Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học cây cúc tím thu hái tại thái nguyên

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI PHÙNG THỊ THƯ HÀ NGHIÊN c ú u ĐẶC ĐIỂM THỰC v ậ t v à • • • THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY cúc TÍM THU HÁI TẠI THÁI NGUYÊN (CENTRATHERUMINTERMEDIUM L. ASTERACEAE) (Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ khóa 2003 - 200, Người hướng dẫn: TS. Nguyễn Thị Bích Thu Nơi Thực hiện: VIỆN Dược LIỆU - BỘ Y TẾ BM DƯỢC LIỆU - ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI Thời gian thực hiện: 02/2007 - 05/2007 HÀ NỘI-2007 LỜI CẢM ƠN! Trong quá trình thực hiện khoá luận tốt nghiệp, tôi đã nhận được sự chỉ bảo tận tình của các thầy, các cô, sự quan tâm của gia đình và bạn bè. Những sự giúp đỡ quý báu ấy đã giúp tôi hoàn thành khoá luận này, đồng thòi cũng cho tôi hiểu biết thêm nhiều điều về tư duy trong công việc và ứng xử trong cuộc sống. Tôi xin chân thành cảm ơn: Tiến sỹ Nguyễn Thị Bích Thu, đã trực tiếp chỉ bảo và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện khoá luận tốt nghiệp. Tôi xin chân thành cảm ơn: Tiến sỹ khoa học Trần Văn Thanh, Dược sỹ Lê Đình Bích, các thầy cô bộ môn Dược liệu, Thực vật trường Đại học Dược Hà Nội đã giúp đỡ tôi về mặt chuyên môn trong quá trình thực hiện khoá luận. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn Ban giám đốc cùng tập thể khoa PT - TC Viện Dược liệu; Ban giám hiệu trường Đại học Dược Hà Nội đã tạo điều kiện tốt nhất để tôi hoàn thành khoá luận này. Cuối cùng tôi xin cảm ơn gia đình và bạn bè đã động viên, khích lệ tôi rất nhiều để tôi có thêm sự nhiệt tình và say mê trong nghiên cứu khoa học. Hà Nội, tháng 05 năm 2007 Sinh viên Phùng Thị Thu Hà CHÚ GIẢI CHỮ VIẾT TẮT AST Ánh sáng thường cs Cộng sự dd Dung dịch dm Dung môi D/c Dịch chiết g gam IR Infrared resonance (spectroscopy) kg Kilogam MS Khối phổ NMR Nuclear magnetic resonance TT Thuốc thử TB Trung bình TLTK Tài liệu tham khảo SKĐ Sắc ký đồ SKLM Sắc ký lớp mỏng u v Ultra violet (spectroscopy) M ực LỤC ĐẶT VẤN Đ Ể 1 PHẦN 1; TỔNG QUAN 3 1.1. Về thực vật 3 1.1.1. Đặc điểm hình thái họ cúc 3 1.1.2. Phân loại họ cúc 4 1.1.3. Cây cúc tím . 5 1.2. Thành phần hóa học 6 1.3. Tác dụng và công dụng 7 PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 8 2.1. Nguyên liệu, phương tiện và phương pháp nghiên cứu 8 2.1.1. Nguyên liệu nghiên cứu 8 2.1.2. Phương tiện nghiên cứu 8 2 .1.3. Phương pháp nghiên cứu 9 2.2. Thực nghiệm và kết quả , 9 2.2.1. Kết quả nghiên cứu về đặc điểm thực vật 9 2.2.2. Kết quả nghiên cứu thành phần hóa học J4 PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 36 3.1. Kết luận 36 3.2. Đề xuất 37 ĐẶT VẤN ĐỂ Việt Nam là một nước nằm trong vùng khí hậu nhiệt đói gió mùa, nóng ẩm, mưa nhiều thích hợp cho sự phát triển cây cỏ tạo ra hệ thực vật rất phong phú và đa dạng. Đây là điều kiện thuận lợi cho việc nghiên cứu và phát triển tài nguyên cây thuốc. Theo những công bố gần đây, ở nước ta đã biết tới 3.800 loài cây được sử dụng làm thuốc. Tuy vậy, mới có khoảng 300 loài cây con và vị thuốc được sử dụng ở mức độ tưcmg đối phổ biến theo kinh nghiệm dân gian hoặc theo y học cổ truyền mà chưa được nghiên cứu kỹ và đầy đủ. Cúc tím {Centratherum intermedium L.) là cây sinh trưởng và phát triển tốt ở Thái Nguyên, được đồng bào các dân tộc Tày, Nùng ở Thái Nguyên dùng khá phổ biến để làm thuốc chữa cảm cúm, vàng da, đun nước tắm cho phụ nữ sau khi sinh. ở Việt Nam, thành phần hoá học của cây cho đến nay hầu như chưa được nghiên cứu và ứng dụng. Nếu được nghiên cứu một cách có hệ thống và toàn diện, cúc tím có thể trở thành nguồn nguyên liệu thiên nhiên quý để tạo ra các sản phẩm có ích. Xuất phát từ thực tế trên, chúng tôi tiến hành đề tài " Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hoá học cây cúc tím thu hái tại Thái Nguyên**, vói nội dung: - Nghiên cứu về mặt thực vật cây cúc tím: Mô tả hình thái, thẩm định lại tên khoa học, đặc điểm vi phẫu thân, cuống lá, phiến lá. - Nghiên cứu thành phần hoá học cây cúc tím: Sơ bộ định tính các nhóm chất trong cây, định lượng cắn trong phân đoạn ethyl acetat, định lượng tinh dầu và đi sâu nghiên cứu các thành phần của tinh dầu, so sánh hàm lượng và thành phần tinh dầu cây cúc tím giữa 2 mùa: Mùa xuân và mùa hạ. Chúng tôi hy vọng rằng các kết quả thu được sẽ là cơ sở cho những nghiên cứu tiếp theo về hoá học và ứng dụng của cây cúc tím trong y học và đòi sống. PHẦN I TỔNG QUAN 1.1. VỂ THỰC VẬT 1.1.1. Đặc điểm hình thái họ cúc (Asteraceae) [4], [6] Cây thảo, cây leo hay cây bụi ít khi là cây gỗ, hiếm khi là cây nhỡ hay cây to. Lá đơn, ít khi lá kép lông chim hoặc tiêu giảm, mọc so le không có lá kèm. Rễ có thể phồng to và chứa chất dự trữ tan trong nước gọi là inulin. Cụm hoa gồm các hoa mọc tập trung thành đầu, nằm trong tổng bao lá bắc chung. Lá bắc của hoa không có hoặc giảm thành vảy hoặc lông tơ. Các đầu tập trung thành chùm đầu, ngù đầu, chùy đầu. Mỗi đầu có một đế cụm hoa chung phẳng, lồi hoặc lõm thành hình chén. Đầu có ba loại: - Đầu gồm tất cả các hoa hình ống. - Đầu gồm tất cả các hoa hình lưỡi nhỏ. - Đầu có cả hoa hình lưỡi nhỏ ở xung quanh và thường là hoa cái, hoa hình ống ở trung tâm. Hoa có thể lưỡng tính hoặc đơn tính (hoa cái), cùng gốc hoặc khác gốc. Đài không bao giờ có dạng lá, thường biến thành mào lông. Đài thường giảm vì nhiệm vụ bảo vệ được đảm nhận bỏi các lá bắc của tổng bao. Tràng liền, hai dạng: lưỡi nhỏ, ống hoặc hình chuông với 4 - 5 thùy đều nhau hoặc gần bằng nhau, hoặc lưỡi nhỏ ở trên một ống ngắn, đĩa ở phía trên bầu. Bộ nhị gồm 4 - 5 nhị dính liền nhau bỏi bao phấn thành một ống bao quanh vòi, chỉ nhị rời và dính vào ống tràng, bao phấn dính lại với nhau thành một ống, đính gốc, mở đầu bằng khe nứt dọc vào phía trong, trung đới kéo dài ở đỉnh, ô phấn thường có phần phụ ở gốc tạo thành tai nhỏ, hạt phấn thường hình cầu, có gai. Bộ nhụy gồm có hai lá noãn luôn luôn dính lại vái nhau thành bầu dưới một ô, chứa một noãn. Gốc vòi nhụy có tuyến mật. Núm nhụy luôn chia thành hai nhánh, ban đầu ép lại với nhau, mặt trong của núm nhụy là nơi tiếp nhận hạt phấn, mặt ngoài có lông để quét hạt phấn khi vòi nhụy đi qua ống bao phấn. Những hạt phấn này được sâu bọ mang đi thụ phấn cho hoa khác khi các nhánh của núm nhụy đã tách nhau ra. Quả bế một hạt, có khi trần. Để giúp sự phát tán mỗi quả có thể có một chùm lông (phát tán nhờ gió), có gai nhọn, có móc nhỏ hoặc lông dính (phát tán nhờ động vật). Hạt có phôi lớn, không có nội nhũ. Lá mầm to, nhiều khi chứa đầy dầu. 1.1.2. Phân loại họ cúc [6],[9] Đây là họ lớn nhất của thực vật có hoa, được phân bố khắp thế giới, ở Việt Nam có khoảng 125 chi trên 350 loài [9]. Theo Vũ Văn Chuyên họ cúc được chia thành hai phân họ [6 ]: - Phân họ hoa ống (Tubuliflorea = Asteroideae): Trên cụm hoa chỉ có hoa hình ống, hoặc hoa hình ống ở giữa, hoa hình lưỡi nhỏ ò xung quanh đầu. Cây không có nhựa mủ. - Phân họ hoa lưỡi nhỏ (Liguliflorae = Cichorioideae): Trên cụm hoa chỉ có hoa hình lưỡi nhỏ. Cây có nhựa mủ. Có tài liệu lại chia họ cúc thành ba phân họ : - Phân họ hoa lưỡi nhỏ: Đầu đồng giao, cấu tạo bởi toàn hoa hình lưỡi nhỏ, lưỡng tmh, không đều. - Phân họ hoa ống; Đầu đồng giao, cấu tạo bỏi toàn hoa hình ống, lưỡng tính, đều. - Phân họ hoa tỏa tròn (Radiatae): Đầu dị giao, cấu tạo bỏfi hoa hình ống đều, lưỡng tính ở giữa và hoa hình lưỡi nhỏ không đều, bất thụ hoặc đực ở xung quanh. Đầu thường tụ họp thành ngù. 1.1.3. Cây cúc tím a. VỊ trí phân loại của chi Centratherum [10] Chi Centratherum nằm trong phân họ hoa ống (Tubuli/ỉorae), họ cúc (Asteraceae), bộ cúc {Asterales), phân lớp cúc(Asteridae), lớp ngọc lan (Magnoliopsida ), ngành ngọc lan {Magnoliophytà). Vị trí của chi Centratherum trong hệ thống phân loại thực vật được tóm tắt như sau: Ngành Magnoliophyta Lớp Magnoliopsida Phân lớp Asteridae Bộ Asterales Họ Asteraceae Phân họ Tubuliflorae Chi Centratherum b. Đặc điểm thực vật loài Centratherum intermedium L [5], [8] Tên Việt Nam: Tâm nhầy Còn gọi là: cúc tím, cúc sợi tím Cây thảo, sống nhiều năm, cao 45 - 60 cm , mọc thành bụi. Thân mọc nằm đối xứng, màu xanh nhạt có lông trắng. Lá có phiến hình trái xoan, dài 4 - 8 cm, gốc từ từ hẹp trên cuống, mép có răng kép, nhọn, không đều, gân bẽn 7 đôi. Cụm hoa đầu ở ngọn các nhánh không cuống, tổng bao to 1 - 1,5 cm do những lá bắc xanh, đầu nhọn. Hoa hình ống dài, màu lam tím đẹp, bao phấn trắng. c. Sinh thái và phân bố Cây ưa sáng, thòi kỳ ra hoa giữa đến cuối hạ, lá thcím. Loài này thu hút ong bướm [11 ] Cây cúc tím có nguồn gốc ở Nam Mỹ: Brazil, Nigeria. Cây được nhập trồng để làm cảnh, dễ trồng [5], [8]. Hiện nay cây được tìm thấy nhiều ncd ở nước ta: Thành phố Hồ Chí Minh [5], Hồ núi Cốc, vườn Quốc gia Bạch Mã [11], Nghệ An. Cúc tím là một loài xâm lấn cùng một số loài cây: Cuphea hookeriana, Mimosa pigra, M. invisa, Centratherum intermedium, Waltheria americana, Syndonella nudifolia, Dichrocephala intergrifolia, Pỉlea microphylla, Lantana camara, Taraxacum officinalis, Stachytarpheta jamaicensis và Stachytarpheta sp [11]. 1.2. Thành phần hoá học [12], [13],[14],[15],[16] Trong những năm gần đây, một số hợp chất sesquiterpenoid đã được tách ra từ cây, bao gồm: Centratherin, 5 - epi-isocentratherin, goyazensolid, lychnophorolid A&B, 14- carboxy-15-demethyl costunolid, eremanthin, 8a-iso-valeroyl-oxy-dehydro- costuslacton và 11, (13)-dehydro-l-saussurea lacton [14] Các nghiên cứu cũng cho thấy có sự biến đổi thành phần tinh dầu ỏ một số loài của những mẫu từ Brazil. Bằng sắc ký khí khối phổ cho thấy có mặt 49 thành phần, 42 chất trong đó được nhận ra và xác định. Tinh dầu gồm chủ yếu là: sesquiterpen (83,9%) trong đó dẫn xuất hydrocarbon chiếm nhiều nhất (62,7%). p-Caryophyllen (16.6%) và germacren D (6.4%) được xác định là thành phần quan trọng nhất trong thành phần tinh dầu [16] Dẫn xuất oxy sesquiterpen gồm chủ yếu globulol (5.7%), caryophyllen oxide (3.7%), P-eudesmol (3.6%), elemol (3.0%) và spathulenol (2 .2 %). Nhóm monoterpen có tỷ lệ khá thấp (9,7%) và hợp chất cao nhất trong đó là 1,8-cineol (4,1%). Năm 1983 Mancini và cộng sự nghiên cứu thành phần hoá học của Centratherum intermedium, và thông báo sự phong phú của ị3-caryophyllen (17,6%), trong khi hợp chất sesquiterpenoid có rất nhiều thành phần như: a- copaen, a-humulen, y-cadinen, ỗ-cadinen, germacren D [16] [...]... L.) thu hái vào tháng 2 và tháng 5 tại Thái Nguyên Sau khi thu hái dùng cành tưoi mang hoa, ép để lưu mẫu cây, nghiên cứu đặc điểm hình thái, đặc điểm giải phẫu và cất tinh dầu Một phần sấy khô ở nhiệt độ 45° c - 60° c, tán nhỏ bằng thuyền tán, đựng trong lọ kín để làm thực nghiệm 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu Thu c thử, dung môi, hóa chất - Các thu c thử, dung môi, hóa chất sử dụng trong nghiên cứu. .. y học Cây mới chỉ được đồng bào dân tộc Tày, Nùng ờ Thái Nguyên dùng làm thu c chữa cảm cúm, vàng da, đun nước tắm cho phụ nữ sau khi sinh con Cách dùng: Lấy cúc tím về rửa sạch đun lấy nước xông và tắm ngày một lần, khoảng 2-3 lần PH Ầ N n THựC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu Nguyên liệu là phần trên mặt đất của cây cúc tím {Centratherum... cúc tím [ 12 ] Tác giả Valve DA (1998) đã tách và xác định cấu trúc của 2 flavonoid trong cúc tím thu tại Arghentina là goyazensolid và isogoyazensolid [13] 1.3 Tác dụng và công dụng Dịch chiết cây cúc tím có tác dụng kháng khuẩn Hoạt tính sinh học của loài này chủ yếu dựa trên sự có mặt của các sesquiterpen lacton và isocentratherin [14] Cây cúc tím ít được nghiên cứu, chưa được ứng dụng trong y học. .. sát, mô tả hình thái thực vật của cây tại thực địa, thu mẫu làm tiêu bản khô, dựa theo khoá phân loại để xác định tên khoa học theo tài liệu [8 ] - Nghiên cứu đặc điểm vi phẫu: cắt vi phẫu sau đó tẩy, nhuộm bằng phương pháp nhuộm kép theo tài liệu [2 ] quan sát và chụp ảnh vi phẫu bằng kính hiển vi chụp ảnh Leica Nghiên cứu về hoá học - Định tính các nhóm chất tự nhiên ừong cây cúc tím bằng các phản... lượng cắn ừong phân đoạn ethyl acetat bằng phương pháp cân - Định lượng, phân tích thành phần tinh dầu của cây cúc tím bằng sắc ký khí kết hợp với khối phổ (GC - MS) 2.2 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.2.1 Kết quả nghiên cứu về đặc điểm thực vật 2.2.1.1 Đặc điểm hình thái Hình 2.1 Cành mang hoa Mô tả cây: Cây thảo, sống dai Thân và cành có nhiều lông mịn Lá mọc đối, hình trứng, dài 4-8 cm, rộng 2-3 cm, mép lá... tinh dầu cúc Um (thu hái vcío tháng 5 năm 2007) STT mẫu M(g) a(%) V(ml) X(%) 1 300,00 80,67 0,28 0,48 2 300,11 80,67 0,32 0,55 3 300,15 80,67 0,34 0,59 Trung bình 0,54±0,03 Hàm lượng tinh dầu trong cúc tím thu hái tháng 5 năm 2007 là (0,54±0,03)% Nhận xét: Tinh dầu cúc tím thu được là chất lỏng, màu vàng nhạt, mùi thơm dịu có tỷ trọng nhẹ hơn nước Hàm lượng tinh dầu trong cúc tím thu hái vào tháng... liệu khác một vài thành phần đã và đang được xác định lần đầu như thành phần tinh dầu lá, trong đó thành phần chính là: globulol, sesquisabinen, 1 ,8 -cineol, ß-selinen, caryophyllen oxid, ß-eudesmol, bicyclogermacren and elemol Percy S.M và cs đã tách và xác định cấu trúc của isocentratherin từ Cúc tím bằng phương pháp uv, IR, NMR, MS và SKLM [15] Năm 1986, Banerjees và cs đã phân lập và xác định cấu... chia làm 5 thùy, thùy dài 3 mm, mầu tím Nhị 5, chỉ nhị ròd đính trên tràng, bao phấn 2 ô 2 mm trung đới kéo dài thành mũi nhọn dài 0,5 mm Lá noãn 2, bầu dưới 1 ô đính noãn bên Quả bế 2.2.I.2 Tên khoa học Sau khi phân tích đặc điểm hình thái và đối chiếu với các tài liệu [5],[8],[17], được sự giúp đỡ của Dược sỹ Lê Đình Bích chúng tôi xác định tên khoa học của cây cúc tím là Centratherum intermedium L... gia Bạch mã 2.2.2 Kết quả nghiên cứu thành phần hóa học 2.2.2.1.Định tính sơ bộ các nhóm chất thường có trong dược liệu • Định tính flavonoid Lấy 5g bột dược liệu cho vào bình nón, thêm 50ml cồn 90°, đun cách thủy 10 phút, lọc nóng, dùng dịch lọc làm các phản ứng sau; + Phản ứng Cyanidỉn Cho vào ống nghiệm Iml dịch chiết, thêm 1 ít bột magie kim loại, thêm tiếp vài giọt H a đặc, đun cách thủy, thấy... X: Hàm lượng phần trăm tinh dầu (TT/KL) v: Thể tích tinh dầu đọc được sau khi cất (ml) M: Khối lượng dược liệu đem cất (g) a; Độ ẩm của dược liệu (%) Bảng 2.5 Kết quả định lượng tinh dầu cúc tím (thu hái vào tháng 2 năm 2007) STT mẫu M(g) a(%) V(ml) X(%) 1 300,25 81,98 0,30 0,55 2 300,15 81,98 0,28 0,52 3 300,18 81,98 0,34 0,63 0,57±0,03 Trung bình Hàm lượng tinh dầu trong cúc tím thu hái tháng 2 năm . thực vật và thành phần hoá học cây cúc tím thu hái tại Thái Nguyên* *, vói nội dung: - Nghiên cứu về mặt thực vật cây cúc tím: Mô tả hình thái, thẩm định lại tên khoa học, đặc điểm vi phẫu thân,. L.) thu hái vào tháng 2 và tháng 5 tại Thái Nguyên. Sau khi thu hái dùng cành tưoi mang hoa, ép để lưu mẫu cây, nghiên cứu đặc điểm hình thái, đặc điểm giải phẫu và cất tinh dầu. Một phần sấy. TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI PHÙNG THỊ THƯ HÀ NGHIÊN c ú u ĐẶC ĐIỂM THỰC v ậ t v à • • • THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY cúc TÍM THU HÁI TẠI THÁI NGUYÊN (CENTRATHERUMINTERMEDIUM L. ASTERACEAE) (Khóa luận