Nghiên cứu khả năng kháng khuẩn và thành phần hóa học trong cao chiết ethanol nhân trần tía (adenosma bracteosum bonati)

LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu đồ án hồn tồn trung thực Tơi xin cam đoan rằng, giúp đỡ việc hoàn thành đồ án cảm ơn thơng tin trích dẫn đồ án ghi rõ nguồn gốc i LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin cảm ơn ban chủ nhiệm Viện Khoa Học Ứng dụng Hutech trường Đại học Công nghệ Thành phố Hồ Chí Minh tận tình truyền đạt kiến thức cho tơi thời gian ngồi ghế giảng đường để làm hành trang vững nhờ đủ kiến thức tự tin để thực đồ án tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn đến Cha Mẹ gia đình tơi, tạo điều kiện tốt để tơi học tập Trường Đại Học Công Nghệ TP.HCM Cảm ơn Cha Mẹ động viên để hồn thành tốt khố học Xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc đến T.S Nguyễn Ngọc Hồng KS Phạm Quang Thắng tạo điều kiện cho người đồng hành bước Nhờ Cô bảo, hướng dẫn tiếp lửa để vượt qua gặp vấn đề khó khăn lúc thực đề tài Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình bạn bè giúp đỡ, động viên tạo điều kiện tốt để đạt kết ngày hơm ii TĨM TẮT Nước ta nằm vùng nhiệt đới chịu ảnh hưởng sâu sắc khí hậu ẩm thấp, nóng kéo dài quanh năm Đây điều kiện thuận lợi cho loại vi khuẩn gây bệnh phát triển Mặt khác, việc sử dụng thuốc kháng sinh tuỳ tiện nhận thức chưa đầy đủ người dân cách sử dụng thuốc dẫn đến thực tế thuốc kháng sinh tổng Kết nhận sau khảo sát khả kháng khuẩn cao chiết Nhân Trần cao chiết có khả kháng chủng là: Staphylococcus aureus, Shigella sp., Salmonella sp Còn chủng Escherichia coli khơng bị kháng loại cao chiết Định lượng polyphenol tổng số flavonoid tổng số cao cồn cao cao nước Mẫu cao chiết cồn sau phân tích GC-MS cho kết có 15 chất định danh Đồng thời để tạo sản phẩm dễ dàng sử dụng nên qui trình sản xuất bột hòa tan từ Nhân Trần thông qua kỹ thuật sấy phun (được xác lập) với thông số chất trợ sấy, nhiệt độ đầu vào xác định iii DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 2.1 Nhân Trần tía Hình 2.2 Hình cấu tạo carvacrol Hình 2.3 Hình cấu tạo 1,8-cineol Hình 2.4 Hình cấu tạo morphin Hình 2.5 Hình cấu tạo coumarin Hình 2.6 Hình cấu tạo umbelliferin Hình 2.7 Hình cấu tạo vitamin K Hình 2.8 Hình cấu tạo osthol iv Hình 2.9 Hình cấu tạo seselin Hình 2.10 Hình cấu tạo marmesin Hình 2.11 Hình cấu tạo 7-hydroxy-4-methyl coumarin 10 Hình 2.12 Hình Staphylococcus aureus 11 Hình 2.13 Escherichia coli 12 Hình 2.14 Salmonella sp 14 Hình 2.15 Shigella sp 16 Hình 2.16 Thiết bị sấy phun SD-Basic 18 v Hình 2.17 Hệ thống sắc ký khí ghép nối khối phổ liên tục 17 Hình Sơ 3.1 đồ nghiên cứu 23 Hình 3.2 Bột Nhân Trần ngâm dung môi ethanol 96% 25 Hình 3.3 Thiết bị quay chân khơng 26 Hình 3.4 Cao ethanol Nhân Trần 26 Hình Cao 3.5 nước Nhân Trần 27 Hình 3.6 Sơ đồ quy trình sấy phun cao chiết Nhân Trần 30 Hình 3.7 Qui trình xử lý cao cồn trước chạy GC-MS 32 Hình 4.1 Khả kháng khuẩn Staphylococcus aureus cao chiết ethanol Nhân Trần vi 36 Hình 4.2 Khả kháng khuẩn Staphylococcus aureus cao chiết nước Nhân Trần 36 Hình 4.3 Khả kháng khuẩn Staphylococcus aureus kháng sinh ampicillin 37 Hình 4.4 Khả kháng khuẩn Shigella sp cao chiết ethanol Nhân Trần 39 Hình 4.5 Khả kháng khuẩn Shigella sp cao chiết nước Nhân Trần 39 Hình 4.6 Khả kháng khuẩn Shigella sp kháng sinh ampicillin 40 Hình 4.7 Khả kháng khuẩn Salmonella sp cao chiết ethanol Nhân Trần 42 Hình 4.8 Khả kháng khuẩn Salmonella sp cao chiết nước Nhân Trần 42 vii Hình 4.9 Khả kháng khuẩn Salmonella sp kháng sinh ampicillin 43 Hình 4.10 Khả kháng khuẩn Escherichia coli cao chiết ethanol Nhân Trần 45 Hình 4.11 Khả kháng khuẩn Escherichia coli cao chiết nước Nhân Trần 46 Hình 4.12 Khả kháng khuẩn Escherichia coli kháng sinh ampicillin 46 Hình 4.13 Dung dịch dựng đường chuẩn acid gallic 47 Hình 4.14 Đường chuẩn acid gallic 47 Hình 4.15 Dung dịch rutin chuẩn 49 Hình 4.16 Đường chuẩn rutin 49 viii Hình 4.17 Bột Nhân Trần hòa tan 55 Hình Sơ 4.18 đồ qui trình sấy phun 55 Hình 4.19 Bột hòa tan Nhân Trần máy SD-Basic 57 ix DANH MỤC BẢNG Bảng Đặc 2.1 điểm sinh hóa Salmonella sp 15 Bảng Độ 4.1 ẩm dược liệu 34 Bảng 4.2 Hàm lượng cao chiết theo dung môi 34 Bảng 4.3 Hoạt tính kháng khuẩn Staphylococcus aureus loại cao chiết Nhân Trần kháng sinh ampicillin 35 Bảng 4.4 Hoạt tính kháng khuẩn Shigella sp loại cao chiết Nhân Trần kháng sinh ampicillin 38 Bảng 4.5 Hoạt tính kháng khuẩn Salmonella sp loại cao chiết Nhân Trần kháng sinh ampicillin 41 Bảng 4.6 Hoạt tính kháng khuẩn Escherichia coli loại cao chiết Nhân Trần kháng sinh ampicillin 45 x Dependent Variable: KHANGKHUANSA Sum of Source DF Model Error Squares Mean Square F Value Pr > F 35.40000000 1.50000000 Corrected Total 8.85000000 29.50 0.0011 0.30000000 36.90000000 R-Square Coeff Var Root MSE KHANGKHUANSA Mean 0.959350 4.526633 0.547723 Source AMPICI DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F 35.40000000 The SAS System The ANOVA Procedure 65 12.10000 8.85000000 29.50 0.0011 13:55 Tuesday, July 27, 2018 11 t Tests (LSD) for KHANGKHUANSA NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t 0.3 2.57058 Least Significant Difference 1.408 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N AMPICI A 15.0000 2000 B 13.5000 1280 C 11.5000 640 C D C 10.5000 320 D D 10.0000 160 1.3 Khả kháng khuẩn cao nước lên Shigella sp The SAS System 66 13:55 Tuesday, July 27, 2018 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values CAONUOC 1280 160 2000 320 640 KHANGKHUANSHI 11 12 13 14 15 16 Number of observations 10 The SAS System 13:55 Tuesday, July 27, 2018 14 The ANOVA Procedure Dependent Variable: KHANGKHUANSHI Sum of Source DF Model Error Corrected Total R-Square Squares Mean Square F Value Pr > F 25.00000000 1.00000000 6.25000000 31.25 0.0010 0.20000000 26.00000000 Coeff Var Root MSE KHANGKHUANSHI Mean 67 0.961538 Source 3.440105 DF CAONUOC 0.447214 Anova SS 13.00000 Mean Square F Value Pr > F 25.00000000 6.25000000 31.25 0.0010 1.4 Khả kháng khuẩn ampicillin lên Shigella sp The SAS System 13:55 Tuesday, July 27, 2018 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values AMPICI 1280 160 2000 320 640 KHANGKHUANSHI 10 11 12 13 14 15 Number of observations 10 The SAS System The ANOVA Procedure 68 13:55 Tuesday, July 27, 2018 22 Dependent Variable: KHANGKHUANSHI Sum of Source DF Model Error Squares Mean Square F Value Pr > F 23.40000000 1.50000000 Corrected Total 5.85000000 19.50 0.0030 0.30000000 24.90000000 R-Square Coeff Var Root MSE KHANGKHUANSHI Mean 0.939759 4.526633 0.547723 Source AMPICI DF Anova SS 12.10000 Mean Square F Value Pr > F 23.40000000 The SAS System 5.85000000 13:55 Tuesday, July 27, 2018 23 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for KHANGKHUANSHI 69 19.50 0.0030 NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t 0.3 2.57058 Least Significant Difference 1.408 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N AMPICI A 14.5000 2000 B 13.0000 1280 C 11.5000 320 C 11.5000 640 D 10.0000 160 C 1.5 Khả kháng khuẩn cao nước lên Salmonella sp The SAS System The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values 70 13:55 Tuesday, July 27, 2018 CAONUOC 1280 160 2000 320 640 KHANGKHUANSAL 11 12 13 Number of observations 10 The SAS System 13:55 Tuesday, July 27, 2018 26 The ANOVA Procedure Dependent Variable: KHANGKHUANSAL Sum of Source DF Model Error Squares 340.4000000 Corrected Total Mean Square 0.5000000 85.1000000 F Value Pr > F 851.00 F 340.4000000 71 7.100000 85.1000000 851.00 F 22.60000000 1.00000000 5.65000000 0.20000000 23.60000000 73 28.25 0.0013 R-Square Coeff Var Root MSE KHANGKHUANSAL Mean 0.957627 3.240678 0.447214 Source AMPICI DF Anova SS 13.80000 Mean Square F Value Pr > F 22.60000000 The SAS System 5.65000000 13:55 Tuesday, July 27, 2018 31 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for KHANGKHUANSAL 74 28.25 0.0013 NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t 0.2 2.57058 Least Significant Difference 1.1496 Means with the same letter are not significantly different t Grouping A Mean N AMPICI 16.0000 2000 A 15.0000 1280 B 13.5000 640 A B C B 12.5000 320 C C 12.0000 160 1.7 Khả kháng khuẩn ampicillin lên Escherichia coli The SAS System 33 The ANOVA Procedure Class Level Information 75 13:55 Tuesday, July 27, 2018 Class Levels Values AMPICI 1280 160 2000 320 640 KHANGKHUANEC 12 13 14 15 16 Number of observations 10 The SAS System 13:55 Tuesday, July 27, 2018 34 The ANOVA Procedure Dependent Variable: KHANGKHUANEC Sum of Source DF Model Error Corrected Total Source Squares Mean Square F Value Pr > F 18.60000000 1.00000000 4.65000000 23.25 0.0020 0.20000000 19.60000000 R-Square Coeff Var Root MSE KHANGKHUANEC Mean 0.948980 3.240678 0.447214 DF Anova SS 76 13.80000 Mean Square F Value Pr > F AMPICI 18.60000000 4.65000000 The SAS System 23.25 0.0020 13:55 Tuesday, July 27, 2018 35 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for KHANGKHUANEC NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom Error Mean Square Critical Value of t 0.2 2.57058 Least Significant Difference 1.1496 Means with the same letter are not significantly different t Grouping Mean N AMPICI A 16.0000 2000 B 14.5000 1280 77 B C B 13.5000 640 13.0000 320 C C D D D 12.0000 160 Sắc ký đồ phân đoạn cao Nhân Trần 78 79 ... cao chiết qua cao cồn Bước đầu xây dựng qui trình từ sản xuất bột hòa tan Nhân Trần tía 1.3 Ý NGHĨA NGHIÊN CỨU Khảo sát khả kháng khuẩn cao chiết nhằm biết mức độ kháng khuẩn loại cao chiết cao. .. Shigella sp, trực khuẩn đường ruột (Escheriechia coli) 1.2 MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU Khảo sát khả kháng khuẩn cao chiết ethanol cao chiết nước từ Nhân Trần tía (Adenosma bracteosum Bonati) Định lượng... Trong thí nghiệm kháng khuẩn loại cao chiết cao nước cao ethanol đánh giá để chọn loại cao có hiệu kháng khuẩn tốt Từ tiến hành phân tích GC-MS để biết số thành phần hóa học góp phần hỗ trợ kháng