ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP TÍNH SỐ SÁC XUẤT LỚN NHẤT (MPN)

ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS BẰNG PHƯƠNG PHÁP TÍNH SỐ SÁC XUẤT LỚN NHẤT (MPN) GVHD:NGUYỄN THỊ MỸ LỆ NỘI DUNG I ĐỐI TƯỢNG PHÂN TÍCH: COLIFORMS II PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG : MPN III QUY TRÌNH PHÂN TÍCH IV VÍ DỤ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH VSV TRONG NƯỚC I COLIFORMS  Coliforms trực khuẩn gram (-)  Không sinh bào tử  Hiếu khí kị khí tùy ý  Có khả lên men lactose sinh acid sinh 37 c 24- 48h  Coliforms xem nhóm vsv thị Coliforms gồm nhóm : echerichia enterobacter coliforms klebsiella citrobacter Echerichia Coli Citrobacter Freundii Bacteria Klebsiella Pneumoniae Carbapenemase Enterobacter aerobacter Là coliforms chịu nhiệt có khả sinh indole ủ 44.5 Coliforms phân + IMViC c /24h tryptone II PHƯƠNG PHÁP MPN (MOST PROBABLE NUMBER     Phương pháp MPN dựa nguyên tắc xác suất thống kê phân bố vsv độ pha loãng khác mẫu Mỗi độ pha loãng nuôi cấy lặp lại nhiều lần ( 3- 10 lần) Các độ pha loãng chọn lựa cho lần lặp lại có số lần dương tính có số lần âm tính Số lần dương tính ghi nhận so sánh với bảng thống kê => giá trị ước đoán số lượng vsv mẫu  Hai hệ thống MPN: Hệ thống ống Hệ thống 15 ống  Đặc điểm: Vi sinh vật mục tiêu phải có biểu đặc trưng môi trường nuôi cấy : Sự tạo : Coliforms Sự đổi màu : S aurius Cho phép định lượng mật độ vsv thấp thể tích mẫu lớn HỆ THỐNG MPN /g (ml) Bước : Chuyển 1ml từ ống nghiệm LSB ( + ) nồng độ vào ống nghiệm có chứa 10ml canh BGLB ủ 37 O C , 48 10 ML BGLB Bước : + Ghi nhận số ống sinh canh trường đục độ pha loãng + Kết luận ống BGLB ( + ) Bước : Tính kết - Từ kết thí nghiệm ta có: • • • Nồng độ 10-1: có ống BGLB(+) Nồng độ 10-2: có ống BGLB(+) Nồng độ 10-3 : khơng có ống BGLB(+) - Tra bảng Mac Crady : Tra bảng MPN/100ml ta có kết : 43 coliform tổng / 100 ml mẫu IV.Phân tích coliforms mẫu nước  giới thiệu vsv mẫu nước    Nước, dung môi phổ biến, điều cần thiết cho sống: nước để tắm, uống nấu ăn Thật không may, nhiều tác nhân gây bệnh lây truyền qua nguồn nước Một số loài gây bệnh bại liệt, thương hàn, tả, viêm gan, Bệnh vi khuẩn Shigella, Salmonella Coliforms có đầy đủ tiêu chuẩn sinh vật thị chuẩn sử dụng để kiểm tra tình trạng nhiễm sinh học nước Theo tiêu chuẩn EPA nước uống nước hồ bơi phải có độ tinh khiết cao Khơng thể có nhiều mẫu dương tính (> coliform/100 ml) 40 mẫu kiểm tra tháng nồng độ coliform phân phải không  THỦ TỤC PHÂN TÍCH NƯỚC Giai đoạn 1: Chuẩn bị: • mẫu nước • đĩa petri vơ trùng • chai thạch Agar tan chảy (PCA, 100 ml / chai) - nước tắm 50 ° C • 15 ống Lactose Lauryl Tryptose Broth(LLTB, với ống Durham) • Pipett vơ trùng Khi đĩa đông cứng, Chọn mẫu nướcsinh đảo ngược đĩa ủ chúng 30 ° Dán nhãn 15 ống LLTB cho năm độ pha loãng (mỗi độ pha loãng ống) C hoạt Cấy 1ml 0,1 ml từ Đổ dd PCA từ nước tắm (mỗi chai đĩa) vào đĩa petri đánh dấu Sau đổ, nhẹ nhàng xoay đĩa (đảo Trộn mẫu nước chiều vài lần) để pha trộn chất mẫu hoàn toàn với chai pha lỗng thích hợp vào ống mơi trường chuẩn bị pha loãng Ủ tất ống 37 ° C 1-2 ngày (Nhiệt độ tiêu chuẩn 35 độ C, 37 ° C Cấy đĩa cho lần pha lỗng Dán nhãn vơ trùng đĩa petri cách cấy ml 0,1 ml từ chai pha lỗng thích hợp vào đĩa ) Các ống làm lạnh ngày trước tiến hành giai đoạn Tổng số vi khuẩn hiếu khí Giai đoạn 2: • 15 ống nghiệm cho môi trường Brilliant Green Lactose Bile (BGLB) Broth EC Broth (với ống Durham cho ống Nươc tắm 44,5 ° C • Kết tăng trưởng tiêu biểu lactose lauryl tryptose broth • Quan sát ghi nhận ống dương tính Các ống dương tính ống sinh canh trường bị đục Tính tốn số lượng xảy vi khuẩn/ ml mẫu cách sử dụng bảng MPN Kết BGLB Kết tăng trưởng điển hình quan sát cho canh EC Ghi lại số lượng tích cực (tăng trưởng khí) giai đoạn trước  Ghi kết bảng liệu Đối với ống canh BGLB, tính tốn xác nhận, số lượng xảy vi khuẩn / ml mẫu Đối với ống canh EC, tính tốn xác nhận, số lượng xảy vi khuẩn phân / ml mẫu Ghi lại giá trị bảng liệu   Từ ống canh BGLB pha loãng cho thấy tăng trưởng sinh khí, đường sọc đĩa thạch EMB cho thấy phân lập khuẩn lạc Làm tương tự cho canh EC Ủ đĩa 37 ° C 1-2 ngày  Đối với coliform cô lập, thực xét nghiệm cần thiết quan sát thiết bị thí nghiệm trước Mỗi lập phải lên men lactose thành acid khí đốt nhìn thấy để coi coliform The end ...NỘI DUNG I ĐỐI TƯỢNG PHÂN TÍCH: COLIFORMS II PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG : MPN III QUY TRÌNH PHÂN TÍCH IV VÍ DỤ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH VSV TRONG NƯỚC I COLIFORMS  Coliforms trực khuẩn gram (-)  Khơng... độ pha loãng chọn lựa cho lần lặp lại có số lần dương tính có số lần âm tính Số lần dương tính ghi nhận so sánh với bảng thống kê => giá trị ước đoán số lượng vsv mẫu  Hai hệ thống MPN: Hệ thống... Enterobacter aerobacter Là coliforms chịu nhiệt có khả sinh indole ủ 44.5 Coliforms phân + IMViC c /24h tryptone II PHƯƠNG PHÁP MPN (MOST PROBABLE NUMBER     Phương pháp MPN dựa nguyên tắc xác