GIỚI THIỆU PHƯƠNG PHÁP DÙNG PETRIFILM TRONG PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM GIỚI THIỆU PHƯƠNG PHÁP DÙNG PETRIFFILM TRONG PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM GVHD: Nguyễn Thị Mỹ Lệ Nhóm thực hiện: Nhóm 14 NHƯỢC ĐIỂM KHI DÙNG ĐĨA PETRIFILM • 5.BẢO QUẢN ĐĨA PETRIFILM • 6.CÁCH SỬ DỤNG CÁC LOẠI ĐĨA PETRIFILM • 7.Enterobacteriaceae Count Plate • 8.E.coli/Coliforms Count Plate • 9.Yeast and Mold Count Plate • • Nội dung trình bày 3.MỘT SỐ HÌNH ẢNH CỤ THỂ TRONG PHÂN TÍCH VI SINH VẬT 1.GIỚI THIỆU VỀ PETRIFILM Đĩa petrifilm đĩa chứa môi trường làm sẵn thay cho môi trường agar truyền thống Mỗi đĩa gồm chất gel hòa tan nước, dinh dưỡng chất thị làm khô cố định lớp film mỏng • Khi tiến hành thí nghiệm, 1ml mẫu cấy vào petrifilm ủ Chất màu đặc biệt đĩa khiến khuẩn lạc có màu đặc trưng dễ dàng phân biệt mắt thường Và đường kẻ ô vuông giúp cho việc đếm số lượng khuẩn lạc dễ dàng • • Trong kỹ thuật này, môi trường dinh dưỡng dạng đông khô cố định giá thể mỏng phủ màng bảo vệ Khi sử dụng, lớp màng bảo vệ tách phần để bổ sung 1ml dịch mẫu lên bề mặt môi trường, sau phủ lại màng bảo vệ Đĩa petrifilm kiểm tra hầu hết loại vi sinh vật phổ biến không cần qua bước khẳng định Sinh Hóa phương pháp truyền thống.Bao gồm: • • • • • • • • • Aerobic Count - Tổng vi khuẩn hiếu khí Coliform Count E.coli/Coliform Count Enterobacteriaceae Count - Họ vi khuẩn đường ruột Environmental Listeria - Listeria môi trường High – Sensitivity Coliform Count - Coliform nhạy Rapid Coliform Count - Coliform nhanh Staph Express Count - staph, aureus loài khác Yeast and Mold Count - Nấm men nấm mốc 2.ƯU ĐIỂM KHI DÙNG PETRIFILM • • • • • • Dễ thao tác Kết quán Thời gian sử dụng lâu Không cần hấp khử trùng môi trường Nhanh, loại bỏ bước chuẩn bị môi trường Thiết kế nhỏ gọn, tiết kiệm không gian ủ bảo quản 3.MỘT SỐ HÌNH ẢNH CỤ THỂ TRONG PHÂN TÍCH VI SINH VẬT • Khuẩn lạc Coliform có màu đỏ sinh bọt khí film.Kết sau 24 Coliform Count Plate • Khuẩn lạc nấm men có màu xanh dương khuẩn lạc nấm mốc tạo nhiều màu sắc, to rõ rệt Kết – ngày Yeast and Mold Count Plate • Khuẩn lạc có màu đỏ Đếm tất khuẩn lạc tạo vùng sáng sinh axit có/khơng có bọt khí Kết 24 Enterobacteriaceae Count Plate • • • • • • • • • • • Đổ đĩa: — Đặt đĩa Petrifilm EB mặt phẳng ngang — Nâng màng đậy petrifilm và nhỏ 1ml mẫu thử dung dịch mẫu thử vào đĩa — Cẩn thận và đặt film xuống cho khơng tạo thành bọt khí — Dàn mẫu vùng đường kính 20cm spreader — Đặt nhẹ spreader vào đĩa — Ấn nhẹ để dàn mẫu — Nhấc spreader và để phút để gel đông đặc Chú ý: Phải dàn nhanh mẫu trước gel đông đặc Không đưa spreader từ bên này sang bên đĩa • • • Ủ ấm: — Ủ ấm đĩa 24h±2h/ 30°C ± 1; 35°C±1 37°C± 1, chồng không 20 đĩa — Phải làm ẩm buồng ủ mẫu cho lượng ẩm từ đĩa khơng vượt q 15% trình ủ ấm • • • Giải thích kết quả: • • — Đường kính vùng phát triển khoảng 20 cm2 • — Nhân số trung bình mợt với 20 để tính số khuẩn lạc đĩa — Đĩa Petrifilm EB đếm máy đếm khuẩn lạc nguồn sáng có kính phóng đại — Khuẩn lạc Enterobacteriaceae có màu đỏ với vùng màu vàng bao quanh/ khuẩn lạc màu đỏ có bóng hơi, có khơng có vùng màu vàng bao quanh — Nếu ước tính đĩa có nhiều 100 khuẩn lạc thì đếm một vài ô đại diện tính kết trung bình cho mợt • Chú ý: • — Khơng đếm bóng sinh trình thao tác • — Không đếm khuẩn lạc mép ranh giới đĩa vì • • • khuẩn lạc này khơng chịu tác động ức chế môi trường nuôi cấy chọn lọc — Hơi sinh Enterobacteriaceae phá vỡ khuẩn lạc, khơng đếm khuẩn lạc nằm ngoài bóng khơng có vùng màu vàng — Đơi khi, đĩa có nhiều 100 khuẩn lạc, khuẩn lạc và bóng không rõ ràng; acid sinh làm thay đổi toàn bộ đĩa thành màu vàng, trường hợp này cần tăng đợ pha lỗng mẫu và thử lại — Có thể sử dụng khuẩn lạc này cho bước xác định cách nâng film đậy lên và lấy khuẩn lạc gel 8.E.coli/Coliforms Count Plate • • • Định nghĩa Coliforms • Coliforms coi là nhóm vi khuẩn điểm vệ sinh — Coliforms thuộc họ Enterobacteriaceae, sinh acid và lên men lactose (24- 48h/36±2°C) —Thermotolerant (Fecal) coliform : tḥc họ Enterobacteriaceae, có khả phát triển và lên men lactose 44,5±2°C bao gồm E.coli, Klebsiella, Enterobacter và Citrobacter (E.coli sinh Indol từ tryptophan) Video clips • http://www.youtube.com/watch?v=VVbyoHPcLEM • • • • • Chuẩn bị mẫu: - Sử dụng dung dịch pha lỗng vơ trùng thích hợp - Đối với sản phẩm acid, chỉnh pH mẫu thử tới 6.6 – 7.2 NaOH 1N - Đối với sản phẩm kiềm, chỉnh pH HCl 1N - Trợn đồng mẫu • • • • • • • • Đổ đĩa: Đặt đĩa Petrifilm EB lên mặt phẳng ngang Nhấc màng film lên và nhỏ 1ml dung dịch mẫu thử vào đĩa Từ từ đặt film xuống cho không tạo thành bọt khí Đặt mặt nhẵn spreader vào đĩa Nhẹ nhàng ấn spreader để dàn mẫu Không đưa spreader ngang qua mặt đĩa Nhấc spreader ra, để một phút cho gel đông đặc Mỗi chồng đĩa không để 20 đĩa Buồng ủ ấm nên làm ẩm để hạn chế bốc mẫu Hơi ẩm từ đĩa không vượt 15% 48 h ni cấy • • • • • • • • Thời gian ủ ấm nhiệt độ nuôi cấy: • Khuẩn lạc Coliform màu đỏ sáng, sinh (đường kính khoảng 1mm)   AOAC method: Ủ ấm đĩa Petrifilm EC 48±2h 35±1°C Giải thích kết quả: Đĩa Petrifilm EC đếm máy đếm khuẩn lạc nguồn sáng có kính phóng đại Khơng đếm khuẩn lạc bờ ranh giới vì không chịu tác động mơi trường chọn lọc Khơng đếm bóng hình thành thao tác Xấp xỉ 95% E.coli có sinh Thơng thường, khuẩn lạc E.coli có màu xanh đỏ xanh, sinh (đường kính khoảng mm) Số khuẩn lạc Coliformcount = 69 Coliform =   Vong số = Khuẩn lạc Vong 1, cho thấy khác kiểu bóng khơng sinh Vong = Bóng thao tác Vong = Khuẩn lạc sinh E coli = 49 (màu xanh có sinh Số E coli = 17 hơi) Số coliform = 150 Tổng số coliform = 87 (khuẩn lạc đỏ xanh sinh hơi) 9.Yeast and Mold Count Plate • • • • • • • • • • Chuẩn bị mẫu — Chuẩn bị dung dịch pha loãng — Cân mẫu vào túi — Đổ mợt lượng thích hơp dung dịch Butterfield’s phosphate vào túi — Đồng mẫu Nuôi cấy — Đặt đĩa petrifilm bề mặt phẳng, nâng phim lên — Nhẹ nhàng nhỏ 1ml mẫu pha loãng vào đĩa — Hạ phim xuống cho khơng tạo thành bóng — Khơng sử dụng nước pha lỗng có citrat, thiosulfate, bisulfate vì ức chế phát triển Trường hợp Trường hợp Âm tính Thành phần: Một loại gel hòa tan nước lạnh Chất dinh dưỡng Chất nhm màu Thích hợp để đếm nấm mốc men - VD: Tổng số 20 KL - 16 KL mốc - KL men Trường hợp Trường hợp Khi số KL lớn 150, ước tính số đếm Xác định số KL trung bình/cm2 Ước tính số KL nấm Để tính cho tồn đĩa, men >104 nhân số KL trung bình/cm2 Đĩa q nhiều Kl x30 VD hình bên: Ước tính tổng số đếm 500 Ước tính số nấm men 480 Ước tính số nấm men 21 KL nấm men có màu từ nâu nhạt tới hồng xanh tím khơng thể đếm đươc Các Kl nhỏ mầu xanh rìa đĩa khơng đươc tính Trường hợp Ước tính số KL nấm mốc 64 Đếm số KL ¼ đĩa nhân với để tổng số Video clips • http://www.youtube.com/watch?v=LKXACBZs9K8 ... Mold Count Plate • • Nợi dung trình bày 3.MỘT SỐ HÌNH ẢNH CỤ THỂ TRONG PHÂN TÍCH VI SINH VẬT 1.GIỚI THIỆU VỀ PETRIFILM Đĩa petrifilm đĩa chứa môi trường làm sẵn thay cho môi trường agar truyền... màng bảo vệ Đĩa petrifilm kiểm tra hầu hết loại vi sinh vật phổ biến không cần qua bước khẳng định Sinh Hóa phương pháp truyền thống.Bao gồm: • • • • • • • • • Aerobic Count - Tổng vi khuẩn hiếu... nhỏ gọn, tiết kiệm không gian ủ bảo quản 3.MỘT SỐ HÌNH ẢNH CỤ THỂ TRONG PHÂN TÍCH VI SINH VẬT • Khuẩn lạc Coliform có màu đỏ sinh bọt khí film.Kết sau 24 Coliform Count Plate • Khuẩn lạc nấm