ỨNG DỤNG CỦA NHIỄM SẮC THỂ ĐỒ VÀLAI TẠI CHỖ PHÁT HUỲNH QUANG (FISH)TRONG Y HỌC

ỨNG DỤNG CỦA NHIỄM SẮC THỂ ĐỒ VÀ LAI TẠI CHỖ PHÁT HUỲNH QUANG (FISH) TRONG Y HỌC TS.BS Phan Thị Xinh Đại Học Y Dược TP HCM Bộ Môn Huyết Học 19/03/2011 DI TRUYỀN TẾ BÀO Nội dung: Nhiễm sắc thể đồ bình thường Phương pháp nuôi cấy nhuộm băng Các dạng bất thường danh pháp Các rối loạn số lượng NST Các rối loạn cấu trúc NST DI TRUYỀN TẾ BÀO Nhiễm sắc thể đồ bình thường Phương pháp nuôi cấy nhuộm band Các dạng bất thường danh pháp Các rối loạn số lượng NST Các rối loạn cấu trúc NST Từ Sợi Đôi DNA Đến NST NST 17, băng G, 400 băng Đánh giá mức độ cuộn xoắn sợi đôi DNA: • 1:6 nucleosomes, • 1:36 30 nm sợi chromatin • Và > 1: 10,000 NST kỳ Sự Phân Bào Nguyên Phân (Mitosis) Kỳ đầu Tiền Kỳ Kỳ Từ kỳ sau đến trước nhân đôi DNA gđ S Kỳ sau Kỳ cuối NST sợi đơn (n) Gđ phân chia tb chất Lượng DNA Của NST - Gđ M (mitosis): Thời kỳ phân chia - Gian kỳ (Interphase): + Gđ G1 (Gap1, M S) + Gđ S (Tổng hợp DNA) + Gđ G2 (Gap2, S M) - n: số NST (ploidy) - C: Lượng DNA Thời Gian Phát Hiện Nhiễm Sắc Thể Ngừng phân bào colcemid 4n 4n M phase 60 M Gap2 3-4 hrs 4n Synthesis 4n Nhiễm sắc thể nằm đĩa phân bào (metaphase plate) P 2n Gap1 2n 10-12 hrs Cực phân bào 6-8 hrs M P Phân tích nhiễm sắc thể Ống vi Chu kỳ tế bào: Khoảng 24 G1 (gap1): 10-12 hr S (DNA): 6-8 hr G2 (gap2): 3-4 hr M (Mitosis): hr Cấu Trúc Của Nhiễm Sắc Thể pter telomere p centromere q q telomere qter Telomere: Có cấu trúc đặc biệt gồm DNA protein, nắp tận NST Có chức sau: - Duy trì cấu trúc nguyên vẹn NST - Đảm bảo việc mã DNA hoàn tất - Giúp định vị NST Vệ tinh (satellite) Cuống vệ tinh (satellite stalk) Chổ thắt eo thứ hai (second constriction) pter p p q Centromere: - Vị trí gắn kết chromatid qter -Có vai trò q trình phân bào: Ở người, centromere gồm hàng trăm Kb DNA lặp lại, thành phần α–satellite DNA, chổ gắn protein nhân CENP-B Phân Nhóm Nhiễm Sắc Thể Ở Người Sơ Đồ Băng Của Bộ Nhiễm Sắc Thể Nhận diện dựa vào kiểu băng đặc hiệu NST Nguyên tắc interphase metaphase FISH (1) Tế bào bình thường Metaphase FISH Interphase FISH No.8 α–satellite probe No.7 α–satellite probe Tế bào bất thường Nguyên tắc interphase metaphase FISH (2) Tế bào bình thường Tế bào bất thường Metaphase FISH Interphase FISH Probe A Probe B Tổ hợp A/B Smear Smear FISH FISH Basophils der(1;7) Eosinophils Erythroblasts Probe = cep(1) Neutrophils normal der(1;7)+ DI TRUYỀN PHÂN TỬ A Fluorescence in situ hybridization (FISH) Metaphase FISH Interphase FISH Smear FISH B CGH (comparative genomic hybridization) Metaphase CGH C Một số ứng dụng Phương Phương pháp pháp CGH CGH （（(comparative (comparative genomic genomic hybridization) hybridization)（（ DNA chứng DNA bệnh nhân Spectrum Orange Spectrum Green µm Màu xanh Màu vàng Khuếch đại Bình thường Màu đỏ Mất đoạn 1.5 1.0 0.5 1.5 1.0 0.5 No.1 No.11 Tìm bất thường NST trường hợp: - U đặc - Khơng cấy NST CGH-metaphase CGH-metaphase DNA chứng (người bình thường) DNA bệnh nhân DI TRUYỀN PHÂN TỬ A Fluorescence in situ hybridization (FISH) Metaphase FISH Interphase FISH Smear FISH B CGH (comparative genomic hybridization) Metaphase CGH C Một số ứng dụng Ứng Dụng Của FISH  Giúp cho chẩn đoán: - Chẩn đoán trước sinh: Trisomy 13, 18, 21 - Chẩn đoán xác định bệnh: CML, Prader-Willi syndrome (NST 15q patial deletion)  Đánh giá tiên lượng: AML, ALL  Đánh giá đáp ứng với điều trị, đặc biệt ung thư: NST Ph CML HER-2: Human Epidermal Growth Factor Receptor type-2 HER-2 Genes HER-2 Protein FISH : DNA (khuếch đại) Immunohistochemistry (IHC): Protein HER-2 orange signal : CEP 17 green signals : Ratio = 1.0 HER2 signal X 20 nuclei CEP 17 signal X 20 nuclei HER-2 orange signal : 10 CEP 17 green signals : Ratio = 2.5 ≥ 2.0 (positive) Ung thư phổi ung thư đại trực tràng Khuếch đại gen EGFR (Goncalves A et al, BMC Cancer 2008, 8:169) Bạch cầu mạn dòng tủy ≈ 300 kb BCR probe NST Ph ASS gene-56kb nl(9) ≈ 650 kb ABL probe nl(22) Ung thư tiền liệt tuyến Bạch cầu cấp dòng tủy-M3 FISH: Ưu khuyết điểm - Ưu điểm:  Phát bất thường NST TB không phân chia  Cho kết nhanh vòng 24  Mồi đặc hiệu nên phát tái xếp ẩn  Phân tích nhiều TB: từ 200 đến 500 TB (độ nhạy để phát clone bất thường 1%)  Phát khuếch đại gen - Khuyết điểm:  Không phát bất thường kèm khơng quan sát toàn cấu trúc NST ... lượng NST Các rối loạn cấu trúc NST DI TRUYỀN TẾ BÀO Nhiễm sắc thể đồ bình thường Phương pháp ni cấy nhuộm band Các dạng bất thường danh pháp Các rối loạn số lượng NST Các rối loạn cấu trúc NST. .. tận NST Có chức sau: - Duy trì cấu trúc nguyên vẹn NST - Đảm bảo việc mã DNA hoàn tất - Giúp định vị NST Vệ tinh (satellite) Cuống vệ tinh (satellite stalk) Chổ thắt eo thứ hai (second constriction)... cuối NST sợi đơn (n) Gđ phân chia tb chất Lượng DNA Của NST - Gđ M (mitosis): Thời kỳ phân chia - Gian kỳ (Interphase): + Gđ G1 (Gap1, M S) + Gđ S (Tổng hợp DNA) + Gđ G2 (Gap2, S M) - n: số NST