Bệnh do Gnathostoma sp. là một bệnh động vật ký sinh, lây nhiễm vào người qua đường thực phẩm do ăn các loài thủy sản sống hoặc tái như ếch nhái, cá lóc, lươn, rắn bị nhiễm ấu trùng giai đoạn 3 của KST này. Trong cơ thể người ấu trùng có thể di chuyển và gây tác hại tại nhiều cơ quan khác nhau, đôi khi có thể đưa đến tử vong.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Tập 21 * Số * 2017 BƯỚC ĐẦU THỰC NGHIỆM XÂY DỰNG QUY TRÌNH KỸ THUẬT TIÊU CƠ CẢI TIẾN TRONG CHẨN ĐOÁN NHIỄM GNATHOSTOMA SP Ở LƯƠN (MONOPTERUS ALBUS) Lê Đức Vinh*, Nguyễn Văn Vĩnh Châu**, Trần Trinh Vương* TÓM TẮT Mở đầu: Bệnh Gnathostoma sp bệnh động vật ký sinh, lây nhiễm vào người qua đường thực phẩm ăn loài thuỷ sản sống tái ếch nhái, cá lóc, lươn, rắn bị nhiễm ấu trùng giai đoạn KST Trong thể người ấu trùng di chuyển gây tác hại nhiều quan khác nhau, đơi đưa đến tử vong Do yêu cầu cấp thiết kỹ thuật chẩn đoán phù hợp với loại bệnh phẩm khác nhau, chúng tơi tiến hành nghiên cứu xây dựng mơ hình kỹ thuật tiêu cải tiến để tìm ấu trùng Gnathostoma sp lươn nhằm xác định xác nguy lây nhiễm mầm bệnh từ môi trường Mục tiêu nghiên cứu: Bước đầu xây dựng mơ hình kỹ thuật tiêu cải tiến chẩn đoán nhiễm Gnathostoma sp lươn Phương pháp tiến hành: tiến hành mô hình thực nghiệm cải tiến phòng thí nghiệm.Thu thập mẫu nội tạng lươn thịt lươn từ chợ Mẫu phẫu tích ứng dụng kỹ thuật tiêu mơ pepsin tìm ấu trùng lây nhiễm giai đoạn (AT3) Gnathostoma sp gan Xác định tỷ lệ lươn nhiễm mầm bệnh từ mẫu nghiên cứu Kết quả: thực nghiệm 30 mẫu thịt 30 mẫu gan lươn theo quy trình thiết lập tìm thấy kết nhiễm 10% Quy trình cho kết thành công với mô thịt (6FIP – U) Ở nồng độ thủy phân thấp (5FIP –U) quy trình thành cơng với mô gan Kết luận: Từ kết nghiên cứu chúng tơi nhận thấy qui trình cải tiến xây dựng ứng dụng cho việc xác định mầm bệnh Gnathostoma sp gan thịt lươn Từ khóa: Gnathostoma sp., kỹ thuật tiêu pepsin cải tiến ABSTRACT INITIAL EXPERIMENT TO BUILD PROCESS USING MODIFIED TECHNIQUE OF MEAT’S DIGESTION IN DIAGNOSIC OF GNATHOSTOMA SP INFECTION IN SWARM EELS (MONOPTERUS ALBUS) Le Duc Vinh, Nguyen Van Vinh Châu, Tran Trinh Vuong * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement Vol 21 - No - 2017: 22 - 29 Background: Human gnathostomiasis is an important food-borne parasitic zoonosis, caused mainly by eating raw meat of infected fish especially frogs, snakehead, swamp eels, snakes, Getting into the human body, the advanced third stage larvae can migrate and harm to many different organs, or even lead to death Due to the urgent requirements of suitable diagnostic techniques with many various types of specimens, we conducted a rese arch to build the process of modified method - digestion of meat by pepsin to determine presence of Gnathostoma sp larvae in swamp eels Navigate to alert the exact risk of infection agent from the environment *Bộ môn Ký Sinh – Vi Nấm học, Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch **Bệnh Viện Bệnh Nhiệt Đới Thành Phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS BS Lê Đức Vinh ĐT: 0918096773 Email: ducvinh@pnt.edu.vn 22 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2017 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Tập 21 * Số * 2017 Nghiên cứu Y học Objectives: Initial building the process using modified technique - digestion of meat by pepsin to determine presence of Gnathostoma sp larvae in swamp eels Methods: a laboratory experimental study, we build the process of modified technique - digestion of meat by pepsin Collect samples of meat and visceral organ of swamp eels from a market The samples were dissected and applied histolytic modified technique by artificial pepsin digestion to find the advanced third stage larvae (AT3) Determine the prevalence of Gnathostoma sp infection in research samples Results: According to the established process, 30 samples of eel meat and 30 samples of eel liver were tested; the prevalence of Gnathostoma sp infection was 10% The process get a successful outcome with pepsin concentration was FIP – U for eel meat At lower concentration (5 FIP –U), the process was also success with the tissue of eel liver Conclusion: From our study, we found that our modified process was possible to apply in determination of Gnathostoma sp infection inside the liver and meat tissue of eel Keywords: Gnathostoma sp., modified digestion of meat lồi ký chủ trung gian khơng sử dụng nội ĐẶT VẤN ĐỀ tạng, lẽ nghiên cứu ô nhiễm Bệnh Gnathostoma sp người nhiễm mầm bệnh tự nhiên từ nội tạng từ thực phẩm Trong thể người giun phát loài KCTG dù kinh điển bộc lộ triển đến giai đoạn ấu trùng giun non Ấu hạn chế(1) trùng giun khơng khu trú mà di chuyển từ Trước thực tế đó, nhà nghiên cứu đường tiêu hoá qua quan nội tạng Thái Lan ứng dụng kỹ thuật tiêu để tìm da Khi ấu trùng giun non di chuyển vào mầm bệnh Gnathostoma sp gây bệnh cho người quan trọng yếu thể não, tuỷ thịt lươn Kỹ thuật trước vốn sống, … bệnh cảnh nghiêm trọng sử dụng để tìm lồi giun xoắn nang đưa đến tử vong(2,3,4) trùng loài sán với quy trình thực Trên giới, bệnh Gnathostoma sp công phu, tốn nhiều thời gian nguyên vật báo cáo nhiều khu vực Đông nam Á, liệu Và đến nay, qui trình hồn chỉnh cho có Việt Nam Trường hợp bệnh nước việc chẩn đoán nhiễm Gnathostoma sp chưa ta phát năm 1963, từ năm 1999 trở cơng bố thức(5,6,7,10,13) lại bệnh phát ngày nhiều nhờ Bên cạnh đó, khác biệt hình thái học vào phát triển kỹ thuật chẩn đoán(11) giun Gnathostoma sp giun xoắn Nguyên để nhiễm Gnathostoma sp vào với nang trùng loài sán ảnh hưởng rõ người ăn loài thuỷ sản sống tái đến kết xét nghiệm sử dụng kỹ thuật lươn, rắn, ếch nhái, cá lóc, cá trê, … ốc tiêu kinh điển(5,10) Tại Thái Lan Việt nam có nghiên cứu Từ lý trên, chúng tơi tiến hành thực tình hình nhiễm Gnathostoma sp lươn từ nghiệm hiệu chỉnh cải tiến kỹ thuật tiêu trước năm 2000 đến để đánh giá tình hình chẩn đốn nhiễm giun xoắn, ứng dụng cho nhiễm mầm bệnh tự nhiên Kỹ thuật xét chẩn đoán nhiễm giun Gnathostoma sp lươn nghiệm dùng nghiên cứu chủ yếu Thực nghiệm sử dụng vật liệu phương tìm kiếm mầm bệnh phương pháp ép lam tiện đơn giản nhằm tiết kiệm nguồn lực kính soi trực tiếp với bệnh phẩm nội tạng đạt kết chẩn đoán, mong muốn xây ký chủ trung gian này(6,7,8,9,1,13) dựng quy trình hiệu khả thi Tuy nhiên thực tế đặt người ăn sử dụng chế phẩm từ thịt Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2017 23 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Tập 21 * Số * 2017 Mục tiêu nghiên cứu Bước đầu xây dựng quy trình kỹ thuật xét nghiệm tìm ấu trùng Gnathostoma sp gây bệnh lươn kỹ thuật tiêu cải tiến từ qui trình chẩn đốn giun xoắn Xác định tỷ lệ nhiễm Gnathostoma sp mẫu thực nghiệm PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Thiết kế nghiên cứu Mơ hình thực nghiệm khơng lặp Địa điểm nghiên cứu Phòng thí nghiệm Bộ môn Ký sinh – Vi nấm học, Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch Đối tượng nghiên cứu Lươn nội tạng lươn đựơc bán chợ nội thành Tp.HCM Cỡ mẫu Theo quy ước Tổ Chức Y Tế Thế Giới 30 mẫu thịt lươn 30 mẫu gan lươn Phương pháp chọn thu thập mẫu Chọn mẫu thuận tiện chợ N Q.10 chợ trung tâm lớn quận Tại chợ: chọn gian hàng lớn đảm bảo mẫu ngày Nội tạng lươn rửa bóc tách phần gan Phần gan lươn cân lấy mẫu, mẫu 50g, lấy ngẫu nhiên Mẫu gan thịt xử lý theo quy trình cải tiến Mơ hình kỹ thuật sử dụng nghiên cứu Bước 1: Chuẩn bị mẫu dung dịch thủy phân 50 gam mẫu xay nhuyễn phút máy xay thịt gia dụng Pha dung dịch thủy phân HCl 1,5% từ dung dịch acid HCl 37%, thêm pepsin vào với nồng độ pepsin FIP – U/ml Bước 2: Thủy phân mẫu Chuyển mẫu xay nhuyễn vào cốc thủy tinh có chứa 1500 ml dịch thủy phân (tỷ lệ 1/300) Mẫu thịt sử dụng nồng độ pepsin FIP – U/ml Mẫu gan: mẫu sử dụng nồng độ pepsin mẫu sử dụng FIP-U/ml Đậy giấy nhôm lên miệng cốc ủ tủ ấm 370C qua đêm (18 – 24 giờ) Bước 3: Lọc dịch lắng mẫu Gạn bỏ phần nước Một ngày mua cá thể lươn có trọng lượng từ 300 - 400g/con, mua 10 ngày Rửa phần cặn lắng – lần với nước sinh hoạt Thu thập nội tạng lươn sau buổi chợ chiều 15 ngày Thu toàn nội tạng lươn Lần cuối gạn phần lắng khoảng 20 – 30 ml đĩa petri đường kính 9cm Tại mơn Ký Sinh – Vi nấm học: Phần thịt lươn: Rửa sạch, phẫu tích lọc phần thịt lươn từ đầu đến tận bên (hình 1) Chia làm phần: 1/3 đầu, 1/3 1/3 sau đuôi, cắt lọc mẫu có trọng lương 50g, lọc bỏ phần dư Trường hợp không đủ 50g, tiến hành bổ sung lượng thịt phần thân đối xứng Phần nội tạng lươn: 24 Bước 4: Quan sát tìm mầm bệnh Tìm mầm bệnh kính hiển vi soi SZ 51 (FIP – U: đơn vị hãng, 1FIP- U/ml = 1g/ 1000ml nước) Quan sát ghi nhận kết Mầm bệnh thu dạng ấu trùng tự nang Ghi nhận nguyên vẹn ấu trùng, khối nang hiệu suất thủy phân đạt/không đạt Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2017 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Tập 21 * Số * 2017 Nghiên cứu Y học Thu thập đếm số lượng ấu trùng mẫu Xử lý số liệu: Chẩn đoán xác định cách quan sát hình thể ấu trùng: ấu trùng dài – mm, màu trắng ánh vàng, đầu phình to thành vòm tròn, có hàng gai nhỏ, phận sinh dục ngun sơ, tồn thân có nhiều gai mảnh (Hình 4) KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU SPSS 16.0 for windows Mẫu nghiên cứu Tổng số mẫu thịt lươn thu được: 30 mẫu Tổng số mẫu gan lươn thu được: 30 mẫu Biểu đồ 1: Tỷ lệ thủy phân mơ hình cải tiến Bảng 1: Tỷ lệ phát mầm bệnh thịt Vị trí thịt (chia 1/3) Đầu Giữa Đuôi Mẫu 10 10 10 Bảng 2: Tỷ lệ phát mầm bệnh gan lươn Số mẫu thủy Số mẫu Tỷ lệ phân tốt nhiễm nhiễm % 10 0 10 10 0 Loại thủy phân FIP - U FIP - U Tổng Mẫu 15 15 30 Số mẫu nhiễm 7 14 Tỷ lệ % 46.67 46.67 46.67 Bảng 3: Lượng ấu trùng mẫu Loại mẫu- nồng độ Số mẫu nhiễm Tổng số ấu trùng Mật độ trung bình Số ấu trùng sống Trong nang Đứt, chết Thịt 2 0 Gan - FIP - U 67 9.57 ± 5,56 56 Gan - FIP - U 68 9,14 ± 4,27 60 Bảng Tỷ lệ ấu trùng khó chẩn đốn sau kỹ thuật Loại mẫu nồng độ Thịt Gan - FIP - U Gan - FIP - U Dễ (100%) 60 (89,55%) 60 (88,33%) Khó (0%) 7(10,45%) 8(11,77%) Tổng (tỷ lệ) (100%) 67 (100%) 68 (100%) Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2017 25 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Tập 21 * Số * 2017 Hình Hình 1: Lươn phẫu tích Hình Hình 3: Mẫu ấu trùng sau gạn lắng quan sát kính hiển vi soi BÀN LUẬN So sánh với mơ hình chẩn đốn giun xoắn Trichinella trước (5,10) Mơ hình gồm bước kéo dài – Bước 1: Chuẩn bị mẫu dung dịch thủy phân 50 gam mẫu xay nhuyễn – 10 phút Pha dung dịch thủy phân HCl 1,5% từ dung dịch acid HCl 37%, thêm pepsin vào với nồng độ pepsin FIP – U/ml Bước 2: Thủy phân mẫu Chuyển mẫu xay nhuyễn vào cốc thủy tinh có chứa 3000 ml dịch thủy phân 26 Hình Hình 2: Thủy phân chưa đạt Hình Hình 4: Ấu trùng phóng lớn định danh nhờ cấu trúc gai Đặt máy khuấy từ vào chỉnh tốc độ khuấy phù hợp 20 - 30 phút, lặp lại – lần Luôn giữ nhiệt độ khuấy 350C Bước 3: Lọc dịch lắng mẫu Dịch sau thủy phân lọc qua rây lọc có kích thước 180 µm vào bình lắng thứ nhất, rửa rây lọc nước ấm cho tất vào bình lắng Dịch lọc bình lắng thứ để yên 30 phút Lấy 125 ml phần lắng từ bình thứ chuyển sang bình lắng thứ Để yên 10 phút Lấy nhanh 22 – 27 ml từ bình lắng thứ đĩa petri Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2017 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Tập 21 * Số * 2017 Bước 4: Quan sát tìm mầm bệnh, Để yên đĩa petri 10 phút Tìm mầm bệnh kính lúp điện Những nhược điểm kỹ thuật mơ hình rơi vào bước: Bước thủy phân cần thiết bị máy khuấy phải giữ máy tủ ấm đảm bảo nhiệt độ ổn định Bước lắng mẫu cần hệ thống lắng rây lọc, đòi hỏi vật dụng thiết bị, thời gian liên tục không cho phép thực nhiều mẫu Trên sở nhận xét thấy ấu trùng Gnathostoma sp có kích thước lớn khả tồn tốt mơi trường bên ngồi chúng tơi tiến hành cải tiến kỹ thuật tất bước: Giảm thời gian xay bước 1, tăng khoảng thời gian ủ hạn chế thao tác sử dụng máy khuấy liên tục bước 2, Bỏ qua khoảng gạn lọc nhiều lần bước ấu trùng lớn có trọng lượng nặng lắng nhanh bên Tiết kiệm hệ thống bình lắng Như tiến hành nhiều mẫu thao tác đơn giản hóa Về u cầu kích thước phần mơ thịt gan sau thủy phân: kích thước phần mô không cần thiết nhuyễn q bé kích thước ấu trùng Gnathostoma có chiều dài – mm lớn nhiều lần so với ấu trùng giun xoắn, phần tử sau thủy phân không thiết mịn, điều cho mạnh dạn loại bỏ khâu lọc qua rây lọc với kích thước 180 µm Bên cạnh đó, mật độ mơ gan lý thuyết khơng chặt thịt lươn, chúng tơi tiến hành giảm nồng độ pepsin xuống đơn vị so với quy trình trước Biểu đồ cho thấy hiệu thủy phân thịt theo mơ hình nghiên cứu đạt tỷ lệ 96,67% Với mô gan lươn, kết cho thấy tỷ lệ thủy phân tốt nồng độ FIP – U/ml 93,33 100% Như vậy, việc cần thiết lặp lại thủy phân quy trình kỹ thuật bước không đáng kể khâu cải tiến bước mơ hình đạt mong đợi Nghiên cứu Y học Đánh giá kết thành công bước bước kỹ thuật cần dựa phát ấu trùng sau gạn lọc Bảng cho thấy với mẫu thịt mẫu gan sử dụng nồng độ phát mẫu dương với diện ấu trùng Gnathostoma sp nang, tự đứt gãy Sự đứt gẫy rơi vào bước máy xay đứt phối hợp với nồng độ thủy phân bước 2, ấu trùng chưa xuất nang gây khó cho người phát nhiên không đáng kể người kỹ thuật có trình độ đào tạo Tuy nhiên nhiều nghiên cứu cho xuất nang chủ yếu nồng độ pepsin thủy phân chưa đủ không đủ thời gian ủ phản ứng thao tác khuấy(5) Bảng với mẫu thịt xay 100% thu ấu trùng tốt, nhiên thực nghiệm chúng tơi có mẫu dương tính với số lượng ấu trùng (AT) Do vậy, để kết luận quy trình thành cơng kết để hoàn chỉnh cần nghiên cứu với số mẫu thịt nhiều Bảng với mô gan sử dụng nồng độ thủy phân FIP – U, tỷ lệ ấu trùng khó chẩn đốn gần giống 10,45% (7AT) 11,77% (8AT) Điều tương đồng cao dù sử dụng nồng độ Như vậy, nhiều khả ấu trùng khó chẩn đốn đứt gẫy rơi vào bước xay Liệu với mô gan không chặt so với mơ thịt, mẫu có cần xay đủ phút mô thịt hay không? Để trả lời câu hỏi thiết nghĩ cần thực lại nghiên cứu với mơ hình có lặp thử xay khoảng thời gian, tốc độ xay thiết bị xay hãng khác Tỷ lệ nhiễm Gnathostoma sp Trong 10 cá thể lươn khảo sát nhiễm Gnathostoma sp cơ, số mẫu (+) 1/10 = 10% Tỷ lệ cao nghiên cứu trước chợ Tp.HCM 3,25 4,64%(1,12) Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2017 27 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Tập 21 * Số * 2017 Tỷ lệ cao nghiên cứu Thái Lan Tuy nhiên theo khác biệt cỡ mẫu nghiên cứu nhỏ, có ứng dụng kết điều tra tìm thấy tỷ lệ nhiễm cao rơi vào tháng 11 – đến tháng hàng năm tác giả trước để chọn thời điểm tiến hành nghiên cứu thực nghiệm Trong nghiên cứu, chúng tơi chọn lươn có kích thước trọng lượng lớn để có xác xuất nhiễm cao, qua sử dụng làm chuẩn vàng để đánh giá kết mơ hình mà kỹ thuật áp dụng Như vậy, dù kết nhiễm chúng tơi tìm thấy chưa phản ánh thực trạng ô nhiễm mầm bệnh lươn, với mơ hình kỹ thuật xây dựng thành cơng góp phần điều tra xác thực trang công đồng môi trường tiến hành diện rộng với cỡ mẫu lớn.(6,7,8) Bảng cho thấy trường hợp tìm thấy ấu trùng thịt lươn rơi vào đoạn thân cá thể lươn Kết phù hợp với nghiên cứu Rojekittikhun W cộng (2004) cho thấy phần thịt thân có tỷ lệ phát ấu trùng cao 51,7% so với 29,7 18,6% phần đầu đuôi lươn.(7) Với trường hợp mẫu gan, trọng lượng tối thiểu mơ hình 50g cho mẫu, tương ứng với khoảng – gan lươn, tỷ lệ nhiễm 46,67% bảng tỷ lệ nhiễm Gnathostoma sp lươn cộng đồng Đó điểm yếu nghiên cứu này, tỷ lệ cao kết mà chưa thể đầy đủ tình hình nhiễm định hướng cho việc khảo sát cá thể lươn nghiên cứu quy trình kỹ thuật ổn định tất loại mô khác thịt gan lươn sở mơ hình chẩn đốn phức tạp nhiễm giun xoắn Với mô thịt, nồng độ pepsin xác định FIP – U Với mô gan, nồng độ pepsin xác định 5FIP – U Tỷ lệ nhiễm Gnathostoma sp lươn 10% chưa thể xác cỡ mẫu thực nghiệm chưa đủ lớn KIẾN NGHỊ Áp dụng kỹ thuật tiêu cải tiến tìm ấu trùng Gnathostoma sp lươn thuỷ sản khác chợ địa bàn thành phố nước Tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện kỹ thuật với cỡ mẫu lớn có so sánh đối chiếu, tiến tới hình thành quy trình chuẩn Nghiên cứu phát triển việc sử dụng nguyên vật liệu rẻ tiền thích hợp khác, áp dụng mơ khác ký chủ trung gian phù hợp với điều kiện sống tập quán sinh hoạt người dân cộng đồng Thực chương trình kiểm sốt ngăn ngừa nguồn bệnh Gnathostoma sp tồn môi trường Tăng cường thông tin, khuyến cáo người dân khơng sử dụng ăn tái chế biến chưa chín từ thuỷ sản TÀI LIỆU THAM KHẢO KẾT LUẬN Chúng bước đầu xây dựng thành cơng mơ hình thủy phân – tiêu cải tiến để chẩn đoán nhiễm Gnathostoma sp lươn dựa 28 Lê Đức Vinh c.s (2013) Khảo sát tình hình nhiễm Gnathostoma spp gan lươn (Monopterus albus) chợ N quận 10, Tp.HCM từ tháng 3/2010- 2/2011 Tạp chí y học Tp.HCM (3):121 – 126 Lê Thị Xuân, Phạm Thị Lệ Hoa, Trần Thị Huệ Vân CS (2003) Bệnh nhiễm Gnathostoma người TP Hồ Chí Minh.Tạp chí Y học thực hành, số 477, tr 117-119 Lê Thị Xuân, Trần Vinh Hiển, Lê Xuân Tú (2001) Một trường hợp nhiễm Gnathostoma spinigerum ngồi da TP Hồ Chí Minh Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, 2001,tr 103-105 Nguyễn Hữu Hồn, Phạm Như Ý, Trương Văn Luyện(2001) Nhân trường hợp viêm não tủy giun Gnathostoma sp Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, tr 106 -110 Nguyễn tiến Dũng c.s (2013) Nghiên cứu xây dựng phương pháp phát ký sinh trùng Trichinella kỹ thuật tiêu Tạp chí y học Tp.HCM (17), 2013:121 - 126 Rojekittikhun W, Chaiyasith T, Nuamtanong S, Komalamisra C.(2004): Gnathostoma infection in fish caught for local consumption in Nakhon Nayok Province, Thailand I Prevalence and fish species Southeast Asian J Trop Med Public Health 2004 Sep;35(3):523-30 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2017 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Tập 21 * Số * 2017 10 11 Rojekittikhun W1, Chaiyasith T, Butraporn P (2004): Gnathostoma infection in fish caught for local consumption in Nakhon Nayok Province, Thailand II Deasonal variation in swamp eels Southeast Asian J Trop Med Public Health 2004 Dec;35(4):786-91 Saksirisampant W, Nuchprayoon S, Wiwanitkit V, Kraivichian K, Suwansaksri J.(2002): Prevalence and intensity of third stage Gnathostoma spinigerum larvae in swamp eels sold in three large markets in Bangkok, Thailand Southeast Asian J Trop Med Public Health 2002;33 Suppl 3:60-2 Sieu TP, Dung TT, Nga NT, Hien TV, Dalsgaard A, Waikagul J, Murrell KD.(2009): Prevalence of Gnathostoma spinigerum infection in wild and cultured swamp eels in Vietnam J Parasitol 2009Feb;95(1):246-8 Trần Thanh Dương (2014) Quy trình phát thu thập sán phương pháp tiêu Trần Thanh Dương (Eds) Quy trình xét nghiệm chuẩn 107 – 109, Nhà xuất Y học Trần Thị Hồng (2013) Gnathostoma sp In: Trần thị Hồng (Eds) Ký sinh trùng y học 1st edition, 126 – 128, Nhà xuất Y học, TP Hồ Chí Minh 12 13 Nghiên cứu Y học Trần Thị Hồng c.s (2014) Khảo sát tình hình nhiễm Gnathostoma spp gan lươn (Monopterus albus) chợ P quận 10, Tp.HCM từ tháng 3/2012- 1/2013 Tạp chí PCSR bệnh KST, (chuyên đề HNKH ĐT CN KST toàn quốc lần thứ 41):85 – 92 Wilai Saksirisampant W, Thanomsub BW (2012): Positivity and Intensity of Gnathostoma spinigerum Infective Larvae in farmed and wild-caught swamp eels in Thailand Korean J Parasitol 2012; 50(2): 113–118 Ngày nhận báo: 02/02/2017 Ngày phản biện nhận xét báo: 13/02/2017 Ngày báo đăng: 20/04/2017 Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật Trường Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch năm 2017 29 ... Mục tiêu nghiên cứu Bước đầu xây dựng quy trình kỹ thuật xét nghiệm tìm ấu trùng Gnathostoma sp gây bệnh lươn kỹ thuật tiêu cải tiến từ qui trình chẩn đốn giun xoắn Xác định tỷ lệ nhiễm Gnathostoma. .. Chúng bước đầu xây dựng thành cơng mơ hình thủy phân – tiêu cải tiến để chẩn đoán nhiễm Gnathostoma sp lươn dựa 28 Lê Đức Vinh c.s (2013) Khảo sát tình hình nhiễm Gnathostoma spp gan lươn (Monopterus. .. chỉnh cải tiến kỹ thuật tiêu trước năm 2000 đến để đánh giá tình hình chẩn đốn nhiễm giun xoắn, ứng dụng cho nhiễm mầm bệnh tự nhiên Kỹ thuật xét chẩn đoán nhiễm giun Gnathostoma sp lươn nghiệm