Kiến thức chuyên ngành Xét nghiệm Đại học

TÀI LIỆU VÀ CÂU HỎI KIỂM TRA, SÁT HẠCH KIẾN THỨC CHUYÊN NGÀNH Tuyển dụng vị trí: Kỹ thuật y đại học chuyên ngành xét nghiệm I TÀI LIỆU - Quy trình kỹ thuật khám bệnh, chữa bệnh chuyên ngành Huyết họcTruyền máu-Miễn dịch-Di truyền ban hành kèm theo Quyết định số 4401/QĐBYT ngày 09/11/2012 Bộ Y tế - Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành Huyết học-Truyền máuMiễn dịch-Di truyền- Sinh học phân tử, ban hành kèm theo Quyết định số 2017/QĐ-BYT ngày 09/6/2014 Bộ Y tế - Thông tư số 26/2013/TT-BYT ngày 16/9/2013 Bộ trưởng Bộ Y tế hướng dẫn hoạt động truyền máu - Thông tư 01/2013/TT-BYT ngày 11 tháng năm 2013 Bộ Y tế hướng dẫn thực quản lý chất lượng xét nghiệm sở khám bệnh, chữa bệnh - Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành Hóa sinh, ban hành kèm theo Quyết định số 320/QĐ- BYT ngày 23/01/2014 Bộ Y tế - Giáo trình Vi sinh vật Y học, Bộ mơn Vi sinh vật - Trường Đại học Y Dược Huế, 2008 II CÂU HỎI, ĐÁP ÁN Câu số Anh (chị) nêu hình thể, tính chất bắt màu, tính chất ni cấy, tính chất sinh vật hóa học vi khuẩn E.coli ? Đáp án: Nội dung Điểm 1.Hình thể tính chất bắt màu : - Hình que thẳng , hai đầu tròn - Kích thước : dài 2-3 micromét , rộng 0.3µm Trong mơi trường ni cấy đơi dài 6-8µm - Phần lớn di động , số không di động Di động có lơng xung quanh thân - Có thể có vỏ , khơng sinh nha bào - Bắt màu gram (-) 2.Tính chất ni cấy : - Phát triển dễ dàng môi trường nuôi cấy thông thường - Phát triển nhiệt độ 5-400C, thích hợp 370C - PH thích hợp : - 7,2 - Hiếu khí kỵ khí tuỳ tiện • Canh thang : sau 3-4 làm đục nhẹ môi trường , sau 24 phát triển làm đục • Thạch thường : sau 24 mọc khuẩn lạc tròn lồi , phồng , đường kính 1,5 mm bờ , dạng S Ngồi có khuẩn lạc xù xì dạng R khuẩn lạc dày dạng • Mac-Con-Key : Khuẩn lạc tròn , bờ , bóng , lên men đường lactoza nên khẩn lạc có màu đỏ cánh sen làm màu môi trường thành màu đỏ, số chủng lên men lactoza chậm 3.Tính chất sinh vật hoá học : - Glucose (+) - Lactose (+) - Hơi (+) mạnh -Di động (+), số chủng không di động - H2S (-) - Phản ứng đỏ methyl (+) - Phản ứng VP( Voges – Proskauer) (-) - Indol (+) - Ure (-) - Citrat Simmons (-) Tổng 65 Câu số 2: Anh (chi) nêu hình thể, tính chất bắt màu, tính chất ni cấy, tính chất sinh vật hóa học vi khuẩn Klebsiella ? Đáp án: Nội dung Điểm Hình thể: - Có nhiều hình thể, mơi trường thạch vi khuẩn có hình cầu trực khuẩn, - Trong mơi trường canh thang vi khuẩn có hình trực khuẩn dài - Bắt màu gram âm - Có vỏ dày gấp 2-3 lần tế bào 3 3 Tính chất nuôi cấy: - Mọc dễ dàng môi trường nuôi cấy thơng thường, điều kiện hiếu kỵ khí tùy tiện, nhiệt độ thích hợp 35-370 C, pH từ 7,2-7,5 - Trên môi trường canh thang :đục môi trường lắng cặn đáy ống nghiệm - Trên mơi trường thạch thường: Khuẩn lạc nhầy dạng M, có màu xám - Trên môi trường Mac- Conkey: khuẩn lạc to,tròn, lầy nhầy, có màu hồng, lấy que cấy thẳng chấm vào khuẩn lạc kéo lên thành sợi dài 2-3mm Tính chất sinh vật hóa học: - Glucose (+) - Lactose (+) - Hơi (+) - Di động (-) - H2S (-) - Phản ứng đỏ methyl (-) - Phản ứng VP( Voges – Proskauer) (+) - Indol (-) - Ure (+) - Citrat Simmons (+) Tổng 3 65 Câu số 3: Anh (chị) nêu hình thể, tính chất bắt màu, tính chất ni cấy, tính chất sinh vật hóa học vi khuẩn Shigella? Đáp án: Nội dung Điểm 1.Hình thể: - Trực khuẩn nhỏ, kích thước 1-3µm - Bắt màu gram âm - Khơng có lơng, khơng có vỏ, khơng di động, khơng sinh nha bào Tính chất ni cấy: ( ý 1.25 điểm) 3 - Phát triển dễ dàng môi trường nuôi cấy thông thường - Phát triển nhiệt độ 6-400 C, thích hợp 370 C - Hiếu khí kỵ khí tùy tiện - pH thích hợp 7,8 phát triển mơi trường có pH 6,8-8,8 - Trên mơi trường lỏng canh thang, pepton: vi khuẩn mọc sớm làm đục môi trường - Trên môi trường SS: Sau 24 mọc khuẩn lạc có kích thước 2-3mm đường kính, khơng màu màu hồng nhạt, mặt nhẵn, bờ đều, khuẩn lạc dạng S - Trên môi trường Mac- Conkey: Khuẩn lạc trong, không màu màu hồng nhạt - Trên môi trường Istrati: khuẩn lạc nhỏ, xanh 3 Tính chất sinh vật hóa học: ( ý điểm) - Glucose (+) - Lactose (-) - Hơi (-) , trừ Shi.flexneri tuyp - Di động (-) - H2S (-) - Phản ứng đỏ methyl (+) - Phản ứng VP( Voges – Proskauer) (-/+) - Indol (-/+) - Ure (-) - Citrat Simmons (-) Tổng 65 Câu số :Anh (chị) nêu hình thể, tính chất bắt màu, tính chất ni cấy, tính chất sinh vật hóa học vi khuẩn Staphylococcus aureus? Đáp án: Nội dung Điểm Hình thái: Vi khuẩn hình cầu hình thuẫn, đường kính µm Trong canh thang hợp thành cụm chùm nho, hình thức tập hợp vi khuẩn phân bào theo nhiều chiều không gian Trong bệnh phẩm vi khuẩn hợp thành đôi đám nhỏ Vi khuẩn bắt màu gram dương Vi khuẩn khơng có vỏ, khơng có lơng, khơng di động, khơng sinh nha bào 2.Tính chất nuôi cấy: - Tụ cầu vàng thuộc loại dễ nuôi cấy, phát triển nhiệt độ 10 – 45°c nồng độ muối cao tới 10% - Thích hợp điều kiện hiếu kỵ khí - Trên môi trường thạch thường, tụ cầu vàng tạo thành khuẩn lạc S( lồi, bóng láng, óng ánh) đường kính 1-2 mm, nhẵn Sau 24 37°C, khuẩn lạc thường có màu vàng chanh, vàng đậm, vàng cam màu trắng - Trên môi trường thạch máu, tụ cầu vàng phát triển nhanh, tạo tan máu hoàn toàn Tụ cầu vàng tiết loại dung huyết tố (hemolysin): α, β, δ, ε, γ - Trên môi trường canh thang: tụ cầu vàng làm đục môi trường sau 5-6 giờ, sau 24 làm đục mơi trường,để lâu lắng cặn 3.Tính chất sinh vật hóa học: 4 4 - S.aureus lên men đường manit - Catalase (+), -Urease (+) - Coagulase (+) - S.aureus có hệ thống men đầy đủ giúp tác động với nhiều loại cacbonhydrat, lipit, protein - S.aureus tương đối chịu nhiệt thuốc sát khuẩn vi khuẩn khác, chịu độ khơ sống mơi trường nồng độ NaCl cao (9%) - Sự kháng lại kháng sinh tụ cầu vàng đặc điểm đáng lưu ý Đa số tụ cầu kháng lại penicillin G vi khuẩn sản xuất men penicillinase nhờ gen R-plasmid Một số kháng lại methicillin goi methicillin resistance S aureus (viết tắt MRSA), tạo đươc cac protein gắn vào vị trí tác động kháng sinh Hiện số tụ cầu đề kháng với cephalosporin hệ Kháng sinh dùng trường hợp vancomycin Tổng 65 Câu số 5: Anh (chị) nêu hình thể, tính chất bắt màu, tính chất ni cấy, tính chất sinh vật hóa học vi khuẩn Streptococcus pneumoniae? Đáp án: Nội dung Điểm Hình thể: - Phế cầu song cầu gram dương, hình nến, xếp thành đơi hai đầu giống tạo thành hình số hay hình mắt kính - Trong mơi trường ni cấy xếp thành chuỗi ngắn dễ nhầm với liên cầu - Trong bệnh phẩm hay môi trường nuôi cấy giàu albumin vi khuẩn tạo vỏ Ni cấy lâu ngày mơi trường nhân tạo khơng có vỏ - Vi khuẩn khơng có lơng, khơng di động, khơng sinh bào tử - Những enzym tự ly giải làm cho vi khuẩn màu gram ly giải Tính chất ni cấy: - Vi khuẩn hiếu, kỵ khí tùy tiện - Mọc tốt mơi trường giàu chất dinh dưỡng, khí trường 510% CO2 Nhiệt độ thích hợp 370C, pH 7,2-7,6 - Ở thachh máu khuẩn lạc sau 24h nhỏ, tròn , bờ đều, giọt sương, lúc đầu lồi, sau lõm với bờ cao xung quanh, tạo vòng tan máu α β xung quanh khuẩn lạc - Trên mơi trường thạch máu có gentamycin: khuẩn lạc tròn, bóng, sáng, Những phế cầu có vỏ khuẩn lạc có đỉnh giữa, đặc tính cho phép phân biệt phế cầu có độc lực phế cầu khơng có độc lực - Trên mơi trường nghèo chất dinh dưỡng: phế cầu phát triển khó, khuẩn lạc dạng R - Ở thạch thường: khuẩn lạc nhỏ, khơ, xù xì - Những phế cầu có vỏ khuẩn lạc thường lớn, nhầy, màu xám 3.Tính chất sinh vật học: - Phế cầu lên men nhiều loại đường, khơng sinh - Khơng có men Catalase: Catalase (-) - Bị ly giải mât, muối mật: Phản ứng Neufeld (+) ( tan dung dịch mật hay muối mật - Không mọc mơi trường có Optochin - Phế cầu dễ chết chất sát khuẩn thông thường (phenol, Cl2Hg) nhiệt( 600C 30 phút) Tổng 65 Câu số 6: Anh (chị) trình bày cấu tạo tế bào vi khuẩn? Đáp án: Nội dung Điểm Vách tế bào vi khuẩn gram dương dày từ 15 đến 50nm Thành phần chủ yếu mucopeptid, N-acetyl glucosamin, Nacetyl muramic chuỗi peptid ngắn chứa alanin, acid glutamic acid diaminopimelic lysin Ngoài vách số vi khuẩn gram dương chứa acid teichoic 6,5 Vách tế bào vi khuẩn gram âm: gồm lớp Lớp mucopeptid mỏng hai lớp lipoprotein lipopolysaccharide bên ngoài, lớp lipoprotein chứa acid amin thơng thường, khơng có acid teichoic 6,5 Chức vách tế bào: 6,5 Vách tế bào - Duy trì hình thể vi khuẩn - Quyết định tính bắt màu gram vi khuẩn - Tạo nên kháng nguyên thân O vi khuẩn đường ruột - Tạo nên nội độc tố vi khuẩn đường ruột 2.Màng nguyên tương: Là màng bán thấm dày khoảng 10nm nằm sát vách tế bào Nó chứa 60-70% lipid, 20-30% protein lượng nhỏ hydrat cacbon Màng nguyên tương có chức rào cản thẩm thấu tế bào, ngăn cản không cho nhiều phẩm vật khác vào bên tế bào lại xúc tác việc chuyên chở vật phẩm khác vào bên tế bào Hơn màng tế bào chứa nhiều hệ thống enzym có chức giốngnhư ti lạp thể động vật thực vật 6,5 Nguyên tương: Là cấu trúc bao bọc bên màng nguyên tương, trạng thái gel, cấu trúc gồm 80% nước, protein có tính chất enzym, cacbohydrat, lipid ion vô nồng độ cao, hợp chất có trọng lượng phân tử thấp Nguyên tương chứa dày đặc ribosome Ngồi thấy hạt dự trữ glycogen, granulosa hay 6,5 polymetaphosphat 4.Nhân tế bào: hình cầu, hình que, hình tạ hình chữ V Nó sợi DNA trọng lương phân tử 3x109 dalton chứa nhiễm sắc thể dài khoảng 1mm không xoắn 6,5 Lông vi khuẩn: Chịu trách nhiệm tính di động vi khuẩn Cách thức mọc lơng đặc tính di truyền Một số loại nhiều lông mọc quanh thân, số loại lông mọc cực, mọt số khác chùm lông cực Nếu lông bị lầm học lơng tạo thành nhanh chóng Lơng đóng vai trò kháng ngun kháng ngun H vi khuẩn đường ruột 6,5 Pili: Là phụ hình sợi, mềm mại lơng, mảnh nhiều có xu hướng thẳng, đường kính 2-3nm dài từ 0.3-1nm, tìm thấy từ đến hàng trăm mặt vi khuẩn Pili xuất phát màng nguyên tương xuyên qua vách tế bào Được tìm thấy vi khuẩn gram âm tìm thấy số vi khuẩn gram dương Pili F có nhiệm vụ tiếp hợp Những pili khác giúp cho vi khuẩn bám vào niêm mạc bề mặt khác tế bào 6,5 Vỏ vi khuẩn: Là cấu trúc nhầy bọc quanh vách tế bào số vi khuẩn, thường polysaccharide, có vỏ B.anthracis polypeptid acid D-glutamic Vỏ có nhiệm vụ la bảo vệ vi khuẩn chống thực bào chống virus gắn vào vách tế bào 6,5 Nha bào: tế bào làm phát sinh nha bào Nha bào nằm giữa, đầu nút gần đầu nút tùy theo loài Vách nha bào chứa thành phần mucopeptid acid dipicolinic Sự dè kháng với hóa chát độc tính khơng thẩm thấu vách nha bào, đề kháng với nhiệt liên quan đến trạng thái nước cao Vì chịu đựng với điều kiện khong thuận lợi bên ngồi, nha bào góp phần quan trọng khả gây bệnh trực khuẩn hiếu khí tạo nha bào trực 6,5 khuẩn than trực khuẩn kỵ khí tạo nha bào Clostridia trực khuẩn uốn ván, hoại thư, sinh hơi, ngộ độc thịt Tổng 65 Câu số 7: Anh (chị) trình bày cấu trúc kháng nguyên tụ cầu ? Đáp án: Nội dung Điểm Các tụ cầu có nhiều loại kháng nguyên: protein, polysaccharid, acid teichoic vách Acid teichoic: kháng nguyên ngưng kết chủ yếu tụ cầu làm tăng tác dụng hoạt hóa bổ thể Đây chất bám dính tụ cầu vào niêm mạc mũi Acid gắn vào polysaccharid vách tụ cầu vàng Đây thành phần đặc hiệu kháng nguyên O Protein A: protein bao quanh bề mặt vách tụ cầu vàng tiêu chuẩn để xác định tụ cầu vàng 100% chủng tụ cầu vàng có protein kháng nguyên mang tên protein A, protein gắn phần Fc IgG Điều dẫn tới làm tác dụng IgG, chủ yếu opsonin hóa (opsonisation), nên làm giảm thực bào 15 15 Vỏ polysaccharid: sơ chủng S aureus có vỏ quan sát phương pháp nhuộm vỏ Lớp vỏ bao gồm nhiều tính đặc hiệu kháng nguyên chứng minh phương pháp huyết học 15 Kháng nguyên adherin (yếu tố bám) Giống nhiều vi khuẩn khác, tụ cầu có protein bề mặt đặc hiệu, có tác dụng bám vào receptor đặc hiệu tế bào Adherin protein: laminin, fibronectin, collagen 15 Tổng 65 Câu số 8: Anh (chị) trình bày khả gây bệnh S.aureus? Đáp án: Nội dung Điểm 10 quản tuần) Tiến hành kỹ thuật 2.1 Chuẩn bị máy phân tích Dựng đường chuẩn Phân tích QC: level Khi QC đạt, tiến hành phân tích mẫu 2.2 Phân tích mẫu Mẫu máu tồn phần trộn đặt vào Rack đựng bệnh phẩm dùng mã vạch (barcode) đánh số (hoặc ID người bệnh); vận hành theo protocol máy máy tự động phân tích 10 III NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ - Giá trị bình thường HbA1c 4- % (tǎng > 6,5%) -Tỷ lệ tương đối trị số HbA1c, nồng độ glucose Fructosamine máu HbA1c Glucose máu Fructosamine % (mmol/L) (µmol/L) 3,3 141 5,0 200 6,7 258 8,3 317 10,0 375 11,7 435 10 13,3 494 11 15,0 552 12 16,7 611 13 18,3 670 14 20,0 729 IV NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ 20 - HbA1c “tăng giả” PreHbA1c; HbF; Hội chứng ure máu cao (cơ chế: Hb bị carbamyl hóa); … - HbA1c “giảm giả” Các bệnh làm giảm đời sống HC: huyết tán (tan máu); Thiếu máu mạn cấp; Xuất 70 huyết tiêu hóa, sau trích máu điều trị; Nhiễm sắc tố sắt; Hemoglobine bất thường (VD: HbH, HbS, HbD, HbE, HbC)… Tổng 65 Câu số 42: Đại cương, bước tiến hành, nhận định kết quy trình xét nghiệm Huyết đồ (bằng máy) Đáp án: Nội dung Đại cương: Điểm Nhiều tình trạng sinh lý bệnh lý thể phản ánh trực tiếp gián tiếp qua số lượng, hình thái thành phần tế bào máu Huyết đồ tổng kết có bình luận biểu Qua đưa số định hướng cho bác sĩ điều trị Các bước tiến hành: 42 2.1 Lấy bệnh phẩm 12 - Người cần xét nghiệm điều dưỡng viên đưa giấy định xét nghiệm - Lấy 2ml máu tĩnh mạch trực tiếp từ người bệnh cho vào ống chống đông, lắc (theo quy trình lấy máu tĩnh mạch) nhận ống máu người bệnh điều dưỡng viên lấy sẵn (máu phải đảm bảo số lượng chất lượng, điều dưỡng viên phải ghi vào sổ nhận bệnh phẩm ngày đưa xét nghiệm ký tên), ống có ghi đầy đủ thông tin phù hợp với giấy xét nghiệm 2.2 Tiến hành kỹ thuật - Đánh số thứ tự lên giấy xét nghiệm ống máu người bệnh (cùng số) - Vào sổ theo thứ tự ghi giấy xét nghiệm - Lắc ống máu (bằng máy lắc có) Cho máu vào chạy máy (theo quy trình chạy máy đếm tế bào) Số thứ tự máy số với ống máu In kết vào giấy riêng ghim vào giấy xét nghiệm 30 6 - Kéo tiêu nhuộm Giemsa (theo quy trình kéo nhuộm tiêu bản) Làm hồng cầu lưới (cho vào ống nghiệm nhỏ giọt máu, giọt xanh cresyl, lắc đều, nút kín, cho vào tủ ấm 370C 15-20 phút, lấy kéo tiêu bản, để khơ tự nhiên đọc kính hiển vi quang học) tính số lượng hồng cầu lưới 1000 hồng cầu trưởng thành, ghi kết vào giấy xét nghiệm - Lưu ý sử dụng máy đếm tế bào có kèm hồng cầu lưới bước 71 làm Nhận định kết quả: 12 - Đọc tiêu nhuộm Giemsa kính hiển vi, đối chiếu với kết chạy máy ghi đầy đủ thông số với ý kiến nhận xét vào giấy xét nghiệm Có thể đưa số yêu cầu xét nghiệm thêm định hướng chẩn đoán (nếu cần) Ghi ngày tháng năm đọc kết bác sĩ ký tên - Vào sổ lưu kết vào máy vi tính - Trả kết - Xét nghiệm trả vòng 24 Cộng 65 Câu số 43: Nguyên lý, bước tiến hành, nhận định kết quy trình định nhóm máu Rh huyết mẫu phương pháp ống nghiệm Đáp án: Nội dung Nguyên lý định nhóm máu Rh kỹ thuật ống nghiệm: Điểm 20 - Hệ nhóm máu Rh hệ nhóm máu quan trọng thứ hai thực hành truyền máu phát năm 1940 nhà bác học Kahl Landsteiner Wiener - Kháng nguyên nhóm máu hệ Rh phong phú với khoảng 50 kháng nguyên khác nhau, nhiên có kháng ngun D, C, c, E, e Kháng nguyên D quan trọng Người mang kháng nguyên D bề mặt hồng cầu gọi người có nhóm máu Rh (D) dương, người không mang kháng nguyên D bề mặt hồng cầu gọi người có nhóm máu Rh (D) âm - Nhóm máu hệ Rh (D) xác định đưa vào có mặt khơng có mặt kháng nguyên D bề mặt hồng cầu - Nguyên lý kỹ thuật định nhóm máu hệ Rh (D) dựa nguyên lý phản ứng ngưng kết Các bước tiến hành: 30 2.1 Chuẩn bị dụng cụ, hóa chất, sinh phẩm trước tiến hành xét nghiệm 2.2 Nhận bệnh phẩm phiếu yêu cầu định nhóm máu Rh (D) người 72 bệnh, kiểm tra đối chiếu thông tin người bệnh ống máu phiếu xét nghiệm 2.3 Chuẩn bị hồng cầu người bệnh 5% môi trường nước muối sinh lý 0,9% (1giọt hồng cầu khối người bệnh + 19 giọt NaCl 0,9%) 2.4 Chuẩn bị ống nghiệm sạch, khô ghi nhãn anti -D va ghi đầy đủ thông tin người bệnh lên ống nghiệm 2.5 Tiến hành định nhóm máu Rh (D): Nhỏ giọt thuốc thử anti -D vào ống nghiệm chuẩn bị trên; Thêm giọt hồng cầu 5% người bệnh vào ống nghiệm trên; Trộn đều, ly tâm 1.000 vòng /phút x 20 giây 2.6 Đọc kết ghi lại mức độ ngưng kết Nhận định kết quả: 5 15 - Nếu phản ứng ngưng kết, kết luận có kháng nguyên D bề mặt hồng cầu, đóng dấu kết quả: nhóm máu Rh (D) dương - Nếu phản ứng khơng ngưng kết, kết luận khơng có kháng ngun D bề mặt hồng cầu, đóng dấu kết quả: nhóm máu Rh (D) âm - Ghi ngày tháng làm xét nghiệm, bác sĩ kỹ thuật viên điều dưỡng làm trực tiếp ký nháy vào phiếu xét nghiệm - Ghi kết vào sổ lưu kết định nhóm máu - Trưởng khoa xét nghiệm ký giấy xét nghiệm để trả kết cho người bệnh Cộng 3 65 Câu số 44: Nguyên lý; sai sót xử trí quy trình xét nghiệm hòa hợp miễn dịch truyền máu cấp phát máu an toàn Đáp án: Nội dung Nguyên lý: Điểm 10 - Việc truyền máu chế phẩm máu phải đảm bảo hòa hợp thành phần truyền vào hệ thống miễn dịch, đặc biệt hệ thống miễn dịch hồng cầu người bệnh - Ngoài việc đảm bảo hòa hợp hệ nhóm máu ABO, cần áp dụng kỹ thuật phát tình trạng khơng hòa hợp ngồi hệ ABO, kiểm sốt tình trạng an toàn thể qua dấu hiệu bề đơn vị máu, quản lý đối chiếu hồ sơ, sản phẩm 73 Những sai sót xử trí: 2.1 Định nhóm máu hệ ABO Khi khơng có phù hợp kết hai phương pháp huyết mẫu hồng cầu mẫu, cần phải thực kiểm tra bổ sung sau: - Kiểm tra mẫu tự thân huyết cần định nhóm hồng cầu tự thân Nếu có ngưng kết, cần kiểm tra mức độ ngưng kết nhiệt độ lạnh (khoảng 40C) nhiệt độ ấm 370C Sự ngưng kết điều kiện nhiệt độ cho thấy có mặt tự kháng thể mẫu định nhóm + Cần thực kỹ thuật rửa hồng cầu nhiều lần điều kiện nhiệt độ ấm 370C hết tượng tự ngưng kết, sau thực định nhóm huyết mẫu + Cần ủ hấp phụ tự kháng thể huyết cần định nhóm với hồng cầu O khơng gây ngưng kết hồng cầu O, sau thực định nhóm với hồng cầu mẫu - Kiểm tra với mẫu chứng huyết cần định nhóm hồng cầu chứng nhóm O Nếu có ngưng kết, cần kiểm tra mức độ ngưng kết nhiệt độ lạnh (khoảng 40C) nhiệt độ ấm 370C + Nếu đồng thời xảy ngưng kết với hồng cầu tự thân: xử lý trường hợp + Nếu huyết cần định nhóm khơng xảy ngưng kết với hồng cầu tự thân ngưng kết với hồng cầu nhóm O hồng cầu khác: Thực kỹ thuật hấp phụ với hồng cầu nhóm O theo điều kiện nhiệt độ cho ngưng kết mạnh không gây ngưng với hồng cầu O, sau thực định nhóm với hồng cầu mẫu - Nếu huyết cần định nhóm khơng có ngưng kết bất thường với hồng cầu tự thân hồng cầu O, khơng có phù hợp kết định nhóm huyết mẫu hồng cầu mẫu Cần kiểm tra phản ứng không ngưng kết kỹ thuật antiglobulin gián tiếp để tăng độ nhạy phản ứng ngưng kết 2.2 Định nhóm máu Rh(D) Khi khơng có tượng ngưng kết kháng huyết anti-D hồng cầu cần định nhóm: - Cần ủ hồng cầu cần định nhóm với huyết mẫu anti -D 370C 60 phút, sau rửa hồng cầu tiếp tục thực kỹ thuật antiglobulin gián tiếp để kiểm tra gắn kháng thể bề mặt hồng cầu - Chỉ kết luận nhóm máu Rh(D) âm tính khơng có ngưng kết với kỹ thuật antiglobulin gián tiếp - Chọn lựa máu chế phẩm hòa hợp kháng nguyên Rh(D) theo quy định điều 34, 35 Quy chế truyền máu ban hành theo Quyết định 06/2007/QĐ-BYT ngày 19/01/2007 Bộ trưởng Y tế 2.3 Xét nghiệm hòa hợp Khi có nhiều xét nghiệm hòa hợp có kết dương tính cần thông báo với bác sĩ điều trị, bác sĩ chuyên khoa huyết học để xem xét thực 55 35 5 5 5 15 5 5 74 biện pháp khác theo quy định điều 33, 34, 35 văn trích dẫn Cộng 65 Câu số 45: Các bước định nhóm máu ABO (định nhóm máu người bệnh nhóm máu túi máu) quy trình xét nghiệm hòa hợp miễn dịch truyền máu cấp phát máu an toàn Đáp án: Nội dung Định nhóm hệ ABO mẫu máu người bệnh theo phương pháp huyết mẫu: Điểm 18 1.1 Chuẩn bị 03 ống nghiệm ghi tên người bệnh mã số người bệnh loại huyết mẫu anti-A, anti-B anti-AB 1.2 Nhỏ 01 giọt huyết mẫu anti-A, anti-B anti -AB vào ống nghiệm có ghi nhãn tương ứng 1.3 Nhỏ 01 giọt hồng cầu người bệnh pha loãng - 5% vào ống nghiệm 1.4 Lắc đều, ly tâm 1.000 vòng /phút 30 giây 1.5 Nghiêng nhẹ ống nghiệm, đọc phản ứng mắt thường nhỏ lam kính đọc kính hiển vi quang học 3 1.6 Ghi tượng ngưng kết tan máu vào hồ sơ Định nhóm hệ ABO mẫu máu người bệnh theo phương pháp hồng cầu mẫu: 18 2.1 Chuẩn bị 02 ống nghiệm khác ghi tên người bệnh mã số người bệnh loại hồng cầu mẫu A B 2.2 Nhỏ 02 giọt huyết người bệnh vào ống nghiệm chuẩn bị mục 2.1 2.3 Nhỏ 01 giọt hồng cầu mẫu nhóm A B pha lỗng - 5% vào ống nghiệm có ghi nhãn tương ứng 2.4 Lắc đều, ly tâm 1.000 vòng /phút 30 giây 2.5 Nghiêng nhẹ ống nghiệm, đọc phản ứng mắt thường nhỏ lam kính đọc kính hiển vi quang học 2.6 Ghi tượng ngưng kết tan máu vào hồ sơ Kết luận nhóm máu người bệnh: 3 3 75 Căn vào tượng ngưng kết, tan máu bước 1.6 2.6, xác định nhóm máu người bệnh Một kỹ thuật viên khác lặp lại độc lập bước kỹ thuật định nhóm máu từ - xác định lại nhóm máu ABO người bệnh So sánh kết định nhóm ABO hai lần định nhóm: - Kết hai lần định nhóm phải giống nhau, trước kết luận cuối nhóm máu ABO người bệnh - Trường hợp người bệnh truyền máu trước đây, định nhóm từ trước: cần so sánh kết định nhóm lần với lần trước Cần kiểm tra lại có khác lần xét nghiệm (nhầm mẫu máu, nhầm hồ sơ ) Định nhóm máu đơn vị máu, chế phẩm máu: 15 6.1 Lấy mẫu máu đơn vị máu, chế phẩm máu từ đoạn dây dính kèm túi máu 6.2 Định nhóm đơn vị máu tồn phần khối bạch cầu: Thực bước tương tự từ - Kết định nhóm phải giống với nhóm máu ghi nhãn đơn vị máu hồ sơ quản lý đơn vị máu toàn phần 6.3 Định nhóm khối hồng cầu: Thực bước tương tự từ 6.1 - 6.4 Kết định nhóm phải giống với nhóm máu ghi nhãn đơn vị máu hồ sơ quản lý đơn vị máu tồn phần 6.4 Định nhóm loại huyết tương, khối tiểu cầu, tủa lạnh: Thực bước tương tự từ 2.1 - 2.6 Kết định nhóm phải giống với nhóm máu ghi nhãn đơn vị máu hồ sơ quản lý đơn vị máu toàn phần 6.5 Trong trường hợp xét nghiệm bước 6.1 - 6.4 cho kết khác với nhóm máu ghi nhãn hồ sơ, cần tìm hiểu nguyên nhân trước tiếp tục bước sau Cộng 3 65 Câu số 46: Đại cương, nhận định kết quả, sai sót quy trình xét nghiệm tìm ký sinh trùng sốt rét phương pháp thủ công Đáp án: Nội dung Đại cương: - Kí sinh trùng sốt rét (KSTSR) kí sinh người, vật chủ trung gian truyền bệnh muỗi Anopheles Điểm 35 76 - KSTSR xuất nhiều máu ngoại vi, người bệnh bắt đầu lên sốt hay sốt - Máu lấy để tìm KSTSR từ tĩnh mạch, chống đông EDTA lấy trực tiếp từ mao mạch (bằng cách chích đầu ngón tay, dái tai hay gót chân) - Kí sinh trùng sốt rét tìm thấy cách soi giọt máu dày giọt máu đàn kính hiển vi Giọt máu nhuộm Giemsa loãng - Mật độ KSTSR tính mật độ bạch cầu tính thang điểm (+) giọt đặc - Phân loại KSTSR theo tiêu chuẩn quy định Đọc kết quả: Tìm KSTSR KHV độ phóng đại 10 x 40 (để kiểm tra tiêu bản), sau đọc độ phóng đại 10 x 100 tìm KSTSR theo chiều ngang tiêu bản, tránh bỏ sót, theo chiều dọc, tránh trùng lên Đánh sau: - Soi 100 vi trường, thấy KSTSR: (+); - Soi 100 vi trường, thấy 10 KSTSR: (++); - Soi vi trường, thấy KSTSR: (+++); - Soi vi trường, thấy 10 KSTSR: (++++) * Xác định loại KSTSR dựa hình thái tiêu chuẩn chẩn đốn theo quy định 7 7 20 4 4 10 2 2 65 Những sai sót xử trí: - Chích đầu ngón tay khơng bỏ giọt máu đầu; - Q trình chích máu nặn bóp nhiều; - Nhầm bệnh phẩm người sang người khác; - Quá trình cố định, nhuộm khơng tốt gây bong tróc, trơi bệnh phẩm; - Chẩn đốn sai khơng bám sát tiêu chuẩn chẩn đoán Cộng Câu hỏi 47: Nguyên lý, bước tiên hành xét nghiệm sàng lọc đơn vị máu thành phần máu an toàn Đáp án: Nội dung Điểm 15 - Mỗi đơn vị máu hiến từ người hiến máu đủ tiêu chuẩn cần phải xét nghiệm sàng lọc số bệnh lây truyền qua đường máu thực số xét nghiệm huyết học - Các xét nghiệm phải thực thiết bị sinh phẩm cấp phép lưu hành Bộ Y tế có độ nhạy, độ đặc hiệu cao phù hợp với mục đích Nguyên lý: 77 trì chất lượng sản phẩm máu đảm bảo an toàn cho người bệnh truyền máu, chế phẩm máu - Mỗi xét nghiệm phải thực theo hướng dẫn sử dụng nhà sản xuất Quy trình quy định công việc cần làm thái độ xử trí tình xảy trình thực xét nghiệm Các bước tiến hành: 2.1 Định nhóm kháng nguyên hồng cầu hệ ABO huyết mẫu hồng cầu mẫu ống nghiệm 40 Ghi kết tưỢng ngưng kết kết luận nhóm máu có phù hợp kết hai phương pháp 2.2 Định kháng nguyên Rh (D) huyết mẫu anti -D ống nghiệm Ghi kết kháng nguyên D dương tính có ngưng kết 2.3 Xét nghiệm sàng lọc HIV kỹ thật tìm kháng thể anti -HIV với độ nhạy độ đặc hiệu tương đương cao kỹ thuật ELISA Ghi kết xét nghiệm sàng lọc HIV âm tính mật độ quang (OD) mẫu cần xét nghiệm thấp ngưỡng nhà sản xuất sinh phẩm khuyến nghị mẫu chúng, mẫu kiểm tra chất lượng cho kết đạt yêu cầu 2.4 Xét nghiệm sàng lọc viêm gan B kỹ thuật tìm kháng nguyên HBsAg với độ nhạy độ đặc hiệu tương đương cao kỹ thuật ELISA Ghi kết xét nghiệm sàng lọc viêm gan B âm tính OD mẫu cần xét nghiệm thấp ngưỡng C 2.5 Xét nghiệm sàng lọc viêm gan C kỹ thuật tìm kháng thể anti -HCV với độ nhạy độ đặc hiệu tương đương cao kỹ thuật ELISA Ghi kết xét nghiệm sàng lọc viêm gan C âm tính OD mẫu cần xét nghiệm thấp ngưỡng nhà sản xuất sinh phẩm khuyến nghị mẫu chúng, mẫu kiểm tra chất lượng cho kết đạt yêu cầu 2.6 Xét nghiệm sàng lọc giang mai kỹ thuật tìm kháng thể giang mai với độ nhạy độ đặc hiệu tương đương cao kỹ thuật VDRL Ghi kết xét nghiệm sàng lọc giang mai âm tính khơng có ngưng kết OD mẫu cần xét nghiệm thấp ngưỡng nhà sản xuất sinh phẩm khuyến nghị mẫu chúng, mẫu kiểm tra chất lượng cho kết đạt yêu cầu 2.7 Xét nghiệm sàng lọc sốt rét kỹ thuật có độ nhạy tương đương 78 cao kỹ thuật tìm ký sinh trùng sốt rét tiêu giọt đặc đọc kính hiển vi quang học Ghi kết xét nghiệm sàng lọc sốt rét âm tính khơng phát ký sinh trùng kính hiển vi quang học OD mẫu cần xét nghiệm thấp ngưỡng nhà sản xuất sinh phẩm khuyến nghị mẫu chúng, mẫu kiểm tra Cộng 65 Câu hỏi 48: Những sai sót định nhóm máu ABO, Rh quy trình xét nghiệm sàng lọc đơn vị máu thành phần máu an toàn Đáp án: Nội dung Định nhóm hồng cầu ABO Điểm 45 Khi khơng có phù hợp kết hai phương pháp huyết mẫu hồng cầu mẫu, cần phải thực kiểm tra bổ sung sau: - Kiểm tra mẫu tự thân huyết cần định nhóm hồng cầu tự thân: có ngưng kết, cần kiểm tra mức độ ngưng kết nhiệt độ lạnh (khoảng 40C) nhiệt độ ấm 370C Sự ngưng kết điều kiện nhiệt độ cho thấy có mặt tự kháng thể mẫu định nhóm + Cần thực kỹ thuật rửa hồng cầu nhiều lần điều kiện nhiệt độ ấm 370C hết tượng tự ngưng kết, sau thực định nhóm huyết mẫu + Cần ủ hấp phụ tự kháng thể huyết cần định nhóm với hồng cầu O khơng gây ngưng kết hồng cầu O, sau thực định nhóm với hồng cầu mẫu - Kiểm tra với mẫu chứng huyết cần định nhóm hồng cầu chứng nhóm O: có ngưng kết, cần kiểm tra mức độ ngưng kết nhiệt độ lạnh (khoảng 40C) nhiệt độ ấm 370C + Nếu đồng thời xảy ngưng kết với hồng cầu tự thân: xử lý trường hợp + Nếu huyết cần định nhóm khơng xảy ngưng kết với hồng cầu tự 79 thân ngưng kết với hồng cầu nhóm O hồng cầu khác: Thực kỹ thuật hấp phụ với hồng cầu nhóm O theo điều kiện nhiệt độ cho ngưng kết mạnh không gây ngưng với hồng cầu O, sau thực định nhóm với hồng cầu mẫu - Nếu huyết cần định nhóm khơng có ngưng kết bất thường với hồng cầu tự thân hồng cầu O, khơng có phù hợp kết định nhóm huyết mẫu hồng cầu mẫu: cần kiểm tra phản ứng không ngưng kết kỹ thuật antiglobulin gián tiếp để tăng độ nhạy phản ứng ngưng kết - Phải cách ly đơn vị máu, chế phẩm máu chưa có kết định nhóm máu Định nhóm kháng ngun Rh (D): Khi khơng có ngưng kết kháng huyết anti -D hồng cầu cần định nhóm: - Cần ủ hồng cầu cần định nhóm với huyết mẫu anti -D 370C 60 phút, sau rửa hồng cầu tiếp tục thực kỹ thuật antiglobulin gián tiếp để kiểm tra gắn kháng thể bề mặt hồng cầu - Chỉ kết luận nhóm máu Rh (D) âm tính khơng có ngưng kết với kỹ thuật antiglobulin gián tiếp Cộng 5 15 5 65 Câu hỏi 49: Những sai sót xét nghiệm sàng lọc HIV, viêm gan B, viêm gan C, giang mai quy trình xét nghiệm sàng lọc đơn vị máu thành phần máu an toàn Đáp án: Nội dung Xét nghiệm sàng lọc HIV, viêm gan B viêm gan C: Điểm 40 - Khi mẫu chứng, mẫu kiểm tra chất lượng cho kết không đạt yêu cầu Cần phải thực xét nghiệm lại tất mẫu máu thực phiến xét nghiệm - Khi mẫu xét nghiệm có OD cao ngưỡng nhà sản xuất sinh phẩm khuyến nghị, cần thực bước sau: 18 + Lấy thêm mẫu từ túi máu, chế phẩm máu cần xét nghiệm + Định nhóm máu hệ ABO mẫu xét nghiệm lấy lần đầu mẫu lấy từ đơn vị máu chế phẩm máu; So sánh kết định nhóm, kết 6 80 không giống nhau, cần kiểm tra lại tất đơn vị máu tiếp nhận có liên quan + Nếu kết định nhóm mẫu giống nhau, thực xét nghiệm với mẫu xét nghiệm lấy lần đầu mẫu lấy từ túi máu chế phẩm máu kỹ thuật xét nghiệm, sinh phẩm có độ nhạy độ đặc hiệu cao lần xét nghiệm - Kết xét nghiệm xử trí với đơn vị máu, chế phẩm máu có liên quan: + Nếu mẫu xét nghiệm lấy từ đơn vị máu, chế phẩm máu có OD cao ngưỡng nhà sản xuất sinh phẩm khuyến nghị kết luận xét nghiệm dương tính hủy đơn vị máu, chế phẩm máu + Nếu mẫu xét nghiệm lấy từ đơn vị máu, chế phẩm máu có OD thấp so với ngưỡng, cao mức 80% so với ngưỡng nhà sản xuất sinh phẩm khuyến nghị kết luận xét nghiệm nghi ngờ hủy đơn vị máu, chế phẩm máu + Nếu mẫu xét nghiệm lấy từ đơn vị máu, chế phẩm máu có OD thấp mức 80% so với ngưỡng nhà sản xuất sinh phẩm khuyến nghị kết luận xét nghiệm âm tính cho phép sử dụng đơn vị máu, chế phẩm máu Xét nghiệm sàng lọc giang mai: 15 5 25 - Khi mẫu chứng, mẫu kiểm tra chất lượng cho kết không đạt yêu cầu Cần phải thực xét nghiệm lại tất mẫu máu thực phiến xét nghiệm - Khi mẫu xét nghiệm có ngưng kết, có OD cao ngưỡng nhà sản xuất sinh phẩm khuyến nghị, cần thực bước sau: 10 + Lấy thêm mẫu từ túi máu, chế phẩm máu cần xét nghiệm; Định nhóm máu hệ ABO mẫu xét nghiệm lấy lần đầu mẫu lấy từ đơn vị máu chế phẩm máu; So sánh kết định nhóm, kết khơng giống nhau, cần kiểm tra lại tất đơn vị máu tiếp nhận có liên quan + Nếu kết định nhóm mẫu giống nhau, thực xét nghiệm với mẫu xét nghiệm lấy lần đầu mẫu lấy từ túi máu chế phẩm máu kỹ thuật xét nghiệm, sinh phẩm có độ nhạy độ đặc hiệu cao lần xét nghiệm - Kết xét nghiệm xử trí với đơn vị máu, chế phẩm máu có liên quan: + Nếu mẫu xét nghiệm lấy từ đơn vị máu, chế phẩm máu có ngưng kết OD cao ngưỡng nhà sản xuất sinh phẩm khuyến nghị kết luận xét nghiệm dương tính hủy đơn vị máu, chế phẩm máu 81 + Nếu mẫu xét nghiệm lấy từ đơn vị máu, chế phẩm máu khơng có ngưng kết có OD thấp so với ngưỡng nhà sản xuất sinh phẩm khuyến nghị kết luận xét nghiệm âm tính cho phép sử dụng đơn vị máu, chế phẩm máu Cộng 10 5 65 Câu hỏi 50: Nguyên lý, bước tiến hành, nhận định kết quy trình xét nghiệm thời gian prothrombin (thời gian Quick) Đáp án: Nội dung Nguyên lý: Đây xét nghiệm sử dụng rộng rãi để đánh giá đường đông máu ngoại sinh sau bổ sung đầy đủ lượng thromboplastin tổ chức canxi Chỉ định: Tất trường hợp nghi ngờ có bất thường đơng máu: suy giảm chức gan, thiếu hụt vitamin K Đây xét nghiệm tiền phẫu, xét nghiệm theo dõi hiệu điều trị kháng vitamin K Các bước tiến hành: - Ga-rô, sát trùng, lấy khoảng 2ml máu tĩnh mạch - Trộn máu chất chống đông citrat natri 3,2% theo tỷ lệ thể tích máu /1 thể tích chống đơng - Ly tâm mạnh thu huyết tương nghèo tiểu cầu - Tách lấy huyết tương làm xét nghiệm - Mỗi người bệnh, chuẩn bị hai ống nghiệm tan máu, ghi tên, tuổi, khoa, phòng - Phân phối 100ml huyết tương mẫu cần kiểm tra vào ống nghiệm tan máu chuẩn bị - Cho thêm vào 200ml thromboplastin canxi Khởi động đồng hồ ngay; xuất màng đông, bấm đồng hồ dừng lại Nhận định kết quả: - Thời gian (giây), kèm thời gian chứng bình thường Điểm 30 5 5 5 25 82 - %: dựa vào đường thẳng chuẩn - INR (International Normalized Ratio), tính theo cơng thức: PT bệnh (giây) ISI (ISI: International Sensitivity Index: số độ nhạy quốc tế) - Ghi kết quả: thời gian, %, INR vào giấy xét nghiệm - Điền đầy đủ ngày, tháng năm kỹ thuật viên tiến hành xét nghiệm ký tên Cộng 5 5 65 Câu hỏi 51: Nguyên lý, định, bước tiến hành, nhận định kết quy trình xét nghiệm thời gian thromboplastin phần hoạt hóa (thời gian aPTT) Đáp án: Nội dung Nguyên lý: Đây xét nghiệm sử dụng để đánh giá đường đông máu nội sinh sau thay yếu tố tiểu cầu cephalin hoạt hóa tối đa yếu tố tiếp xúc chất hoạt hóa Chỉ định Những trường hợp nghi ngờ bất thường đông cầm máu, bất thường đường đơng máu nội sinh: nghi ngờ hemophilia, có biểu xuất huyết, huyết khối lâm sàng, chảy máu khó cầm sau can thiệp, APTT định trước can thiệp, phẫu thuật xét nghiệm tiền phẫu Các bước tiến hành: - Ga-rô, sát trùng, lấy khoảng 2ml máu tĩnh mạch - Trộn máu với chất chống đông citrat natri 3,2% theo tỷ lệ: thể tích chống đơng trộn với thể tích máu - Ly tâm mạnh để thu huyết tương nghèo tiểu cầu - Mỗi người bệnh, chuẩn bị hai ống nghiệm tan máu, ghi tên, tuổi, khoa, phòng - Phân phối 100ml huyết tương nghèo tiểu cầu cần kiểm tra vào ống nghiệm, để vào bình cách thủy 370C - Thêm vào 100ml hỗn dịch cephalin - kaolin; ủ bình cách thủy 370C 3-5 phút - Cho thêm vào 100ml CaCl2 M/40 Ghi thời gian đông Nhận định kết quả: - Ghi kết quả: thời gian, số bệnh /chứng vào giấy xét nghiệm - Điền đầy đủ ngày, tháng năm kỹ thuật viên tiến hành xét nghiệm ký tên Cộng Điểm 10 10 35 5 5 5 10 5 65 83 84