Mục tiêu nghiên cứu của bài viết là khảo sát đặc điểm thực vật, vi học và mã vạch ADN để góp phần định dạng đúng loài Cam sũng. Sàng lọc các tác dụng kháng khuẩn, chống oxi hóa, kháng viêm của các cao chiết từ lá Cam sũng.
Nghiên cứu Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, MÃ VẠCH ADN VÀ SÀNG LỌC MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CÂY CAM SŨNG (SAUROPUS SPATULIFOLIUS BEILLE, PHYLLANTHACEAE) Nguyễn Anh Đào1,2, Phạm Thị Kim Trâm3, Trần Thị Vân Anh1 TÓM TẮT Mở đầu: Cam sũng ( ưỡi nhân) thuốc dân gian dùng để chữa ho, viêm phổi, chữa bệnh tim, kháng khối u có nghiên cứu cơng bố Mục tiêu: Khảo sát đặc điểm thực vật, vi học mã vạch ADN để góp phần định dạng loài Cam sũng Sàng lọc tác dụng kháng khuẩn, chống oxi hóa, kháng viêm cao chiết từ Cam sũng Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Mẫu Cam sũng thu thập huyện Tịnh Biên, An Giang ( /2 9) phân tích, mơ tả, chụp ảnh đặc điểm hình thái giải phẫu bột vi học phân tích ADN lục lạp vùng ITS1 Hoạt tính chống oxy hóa khảo sát mơ hình DPPH, hoạt tính kháng khuẩn thực phương pháp khuếch tán đĩa thạch, hoạt tính kháng viêm đánh giá qua tác dụng ức chế NO tế bào RAW 26 kích thích b i LPS Kết quả: ồi Cam sũng ( ưỡi nhân) định danh dựa hình thái mã vạch AD xác định tên khoa học Sauropus spatulifolius Beille Cao cồn 50% Cam sũng thể hoạt tính chống oxi hóa tốt với IC50 20,76 µg/ml; phân đoạn Et Ac nước từ cao cồn 50% có tác dụng kháng khuẩn yếu, phân đoạn EtOAc từ cao cồn 50% có tác dụng kháng viêm tốt với IC50 12,05 µg/mL Kết luận: Nghiên cứu góp phần cung cấp liệu định danh xác loài Cam sũng Kết thử nghiệm tác dụng sinh học minh chứng giải thích cho cơng dụng dân gian Từ khóa: Cam sũng, ưỡi nhân, Sauropus spatulifolius Beille, vi học, ADN, DPPH, kháng khuẩn, kháng viêm ABSTRACT BOTANICAL CHARACTERISTICS, DNA BARCODE AND PHARMACOLOGICAL ACTIVITIES OF THE LEAVES OF SAUROPUS SPATULIFOLIUS BEILLE Nguyen Anh Dao, Pham Thi Kim Tram, Tran Thi Van Anh * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Vol 25 - No - 2021: 20 - 28 Background: Cam ũng ( ưỡi nhân) has been used in folk medicine for the treatment of acute bronchitis, cough and sore throat, inflammatory symptoms and anticancer but there have not many scientific reports Objectives: The aim of this study was to investigate the botanical characteristics, D A barcodes of Cam sũng for exact botanical identification and to evaluate of some pharmacological activities of the extract from the leaves Methods: The samples collected from Tinh Bien, An Giang province (04/2019) were described the morphological and anatomical characteristics; analyzed the chloroplast DNA barcode on ITS region Antioxidant activity was evaluated by DPPH test, antibacterial test was evaluated on five pathogenic bacteria species using agar well diffusion method; anti inflammatory activity was accessed by lipopolysaccharide-induced production of Nitric oxide in RAW 264.7 macrophages method Results: Cam sũng ( ưỡi nhân) was identified as Sauropus spatulifolius Beille based on morphological characteristics and DNA barcode 50% ethanolic extract of the leaves presented the highest antioxidant activity 2Khoa Y Dược, Trường Đại học Trà Vinh Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh 3Phịng CNSH Y Dược, Trung tâm Cơng nghệ Sinh học Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS.TS.DS Trần Thị Vân Anh ĐT: 0918852989 Email: ttvananh@ump.edu.vn 20 B - Khoa học Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 Nghiên cứu with IC50 = 20.76 µg/ml The EtOAc and water fractions from 50% ethanolic extract had mild antibacterial activity, EtOAc fraction showed a good anti-inflammatory activity with IC50 = 12.05 µg/mL Conclusion: The study confirmed the scientific name of “Cam sũng” in Viet am is auropus spatulifolius Beille (Euphorbiaceae) The result of bioactive testing rationalized the usages of this plant Keywords: Sauropus spatulifolius Beille, anatomy, DPPH, antibacterial, anti inflammatory Candida albicans (ATCC 10231) (bộ mơn Vi kí sinh ĐẶT VẤNĐỀ - Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh), tế bào RAW Cam sũng (Lưỡi hổ, Lưỡi hùm, tên dân 264.7 (ATCC TIB 71), mơi trường Mơi trường gian cịn gọi Lưỡi nhân) sử dụng Dulbecco’s Modified Eagle Medium (Himedia), y học dân gian để chữa ho, bổ phổi, chữa bệnh LPS (Sigma), Griess (Sigma), DMSO (Merck) tim, kháng khối u Theo tài liệu Đỗ Tất Thiết bị Lợi, Võ Văn Chi Viện Dược liệu, Cam sũng Kính hiển vi (Olympus), Máy UV (Vilber có tên khoa học Sauropus rostratus Miq., họ (1-3) Lourmat CN-15-LC) Euphorbiaceae Tuy nhiên, đặc điểm hình thái Cam sũng so sánh với đặc điểm ghi nhận tài liệu thực vật Phạm Hoàng Hộ(4) tác giả nước ngồi(5) Cam sũng giống với lồi Sauropus spatulifolius Beille Vì thế, vấn đề đặt cần định danh xác thuốc Cam sũng sử dụng Việt Nam Cam sũng thuốc dân gian ý sử dụng rộng rãi chưa có cơng trình cơng bố thực vật học, thành phần hóa học hoạt tính sinh học Nghiên cứu thực với mong muốn cung cấp đặc điểm hình thái, giải phẫu, bột dược liệu, phân tích ADN barcode để định danh xác lồi đồng thời bước đầu khảo sát số tác dụng sinh học Cam sũng làm tiền đề khoa học để phát triển thuốc tương lai Phương pháp nghiên cứu Khảo sát đặc điểm hình thái Các đặc điểm hình thái quan sát mắt thường, kính lúp hay kính hiển vi quang học, mơ tả chụp hình phận khảo sát Xác định tên khoa học loài dựa so sánh đặc điểm hình thái ghi nhận với tài liệu tham khảo(1-5) Mẫu Cam sũng thu hái huyện Tịnh Biên, tỉnh An Giang vào tháng 04 năm 2019 Khảo sát đặc điểm vi phẫu, vi học Thân, phiến cắt ngang thành lát mỏng dao lam Cắt ngang phần thân đường kính 5-6 mm Cắt ngang đoạn 1/3 đáy phiến lá, gồm gân hai bên gân Vi phẫu tẩy trắng nước javel, nhuộm son phèn lục iod Quan sát vi phẫu kính hiển vi quang học, chụp ảnh mô tả cấu trúc Thực soi bột cách chia nhỏ dược liệu, sấy 60 oC đến khô, nghiền nhỏ, rây qua rây 32 (đường kính lỗ rây 0,1 mm) quan sát cấu tử bột kính hiển vi quang học Hóa chất, vật liệu Khảo sát đặc điểm mã vạch ADN 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (SigmaAldrich, Mỹ), acid ascorbic (Viện kiểm nghiệm), Muller Hinton Agar (Himedia), Staphylococcus aureus nhạy cảm methicillin (ATCC 29213), S.aureus đề kháng methicillin (ATCC 33591), Streptococcus pneumoniae (ATCC 44619), Escherichia coli (ATCC 25922), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), nấm men Mẫu Cam sũng chiết tách, tinh chế ADN tồn phần, sau khuếch đại phản ứng PCR với đoạn mồi ITS Sản phẩm PCR tinh giải trình tự phương pháp Sanger(6), sau so sánh với trình tự tương ứng công bố GenBank phương pháp BLAST Qui trình thực ĐỐI TƯỢNG- PHƯƠNG PHÁP NGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu B - Khoa học Dược 21 Nghiên cứu công ty Phù sa Biochem, TP Vĩnh Long, tỉnh Vĩnh Long Chiết xuất cao thử nghiệm Bột dược liệu chiết với dung môi khác (cồn 96%, cồn 50 % nước) phương pháp chiết siêu âm 50 oC 30 phút x lần, lần 350 ml, lọc qua giấy lọc thu dịch chiết Gộp dịch chiết, cô quay thu cao Các cao chiết xác định hàm ẩm trước thực thử nghiệm đánh giá hoạt tính sinh học Cao chiết cồn 50% tiếp tục lắc phân bố lỏnglỏng với dung mơi có độ phân cực tăng dần thu cao dicloromethan (SP50.1), ethyl acetat (SP50.2), n-butanol (SP50.3) cao nước (SP50.4) Đánh giá tác dụng chống oxy hóa Thử nghiệm thực theo mơ tả Kulisic cộng sự(7) Hoạt tính chống oxi hóa mẫu thử đánh giá theo giảm cường độ màu DPPH xác định cách đo OD 517 nm, tiến hành cuvet Thí nghiệm lặp lại lần tính giá trị trung bình Kết tính theo công thức HTCO(%) = [(ODchứng - ODthử)/ ODchứng] x 100 Mẫu chứng (có DDPH khơng có mẫu thử) acid ascorbic tiến hành song song Xác định EC50 (nồng độ có HTCO 50%) phần mềm Excel Đánh giá hoạt tính kháng vi sinh vật Đánh giá hoạt tính kháng vi sinh vật phương pháp khuếch tán đĩa thạch Hòa tan cao DMSO 10% thu dung dịch có nồng độ 100 mg/ml Vi khuẩn hoạt hóa ni cấy dung dịch TBS, ủ 37 oC 24 Điều chỉnh dịch treo có giá trị 0,08-0,1 (tương đương với nồng độ vi khuẩn 1-2 x 108 tế bào vi khuẩn/ml) quang phổ kế bước sóng 625 nm, sau rải huyền dịch vi sinh vật lên bề mặt môi trường Giếng có đường kính từ - mm đục vơ trùng, 100 µl cao chiết DMSO 10% thêm vào giếng Dung môi DMSO 10% sử dụng mẫu trắng để đánh giá khả 22 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 ảnh hưởng dung mơi hịa tan vịng kháng khuẩn Hoạt tính ức chế vi sinh vật đánh giá qua vòng ức chế xung quanh giếng có mẫu thử(8) Thử nghiệm tiến hành lần để ghi nhận kết Đánh giá hoạt tính kháng viêm Đánh giá hoạt tính kháng viêm qua tác dụng ức chế NO tế bào RAW 264.7 bị kích thích LPS(9) Mẫu thử pha thành dung dịch gốc với nồng 100 mg/ml DMSO, sau pha lỗng nồng độ khác Tế bào RAW 264.7 nuôi cấy 48 môi trường DMEM 37 oC, 5% CO2 với 10% FBS, 100 UI/ml penicillin 100 µg/ml streptomycin Sau tế bào chuyển nuôi cấy giếng 96 với mật độ 2,5 x 105 tế bào/giếng Tế bào kích thích với LPS 24 với có mặt chất thử nhiều nồng độ khác Dịch tế bào phản ứng với thuốc thử Griess NaNO2 nồng độ khác sử dụng để xây dựng đường chuẩn Độ hấp thu đo 570 nm Dexan 20 µM sử dụng làm mẫu đối chứng Để khảo sát thành phần thử nghiệm có ảnh hưởng đến sống chết của tế bào hay khơng, phần tế bào cịn lại bổ sung dung dịch MTT (0,5 mg/ml pha PBS), ủ 37 oC 5% CO2 Sau hút bỏ hết mơi trường bề mặt, kết tủa formazan hòa tan isopropanol Độ hấp thu đo 570 nm Tỉ lệ tế bào sống cao giá trị NO sinh thể hoạt tính Thí nghiệm lặp lại lần tính giá trị trung bình Kết tính theo cơng thức: % NO = ([Xtb]mẫu thử - [Xtb]LPS)/([Xtb]Control[Xtb]LPS)*100 ([Xtb] nồng độ NO trung bình tính tốn dựa vào đường chuẩn NaNO2) Giá trị IC50 xác định theo phương pháp hồi quy tuyến tính phần mềm Excel Mẫu xem có hoạt tính kháng viêm có IC50 < 50 µg/mL B - Khoa học Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 Nghiên cứu 2-3 x 2-3 mm Hoa màu tím tím đỏ, chưa thấy (Hình 1) KẾT QUẢ Đặc điểm hình thái Cây bụi nhỏ, cao 10-50 cm, mọng nước, xanh tốt quanh năm Thân tròn, xù xì, màu nâu, có nhiều đốt, đốt mang sẹo rụng để lại Lá mọc so le, phiến hình trứng, dài 7-15 x 2-4 cm, đầu tròn, hai mặt nhẵn, mặt màu lục đậm, có vân màu xám trắng, mặt nhạt; cuống ngắn, dài 1-4 mm; kèm hình tam giác nhọn, Cây Cam sũng Cấu tạo giải phẫu Bóc tách biểu bì Biểu bì mang lơng che chở đơn bào mặt mặt Tế bào biểu bì hình đa giác, vách uốn lượn, nhiều lỗ khí hỗn bào mặt Biểu bì khơng có lỗ khí Biểu bì thân non mang nhiều lơng che chở (Hình 2) Thân hoa Lá kèm hình tam giác Mặt Mặt Hình1.1.Đặc Đặcđiểm điểm hình hình thái Hình tháicây câyCam Camsũng sũng Hình Bóc tách biểu bì Cam sũng Lá giác có kích thước tương đối nhỏ, xếp đặn, Gân lớp cutin mỏng, có nhiều lông che chở đơn bào Hai mặt lồi, mặt lồi nhiều mặt Phía biểu bì lớp mơ dày trịn, gồm Biểu bì lớp tế bào hình chữ nhật đa 3-4 lớp tế bào Mô mềm đặc gồm 5-10 lớp tế B - Khoa học Dược 23 Nghiên cứu Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 bào Gân hình vịng cung liên tục gồm có bó gỗ libe Mạch gỗ hình đa giác hay gần trịn xếp thành dãy xen kẽ với 1-3 dãy mô mềm gỗ vách tẩm chất gỗ hay cellulose; libe tế bào hình đa giác xếp lộn xộn quanh có mơ cứng nâng đỡ Phía ngồi gân có nhiều tinh thể calci oxalat hình cầu gai Phiến Biểu bì giống gồm tế bào hình chữ nhật, vách dày, kích thước khơng đều, lớp cutin dày, lỗ khí có nhiều biểu bì Mơ mềm giậu gồm lớp tế bào thuôn dài, chứa nhiều lục lạp Dưới lớp mô giậu mô mềm khuyết dày gấp lần mơ mềm giậu, tế bào hình dạng thay đổi, có khuyết to Mặt có nhiều lơng che chở đơn bào (Hình 3) Biểu bì Mô giậu Mô mềm khuyết (a) Vi phẫu gân (b) Vùng phiến Hình Cấu tạo giải phẫu Cam sũng Hình Cấu tạo giải phẫu Cam sũng khơng đều, phân hóa ly tâm, bao quanh Thân tế bào mô mềm hình đa giác, vách Vi phẫu tiết diện trịn, trịn góc cellulose, xếp khít Mơ mềm tủy Vùng vỏ chiếm khoảng 1/3 diện tích vi phẫu, tế bào hình đa giác, vách cellulose, kích thước vùng trung trụ chiếm 2/3 không đều, vào tế bào to, xếp Vùng vỏ chừa đạo nhỏ, có nhiều tinh thể calci Biểu bì gồm lớp tế bào hình chữ nhật, kích oxalat hình cầu gai nằm rải rác (Hình 4) thước khơng đều; lớp cutin mỏng Trên biểu bì Đặc điểm bột Cam sũng thân non có lơng che chở đơn bào Mơ mềm Bột Cam sũng có màu xanh đậm, mùi nhẹ, vỏ gồm -7 lớp tế bào thuôn dài, xếp chừa sờ nhám tay Trong bột có nhiều cấu tử lá, đạo nhỏ, có nhiều tinh thể calci oxalat thân: mảnh biểu bì mang lỗ khí, mạch gỗ, sợi có hình cầu gai nằm rải rác vách dày, lông che chở đơn bào nhiều, Vùng trung trụ nhiều tinh thể calci oxalat hình cầu gai (Hình 5) Trụ bì hóa mơ cứng thành cụm úp lên Kết định danh ADN mã vạch đầu bó libe gỗ, gồm tế bào hình đa giác, vách Kết giải trình tự đoạn gen ITS1-5,8S dày hóa mơ cứng Bó libe gỗ bao gồm: libe rARN-ITS2-28S (618bp) mẫu Cam sũng tế bào nhỏ, méo mó, bị ép dẹp, nằm so sánh với liệu Sauropus spatulifolius trụ bì hóa mơ cứng; libe gỗ xếp Beille GenBank (Mã số: EU623588.1)(10) cho xuyên tâm với tạo thành vòng thấy mức độ tương đồng 99,03%, quanh vi phẫu; gỗ cấp với mạch gỗ có nucleotid khơng tương đồng vùng ITS1 khơng đều, hình đa giác, mơ mềm gỗ gồm ITS2 Mức độ tương đồng cao tế bào hình đa giác vách dày, xếp xun lồi chi Sauropus có liệu gen tâm; bó libe gỗ có 2-3 bó gỗ cấp 1, xếp GenBank (Hình 6) song song với nhau, bó gồm - mạch gỗ 24 B - Khoa học Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 Nghiên cứu Hình Cấu tạo giải phẫu thân Cam sũng Hình Các cấu tử bột dược liệu Cam sũng AAACCCCGGCGCGGAATGCGCCAAGAAG Đoạn gen ITS mẫu nghiên cứu AATGAATAGAAAAGYGAGAGCGCTACAG GTGAACCTGCACGCAGTATGACCCGC TCACCTCGGAAACGATGCGTGAACGGTA GAACAAGTTTACTCACTGCTGATGGTGCC GTTGCATCTCCTTTAATAACCAAAACGAC TTGTGCTCCTGACGCAAGGCCCCGTAGGG TCTCGGCAACGGATATCTCGGCTCTCGCA TGCTATGCTCCTTRCGGTGTGCCACTTAAC B - Khoa học Dược 25 Nghiên cứu Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 TCGATGAAGAACGTAGCGAAATGCGATA CTTGGTGTGAATTGCAGAATCCCGTGAAC CATCGAGTTTTTGAACGCAAGTTGCGCCC AAAACCTTCGGGTCGAGGGCACGTCTGC CTGGGTGTCACGCAACGTCGCCCCCTCAC TCCCCTSAAACGGGGCTCGTGAATTTGGG GCGGATAATGGCCTCCCGTGAACTCTTCT GGTCGTGGTTGGCCCAAAAATGAGACCA GGTCGGTTGGTGCCGTGGCATTCGGTGGT TGAAAATACCCTCACAACGCCTCGTTCAT CTTTCCGAACTTACAAGGATCTCGAAATA GAATTAAGAAAAGATTCTTATCTATCCGA CGCGACCCCAGGTCAGG Khảo sát hoạt tính sinh học Hoạt tính chống oxi hóa Kết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa cho thấy cao cồn 96%, cồn 50% cao nước thể hoạt tính chống oxy hóa IC50 cao cồn 96% (82,54 µg/ml) > cao nước (81,37 µg/ml) > cao cồn 50% (20,76 µg/ml) so với chứng dương vitamin C (IC50 = 2,23 µg/ml) Cao cồn 50% thể hoạt tính chống oxy hóa tốt Hoạt tính kháng khuẩn Thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn cao (cao cồn 96%, cao cồn 50% cao nước) nồng độ 100 mg/ml cho thấy có cao cồn 50% có hoạt tính kháng khuẩn yếu Các phân đoạn cao cồn 50% tiếp tục thử hoạt tính kháng khuẩn chủng vi sinh vật khác Kết cho thấy phân đoạn cao SP50.1, SP50.2 SP50.4 có hoạt tính kháng S aureus MRSA (Hình 7) Gen khảo sát Hình Kết Blast đoạn gen khảo sát với đoạn gen tương ứng Sauropus spatulifolius Beille GenBank (Mã số: EU623588.1) (các vạch thể khác biệt đoạn gen khảo sát) Hình Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn phân đoạn cao cồn 50%( : phân đoạn DCM (SP50.1); 2: phân đoạn Et Ac ( 2); 3: phân đoạn BuOH (SP50.3); : phân đoạn nước (SP50.4) 26 B - Khoa học Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 Bảng Kết xác định hoạt tính kháng vi sinh vật phân đoạn cao cồn 50% (nồng độ 100 mg/ml) Vi sinh vật SP50.1 SP50.2 SP50.3 SP50.4 Candida albicans - - - - E.coli MRSA Staphylococus aureus S pneumoniae S pyogenes + + - + + - - + + - Hoạt tính kháng viêm Các phân đoạn sau sàng lọc nồng độ 50, 25 10 µg/ml cho % tế bào sống > 90%, Nghiên cứu trừ SP50.1 nồng độ 50 µg/ml cho % tế bào sống 15% Phân đoạn SP50.1 có hoạt tính kháng viêm tốt nồng độ khảo sát 50, 25 µg/ml nhiên nồng độ 50 µg/ml tỉ lệ tế bào sống 15,45% Phân đoạn SP50.2 có hoạt tính kháng viêm tốt có % NO thấp không ảnh hưởng đến sống tế bào Ở nồng độ 50 µg/ml, phân đoạn có NO mức 30,24% (tỉ lệ tế bào sống tương ứng 120%) thấp so với chứng dương Dexan 20µM (31,34%) Giá trị IC50 phân đoạn SP50.1 SP50.2 22,15 12,50 µg/mL Hình % ức chế NO mẫu thử với nồng độ khác Sauropus spatulifolius Beille thuộc họ BÀNLUẬN Phyllanthaceae (theo The plant list(12)) Các đặc Các đặc điểm hình thái Cam sũng (Lưỡi điểm cấu tạo giải phẫu thân lần đầu nhân) mô tả so sánh với tài liệu tham tiên mô tả chi tiết với vi phẫu giúp khảo cho thấy tương đồng với hình thái tạo sở xây dựng kiểm nghiệm cho thuốc loài Sauropus spatulifolius Beille(4,5) Để có sở tương lai hỗ trợ cho khẳng định rõ hơn, ADN vùng ITS (618bp) nghiên cứu lồi Cam sũng mẫu Cam sũng phân tích so sánh với Kết khảo sát tác dụng sinh học cho liệu ngân hàng gen cho mức độ tương thấy cao chiết Cam sũng có tác dụng đồng >99% Nghiên cứu Kanchana Pruesapan chống oxy hóa cao cồn 50% có tác dụng cộng năm 2008(11) dùng phương pháp chống oxy hóa mạnh với IC50 =20,76 µg/ml giải trình tự đoạn gen matK ITS 125 Cao chiết cồn 50% thể tác dụng kháng mẫu thuộc chi tương cận Breynia, khuẩn yếu phân đoạn dicloromethan Glochidion Sauropus cho mục đích phân loại ethyl acetat từ cao cồn 50% có tác dụng kháng Kết nghiên cứu cho thấy đoạn gen ITS có viêm tốt Kết gợi ý việc lựa chọn khác biệt lồi thuộc chi Sauropus có dung môi cồn 50% giúp tăng hiệu trị liệu thể dùng phân loại so sánh vùng gen thuốc đồng thời sở khoa học Nghiên cứu cung cấp liệu chứng minh công dụng dân gian Cam sũng vùng gen ITS loài Sauropus spatulifolius Beille KẾT LUẬN GenBank (Mã số: EU623588.1) Đặc điểm hình thái kết hợp liệu phân tích ADN giúp xác định tên khoa học loài Cam sũng (Lưỡi nhân) Việt Nam B - Khoa học Dược Các đặc điểm hình thái thân, hoa phân tích ADN so sánh với tài liệu tham khảo giúp định danh Cam sũng (Lưỡi nhân) loài 27 Nghiên cứu Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 Sauropus spatulifolius Beille, họ Phyllanthaceae Các mơ tả hình thái vi học giúp nhận dạng xây dựng tiêu chuẩn cho kiểm nghiệm thuốc Khảo sát tác dụng sinh học cho thấy dịch chiết Cam sũng có tác dụng chống oxi hóa kháng viêm tốt nồng độ thử nghiệm, sở khoa học để giải thích cơng dụng dân gian tiền đề cho nghiên cứu để phát triển thuốc tiềm 10 TÀI LIỆU THAM KHẢO Đỗ Tất Lợi (2015) Cây thuốc vị thuốc Việt Nam, pp.962 Nhà Xuất Bản Y Học, Hà Nội Võ Văn Chi (2015) Từ điển thuốc Việt Nam, pp.231-232 Nhà Xuất Bản Y Học, Hà Nội Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mẫn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2006) Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, V1, pp.325-326 Nhà Xuất Bản Khoa Học Kỹ Thuật, Hà Nội Phạm Hoàng Hộ (2015) Cây cỏ Việt Nam, pp.1021 Nhà Xuất Bản Trẻ, TP HCM Welzen Van PC (2003) Revision of the malesian and Thai species of Sauropus (Euphorbiaceae: Phyllanthoideae) BlumeaBiodiversity Evolution and Biogeography of Plants, 48(2):319-391 28 11 12 Sanger F, Nicklen S, Coulson AR (1977) DNA sequencing with chain-terminating inhibitors Proceedings of the National Academy of Sciences, 74(12):5463-5467 Kulisic T, Radonic A, Katalinic V, Milos M (2004) Use of different methods for testing antioxidative activity of oregano essential oil Food chemistry, 85(4):633-640 Franz Hadacek, Harald Greger (2000) Testing of antifungal natural products: Methodologies, comparability of results and assay choice, Phytochemical Analysis, 11(3):137-147 Lyu SY, Park WB (2005) Production of cytokine and NO by RAW 264.7 macrophages and PBMC in vitro incubation with flavonoids Arch Pharm Res, 28(5):573-8 Ruesapan K, Telford IR, Bruhl JJ, Draisma SG, et al (2008) Delimitation of Sauropus (Phyllanthaceae) based on plastid matK and nuclear ribosomal ITS DNA sequence data Ann Bot, 102(6):1007-1018 URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/EU623588.1 (access on 26/5/2021) Pruesapan K, Telford IR, Bruhl JJ, Draisma SG, et al (2008) Delimitation of Sauropus (Phyllanthaceae) based on plastid matK and nuclear ribosomal its DNA sequence data Annals of Botany, 102(6):1007-1018 The plant list URL: http://www.theplantlist.org/tpl1.1/record/kew186491 (access on 26/5/2021) Ngày nhận báo: 24/02/2021 Ngày phản biện nhận xét báo: 04/06/2021 gày báo đăng: 20/08/2021 B - Khoa học Dược ... thời bước đầu khảo sát số tác dụng sinh học Cam sũng làm tiền đề khoa học để phát triển thuốc tương lai Phương pháp nghiên cứu Khảo sát đặc điểm hình thái Các đặc điểm hình thái quan sát mắt thường,... (618bp) nghiên cứu loài Cam sũng mẫu Cam sũng phân tích so sánh với Kết khảo sát tác dụng sinh học cho liệu ngân hàng gen cho mức độ tương thấy cao chiết Cam sũng có tác dụng đồng >99% Nghiên cứu... (Hình 2) Thân hoa Lá kèm hình tam giác Mặt Mặt Hình1.1 .Đặc Đặcđiểm điểm hình hình thái Hình tháicây câyCam Camsũng sũng Hình Bóc tách biểu bì Cam sũng Lá giác có kích thước tương đối nhỏ, xếp đặn,