Kiến thức chuyên ngành Xét nghiệm Đại học

- Mẫu huyết thanh kiểm tra chất lượng, mẫu bệnh phẩm đo hoạt độ ALP được phân tích trên máy phân tích sinh hóa tự động MODULAR, COBAS 6000, COBAS 8000 hãng Roche, hoặc các máy AU 480 hãn

Trang 1

TÀI LIỆU VÀ CÂU HỎI KIỂM TRA, SÁT HẠCH

KIẾN THỨC CHUYÊN NGÀNH Tuyển dụng vị trí: Kỹ thuật y đại học chuyên ngành xét nghiệm

I TÀI LIỆU

- Quy trình kỹ thuật khám bệnh, chữa bệnh chuyên ngành Huyết Truyền máu-Miễn dịch-Di truyền ban hành kèm theo Quyết định số 4401/QĐ- BYT ngày 09/11/2012 của Bộ Y tế.

học Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành Huyết họchọc Truyền máuhọc Miễn dịch-Di truyền- Sinh học phân tử, ban hành kèm theo Quyết định số 2017/QĐ-BYT ngày 09/6/2014 của Bộ Y tế.

máu Thông tư số 26/2013/TTmáu BYT ngày 16/9/2013 của Bộ trưởng Bộ Y tế

về hướng dẫn hoạt động truyền máu.

- Thông tư 01/2013/TT-BYT ngày 11 tháng 1 năm 2013 của Bộ Y tế về hướng dẫn thực hiện quản lý chất lượng xét nghiệm tại cơ sở khám bệnh, chữa bệnh.

- Hướng dẫn quy trình kỹ thuật chuyên ngành Hóa sinh, ban hành kèm theo Quyết định số 320/QĐ- BYT ngày 23/01/2014 của Bộ Y tế.

- Giáo trình Vi sinh vật Y học, Bộ môn Vi sinh vật - Trường Đại học Y Dược Huế, 2008.

II CÂU HỎI, ĐÁP ÁN

Câu số 1 Anh (chị) hãy nêu hình thể, tính chất bắt màu, tính chất nuôi

cấy, tính chất sinh vật hóa học của vi khuẩn E.coli ?

Đáp án:

1.Hình thể và tính chất bắt màu :

- Kích thước : dài 2-3 micromét , rộng 0.3µm Trong môi

trường nuôi cấy đôi khi dài 6-8µm

Trang 2

• Canh thang : sau 3-4 giờ làm đục nhẹ môi trường , sau 24 giờ

• Mac-Con-Key : Khuẩn lạc tròn , bờ đều , bóng , lên men

đường lactoza nên khẩn lạc có màu đỏ cánh sen và làm màu

của môi trường thành màu đỏ, 1 số chủng lên men lactoza

Câu số 2: Anh (chi) hãy nêu hình thể, tính chất bắt màu, tính chất nuôi cấy, tính

chất sinh vật hóa học của vi khuẩn Klebsiella ?

Trang 3

Nội dung Điểm

- Mọc dễ dàng trên môi trường nuôi cấy thông thường, trong

điều kiện hiếu kỵ khí tùy tiện, ở nhiệt độ thích hợp 35-370 C,

- Trên môi trường Mac- Conkey: khuẩn lạc to,tròn, lầy nhầy,

có màu hồng, lấy que cấy thẳng chấm vào khuẩn lạc kéo lên

Câu số 3: Anh (chị) hãy nêu hình thể, tính chất bắt màu, tính chất nuôi cấy, tính

chất sinh vật hóa học của vi khuẩn Shigella?

Trang 4

Đáp án:

1.Hình thể:

- Bắt màu gram âm 3

- Không có lông, không có vỏ, không di động, không sinh nha

bào

4

2 Tính chất nuôi cấy: ( mỗi ý đúng được 1.25 điểm)

- Phát triển dễ dàng trên các môi trường nuôi cấy thông thường

3

- Phát triển được ở nhiệt độ 6-400 C, thích hợp nhất là 370 C 3

- pH thích hợp là 7,8 nhưng có thể phát triển ở môi trường có

pH 6,8-8,8

3

- Trên môi trường lỏng như canh thang, pepton: vi khuẩn mọc

sớm và làm đục đều môi trường

3

- Trên môi trường SS: Sau 24 giờ mọc khuẩn lạc có kích thước

2-3mm đường kính, không màu hoặc màu hồng nhạt, mặt

- Trên môi trường Istrati: khuẩn lạc nhỏ, trong xanh 3

3 Tính chất sinh vật hóa học: ( mỗi ý đúng được 1 điểm)

Trang 5

- Ure (-) 3

Câu số 4 :Anh (chị) hãy nêu hình thể, tính chất bắt màu, tính chất nuôi cấy, tính

chất sinh vật hóa học của vi khuẩn Staphylococcus aureus?

Đáp án:

1 Hình thái:

Vi khuẩn hình cầu hoặc hình thuẫn, đường kính 1 µm 4

Trong canh thang hợp thành từng cụm như chùm nho, hình

thức tập hợp này do vi khuẩn phân bào theo nhiều chiều trong

không gian Trong bệnh phẩm vi khuẩn hợp thành từng đôi

hoặc từng đám nhỏ

4

Vi khuẩn không có vỏ, không có lông, không di động, không

sinh nha bào

4

2.Tính chất nuôi cấy:

- Tụ cầu vàng thuộc loại dễ nuôi cấy, phát triển được ở nhiệt độ

10 – 45°c và nồng độ muối cao tới 10%.

4

- Trên môi trường thạch thường, tụ cầu vàng tạo thành khuẩn

lạc S( lồi, bóng láng, óng ánh) đường kính 1-2 mm, nhẵn Sau

24 giờ ở 37°C, khuẩn lạc thường có màu vàng chanh, vàng

đậm, vàng cam hoặc màu trắng

4

- Trên môi trường thạch máu, tụ cầu vàng phát triển nhanh, tạo

tan máu hoàn toàn Tụ cầu vàng tiết ra 5 loại dung huyết tố

(hemolysin): α, β, δ, ε, γ.

4

- Trên môi trường canh thang: tụ cầu vàng làm đục môi trường

sau 5-6 giờ, sau 24 giờ làm đục đều môi trường,để lâu nó có

thể lắng cặn.

4

3.Tính chất sinh vật hóa học:

Trang 6

- S.aureus lên men đường manit 4

- S.aureus có hệ thống men rất đầy đủ giúp nó tác động được

với nhiều loại cacbonhydrat, lipit, protein

4

- S.aureus tương đối chịu nhiệt và thuốc sát khuẩn hơn những

vi khuẩn khác, chịu độ khô và có thể sống ở môi trường nồng

độ NaCl cao (9%)

4

- Sự kháng lại kháng sinh của tụ cầu vàng là một đặc điểm rất

đáng lưu ý Đa số tụ cầu kháng lại penicillin G do vi khuẩn

này sản xuất được men penicillinase nhờ gen của R-plasmid

Một số còn kháng lại được methicillin goi là methicillin

resistance S aureus (viết tắt là MRSA), do nó tạo ra đươc cac

protein gắn vào vị trí tác động của kháng sinh Hiện nay một

số rất ít tụ cầu còn đề kháng được với cephalosporin các thế

hệ Kháng sinh được dùng trong các trường hợp này là

vancomycin.

5

Câu số 5: Anh (chị) hãy nêu hình thể, tính chất bắt màu, tính chất nuôi

cấy, tính chất sinh vật hóa học của vi khuẩn Streptococcus pneumoniae?

Đáp án:

1 Hình thể:

- Phế cầu là song cầu gram dương, hình ngọn nến, xếp thành

đôi hai đầu giống nhau tạo thành hình số 8 hay hình mắt kính

Trang 7

không có vỏ

- Vi khuẩn không có lông, không di động, không sinh bào tử 4

- Những enzym tự ly giải làm cho vi khuẩn mất màu gram rồi

2 Tính chất nuôi cấy:

- Mọc tốt ở môi trường giàu chất dinh dưỡng, khí trường

5-10% CO2 Nhiệt độ thích hợp là 370C, pH 7,2-7,6

4

- Ở thachh máu khuẩn lạc sau 24h nhỏ, tròn , bờ đều, trong như

giọt sương, lúc đầu lồi, sau lõm ở giữa với bờ cao xung quanh,

tạo vòng tan máu α hoặc β xung quanh khuẩn lạc

3

- Trên môi trường thạch máu có gentamycin: khuẩn lạc tròn,

bóng, sáng, trong Những phế cầu có vỏ khuẩn lạc có đỉnh ở

giữa, đặc tính này cho phép phân biệt phế cầu có độc lực và

phế cầu không có độc lực

3

- Trên môi trường nghèo chất dinh dưỡng: phế cầu phát triển

- Những phế cầu có vỏ khuẩn lạc thường lớn, hơi nhầy, màu

- Bị ly giải bởi mât, muối mật: Phản ứng Neufeld (+) ( tan

trong dung dịch mật hay muối mật

4

- Phế cầu dễ chết bởi những chất sát khuẩn thông thường

(phenol, Cl2Hg) và nhiệt( 600C trong 30 phút)

4

Câu số 6: Anh (chị) hãy trình bày cấu tạo tế bào của vi khuẩn?

Trang 8

Đáp án:

1 Vách tế bào

Vách tế bào của vi khuẩn gram dương dày từ 15 đến 50nm

Thành phần chủ yếu là mucopeptid, acetyl glucosamin,

N-acetyl muramic và những chuỗi peptid ngắn chứa alanin, acid

glutamic và acid diaminopimelic hoặc lysin Ngoài ra vách của

một số vi khuẩn gram dương còn chứa acid teichoic

6,5

Vách tế bào của vi khuẩn gram âm: gồm 3 lớp Lớp

mucopeptid mỏng hơn và hai lớp lipoprotein và

lipopolysaccharide ở bên ngoài, lớp lipoprotein chứa các acid

amin thông thường, không có acid teichoic

6,5

Chức năng của vách tế bào:

- Duy trì hình thể vi khuẩn

- Quyết định tính bắt màu gram của vi khuẩn

- Tạo nên kháng nguyên thân O của vi khuẩn đường ruột

- Tạo nên nội độc tố của vi khuẩn đường ruột

6,5

2.Màng nguyên tương: Là màng bán thấm dày khoảng 10nm

nằm sát vách tế bào Nó chứa 60-70% lipid, 20-30% protein và

một lượng nhỏ hydrat cacbon Màng nguyên tương có chức

năng rào cản thẩm thấu của tế bào, ngăn cản không cho nhiều

phẩm vật khác vào bên trong tế bào nhưng lại xúc tác việc

chuyên chở những vật phẩm khác vào bên trong tế bào Hơn

nữa màng tế bào chứa nhiều hệ thống enzym và vì vậy nó có

chức năng giốngnhư ti lạp thể ở động vật và thực vật

6,5

3 Nguyên tương: Là cấu trúc được bao bọc bên ngoài bởi

màng nguyên tương, ở trạng thái gel, cấu trúc này gồm 80%

nước, các protein có tính chất enzym, cacbohydrat, lipid và các

ion vô cơ ở nồng độ cao, và các hợp chất có trọng lượng phân

tử thấp Nguyên tương chứa dày đặc ribosome Ngoài ra còn

có thể thấy những hạt dự trữ glycogen, granulosa hay

6,5

Trang 9

polymetaphosphat

4.Nhân tế bào: có thể hình cầu, hình que, hình quả tạ hoặc

hình chữ V Nó là một sợi DNA trọng lương phân tử 3x109

dalton và chứa một nhiễm sắc thể duy nhất dài khoảng 1mm

nếu không xoắn

6,5

5 Lông của vi khuẩn: Chịu trách nhiệm về tính di động của vi

khuẩn Cách thức mọc lông là một đặc tính di truyền Một số

loại nhiều lông mọc quanh thân, một số loại một lông mọc ở

cực, mọt số khác một chùm lông ở một cực Nếu lông bị lầm

mất đi bằng cơ học thì lông mới được tạo thành nhanh chóng

Lông đóng vai trò kháng nguyên như kháng nguyên H ở vi

khuẩn đường ruột.

6,5

6 Pili: Là những bộ phụ hình sợi, mềm mại hơn lông, mảnh

hơn nhiều và có xu hướng thẳng, đường kính 2-3nm và dài từ

0.3-1nm, tìm thấy từ một đến hàng trăm ở mặt ngoài vi khuẩn

Pili xuất phát ở trong màng nguyên tương và xuyên qua vách tế

bào Được tìm thấy ở vi khuẩn gram âm nhưng cũng có thể tìm

thấy ở một số vi khuẩn gram dương Pili F có nhiệm vụ trong

sự tiếp hợp Những pili khác giúp cho vi khuẩn bám vào niêm

mạc hoặc bề mặt khác của tế bào

6,5

7 Vỏ của vi khuẩn: Là một cấu trúc nhầy bọc quanh vách tế

bào của một số vi khuẩn, thường là polysaccharide, chỉ có vỏ

của B.anthracis là một polypeptid acid D-glutamic Vỏ có

nhiệm vụ duy nhất la bảo vệ vi khuẩn chống thực bào và chống

virus gắn vào vách tế bào

6,5

8 Nha bào: mỗi tế bào làm phát sinh một nha bào Nha bào có

thể nằm giữa, ở đầu nút hoặc gần đầu nút tùy theo loài Vách

nha bào chứa những thành phần mucopeptid và acid

dipicolinic Sự dè kháng với hóa chát độc là do tính không

thẩm thấu của vách nha bào, sự đề kháng với nhiệt liên quan

đến trạng thái mất nước cao Vì chịu đựng với điều kiện khong

thuận lợi bên ngoài, nha bào góp phần quan trọng trong khả

năng gây bệnh của trực khuẩn hiếu khí tạo nha bào như trực

6,5

Trang 10

khuẩn than hoặc trực khuẩn kỵ khí tạo nha bào như Clostridia

nhất là trực khuẩn uốn ván, hoại thư, sinh hơi, ngộ độc thịt

Câu số 7: Anh (chị) hãy trình bày cấu trúc kháng nguyên của tụ cầu ?

Đáp án:

Các tụ cầu có nhiều loại kháng nguyên: protein, polysaccharid,

acid teichoic của vách

5

Acid teichoic: là kháng nguyên ngưng kết chủ yếu của tụ cầu

và làm tăng tác dụng hoạt hóa bổ thể Đây còn là chất bám

dính của tụ cầu vào niêm mạc mũi Acid này gắn vào

polysaccharid vách tụ cầu vàng Đây là thành phần đặc hiệu

của kháng nguyên O

15

Protein A: là những protein bao quanh bề mặt vách tụ cầu vàng

và là một tiêu chuẩn để xác định tụ cầu vàng 100% các chủng

tụ cầu vàng có protein này sở dĩ kháng nguyên này mang tên

protein A, vì protein này gắn được phần Fc của IgG Điều này

dẫn tới làm mất tác dụng của IgG, chủ yếu là mất đi opsonin

hóa (opsonisation), nên làm giảm thực bào

15

Vỏ polysaccharid: một sô ít chủng S aureus có vỏ và có thể

quan sát được bằng phương pháp nhuộm vỏ Lớp vỏ này bao

gồm nhiều tính đặc hiệu kháng nguyên và có thể chứng minh

được bằng phương pháp huyết thanh học

15

Kháng nguyên adherin (yếu tố bám)

Giống như nhiều vi khuẩn khác, tụ cầu có protein bề mặt đặc

hiệu, có tác dụng bám vào receptor đặc hiệu tế bào Adherin có

thể là các protein: laminin, fibronectin, collagen

Trang 11

1.Nhiễm khuẩn ngoài da

Do tụ cầu vàng ký sinh ở da và niêm mạc mũi, nên nó có

thể xâm nhập qua các lỗ chân lông, chân tóc hoặc các tuyến

dưói da Sau đó gây nên các nhiễm khuẩn sinh mủ: mụn nhọt,

đầu đinh, các ổ áp xe, eczema, … Mức độ các nhiễm khuẩn

này phụ thuộc vào sự đề kháng của cơ thể và độc lực của vi

khuẩn Nhiễm tụ cầu ngoài da thường gặp ở trẻ em và người

suy giảm miễn dịch

8

2 Nhiễm khuẩn huyết

Tụ cầu vàng là vi khuẩn thường gây nhiễm khuẩn huyết nhất

Do chúng gây nên nhiều loại nhiễm khuẩn, đặc biệt là các

nhiễm khuẩn ngoài da, từ đấy vi khuẩn xâm nhập vào máu gây

nên nhiễm khuẩn huyết Đây là một nhiễm trùng rất nặng Từ

nhiễm khuẩn huyết, tụ cầu vàng đi tới các cơ quan khác nhau

và gây nên các ổ áp xe (gan, phổi, não, tuỷ xương…) hoặc

viêm nội tâm mạc Có thế gây nên các viêm tắc tĩnh mạch Một

số nhiễm trùng khu trú này trở thành viêm mạn tính như viêm

xương…

8

3.Viêm phổi

Viêm phổi do tụ cầu vàng ít gặp Nó chỉ xảy ra sau viêm đường

hô hấp do virus (như cúm) hoặc sau nhiễm khuẩn huyết Tuy

vậy cũng có viêm phổi tiên phát do tụ cầu vàng, ở trẻ em hoặc

những người suy yếu Tỷ lệ tử vong của bệnh này khá cao, vì

thế nó được coi là bệnh nặng

8

4 Nhiễm độc thức ăn và viêm ruột cấp

Ngộ độc thức ăn tụ cầu có thể do ăn uống phải độc tố ruột của

tụ cầu, hoặc do tụ cầu vàng vốn cư trú ở đường ruột chiếm ưu

thế về số lượng Nguyên nhân là sau một thời gian dài bệnh

nhân sử dụng kháng sinh có hoạt phổ rộng, dẫn đến các vi

khuẩn chí bình thường của đường ruột nhậy cảm kháng sinh bị

tiêu diệt và tạo điều kiện thuận lợi cho tụ cầu vàng (kháng

kháng sinh) tăng trưởng về số lượng.Triệu chứng của ngộ độc

thức ăn do tụ cầu thường rất cấp tính sau khi ăn phải thức ăn

17

Trang 12

nhiễm độc tố tụ cầu từ 2 đến 8 giờ, bệnh nhân nôn và đi ngoài

dữ dội, phân lẫn nưóc, càng về sau phân và chất nôn chủ yếu là

nước Do mất nhiều nước và điện giải có thế dẫn tới shock

Ngộ độc thức ăn do tụ cầu vàng là một trong những ngộ độc

thức ăn rất thường gặp ỏ Việt Nam

5.Nhiễm khuẩn bệnh viện do tụ cầu: rất thường gặp, nhất là

đôi với nhiễm trùng vết mổ, vết bỏng… từ đó dẫn tới nhiễm

khuẩn huyết Các chủng tụ cầu này có khả năng kháng kháng

sinh rất mạnh và phải dùng tới vancomycin Tỷ lệ tử vong của

bệnh này rất cao

8

6 Hội chứng da phồng rộp (Scalded skin syndrome) 8

7 Hội chứng shock nhiễm độc (toxic shock syndrome) 8

Câu số 9: Anh (chị) hãy trình bày chẩn đoán vi sinh vật học của phế cầu?

Đáp án:

- Nhuộm gram nếu thấy nhiều cầu khuẩn gram dương hình

ngọn nến xếp thành từng đôi đồng thời với bạch cầu đa nhân

và đại thực bào sơ bộ chẩn đoán do phế cầu và bắt đầu điều trị

6

Tiêu chuẩn xác định phế cầu gây bệnh

+ Song cầu gram dương hình ngọn nến, đứng thành đôi một 9

Trang 13

Đáp án:

1 Độc tố ruột (enterotoxin)

Độc tố ruột được sản xuất bởi phần lớn các chủng tụ cầu vàng,

nhưng không phải là tất cả mọi chủng: đây là những protein

tương đối chịu nhiệt, nên không bị huỷ bởi sự đun nấu, có

trọng lượng phân tử từ 28.000 – 30.000 dalton và bao gồm 6

týp được kýhiệu từ A-F Về miễn dịch, 6 týp này được phân

biệt khá rõ ràng, mặc dù giữa chúng có kháng nguyên chéo Về

cơ chê gây bệnh, độc tố ruột kích thích tạo ra một lượng lớn

interleukin I và II Xác định enterotoxin bằng các kỹ thuật

miễn dịch

11

2 Độc tố gây hội chứng shock nhiễm độc (Toxic shock

syndrome toxin-TSST)

Độc tố gây shock nhiễm độc thường gặp ở những phụ nữ có

kinh dung bông băng dày bẩn hoặc những ngưòi bị nhiễm

trùng vết thương Độc tố này khó phân biệt vối enterotoxin F

của tụ cầu vàng TSST kích thích giải phóng TNF (Tumor

necrosis factor, yếu tố hoại tử u) và các interleukin I, II Cơ chế

gây shock của nó tương tự như của nội độc tố

11

3 Exfoliatin toxin hay epidermolytic toxin

Đây là một ngoại độc tố Nó gây nên hội chứng phỏng rộp và

chốc lở da (Scaded skin syndrome) ở trẻ em Hội chứng này đã

được biết khá lâu nhưng mãi đên năm 1971 người ta mới biết

đến exfoliatin Độc tố này được tạo bởi gen của 85% các chủng

tụ cầu vàng thuộc loại phage nhóm II

11

4 Alpha toxin

Độc tố này gây tan các bạch cầu có nhân đa hình và tiểu cầu, từ

đó gây ra các ổ áp xe, gây ra hoại tử da và tan máu Alpha

toxin là một protein trọng lượng phân tử 33.000-36.000 dalton.

Nó gắn trên màng tê bào và thể hiện các thuộc tính hoạt động

bề mặt Độc tố có tính kháng nguyên nhưng kháng thể của nó

không có tác dụng chống nhiễm khuẩn

11

Trang 14

Mặc dù một số staphylolysin chứa độc tố bạch cầu, nhưng chỉ

một độc tố tụ cầu thực sự độc với bạch cầu và được coi là

leucocidin Độc tố này gây độc cho bạch cầu người và thỏ và

không gây độc cho bạch cầu các loại động vật khác Độc tố này

làm bach cầu mất đi tính di động và bị phá hủy nhân, đọc tố

này chỉ tác dụng với bạch cầu đa nhân và đại thực bào

Leucocidin bao gồm 2 mảnh F và S và có thể tách ròi bằng sắc

ký ion, trọng lượng phân tử là 32.000 và 38.000 dalton Nếu

tách rời 2 mảnh này thì mất tác dụng gây độc.

6 Ngoại độc tố sinh mủ (pyogenic exotoxin)

Protein ngoại độc tố này có tác dụng sinh mủ và phân bào

lymphocyt, đồng thời nó làm tăng nhậy cảm về một số phương

diện đốì với nội độc tố như gây shock và hoại tử gan và cơ tim.

Sau đó, người ta đã phân biệt được 3 loại ngoại độc tố sinh mủ,

ký hiệu là A, B, C Ba loại này khác nhau về trọng lượng phân

Shigella có kháng nguyên thân O, không có kháng nguyên H

Dựa vào kháng nguyên O và tính chất sinh hóa người ta chia

Shigella làm 4 nhóm

5

Nhóm A ( Shigella dysenteriae)

Không lên men manitol, có 10 tuýp huyết thanh được ký hiệu

bằng các chữ số Ả rập từ 1-10 Các tuýp huyết thanh trong

nhóm không có quan hệ về kháng nguyên với nhau và cũng

không có quan hệ kháng nguyên với nhóm khác Tuýp 1 hay

15

Trang 15

còn gọi là trực khuẩn Shiga là tuýp có ngoại độc tố

Nhóm B ( Shigella flexneri)

Lên men manitol, có 6 tuýp huyết thanh Các tuýp này có 1

kháng nguyên nhóm chung và mỗi tuýp huyết thanh lại có 1

kháng nguyên đặc hiệu tuýp

15

Nhóm C ( Sgigella boydii)

Lên men manitol, có 15 tuýp huyết thanh Mỗi tuýp có kháng

nguyên đặc hiệu tuýp

1 Dàn mỏng vết bôi: Vết bôi phải được dàn đều và đủ mỏng.

Muốn thế phải chọn phiến kính thật sạch và khô không dây dầu

mỡ, không bị mốc khử trùng que cấy, lấy một quai canh khuẩn

hoặc một quai vi khuẩn ở môi trường đặc hòa trong một giọt

nước cất vô trùng đã đặt trước ở trên phiến kính Dùng que cấy

từ từ dan mỏng bằng động tác nhẹ nhàng theo đường xoắn ốc

từ trong ra ngoài tạo nên một diện tích khoảng 1cm2 hình

vuông hoặc hình tròn

20

2 Làm khô: Làm khô là một bước đơn giản nhưng cần tách

rời cố dịnh thành một bước Tốt nhất là để khô tự nhiên ở nhiệt

độ phòng hoặc để vào tủ ấm 370 C Cũng có thể đưa tiêu bản

gần ngọn lửa.

Trường hợp cố định bằng cồn, nếu vết bôi chưa khô mà cố

định thì vi khuẩn sẽ trôi mất Trường hợp cố định bằng nhiệt

nếu vết bôi chưa khô mà cố định thì vi khuẩn sẽ không chết mà

biến dạng

20

Trang 16

- Giết chết vi khuẩn

- Làm cho vi khuẩn gắn chặt vào phiến kính

- Làm cho vi khuẩn bắt màu tốt hơn.

Có nhiều phương pháp cố định tiêu bản

- Cố định bằng nhiệt: Đưa phiến kính qua lại trên ngọn lửa đèn

cồn 2-3 lần, lâu chừng vài giây Hơ mặt dưới, không hơ đến

nóng bỏng.

- Cố định bằng rượu etylic 96% trong 5-20 phút

- Cố định bằng rượu metylic trong 5 phút

5

Câu số 13: Trình bày nguyên lý, các bước tiến hành, nhận định kết quả, những

sai sót và xử trí của xét nghiệm đường máu ( Glucose )?

Đáp án:

I NGUYÊN LÝ

Glucose là carbohydrate quan trọng nhất lưu hành trong máu ngoại vi Quá trình

đốt cháy glucose là nguồn chính cung cấp năng lượng cho tế bào

Glucose máu được định lượng theo phương pháp động học có sự tham gia của

Bệnh phẩm phải được lấy đúng kỹ thuật vào ống tiêu chuẩn Ly tâm trước khi

tiến hành kỹ thuật Có thể sử dụng huyết thanh hoặc huyết tương Bệnh phẩm

20

Trang 17

trong vòng 8 giờ, ở 2-8oC được 72 giờ Rã đông một lần.

Để bệnh phẩm, chuẩn, control ở nhiệt độ phòng (20-25oC) và lắc đều trước khi

tiến hành xét nghiệm

2 Tiến hành kỹ thuật

- Máy móc, hóa chất đã được cài đặt và chuẩn trước khi thực hiện phân tích

Control nằm trong miền cho phép tùy thuộc vào kỹ thuật, thuốc thử của từng

công ty Thông thường chạy control- 2 miền: bình thường và bất thường Đối

chiếu với luật về nội kiểm chất lượng nếu đạt thì tiến hành phân tích mẫu

- Đưa bệnh phẩm vào phân tích theo protocol của máy Khi có kết quả thì phân

tích và đối chiếu với phiếu xét nghiệm và trả kết quả

III NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

- Bình thường:

+ Người lớn: 3.9 - 6.4 mmol/l

+ Trẻ em: 3.3 - 5.6 mmol/l

+ Trẻ sơ sinh: 2.2 - 4.4 mmol/l

- Glucose máu tăng trong:

+ Đái tháo đường

+ Viêm tụy, ung thư tụy

+ U tủy thượng thận

+ Cường giáp

- Glucose máu giảm trong:

+ Suy tuyến yên, suy tuyến giáp

tâm và định lượng ngay gây

hiện tượng hủy đường

Làm giảm kết quả Sau 1 giờ giảm khoả

g 7%

Sử dụng chất chống đông NaF để tránh hủy đư

Lấy máu sau ănng Làm tăng kết quả Làm lại mẫu lúc đói

15

Trang 18

Bệnh phẩm tăng bi irubin, huyết tán, tăng

lipid máu, đang sử dụng thuốc

Kết quả ảnh hưởng không rõ

Câu số 14 Trình bày nguyên lý, các bước tiến hành, nhận định kết quả,

những sai sót và xử trí của đo hoạt độ ALT (Alanin transaminase).

Đáp án:

I NGUYÊN LÝ

Hoạt độ của enzym ALT trong máu của người bệnh được xác định theo phương

pháp động học enzyme dựa trên phản ứng:

Hoạt độ ALP được đo bằng sự giảm nồng độ NADH ở bước song 340 nm theo thời

gian

15

II CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

- Cài chương trình trên máy theo protocol của máy: chỉ làm khi bắt đầu triển khai

xét nghiệm trên máy và khi có thay đổi trong chương trình cài đặt

- Dựng đường chuẩn: được làm khi bắt đầu triển khai xét nghiệm trên máy, khi

thay đổi một trong các yếu tố: nồng độ chuẩn mới, thuốc thử mới, thay bóng đèn

hay thay cóng phản ứng, và khi thấy kết quả kiểm tra chất lượng không đạt

- Mẫu huyết thanh kiểm tra chất lượng, mẫu bệnh phẩm đo hoạt độ ALP được phân

tích trên máy phân tích sinh hóa tự động MODULAR, COBAS 6000, COBAS

8000 (hãng Roche), hoặc các máy AU 480 (hãng Minh Tâm) theo protocol của

20

Trang 19

- Mẫu bệnh phẩm chỉ được chạy trên máy phân tích khi kết quả kiểm tra chất

lượng đạt được độ chính xác và xác thực trong giới hạn cho phép và không vi

phạm các luật của quy trình kiểm tra chất lượng

- Kết quả sau khi được đánh giá sẽ được điền vào phiếu xét nghiệm, điền vào sổ

lưu trữ hoặc được chuyển vào phần mềm quản lý dữ liệu để in ra bằng máy

1 Trị số bình thường

 Nam: < 41 U/L

 Nữ: <31 U/L

2 ALT máu tăng trong

 Các bệnh gan: viêm gan cấp (tăng nhiều, gấp 50-150 lần bình thường) và mạn

(tăng gấp 5- 6 lần bình thường), xơ gan, ung thư gan

 Các bệnh về tim: suy tim xung huyết, viêm màng ngoài tim, nhồi máu cơ tim

 Viêm túi mật

 Nhiễm độc rượu cấp

 Tai biến mạch máu não

 Viêm tụy cấp hoại tử

 Hoại tử thận, cơ

15

IV NHỮNG SAI SÓT VÀ SỬ TRÍ

+ Khi thấy kết quả ALT bất thường (cao hơn hoặc thấp hơn giá trị bình thường)

cần kiểm tra lại kết quả bằng cách:

+ Nhấc ống máu để kiểm tra xem có đông dây hoặc bất thường về màu sắc huyết

tương hay không?

+ Đối chiếu kết quả với lời chẩn đoán

+ Kiểm tra lại thông tin ống máu, đối chiếu với thông tin trên phiếu yêu cầu xét

nghiệm: họ tên người bệnh, tuổi, giường, khoa…

Nếu thấy không có gì bất thường, nên chạy lại kiểm tra lại lần nữa trên máy đó

cùng phối hợp với mẫu huyết thanh kiểm tra hoặc chuyển sang máy khác

- Các yếu tố góp phần làm thay đổi kết quả xét nghiệm:

15

Trang 20

+ Mẫu máu vỡ hồng cầu có thể thay đổi kết quả.

+ Các thuốc có thể làm tăng hoạt độ ALT như: thuốc ức chế men chuyển

angiotensin, acetaminophen, thuốc chống co giật, một số loại kháng sinh, thuốc

điều trị tâm thần, benzodiazepin, estrogen, sulfat sắt, heparin, interferon, thuốc làm

giảm mỡ máu, thuốc chống viêm không phải steroid, salicylat, thuốc lợi tiểu loại

thiazid

những sai sót và xử trí của đo hoạt độ AST (Aspatat transaminase).

Đáp án:

I NGUYÊN LÝ

Đo hoạt độ AST thường được làm cùng với ALT để xác định bệnh lý và theo dõi

tiến triển của gan hay tim mạch, Ngoài ra AST cũng được phối hợp với một số xét

nghiệm khác như GGT để theo dõi người bệnh nghiện rượu

Hoạt độ của enzym AST trong máu của người bệnh được xác định theo phương

pháp động học enzyme, theo phản ứng:

Hoạt độ AST được đo bằng sự giảm nồng độ NADH theo thời gian ở bước sóng

340 nm

15

- Cài chương trình trên máy theo protocol của máy: chỉ làm khi bắt đầu triển khai

xét nghiệm trên máy và khi có thay đổi trong chương trình cài đặt

- Dựng đường chuẩn: được làm khi bắt đầu triển khai xét nghiệm trên máy, khi

thay đổi một trong các yếu tố: nồng độ chuẩn mới, thuốc thử mới, thay bóng đèn

hay thay cóng phản ứng, và khi thấy kết quả kiểm tra chất lượng không đạt

- Mẫu huyết thanh kiểm tra chất lượng, mẫu bệnh phẩm đo hoạt độ AST được

20

Trang 21

phân tích trên máy phân tích sinh hóa tự động MODULAR, COBAS 6000,

COBAS 8000 (hãng Roche), hoặc các máy AU 480 (hãng Minh Tâm) theo

protocol của máy

- Mẫu bệnh phẩm chỉ được chạy trên máy phân tích khi kết quả kiểm tra chất

lượng đạt được độ chính xác và xác thực trong giới hạn cho phép và không vi

phạm các luật của quy trình kiểm tra chất lượng

- Kết quả sau khi được đánh giá sẽ được điền vào phiếu xét nghiệm, điền vào sổ

lưu trữ hoặc được chuyển vào phần mềm quản lý dữ liệu để in ra bằng máy

Trị số bình thường:

 Nam: < 37 U/L

 Nữ: < 31 U/L

- AST máu tăng trong các nguyên nhân:

 Các bệnh gan (tỉ số AST/ALT <1): viêm gan do virut cấp, viêm gan do thuốc

(rifampicin, INH, salicylat, heparin), Viêm gan nhiễm độc (CCl4, amanit phalloid),

tắc mật do các nguyên nhân không phải ung thư, apxe gan

 Các bệnh gan (tỉ số AST/ALT >1): Xơ gan, Viêm gan do rượu, Xâm nhiễm gan

(do di căn ung thư, nhiễm sarcoid, lao, u lympho, luput ban đỏ)

 Các bệnh về tim: suy tim mất bù (gan xung huyết), viêm cơ tim, nhồi máu cơ

tim, bóp tim ngoài lồng ngực, phẫu thuật tim, sau thông tim (tỉ số AST/ALT>1)

 Viêm túi mật

 Nhiễm độc rượu cấp

 Viêm tụy cấp hoại tử

 Viêm đa cơ, viêm da và cơ,

Trang 22

 Hội chứng ure máu cao.

IV NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

- Khi thấy kết quả AST bất thường (cao hơn hoặc thấp hơn giá trị bình thường) cần

kiểm tra lại kết quả bằng cách:

+ Nhấc ống máu để kiểm tra xem có đông dây hoặc bất thường về màu sắc huyết

tương hay không?

Nếu thấy không có gì bất thường, nên chạy lại kiểm tra lại lần nữa trên máy đó

cùng phối hợp với mẫu huyết thanh kiểm tra hoặc chuyển sang máy khác

+ Mẫu máu bị vỡ hồng cầu

+ Các thuốc có thể làm tăng hoạt độ AST là: Acetaminophen, allopurinol, một số

loại kháng sinh, acid ascorbic, chlpropamid, cholestyramin, cholinergic, clofibrat,

codein, statin, hydralazin, isoniazid, meperidin

+ Các thuốc có thể làm giảm hoạt độ AST là; metronidazol, trifluoperazin

15

những sai sót và xử trí của định lượng ACID URIC.

Đáp án:

I NGUYÊN LÝ

Acid Uric là sản phẩm chuyển hóa cuối cùng của base có nitơ nhân purin

Acid Uric máu được định lượng theo phương pháp enzyme so màu

Sản phẩm màu được đo ở bước sóng 546nm

15

III CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

1 Lấy bệnh phẩm: bệnh phẩm phải được lấy đúng kỹ thuật vào ống tiêu chuẩn.

20

Trang 23

Ly tâm trước khi tiến hành kỹ thuật Có thể sử dụng huyết thanh hoặc huyết tương

chống đông bằng heparin Bảo quản ở 2-8oC trong vòng 5 ngày, ở - 20oC được 6

tháng Rã đông một lần

Để bệnh phẩm, chuẩn, control ở nhiệt độ phòng (20-25oC) và lắc đều trước khi tiến

hành XN

- Máy móc, hóa chất đã được cài đặt và chuẩn trước khi thực hiện phân tích.

Control nằm trong miền cho phép tùy thuộc vào kỹ thuật, thuốc thử của từng công

ty Thông thường chạy control 2 miền: bình thường và bất thường Đối chiếu với

luật về nội kiểm chất lượng nếu đạt thì tiến hành phân tích mẫu

 Nhiễm độc chì, thủy ngân

- Acid uric máu giảm trong:

Không sử dụng loại chất chống đông nàyBệnh phẩm tăng bilirubin, huyết, tăng lipid m

15

Trang 24

những sai sót và xử trí của đo hoạt độ PHOSPHATASE KIỀM (Alkaline

- Lấy 3 ml máu tĩnh mạch vào ống không có chất chống đông hay ống có chất

chống đông là Li, Na hay NH4-heparin Máu không vỡ hồng cầu Bệnh phẩm ổn

định 7 ngày ở 2-8oC, 2 tháng ở -15oC đến -25oC

- Sau khi lấy máu, đem ly tâm tách lấy huyết thanh hoặc huyết tương

- Bệnh phẩm chỉ rã đông 1 lần và phải để bệnh phẩm đạt nhiệt độ phòng trước khi

phân tích Để tránh hiện tượng bay hơi, bệnh phẩm, chất chuẩn, chất kiểm tra chất

lượng nên phân tích trong vòng 2 giờ

20

Trang 25

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực hiện phân tích mẫu: Máy đã được

cài đặt chương trình xét nghiệm ALP Máy đã được chuẩn với xét nghiệm ALP

Kết quả kiểm tra chất lượng với xét nghiệm ALP đạt yêu cầu không nằm ngoài dải

cho phép và không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

- Người thực hiện phân tích mẫu nhập dữ liệu về thông tin người bệnh và chỉ định

xét nghiệm vào máy phân tích hoặc hệ thống mạng (nếu có)

- Nạp mẫu bệnh phẩm vào máy phân tích

- Ra lệnh cho máy thực hiện phân tích mẫu bệnh phẩm

- Đợi máy phân tích mẫu theo protocol của máy

- Khi có kết quả cần xem xét đánh giá kết quả sau đó in báo cáo hoặc ghi kết quả

vào phiếu xét nghiệm để trả cho người bệnh

+ Trị số bình thường:

Nam: 40 - 129 U/L

Nữ: 35 - 104 U/L

+ ALP máu tăng trong: Cường cận giáp, Thiếu Vitamin D, Bệnh xương (còi, mềm,

xơ cứng, ung thư, sarcom) Bệnh gan (Tắc mật ngoài gan, Viêm ống mật, K gan,

Abces gan), bệnh thận…

+ ALP máu giảm trong: giảm ALP gia đình, suy giáp, thiếu Vitamin C…

15

+ Những yếu tố gây nhiễu cho kết quả xét nghiệm

Kết quả xét nghiệm không bị ảnh hưởng khi:

- Huyết thanh vàng: Bilirubin < 70 mg/dL hay 1197 µmol/L

- Tán huyết: Hemoglobin < 500 mg/dL

- Huyết thanh đục: Triglyceride <2000 mg/dL

Khắc phục: Có thể hòa loãng bệnh phẩm và thực hiện lại xét nghiệm sau đó nhân

kết quả với độ hòa loãng (Trường hợp có hòa loãng tự động trên máy thì kết quả

không cần nhân với độ hòa loãng do máy đã tự tính toán kết quả)

15

Câu số 18 Trình bày nguyên lý, các bước tiến hành, nhận định kết quả, những sai sót và xử trí của đo hoạt độ AMYLASE.

Trang 26

Đáp án:

I NGUYÊN LÝ: Amylase là enzyme thủy phân tinh bột, có nguồn gốc từ tụy và

tuyến nước bọt Xét nghiệm amylase thường được chỉ định trong bệnh lý tuyến tụy

hoặc tuyến nước bọt…

Hoạt độ của enzym α Amylase trong máu của người bệnh được xác định theo

phương pháp động học enzym

α-amylase 5 ethylidene-G7PNP + 5 H2O < => 2 ethylidene-G5 + 2 G2PNP + 2

ethylidene-G4 + 2 G3PNP + ethylidene-G3 + G4PNP

α-glucosidase2 G2PNP + 2 G3PNP + G4PNP + 14 H2O < => 5 PNP + 14 G

Đậm độ màu sắc của PNP hình thành tỷ lệ thuận với hoạt độ amylase huyết thanh

và có thể đo được ở bước sóng 415 nm

15

1 Lấy bệnh phẩm

chống đông là Li, Na hay NH4-heparin hoặc EDTA (nếu dùng EDTA, kết quả thấp

hơn 5-10% so với huyết thanh) Máu không vỡ hồng cầu Bệnh phẩm ổn định 1

tháng ở 2-8oC, 7 ngày ở 20oC đến 25oC

cài đặt chương trình xét nghiệm α Amylase Máy đã được chuẩn với xét nghiệm α

Amylase Kết quả kiểm tra chất lượng với xét nghiệm α Amylase đạt yêu cầu

không nằm ngoài dải cho phép và không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

20

Trang 27

vào phiếu xét nghiệm để trả cho người bệnh.

+ Trị số bình thường: < 100 U/L

+ Amylase máu tăng trong: Bệnh tụy (viêm tụy cấp và mạn), Bệnh đường mật,

Bệnh ổ bụng không phải bệnh tụy (loét thủng dạ dày, tắc ruột ), Quai bị, tắc tuyến

nước bọt, Tăng Amylase ở người bình thường (tăng Macro Amylase)

+ Amylase giảm khi tụy bị hoại tử lan rộng, ngoài ra nó còn giảm trong một số

bệnh lý như: Viêm tụy mạn tính Viêm tụy mạn tính tiến triển Xơ hóa ống dẫn tụy

- Huyết thanh đục: Triglyceride <1500 mg/dL

Khắc phục: Có thể hòa loãng bệnh phẩm và thực hiện lại xét nghiệm sau đó nhân

không cần nhân với độ hòa loãng do máy đã tự tính toán kết quả)

Lưu ý: Nước bọt và mồ hôi có chứa α Amylase nên tránh để nhiễm những chất này

vào bệnh phẩm hay hóa chất

15

những sai sót và xử trí của định lượng CA 125 (Cancer antigen 125).

Đáp án:

I NGUYÊN LÝ

CA 125 được định lượng bằng phương pháp miễn dịch sandwich sử dụng công

nghệ hóa phát quang hay điện hóa phát quang CA 125 có trong mẫu thử đóng vai

trò kháng nguyên được kẹp giữa hai kháng thể, kháng thể thứ nhất là kháng thể

đơn dòng đặc hiệu kháng CA 125 đánh dấu biotin, kháng thể thứ hai là kháng thể

đơn dòng đặc hiệu kháng CA 125 đánh dấu ruthenium (chất có khả năng phát

quang) tạo thành phức hợp miễn dịch kiểu sandwich Cường độ phát quang tỷ lệ

15

Trang 28

thuận với nồng độ CA 125 có trong mẫu thử.

chống đông là Li, Na, NH4-Heparin và K3-EDTA và Sodium Citrat Máu không

vỡ hồng cầu

- Sau khi lấy máu, đem ly tâm phút tách lấy huyết thanh hoặc huyết tương

- Bệnh phẩm ổn định 5 ngày ở 2-8oC, 3 tháng ở -20oC

cài đặt chương trình xét nghiệm C 125 Máy đã được chuẩn với xét nghiệm C 125

Kết quả kiểm tra chất lượng với xét nghiệm C 125 đạt yêu cầu không nằm ngoài

dải cho phép và không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

vào phiếu xét nghiệm để trả cho người bệnh

20

- Trị số bình thường: < 35 U/ml

- C 125 máu tăng trong: CA 125 tăng cao trong ung thư buồng trứng, nội mạc tử

cung, vú… và có giá trị nhất trong việc chẩn đoán ung thư buồng trứng; CA 125

còn tăng trong một số bệnh lành tính như viêm nội mạc, viêm phần phụ, viêm tụy

xơ gan

- C 125 máu giảm trong: Sự giảm nồng độ C 125 cũng có giá trị theo dõi hiệu quả

của phương pháp điều trị, sự tăng trở lại báo hiệu bệnh tái phát

15

Trang 29

ảnh hưởng khi:

+ Huyết thanh vàng: Bilirubin < 66 mg/dL

+ Tán huyết: Hemoglobin <3.2 g/dl

+ Huyết thanh đục: Triglyceride < 2000 mg/dl

+ Biotin <35 ng/ml trường hợp người bệnh sử dụng Biotin với liều > 5 mg/ngày

cần lấy máu xét nghiệm ít nhất 8h sau khi sử dụng Biotin lần cuối

+ Không có hiệu ứng “high-dose hook” (Hiệu ứng mẫu bệnh phẩm có nồng độ

cao) khi nồng độ CA 125 tới 50 000 U/mL

+ RF <1200 IU/mL

- Khắc phục: Có thể hòa loãng bệnh phẩm và thực hiện lại xét nghiệm sau đó nhân

không cần nhân với độ hòa loãng do máy đã tự tính toán)

những sai sót và xử trí của định lượng CHOLESTEROL toàn phần.

Đáp án:

I NGUYÊN LÝ

Cholesterol toàn phần được tổng hợp ở nhiều mô khác nhau nhưng chủ yếu là ở

gan và tế bào thành ruột Nó được sử dụng để phát hiện nguy cơ vữa xơ động

mạch và để chẩn đoán và theo dõi điều trị các bệnh có liên quan đến nồng độ

cholesterol cũng như các rối loạn chuyển hóa lipid hay lipoprotein

Cholesterol toàn phần trong máu được định lượng theo phương pháp enzym so

Trang 30

1 Lấy bệnh phẩm: bệnh phẩm phải được lấy đúng kỹ thuật vào ống tiêu chuẩn

Ly tâm trước khi tiến hành kỹ thuật Có thể sử dụng huyết thanh hoặc huyết tương

chống đông bằng Li-heparin Không sử dụng citrate, oxalate, fluorid Bảo quản ở

2-8oC trong vòng 7 ngày, ở - 20oC được 3 tháng Rã đông một lần

hành xét nghiệm

ty Thông thường chạy control 2 miền: bình thường và bất thường Đối chiếu với

luật về nội kiểm chất lượng nếu đạt thì tiến hành phân tích mẫu

 Rối loạn chuyển hóa lipid

 Tiểu đường, tăng huyết áp

 Viêm thận, hội chứng thận hư

Bệnh phẩm tăng bilirubin, dụng thuốc ả ảnh hưởng không rõ

15

Trang 31

I NGUYÊN LÝ :Creatinin là sản phẩm của quá trình thoái hóa creatin phosphate và

creatin ở cơ Creatinin được đào thải chủ yếu qua thận

Creatinin máu được định lượng theo phương pháp Jaffe (đo điểm đầu và cuối)

15

1 Lấy bệnh phẩm: bệnh phẩm phải được lấy đúng kỹ thuật vào ống tiêu chuẩn Ly

tâm trước khi tiến hành kỹ thuật Có thể sử dụng huyết thanh hoặc huyết tương

chống đông bằng EDTA, heparin Bảo quản ở 2-8oC trong vòng 7 ngày, ở - 20oC

được 3 tháng Rã đông một lần

hành xét nghiệm

ty Thông thường chạy control 2 miền: bình thường và bất thường Đối chiếu với luật

về nội kiểm chất lượng nếu đạt thì tiến hành phân tích mẫu

- Đưa bệnh phẩm vào phân tích theo protocol của máy Khi có kết quả thì phân tích

và đối chiếu với phiếu xét nghiệm và trả kết quả

20

- Bình thường: Nam: 62- 106 μmol/L

Nữ: 44 - 88 μmol/LTrẻ em: 15 - 77 μmol/L

- Tăng trong:

15

Trang 32

Bệnh tim mạch: tăng huyết áp vô căn, nhồi máu cơ tim …

- Giảm trong: có thai, sản giật …

Định lượng creatinin bằng phương pháp khác hoặc pha loãngbệnh phẩm hoặc điều trị tình trạngtăng bilirubin

Bệnh phẩm huyết tán, tăng

lipid máu, đang sử dụng

thuốc

Kết quả có thể bị ảnh hưởng

Trẻ sơ sinh, người lớn

có HbF > 60 m

/dLẢnh hưởng kết quả

Không dung phương pháp này để định lượng creatininNồng độ > dải đo (15-22 0 μmol/L)

Sai lệch kết quả

Pha loãng bệnh phẩm

Mục đích của xét nghiệm: Triglycerid thường được định lượng để giúp đánh giá tình

trạng cân bằng giữa trọng lượng lipid đưa vào và chuyển hóa lipid trong cơ thể

15

Trang 33

theo phương trình phản ứng sau:

LPL: Lipoprotein lipase

GK: Glycerol kinase

GPO: Glycerol phosphate oxidase

- Cài chương trình trên máy theo protocol của máy: chỉ làm khi bắt đầu triển khai xét

nghiệm trên máy và khi có thay đổi trong chương trình cài đặt

- Dựng đường chuẩn: được làm khi bắt đầu triển khai xét nghiệm trên máy, khi thay

đổi một trong các yếu tố: nồng độ chuẩn mới, thuốc thử mới, thay bóng đèn hay thay

cóng phản ứng, và khi thấy kết quả kiểm tra chất lượng không đạt

- Mẫu huyết thanh kiểm tra chất lượng, mẫu bệnh phẩm định lượng Triglycerid được

phân tích trên máy phân tích sinh hóa tự động MODULAR, COBAS 6000, COBAS

8000 (hãng Roche), hoặc các máy AU 480, AU 5800 (hãng Minh Tâm) theo protocol

của máy

- Mẫu bệnh phẩm chỉ được chạy trên máy phân tích khi kết quả kiểm tra chất lượng

đạt được độ chính xác và xác thực trong giới hạn cho phép và không vi phạm các

luật của quy trình kiểm tra chất lượng

- Kết quả sau khi được đánh giá sẽ được điền vào phiếu xét nghiệm, điền vào sổ lưu

trữ hoặc được chuyển vào phần mềm quản lý dữ liệu để in ra bằng máy

Trang 34

 Đái tháo đường

 Viêm tụy cấp

 Xơ gan do rượu

 Tăng lipoprotein máu có tính chất gia đình

- Nồng độ Triglycerid máu có thể giảm trong các nguyên nhân chính sau:

 Không có β-lipoprotein huyết bẩm sinh

 Cường giáp

 Suy dinh dưỡng

 Do chế độ ăn: Tỷ lệ mỡ thấp

 Hội chứng giảm hấp thu

 Nhồi máu não

 Bệnh phổi tắc nghẽ mạn tính

- Khi thấy kết quả Triglycerid bất thường (cao hơn hoặc thấp hơn giá trị bình

thường) cần kiểm tra lại kết quả bằng cách:

+ Nhấc ống máu để kiểm tra xem có đông dây hoặc bất thường gì không?

+ Đối chiếu kết quả với lời chẩn đoán

Nếu thấy không có gì bất thường, nên chạy lại kiểm tra lại lần nữa trên máy đó cùng

phối hợp với mẫu huyết thanh kiểm tra hoặc chuyển sang máy khác

15

Trang 35

+ Các chất có thể làm tăng nồng độ triglycerid máu: Rượu, thuốc chẹn beta giao

cảm, cholestyramin, corticosteroid, estrogen, thuốc ngừa thai uống, thuốc lợi tiểu

thiazid

+ Các chất có thể làm giảm nồng độ triglycerid máu: Acid ascorbic, asparaginase,

colestipol, clofibrat, dextronthyroxin, metformin, niacin

+ Có thai, hoặc người bệnh không nhịn ăn sẽ làm tăng nồng độ triglycerid máu

Câu số 23 Trình bày nguyên lý, các bước tiến hành, nhận định kết quả,

những sai sót và xử trí của xét nghiệm định lượng AFP

Đáp án:

I NGUYÊN LÝ

AFP được định lượng bằng phương pháp miễn dịch sandwich sử dụng công

nghệ hóa phát quang hay điện hóa phát quang AFP có trong mẫu thử đóng vai

trò kháng nguyên được kẹp giữa hai kháng thể, kháng thể thứ nhất là kháng

thể đơn dòng đặc hiệu kháng AFP đánh dấu biotin, kháng thể thứ hai là kháng

thể đơn dòng đặc hiệu kháng AFP đánh dấu ruthenium (chất có khả năng phát

quang) tạo thành phức hợp miễn dịch kiểu sandwich Cường độ phát quang tỷ

lệ thuận với nồng độ AFP có trong mẫu thử

15

II.CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

chống đông là Li, Na-Heparin và K3-EDTA và Natri Citrat Máu không vỡ

hồng cầu

- Bệnh phẩm ổn định 7 ngày ở 2-8oC, 3 tháng ở -20oC Bệnh phẩm chỉ rã đông

1 lần và phải để bệnh phẩm đạt nhiệt độ phòng trước khi phân tích Để tránh

hiện tượng bay hơi, bệnh phẩm, chất chuẩn, chất kiểm tra chất lượng nên phân

tích trong vòng 2 giờ

20

Trang 36

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực hiện phân tích mẫu: Máy đã

được cài đặt chương trình xét nghiệm AFP Máy đã được chuẩn với xét

nghiệm AFP Kết quả kiểm tra chất lượng với xét nghiệm AFP đạt yêu cầu

không nằm ngoài dải cho phép và không vi phạm luật kiểm tra chất lượng

- Người thực hiện phân tích mẫu nhập dữ liệu về thông tin người bệnh và chỉ

định xét nghiệm vào máy phân tích hoặc hệ thống mạng (nếu có)

- Khi có kết quả cần xem xét đánh giá kết quả sau đó in báo cáo hoặc ghi kết

quả vào phiếu xét nghiệm để trả cho người bệnh

- Trị số bình thường: < 7.0 ng/ml

- AFP máu tăng trong: Ung thư gan nguyên phát có mức tăng cao nhất, Ung

thư gan thứ phát mức tăng ít hơn cả về tần suất và nồng độ, U nguyên bào

phôi, Một số bệnh gan như viêm gan, xơ gan…., AFP cùng với βHCG và uE3

là bộ ba xét nghiệm dùng cho chẩn đoán trước sinh đối với bệnh Down và dị

+ Huyết thanh đục: Triglyceride < 1500 mg/dl

+ Biotin <60 ng/ml trường hợp người bệnh sử dụng Biotin với liều > 5

mg/ngày cần lấy máu xét nghiệm ít nhất 8h sau khi sử dụng Biotin lần cuối

+ Không có hiệu ứng “high-dose hook” (Hiệu ứng mẫu bệnh phẩm có nồng

độ cao) khi nồng độ AFP tới 1 210 000 ng/mL

+ RF <1500 IU/mL

25

Trang 37

- Khắc phục: Có thể hòa loãng bệnh phẩm và thực hiện lại xét nghiệm sau đó

nhân kết quả với độ hòa loãng (Trường hợp có hòa loãng tự động trên máy thì

kết quả không cần nhân với độ hòa loãng do máy đã tự tính toán)

Beta hCG được định lượng bằng phương pháp miễn dịch kiểu sandwich sử

dụng công nghệ hóa phát quang hay điện hóa phát quang Beta hCG trong

mẫu thử đóng vai trò kháng nguyên được kẹp giữa 2 kháng thể: kháng thể đơn

dòng kháng hCG từ chuột gắn biotin, kháng thể đơn dòng kháng hCG từ

chuột được đánh dấu bằng ruthenium Chất đánh dấu có khả năng phát quang

Cường độ phát quang tỷ lệ thuận với nồng độ beta hCG có trong mẫu thử

15

Bệnh phẩm phải được lấy đúng kỹ thuật vào ống tiêu chuẩn Ly tâm trước khi

tiến hành kỹ thuật Có thể sử dụng huyết thanh hoặc huyết tương chống đông

bằng heparin hoặc EDTA Bảo quản ở 2-8oC trong vòng 3 ngày, ở -20oC được

12 tháng Rã đông một lần Để bệnh phẩm, chuẩn, control ở nhiệt độ phòng

(20-25oC) và lắc đều trước khi tiến hành xét nghiệm Để tránh những ảnh

hưởng đến kết quả, bệnh phẩm, chuẩn cũng như control phải được phân tích

ngay trong vòng 2 giờ

- Máy móc, hóa chất đã được cài đặt và chuẩn trước khi thực hiện phân tích.

Control nằm trong miền cho phép tùy thuộc vào kỹ thuật, thuốc thử của từng

công ty Thông thường dung control 3 miền: thấp, bình thường và cao Đối

chiếu với luật về nội kiểm chất lượng nếu đạt thì tiến hành phân tích mẫu

- Đưa bệnh phẩm vào phân tích theo protocol của máy Khi có kết quả thì

phân tích và đối chiếu với phiếu xét nghiệm và trả kết quả

20

Trang 38

- Bình thường: < 1mIU/mL

- Tăng trong trường hợp:

Có thai Tăng cao hơn trong nhiễm độc thai và tăng cao nhất trong trường hợp

chửa trứng, ung thư rau

βhCG cùng với αFP và E3 là bộ ba xét nghiệm dùng cho chẩn đoán trước sinh

đối với bệnh Down và các dị tật bẩm sinh khác như tật nứt đốt sống …

- Giảm trong trường hợp:

Nồng độ βhCG thấp hoặc không tương xứng với tuổi thai thì có thể là thai

chết lưu hoặc thiểu năng rau

Điều trị tình trạng bệnh lýhoặc ngừng dùng thuốc rồi định lượng lại

Nồng độ > dải đo (0,1-10000

mIU/mL)

Sai lệch kế qu

Trang 39

BIL.D trong máu của người bệnh được xác định theo phương pháp đo màu.

Bilirubin + diazonium ion => Azobilirubin

Trong môi trường nước, Bilirubin trực tiếp tác dụng với thuốc thử diazonium

tạo phức hợp azobilirubin Đậm độ màu của phức hợp Azobilirubin tỷ lệ thuận

với nồng độ Bilirubin trực tiếp có trong mẫu thử, được đo ở bước sóng 546

nm

chống đông là Heparin hay EDTA Máu không vỡ hồng cầu Bảo quản bệnh

phẩm tránh ánh sáng Bệnh phẩm ổn định 7 ngày ở 2-8oC, 2 ngày ở 15-25oC,

6 tháng ở -15oC đến - 25oC

- Bệnh phẩm chỉ rã đông 1 lần và phải để bệnh phẩm đạt nhiệt độ phòng trước

khi phân tích Để tránh hiện tượng bay hơi, bệnh phẩm, chất chuẩn, chất kiểm

tra chất lượng nên phân tích trong vòng 2 giờ

- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực hiện phân tích mẫu:Máy đã

được cài đặt chương trình xét nghiệm BIL.D Máy đã được chuẩn với xét

nghiệm BIL.D Kết quả kiểm tra chất lượng với xét nghiệm BIL.D đạt yêu

cầu không nằm ngoài dải cho phép và không vi phạm luật kiểm tra chất

lượng

- Người thực hiện phân tích mẫu nhập dữ liệu về thông tin người bệnh và chỉ

định xét nghiệm vào máy phân tích hoặc hệ thống mạng (nếu có)

- Khi có kết quả cần xem xét đánh giá kết quả sau đó in báo cáo hoặc ghi kết

quả vào phiếu xét nghiệm để trả cho người bệnh

20

Trang 40

- Trị số bình thường: < 5.1 µmol/l

- BIL.D máu tăng trong: Tắc mật trong gan: viêm gan, xơ gan Tắc mật ngoài

gan: do sỏi, ung thư, hạch to

IV.NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

Những yếu tố gây nhiễu cho kết quả xét nghiệm Kết quả xét nghiệm cần điều

chỉnh ± 10% khi huyết thanh vàng Huyết thanh đục do tăng lipid máu hay tán

huyết đều ảnh hưởng tới kết quả xét nghiệm

Khắc phục: Có thể hòa loãng bệnh phẩm và thực hiện lại xét nghiệm sau đó

nhân kết quả với độ hòa loãng (Trường hợp có hòa loãng tự động trên máy thì

kết quả không cần nhân với độ hòa loãng do máy đã tự tính toán kết quả)

Bilirubin gián tiếp là bilirubin tự do, độc và ít tan trong nước, nó lên màu gián

tiếp với thuốc thử Diazonên gọi là Bilirrubin gián tiếp tiếp

Bilirubin gián tiếp (BIL.I) trong máu của người bệnh được tính toán trên cơ

sở số liệu thu được từ định lượng BIL T và BIL D của người bệnh

Người bệnh cần được giải thích về mục đích của việc lấy máu để làm xét

nghiệm

15

chống đông là Heparin hay EDTA Máu không vỡ hồng cầu Bảo quản bệnh

phẩm tránh ánh sáng Bệnh phẩm ổn định 7 ngày ở 2-8oC, 2 ngày ở 15 - 25oC,

6 tháng ở -15oC đến - 25oC

20

Định dạng
Số trang	84
Dung lượng	821 KB
File đính kèm	XNDH.rar (245 KB)