phân tích vi sinh thực phẩm hướng dẫn sử dụng đĩa petrifilm để đọc kết quả phân tích e.coli coliform

1 • • Tổng quát sơ lược về E.coli Tổng quát sơ lược về E.coli 2• Phân tích E.coli/Coliform bằng đĩa Petrifilm • Phân tích E.coli/Coliform bằng đĩa Petrifilm 3 • • Kết luận Kết luận NỘI D

Hướng dẫn sử dụng đĩa Petrifilm để đọc kết quả phân tích

E.coli/ Coliform

Hướng dẫn sử dụng đĩa Petrifilm để đọc kết quả phân tích

E.coli/ Coliform

TIÊU ĐỀ

1 • • Tổng quát sơ lược về E.coli Tổng quát sơ lược về E.coli 2

• Phân tích E.coli/Coliform bằng đĩa Petrifilm

• Phân tích E.coli/Coliform bằng đĩa Petrifilm

3 • • Kết luận Kết luận

NỘI DUNG

1 TỔNG QUÁT SƠ LƯỢC VỀ

E.COLI/ COLIFORM

Coliform :

Là các trực khuẩn Gram âm.

Có khả năng lên men nhiều loại đường sinh acid hoặc sinh hơi như Glucose, Lactose…

Không sinh bào tử.

Hiếu khí hoặc kỵ khí không bắt buộc.

 Sinh sống thích hợp ở nhiệt độ: 35-37oC và pH: 7-7,2.

COLIFORM GỒM 4 GIỐNG

Citrobacter Enterobacter

E.Coli dùng

để chỉ định việc ô nhiễm nguồn nước bởi phân

 E.coli lần đầu tiên được phân lập từ

phân người vào năm 1855, bởi Echerich.

 Chúng cư trú trong đường ruột của người và động vật máu nóng Năm 1982

đã phát hiện 4 loài E.coli có khả năng gây bệnh có nguồn gốc thực vật.

2 Phân tích E.coli/ Colifrom

trên đĩa petrifilm

Đĩa Petrifilm E.coli/Coliform Count dùng để xác

định E.coli và các loại Coliform khác

Có thể xác định kết quả chỉ trong vòng 24 đến 48 giờ.

Đĩa Petrifilm E.Coli/Coliform Count (EC) có chứa

Violet Red Bile (VRB), chất gel tan được trong nước lạnh, chất chỉ thị hoạt động của Glucuronidase và một chất chỉ thị giúp cho việc đếm khuẩn lạc dễ dàng hơn

2.1 Đĩa Petrifilm

MỘT VÀI ĐĨA PETRIFILM KHÁC

THEO AOAC INTERATIONAL VÀ U.S

FDA BACTERIOLOGICAL ANALYTICAL MANUAL (BAM)

Xác định Coliforms là trực khuẩn gram âm, hình que, sinh hơi và acid suốt quá trình lên men chuyển hoá lactose Khuẩn lạc Coliform phát triển trên đĩa Petrifilm

EC sinh acid, chất chỉ thị pH trong đĩa làm cho lớp keo

có màu đỏ Khí sinh ra được giữ lại xung quanh khuẩn lạc Coliform màu đỏ là dấu hiệu để xác định Coliform.

 Chú ý:

 Không sử dụng đĩa này để phát hiện E.coli O157 Như hầu hết những môi trường kiểm tra E.coli/Coliform khác, đĩa này sẽ không hiển thị đặc biệt với bất kì dòng O157 nào hiện diện.

vào một túi chứa thích hợp

như là bao dập mẫu, bình

pha loãng, bao Whirl-Pak

hay túi vô trùng khác

Thêm một lượng thích hợp một trong các chất pha loãng

vô trùng sau: phosphate đệm Butterfield, 0,1% dung dịch

peptone, muối peptone pha

loãng, (phương pháp ISO

6887), dung dịch peptone đệm (phương pháp ISO 6579), dung dịch saline (0,85-0,9%), dung dịch letheen không có bisulfite hay nước cất

 Trộn hay đồng nhất mẫu với thiết bị máy lắc dập mẫu

 Điều chỉnh pH cho mẫu trong khoảng 6,5 – 7,5:

 Đối với những mẫu có tính acid dùng NaOH 1 N

 Đối với những mẫu có tính bazo thì dùng HCl 1 N

Ủ MẪU

Ủ MẪU

 Thời gian và nhiệt độ ủ khác nhau theo từng phương pháp

 Những phương pháp chung nhất đã được chứng minh:

AOAC Official Method 991.14

 Đốivới coliforms: Ủ 24h ± 2h ở 35°C ±1°C

 ĐốivớiE.coli : ủ 48h ± 2h ở 35°C ± 1°C

AOAC Official Method 998.08

 Đối với E.coli (trong thịt, thịt gia cầm và hải sản):

• Ủ 24h ± 2h ở 35°C ± 1°C

NMKL method (147.1993)

 Đối với Coliforms: ủ 24h ± 2h ở 37°C

 Đối với E.coli: Ủ 48h ± 2h ở 37°C

màng lên

KHÔNG MỌC = 0

 Chú ý sự thay đổi màu sắc

của gel: khi số lượng E.coli

hay Coliform tăng, lớp gel

sẽ chuyển sang màu đỏ đậm

hoặc tím xanh.

 Những bọt khí li ti là đặc

tính của lớp gel, không phải

do E.coli hay coliform sinh

ra.

SỐ KHUẨN LẠC E.COLI = 3

Những khuẩn lạc nào có

màu xanh (từ xanh đến xanh

đỏ) đều biểu hiện sự có

mặt của E coli Chiếu

sáng phía trước sẽ làm

nổi bật màu xanh kết tủa

trong khuẩn lạc.

SỐ KHUẨN LẠC E.COLI = 13

 Số lượng Coliform tổng = 28.

 Số lượng khuẩn lạc đếm được

trên đĩa Petrifilm EC là từ 15

– 150.

 Không đếm số khuẩn lạc

ngoài rìa vì chúng không chịu

ảnh hưởng của môi trường

chọn lọc

SỐ KHUẨN LẠC E.COLI = 17

 Ước lượng Coliform tổng = 150

 Diện tích môi trường nuôi cấy

khoảng 20 Khi số khuẩn lạc trên

đĩa nhiều hơn 150 thì ta đếm số

lượng khuẩn lạc trong 1 hoặc vài

ô vuông đại diện và xác định số

lượng trung bình trên 1 ô vuông

Nhân số trung bình này với 20 sẽ

ước lượng được số khuẩn lạc trên

từng đĩa

  

Sự tập trung cao của E.coli sẽ tạo nên khu vực phát triển sang màu tía – xanh.

 Ước lượng coliform tổng ~

Khi số lượng coliform cao (), một số chủng E.coli có thể sinh

ít khí và màu xanh khuẩn lạc

không rõ Tất cả khuẩn lạc màu xanh, không có bọt khí được coi

là E.coli Lấy những khuẩn lạc màu xanh không có bọt khí

kiểm tra lại nếu cần.

  

SỐ LƯỢNG KHUẨN LẠC THỰC ~

 

 Khi số lượng vi sinh

không phải Coliform

cao như Pseudomonas

thì lớp gel trên đĩa

Petrifilm EC sẽ chuyển

sang màu vàng.

tác cấy không tốt hoặc khí từ

mẫu bị giữ lại Chúng có hình

dạng bất thường và không liên

quan đến khuẩn lạc

Những hình dạng bọt khí khác nhau sinh ra từ khuẩn lạc Tất cả các dạng trên đều

được đếm.

3 KẾT LUẬN

Tất cả các đĩa Petrifilm đều được sản xuất theo quy trình được

chứng nhận tiêu chuẩn ISO 9001 và quy trình quản lý chất lượng khắc khe

 Chúng được bổ sung bởi cam kết của 3M về chất lượng sản phẩm, dịch vụ khách hàng, hỗ trợ kỹ thuật bởi đội ngũ của 3M

 Phương pháp kiểm tra bằng đĩa Petrifilm đã được kiểm định và

công nhận tại Official Methods of Analysis, AOAC

 Vì đĩa Petrifilm được làm đồng nhất và dễ dàng sử dụng nên ít xảy

ra sai xót so với các phương pháp khác Đĩa có kẻ ô thuận tiện cho việc đếm khuẩn lạc

 Với việc sử dụng đĩa Petrifilm trong việc định dạng và nhận biết vi sinh vật so với các phương pháp khác cho kết quả nhanh và chính xác hơn chỉ qua 3 bước đơn giản:

1- Cấy và trải đều 1 ml mẫu trên đĩa

2- Ủ ở nhiệt độ thích hợp

3- Đếm số khuẩn lạc

nhiều thời gian giám sát các điểm tới hạn thường xuyên hơn Kết quả cuối cùng là kiểm soát quá trình sản xuất tốt hơn và chất lượng

Cảm ơn cô và các

bạn đã chú ý lắng nghe