ĐÁNH GIÁ GIÁ TRỊ bộ xét NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG FRUCTOSE và kẽm TRONG TINH DỊCH góp PHẦN xác ĐỊNH NGUYÊN NHÂN vô SINH NAM

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI BÍCH MAI ĐÁNH GIÁ GIÁ TRỊ BỘ XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG FRUCTOSE VÀ KẼM TRONG TINH DỊCH GĨP PHẦN XÁC ĐỊNH NGUN NHÂN VƠ SINH NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI BÍCH MAI ĐÁNH GIÁ GIÁ TRỊ BỘ XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG FRUCTOSE VÀ KẼM TRONG TINH DỊCH GÓP PHẦN XÁC ĐỊNH NGUYÊN NHÂN VÔ SINH NAM Chuyên ngành : Y sinh học- Di truyền Mã số : 60720102 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN THỊ TRANG PGS.TS HOÀNG THỊ NGỌC LAN HÀ NỘI - 2018 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận hướng dẫn quý báu, giúp đỡ nhiệt tình thầy cô, anh chị, bạn bè gia đình Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới: Ban Giám hiệu trường Đại học Y Hà Nội, phòng Quản lí đào tạo Sau đại học, Bộ môn Y sinh học - Di truyền trường Đại học Y Hà Nội thầy cô anh chị Bộ môn tạo điều kiện, giúp đỡ tơi tận tình học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Thị Trang - người hết lòng giúp đỡ, dạy bảo, dìu dắt, hướng dẫn tơi suốt q trình làm luận văn trình nghiên cứu, học tập, truyền cho niềm say mê nghiên cứu khoa học Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới PGS.TS Hồng Thị Ngọc Lan - Cô đồng hướng dẫn, hướng dẫn, giúp đỡ tơi nhiệt tình q trình nghiên cứu Các Thầy cô Hội đồng khoa học thông qua đề cương bảo vệ luận văn đóng góp nhiều ý kiến q báu cho tơi q trình nghiên cứu hồn thành luận văn Xin cảm ơn bệnh nhân đồng ý tham gia vào nghiên cứu Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới gia đình ln động viên tơi, bạn bè giúp đỡ, chia sẻ khó khăn với tơi suốt q trình hồn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2018 Bùi Bích Mai LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan luận văn: “Đánh giá giá trị xét nghiệm định lượng Fructose kẽm tinh dịch góp phần xác định nguyên nhân vô sinh nam” hướng dẫn TS Nguyễn Thị Trang PGS.TS Hoàng Thị Ngọc Lan hồn tồn tơi thực Các số liệu kết luận văn trung thực chưa công bố trước Hà Nội, ngày 05 tháng năm 2018 Bùi Bích Mai MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Khái niệm, phân loại nguyên nhân vô sinh nam .3 1.1.1 Khái niệm vô sinh, vô sinh nam phân loại vô sinh nam 1.1.2 Nguyên nhân vô sinh nam .5 1.2 Các phương pháp chẩn đốn vơ sinh nam 10 1.2.1 Thăm khám lâm sàng 10 1.2.2 Các kĩ thuật chẩn đốn ngun nhân vơ sinh nam 11 1.3 Phương pháp định lượng fructose kẽm tinh dịch 12 1.3.1 Vai trò frutose kẽm tinh dịch 12 1.3.2 Các phương pháp định lượng fructose kẽm .16 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .20 2.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.2 Thời gian nghiên cứu 20 2.3 Địa điểm nghiên cứu 20 2.4 Phương pháp nghiên cứu 20 2.4.1 Thiết kế nghiên cứu .20 2.4.2 Các bước nghiên cứu 21 2.5 Phân tích xử lý số liệu 30 2.6 Sai số cách khống chế 30 2.6.1 Sai số 30 2.6.2 Cách khắc phục 30 2.7 Đạo đức nghiên cứu 31 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .32 3.1 Kết định lượng nồng độ fructose kẽm xét nghiệm tự pha kit thương mại .32 3.2 Đánh giá giá trị xét nghiệm tự pha với kit thương mại 34 3.2.1 Độ xác .34 3.2.2 Độ nhạy độ đặc hiệu .40 3.2.3 So sánh tương đương xét nghiệm tự pha kit thương mại 42 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 46 4.1 Xác định nồng độ fructose kẽm tinh dịch xét nghiệm tự pha kit thương mại 46 4.1.1 Xác định nồng độ fructose tinh dịch xét nghiệm tự pha kit thương mại .46 4.1.2 Xác định nồng độ kẽm tinh dịch xét nghiệm tự pha kit thương mại 47 4.2 Đánh giá giá trị xét nghiệm tự pha với kit thương mại 48 4.2.1 Đánh giá độ xác xét nghiệm định lượng fructose kẽm tự pha chế 48 4.2.2 Đánh giá tương đương xét nghiệm tự pha kit thương mại .50 KẾT LUẬN 53 KIẾN NGHỊ 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 5- Br- PAPS 5-Bromo-2-pyridiylazo (-5-[N-n-propyl-N-(3-sulfopropyl) amino AZF Azoospermia Factor DNA Deoxyribonucleoid Acid FSH Follicle Stimulating Hormone GnRH Gonadotropin Releasing Hormone HCl Axit chlohidric KTV Kĩ thuật viên LH Luteinizing Hormone NST Nhiễm sắc thể PCR Polymerase Chain Reacion TCA Trichloroacetic Acid TESE Testicular Sperm Extracion WHO World Health Organization (Tổ chức Y tế giới) DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Nồng độ fructose nhóm nghiên cứu .32 Bảng 3.2 Nồng độ kẽm nhóm nghiên cứu 33 Bảng 3.3: Kết thực nghiệm độ lặp lại (CV%) .34 Bảng 3.4 Kết thử nghiệm độ chụm trung gian (CV%) 35 Bảng 3.5: Kết thử nghiệm độ (ttn) .36 Bảng 3.6: Kết thực nghiệm độ lặp lại (CV%) .37 Bảng 3.7 Kết thử nghiệm độ chụm trung gian (CV%) 38 Bảng 3.8: Kết thử nghiệm độ (ttn ) 39 Bảng 3.9 Bảng thống kê giá trị tính toán độ nhạy độ đặc hiệu xét nghiệm định lượng fructose 40 Bảng 3.10 Bảng thống kê giá trị tính tốn độ nhạy độ đặc hiệu xét nghiệm định lượng kẽm 41 Bảng 3.11 Kết kiểm định tương quan Pearson phương pháp 42 Bảng 3.12 Kết kiểm định T-test chênh lệch phương pháp 42 Bảng 3.13 Kết kiểm định tương quan Prearson phương pháp 44 Bảng 3.14 Bảng kiểm định T-test chênh lệch phương pháp .44 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Biểu đồ Bland Altman thể tương hợp phương pháp đo .43 Biểu đồ 3.2 Biểu đồ Bland Altman thể tương hợp phương pháp đo 45 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ q trình chuyển hóa fructose 13 Hình 1.2 Sơ đồ tóm tắt vai trò kẽm q trình sống thể .15 Hình 2.1: Độ xác .25 50 sơ khả định lượng nồng độ kẽm xét nghiệm tự pha với kit đạt chuẩn quốc tế Kết cho thấy rằng, nhóm khơng có tinh trùng nhóm chứng, hai xét nghiệm đưa kết nồng độ kẽm ngưỡng giới hạn bình thường Trong nhóm có số số bất thường, có trường hợp định lượng ngưỡng xét nghiệm tự pha bình thường với kit thương mại Bước đầu thấy xét nghiệm tự pha cho nồng độ kẽm thấp điều dẫn đến chẩn đoán sai lệch Cùng với xét nghiệm định lượng fructose, để khẳng định xét nghiệm tự pha có đạt chuẩn để định lượng nồng độ fructose/ kẽm giá trị định lượng có tương đương với xét nghiệm đạt chuẩn giới hay không, tiếp tục tiến hành đánh giá tính xác tính tương đương xét nghiệm tự pha chế 4.2 Đánh giá giá trị xét nghiệm tự pha với kit thương mại 4.2.1 Đánh giá độ xác xét nghiệm định lượng fructose kẽm tự pha chế Dựa vào yêu cầu phương pháp thực tế điều kiện phòng thí nghiệm, chúng tơi tiến hành đánh giá độ xác bao gồm độ chụm độ 4.2.1.1 Khảo sát độ chụm Trong thử nghiệm, đặc biệt thử nghiệm định lượng, có nhiều yếu tố sai số ảnh hưởng tới thử nghiệm, dẫn tới khơng xác kết Do đó, để kiểm soát yếu tố gây nhiễu này, cần thiết sử dụng khái niệm độ chụm Độ chụm mô tả kết phụ thuộc vào yếu tố sai số ngẫu nhiên mà không liên quan đến kết thực mẫu Độ chụm thấp 51 độ lệch chuẩn hay hệ số biến thiên lớn, ngược lại, độ chụm lớn hệ số biến thiên nhỏ Độ chụm tính tốn dựa thông số: độ lặp lại, độ chụm trung gian độ tái lập Để tính thơng số thiết kế thực điều kiện khác Trong khuôn khổ nghiên cứu này, tiến hành thực nghiệm tính độ lặp lại độ chụm trung gian Do khơng có phòng thí nghiệm tương đương nên khơng thể tiến hành tính tốn độ tái lập Trong nghiên cứu này, xét nghiệm fructose chúng tơi có độ lặp lại với hệ số biến thiên CV% = 1,407%, xét nghiệm kẽm có hệ số biến thiên thấp với CV% = 0,27% Như vậy, hệ số biến thiên có giá trị khơng vượt q 5%, nói lên quy trình có độ lặp lại đạt u cầu phép phân tích Khi tính tốn độ chụm trung gian, thu hệ số biến thiên với xét nghiệm fructose CV% = 2,032%; xét nghiệm kẽm CV% = 0,64% Hệ số biến thiên có giá trị khơng vượt 5% Và vậy, quy trình đạt u cầu phép phân tích Như vậy, có tác động yếu tố sai số ngẫu nhiên, với mẫu, nồng độ đo điều kiện khác có sai số khoảng chấp nhận 4.2.1.2 Khảo sát độ Độ phương pháp cho thấy mức độ gần kết thu giá trị thực giá trị chấp nhận (µ) Với thực nghiệm kiểm định độ đúng, kết thu ttn = 0,906 xét nghiệm fructose ttn = 2,076 xét nghiệm kẽm Đồng thời tra bảng, giá trị t c thu 2,262 Như ttn < tc, điều đồng nghĩa với việc nồng độ fructose/ kẽm đo từ phương pháp 52 có kết giống với nồng độ thực mẫu Quy trình đạt độ theo u cầu phép phân tích Tóm lại, xét nghiệm chúng tơi có độ xác đạt yêu cầu phép phân tích 4.2.2 Đánh giá tương đương xét nghiệm tự pha kit thương mại Để chắn độ xác kit tự pha chế, tiếp tục thực nghiệm so sánh kết định lượng xét nghiệm tự pha với kit thương mại đạt chuẩn 4.2.2.1 Đánh giá độ nhạy độ đặc hiệu Độ nhạy độ đặc hiệu hai đại lượng thống kê phản ánh độ xác xét nghiệm Một xét nghiệm tốt cần có độ nhạy độ đặc hiệu cao, có nghĩa sinh phẩm có kết dương tính giả âm tính giả thấp Đây hai tiêu chí quan trọng đánh giá chất lượng xét nghiệm Bộ xét nghiệm fructose đạt độ đặc hiệu 98,90%, độ nhạy 99,52% Bộ xét nghiệm kẽm có độ đặc hiệu cao xét nghiệm fructose đạt 100% độ nhạy thấp đạt 99,05% Độ nhạy độ đặc hiệu hai xét nghiệm cao 90 % sử dụng hai xét nghiệm để định lượng fructose kẽm tinh dịch với độ tin cậy cao 4.2.2.2 Đánh giá tương đương Sử dụng phương pháp Bland - Atman với xây dựng biểu đồ cơng cụ tính tốn đơn giản phương pháp hữu hiệu để đánh giá tương đương hai phương pháp đo lường, đặc biệt kiểm định phương pháp đo lường thay phương pháp đo lường chuẩn cơng nhận trước Quy trình định lượng fructose kẽm tinh dịch xét nghiệm tự pha cho kết tương đương với kít thương 53 mại kiểm định phương pháp xây dựng biểu đồ Bland - Atman Điều chứng tỏ giá trị tương đương xét nghiệm tự pha với quy trình đơn giản, giá thành thấp để thay cho kit thương mại phòng xét nghiệm Đối với xét nghiệm fructose, kết cho thấy có tương quan ý nghĩa phương pháp (r=0,990; p