PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CLOSTRIDIUM PERFRINGENS

Cấy và ủ mẫu• Dùng pipet vô trùng cho vào mỗi đĩa 1ml mẫu thử sản phẩm ở dạng lỏng hoặc 1ml huyền phù ban đầu sản phẩm dạng khác cho vào giữa hai đĩa petri trống.. Làm tương tự với các đ

Trường ĐH Công Nghiệp Thực Phẩm Tp.HCM

PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG

CLOSTRIDIUM PERFRINGENS

GVHD: Nguyễn Thị Mỹ Lệ

CLOSTRIDIUM PERFRINGENS

CÁC TRIỆU CHỨNG GÂY NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM CỦA CLOSTRIDIUM PERFRINGENS

  Buồn nôn, đau bụng, tiêu chảy nước

  Ít có biểu hiện ói mữa hay sốt

 Thời gian khởi phát là 8-24h sau khi tiêu thụ thực phẩm bị nhiễm một lựợng lớn

Clostridium perfringens

 Tự hết sau 24h

Nguyên lý

môi trường thạch Tryptose Sulfide Cycloserin

(TSC) trong điều kiện kỵ khí ở 35-37 0 C sau 20h

các tính chất sinh hoá đặc trưng: khử nitrat thành nitrit, di động, sử dụng lactose, hóa lỏng gelatin

Ống nghiệm, bình hoặc chai có dung tích thích hợp

Pipet chia độ xả hết có dung tích 1ml và 10 ml, được chia vạch tương ứng 0,1 và 0,5 ml.

Đĩa petri bằng thuỷ tinh hoặc chất dẻo đường kính 90mm đến 100mm.

Nồi cách thuỷ có thể hoạt động ở 44 0 C – 47 0 C.

Máy đếm khuẩn lạc

Máy đồng nhất mẫu

Máy lắc Vortex

Môi trường nuôi cấy và thuốc thử

Môi trường thạch sunfit xycloserin (TSC)

Môi trường nitrat để thử tính di động

Môi trường lactose – gelatin

Thuốc thử để phát hiện nitrit

Bụi kẽm

Chuẩn bị mẫu thử, dung dịch huyền phù và

các dung dịch pha loãng

Sản phẩm dạng lỏng

Sản phẩm dạng khác

Cấy và ủ mẫu

• Dùng pipet vô trùng cho vào mỗi đĩa 1ml mẫu thử (sản phẩm ở dạng lỏng) hoặc 1ml huyền phù ban đầu (sản phẩm dạng khác) cho vào

giữa hai đĩa petri trống Làm tương tự với các đậm độ pha loãng tiếp theo, mỗi đậm độ cấy hai đĩa

Cấy và ủ mẫu

• Rót vào mỗi đĩa 10ml đến 15ml thạch TSC (đã đun chảy để nguội ở 450C đến 470C trong nồi cách thuỷ) trộn đều bằng cách xoay nhẹ đĩa

theo hai chiều trái, phải Để đông tự nhiên, sau

đó phủ trên bề mặt của mỗi đĩa một lớp thạch phủ (cùng loại thạch TSC) 15 ml, để đông đặc lại Ủ ấm trong điều kiện kỵ khí ở 370 C trong

20  2h Thời gian ủ kéo dài có thể làm các đĩa

bị quá đen

Đếm và chọn các khuẩn lạc

• Chọn tất cả các đĩa có ≤ 150 khuẩn lạc điển

hình

• Nếu hai đĩa của cùng một đậm độ có ít hơn

hoặc bằng 150 khuẩn lạc điển hình, đếm tổng

số khuẩn lạc trên cả hai đĩa và lấy giá trị trung bình

• Nếu bốn đĩa của hai đậm độ liên tiếp có từ

15-150 khuẩn lạc điển hình, tính giá trị trung bình của hai đậm độ

Đếm và chọn các khuẩn lạc

• Nếu đĩa cấy bị đen hoặc không thể đếm được các khuẩn lạc riêng rẽ thì đếm các đĩa của độ pha loãng cao hơn kế tiếp

• Đếm số khuẩn lạc điển hình của Cl

perfringens: khuẩn lạc đen, có kích thước 0,5

mm trở lên trên mỗi đĩa và chọn ra 5 khuẩn lạc

để thử khẳng định sinh hoá

Khẳng định sinh hoá

Tính di động

Khả năng khử nitrat thành nitrit

Các chủng cho phản ứng yếu đối với nitrit (tức là

có màu hồng) phải được loại bỏ, vì Cl perfringens luôn luôn có

phản ứng mạnh và phản ứng tức thì.

Sử dụng lactose

Hóa lỏng gelatin

Tính kết quả

Tính số lượng a vi khuẩn Cl perfringens có

mặt trên mỗi đĩa, sử dụng công thức:

a = (b/A) x C Trong đó:

b: Số khuẩn lạc xác định đúng là vi

khuẩn Cl perfringens

A: Số khuẩn lạc chọn để thử khẳng định C: Tổng số khuẩn lạc điển hình đếm

được trên đĩa

Sơ đồ định lượng Cl perfringens

Bước 2: Pha loãng và cấy mẫu

Bước 3: Ủ ấm Úp ngược đĩa thạch để

Tỉ lệ nhiễm Clostridium Perfringens trong hội

chứng tiêu chảy của lợn nuôi tại Hà Nội và vùng phụ cận

Hết