PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CLOSTRIDIUM PERFRINGENS

Trường ĐH Công Nghiệp Thực Phẩm Tp.HCM PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CLOSTRIDIUM PERFRINGENS GVHD: Nguyễn Thị Mỹ Lệ CLOSTRIDIUM PERFRINGENS CÁC TRIỆU CHỨNG GÂY NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM CỦA CLOSTRIDIUM PERFRINGENS   Buồn nơn, đau bụng, tiêu chảy nước   Ít có biểu ói mữa hay sốt  Thời gian khởi phát là 8-24h sau tiêu thụ thực phẩm bị nhiễm lựợng lớn Clostridium perfringens  Tự hết sau 24h Nguyên lý môi trường thạch Tryptose Sulfide Cycloserin (TSC) điều kiện kỵ khí 35-370C sau 20h các tính chất sinh hố đặc trưng: khử nitrat thành nitrit, di động, sử dụng lactose, hóa lỏng gelatin Thiết bị cần dùng Thiết bị để khử trùng khô (tủ sấy) để khử trùng ướt (nồi hấp) Tủ ấm điều chỉnh nhiệt độ 37  1oC Bình ni cấy kỵ khí, sử dụng bình tự tạo đảm bảo mơi trường kỵ khí pH mét, đọc xác đến  0,01 đơn vị pH 250C, đo phép đo xác đến 0,1 đơn vị pH Que cấy vòng, platin-iridi niken- crơm, đường kính khoảng 3mm, kim cấy sâu Ống nghiệm, bình chai có dung tích thích hợp Pipet chia độ xả hết có dung tích 1ml 10 ml, chia vạch tương ứng 0,1 0,5 ml Đĩa petri thuỷ tinh chất dẻo đường kính 90mm đến 100mm Nồi cách thuỷ hoạt động 440C – 470 C Máy đếm khuẩn lạc Máy đồng mẫu Máy lắc Vortex Môi trường nuôi cấy thuốc thử Môi trường thạch sunfit xycloserin (TSC) Môi trường nitrat để thử tính di động Mơi trường lactose – gelatin Thuốc thử để phát nitrit Bụi kẽm Chuẩn bị mẫu thử, dung dịch huyền phù dung dịch pha loãng Sản phẩm dạng lỏng Sản phẩm dạng khác Cấy ủ mẫu • Dùng pipet vơ trùng cho vào đĩa 1ml mẫu thử (sản phẩm dạng lỏng) 1ml huyền phù ban đầu (sản phẩm dạng khác) cho vào hai đĩa petri trống Làm tương tự với đậm độ pha loãng tiếp theo, đậm độ cấy hai đĩa Cấy ủ mẫu • Rót vào đĩa 10ml đến 15ml thạch TSC (đã đun chảy để nguội 450C đến 470C nồi cách thuỷ) trộn cách xoay nhẹ đĩa theo hai chiều trái, phải Để đơng tự nhiên, sau phủ bề mặt đĩa lớp thạch phủ (cùng loại thạch TSC) 15 ml, để đông đặc lại Ủ ấm điều kiện kỵ khí 370 C 20  2h Thời gian ủ kéo dài làm đĩa bị đen Đếm chọn khuẩn lạc • Chọn tất đĩa có ≤ 150 khuẩn lạc điển hình • Nếu hai đĩa đậm độ có 150 khuẩn lạc điển hình, đếm tổng số khuẩn lạc hai đĩa lấy giá trị trung bình • Nếu bốn đĩa hai đậm độ liên tiếp có từ 15150 khuẩn lạc điển hình, tính giá trị trung bình hai đậm độ Đếm chọn khuẩn lạc • Nếu đĩa cấy bị đen khơng thể đếm khuẩn lạc riêng rẽ đếm đĩa độ pha lỗng cao • Đếm số khuẩn lạc điển hình Cl perfringens: khuẩn lạc đen, có kích thước 0,5 mm trở lên đĩa chọn khuẩn lạc để thử khẳng định sinh hố Khẳng định sinh hố Tính di động Khả khử nitrat thành nitrit Các chủng cho phản ứng yếu nitrit (tức có màu hồng) phải loại bỏ, Cl perfringens ln ln có phản ứng mạnh phản ứng tức Sử dụng lactose Hóa lỏng gelatin Tính kết Tính số lượng a vi khuẩn Cl perfringens có mặt đĩa, sử dụng công thức: a = (b/A) x C Trong đó: b: Số khuẩn lạc xác định vi khuẩn Cl perfringens A: Số khuẩn lạc chọn để thử khẳng định C: Tổng số khuẩn lạc điển hình đếm đĩa Sơ đồ định lượng Cl perfringens Bước 2: Pha loãng cấy mẫu Bước 3: Ủ ấm Úp ngược đĩa thạch để bình kỵ khí Để 370C/20 - 24 Bước 4: Chọn đĩa thạch: chọn đĩa < 150 khuẩn lạc điển hình để đếm Bước 5: Xác định tính chất sinh vật hóa học: Lactose (+); Di động (-), gelatinase (+), Nitrat (+) Tỉ lệ nhiễm Clostridium Perfringens hội chứng tiêu chảy lợn nuôi Hà Nội vùng phụ cận Hết ... C Trong đó: b: Số khuẩn lạc xác định vi khuẩn Cl perfringens A: Số khuẩn lạc chọn để thử khẳng định C: Tổng số khuẩn lạc điển hình đếm đĩa Sơ đồ định lượng Cl perfringens Bước 2: Pha loãng cấy.. .CLOSTRIDIUM PERFRINGENS CÁC TRIỆU CHỨNG GÂY NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM CỦA CLOSTRIDIUM PERFRINGENS   Buồn nơn, đau bụng, tiêu chảy nước   Ít có biểu... nitrit (tức có màu hồng) phải loại bỏ, Cl perfringens ln ln có phản ứng mạnh phản ứng tức Sử dụng lactose Hóa lỏng gelatin Tính kết Tính số lượng a vi khuẩn Cl perfringens có mặt đĩa, sử dụng công