NGHIÊN cứu bộ xét NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG FRUCTOSE và KẼMTRONG TINH DỊCH ỨNG DỤNGTRONG CHẨN đoán vô SINH NAM tại BỆNH VIỆN đại học y hà nội từ năm 2017 2018

1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BỘ Y TẾ BÙI BÍCH MAI NGHIÊN CỨU BỘ XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG FRUCTOSE VÀ KẼM TRONG TINH DỊCH ỨNG DỤNG TRONG CHẨN ĐỐN VƠ SINH NAM TẠI BỆNH VIỆN ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TỪ NĂM 2017- 2018 ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI BÍCH MAI NGHIÊN CỨU BỘ XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG FRUCTOSE VÀ KẼM TRONG TINH DỊCH ỨNG DỤNG TRONG CHẨN ĐỐN VƠ SINH NAM TẠI BỆNH VIỆN ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TỪ NĂM 2017- 2018 Chuyên ngành : Y sinh học- Di truyền Mã số : 60720102 ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Trang PGS.TS Hoàng Thị Ngọc Lan HÀ NỘI - 2017 MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC BIỂU ĐỒ DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ q trình chuyển hóa fructose Hình 1.2 Sơ đồ tóm tắt vai trò kẽm trình sống thể ĐẶT VẤN ĐỀ Cùng với phát triển xã hội nhận thức người dân bệnh tật ngày nâng cao việc chăm sóc sức khỏe sinh sản dần quan tâm nhiều tỉ lệ vô sinh muộn cặp vợ chồng ngày tăng Theo tổ chức Y tế Thế giới, 10 - 15% cặp vợ chồng độ tuổi sinh sản bị vô sinh, 40% nữ giới, 30 - 40% nam giới, 10% nam nữ, lại 10% không rõ nguyên nhân [1] Trong vô sinh nữ biết đến nghiên cứu từ lâu gần đây, vơ sinh nam mơí trọng nhiều Đã có nhiều phương pháp đời đề phục vụ cho việc chẩn đốn điều trị vơ nam siêu âm tinh hồn, mổ thăm dò tinh hồn, xét nghiệm gen, nhiễm sắc thể, gần xét nghiệm hóa sinh tinh dịch áp dụng để đánh giá chức sinh sản nam giới Fructose kẽm hai chất có vai trò quan trọng sức khỏe nam giới định lượng phương pháp hóa sinh Theo WHO năm 2010, nồng độ fructose tinh dịch thấp đặc trưng cho tình trạng tắc nghẽn ống dẫn tinh (bất sản ống dẫn tinh, bất sản túi tinh,…) [2] Nồng độ fructose tinh dịch bình thường khẳng định chức đường dẫn tinh, túi tinh bình thường, khơng gặp trường hợp tắc nghẽn [3] Chính lý này, phương pháp định lượng fructose tinh dịch khuyến cáo cho bác sĩ lâm sàng xác định bệnh nhân có tinh trùng hay khơng mà khơng cần sử dụng đến biện pháp xâm lấn Bên cạnh số fructose kẽm đóng vai trò quan trọng tinh trùng Nồng độ kẽm có liên quan đến số lượng, độ di động hình thái tinh trùng; cải thiện nồng độ testosterone máu cải thiện khả tình dục [4] Vì định lượng nồng độ kẽm tinh dịch cần thiết xét nghiệm thường quy để bổ sung cho xét nghiệm tinh dịch đồ thông thường, giúp bác sĩ lâm sàng đưa lời khuyên chế độ ăn uống để làm tăng số lượng chất lượng tinh trùng tăng khả thụ thai Ở Việt Nam, xét nghiệm định lượng fructose kẽm tinh dịch chưa phổ biến hóa chất xét nghiệm phải nhập từ nước với giá thành cao Xuất phát từ vấn đề thực tế trên, thực đề tài: “Nghiên cứu xét nghiệm định lượng fructose kẽm tinh dịch ứng dụng chẩn đốn vơ sinh nam Bệnh viện Đại học Y Hà Nội từ năm 2017- 2018”, với mục tiêu sau: Xây dựng quy trình xét nghiệm định lượng fructose kẽm tinh dịch So sánh kết định lượng fructose kẽm tinh dịch xét nghiệm tự pha với kit thương mại Xác định độ nhạy độ đặc hiệu xét nghiệm 10 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Khái niệm, phân loại nguyên nhân vô sinh nam 1.1.1 Khái niệm vô sinh, vô sinh nam phân loại vơ sinh nam Theo WHO, vơ sinh tình trạng cặp vợ chồng có quan hệ tình dục đặn mà không sử dụng biện pháp tránh thai mà sau 12 tháng khơng thể có thai (loại trừ trường hợp cho bú kinh hậu sản) [2] Vô sinh nam giới trường hợp nguyên nhân vô sinh từ nam giới, người nam giới có chức sinh sản khơng đảm bảo người bình thường, cần có can thiệp y tế Dựa vào kết tinh dịch đồ, vơ sinh nam chia thành nhóm sau: - Nhóm khơng có tinh trùng gồm: vơ tinh thiểu tinh nặng Nhóm có tinh trùng bình thường Tiêu chuẩn tinh dịch đồ bình thường theo WHO 2010 [2]:        Thể tích tinh dịch ≥ 1,5 ml pH tinh dịch ≥ 7,2 Mật độ tinh trùng ≥ 15 x 106 tinh trùng/ml Di động tiến tới ≥ 32% Hình thái bình thường ≥ 4% Tỉ lệ sống ≥ 58% Bạch cầu ≤ x 106 tinh trùng/ml • Vơ tinh Khái niệm: Vơ tinh hay Azoospermia tình trạng khơng phát tinh trùng tiêu với kính hiển vi độ phóng đại cao sau ly tâm tinh dịch hai lần xét nghiệm (lần thứ hai cách lần thứ nhất ngày xa tháng) [2] 34 2.6.2 Cách khắc phục  Trong trình lấy mẫu: Lấy mẫu theo quy định như: - Kiêng quan hệ từ 3-5 ngày trước lấy mẫu - Vệ sinh tay trước lấy mẫu - Tinh dịch lấy tay thủ dâm xuất tinh trực tiếp vào lọ đựng mẫu - Lọ đựng tinh dịch phải tiệt trùng làm loại nhựa không ảnh hưởng đến tinh trùng - Không lấy mẫu cách quan hệ  Trong trình làm tinh dịch đồ: Tuân thủ bước làm xét nghiệm tinh dịch đồ Trong trình định lượng chất xét nghiệm tự pha chế xét  nghiệm đạt chuẩn Áp dụng bước quy trình Trong trình nhập xử lý số liệu  - Số liệu kiểm tra lại trước nhập vào phần mềm - Cần nhập liệu cẩn thận, nhập xong phiếu kiểm tra lại lượt phiếu chuyển sang nhập phiếu 2.7 Đạo đức nghiên cứu Nghiên cứu vấn đề vô sinh nam nhiều nhà nghiên cứu thực song vấn đề nhạy cảm Việt Nam Đa số người bệnh chưa có khái niệm hồn chỉnh vấn đề Chính thế: - Nghiên cứu dựa hoàn toàn tự nguyện cách giải thích, thỏa thuận cho đối tượng tham gia nghiên cứu Các thông tin thu thập dành cho mục đích nghiên cứu khoa học khơng dành cho mục đích nghiên cứu khác 35 - Thông tin cá nhân đối tượng tham gia nghiên cứu hồn tồn giữ bí mật luận văn - Các đối tượng nghiên cứu từ chối tham gia tham gia từ bỏ chừng hồn tồn chấp thuận mà khơng có ép buộc - Nghiên cứu thực có cho phép hội đồng khoa học thông qua việc bảo vệ đề cương 36 CHƯƠNG DỰ KIẾN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Một số đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu Biểu đồ 3.1 Phân bố tuổi bệnh nhân Biểu đồ 3.2 Lý khám Biểu đồ 3.3 Tiền sử bệnh nhân 3.2 Xây dựng quy trình xét nghiệm định lượng fructose kẽm tinh dịch Bảng 3.1 Bảng kiểm quy trình kĩ thuật định lượng fructose Các bước Nội dung Cách tiến hành Ý nghĩa … Bảng 3.2 Bảng kiểm quy trình kĩ thuật định lượng kẽm Các bước Nội dung Cách tiến hành Ý nghĩa … Bảng 3.3 Kết thử nghiệm quy trình kĩ thuật định lượng fructose Nhóm STT OD fructose Nồng độ fructose p 37 … Bảng 3.4 Kết thử nghiệm quy trình kĩ thuật định lượng kẽm Nhóm STT … OD kẽm Nồngđộ kẽm p 3.2 So sánh kết định lượng nồng độ fructose kẽm xét nghiệm tự pha với kit thương mại Nhắc lại quy ước nhóm nghiên cứu: - Nhóm I: kết tinh dịch đồ hồn tồn bình thường Nhóm II: kết tinh dịch đồ có số bất thường - độ di động, vận tốc di chuyển, hình thái tỷ lệ sống Nhóm III: kết tinh dịch đồ khơng có tinh trùng tinh trùng (< 15 triệu/ ml) 3.2.1 Định lượng nồng độ fructose kẽm Bảng 3.5 Nồng độ fructose Bộ tự pha Nhóm STT I Dưới ngưỡng Bình thường Bộđạt chuẩn Dưới ngưỡng Tổng Bình thường … II … III … Bảng 3.6 Nồng độ kẽm Nhóm STT Bộ tự pha Dưới Bình ngưỡng I thường Bộ thương mại Dưới Bình ngưỡng thường Tổng 38 II III … … … 3.2.2 So sánh tương đương xét nghiệm tự pha kit thương mại • Ứng dụng phương pháp xây dựng biểu đồ Bland- Altman: phương pháp khảo sát định lượng tương hợp phép đo khác kiểm nghiệm xét nghiệm so với xét nghiệm cơng nhận đạt chuẩn 3.3 Tính tốn độ nhạy độ đặc hiệu xét nghiệm tự pha chế Bảng 3.7 Bảng thống kê số lượng giá trị tính độ nhạy độ đặc hiệu Âm tính Âm tính Dương Dương thật giả tính thật tính giả Tổng Tổng Trong đó: - Âm tính thật: Là nồng độ fructose kẽm ngưỡng bình thường thử 39 - nghiệm với xét nghiệm Âm tính giả: Là nồng độ fructose kẽm ngưỡng bình thường thử nghiệm với xét nghiệm tự pha chế ngưỡng với xét nghiệm đạt - chuẩn Dương tính thật: Là nồng độ fructose kẽm ngưỡng bình thường - thử nghiệm với xét nghiệm Dương tính giả: Là nồng độ fructose kẽm ngưỡng bình thường thử nghiệm với xét nghiệm tự pha chế ngưỡng bình thường với xét • nghiệm đạt chuẩn Cơng thức tính độ nhạy: Độ nhạy = • Cơng thức tính độ đặc hiệu: Độ đặc hiệu = 40 CHƯƠNG DỰ KIẾN BÀN LUẬN Dự kiến bàn luận theo kết DỰ KIẾN KẾT LUẬN Dự kiến kết luận theo mục tiêu DỰ KIẾN KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO Agarwal A Sabanegh E (2011), Male infertility, 10th, Elsevier Saunders, Philadelphia World Health Organization (2010), Laboratory manual for the examination and processing of human semen, Cambridge University Press, New York Muhammad S K Zahoor A., Mudassir A K (2010), "Seminal fructose in various classes of infertile patients", Pak J Physiol., 6(1), tr 36-38 Cooper T.G., Noonan E., Von Eckardstein S et al (2010) World Health Organization reference values for human semen characteristics Update, 16 (3), 231 - 245 Padubidri Daftary (2011), Shaw’s Textbook of Gynaecology, 15th edition, Elsevier, 204 Nguyễn Xuân Quý, Phạm Ngọc Quốc Duy, Hồ Mạnh Tường (2002) Khảo sát tinh dịch đồ cặp vợ chồng muộn điều trị bệnh viện Phụ Sản Từ Dũ từ tháng đến tháng năm 2001 Tạp chí Phụ sản Việt Nam, (3), 71 - 75 Trần Đức Phấn, Trịnh Văn Bảo, Hoàng Thu Lan (2002) Đặc điểm tinh dịch người nam giới cặp vợ chồng thiểu sinh sản Tạp chí Y học thực hành, (407), 38 - 41 Lê Hoàng Anh Hồ Mạnh Tường (2012), Phân tích kết 4.060 tinh dịch đồ theo tiêu chuẩn WHO 2010 cặp vợ chồng khám muộn, Hội nghị khoa học thường niên HOSREM lần VIII, 2012 WHO (1987) Towards more objectivity in diagnosis and management of male infertility International Journal of Andrology, 17 10 Phan Văn Quyền (2000), Khám làm bệnh án cặp vợ chồng vô sinh, Lớp vô sinh hỗ trợ sinh sản khoá IV, 14 - 20 11 Yoshiyoki K et al (2001) Molecular analysis of hypospadias in a boy with dicentric Y Chromosome The Journal of urology, 385, 1244 - 1245 12 Nguyễn Bửu Triều, Trần Quán Anh (2002), Vơ sinh nam giới, Bệnh học giới tính nam, Nhà xuất Y học, 240 - 271 13 Lanfranco F (2004) Klinefelter's syndrome.Lancet 364 273 - 283 14 Phùng Huy Tuân (2005), Bất thường di truyền vô sinh nam, Sức khoẻ sinh sản, 10 - 15 15 Trần Đức Phấn (2003), Tình hình vơ sinh vùng có nguy nhiễm chất độc hố học chiến tranh, bước đầu phân tích ngun nhân tình trạng đó, Báo cáo tổng kết đề tài nhánh 16 Poogothai J., Gopenath T.S, Maronnayaki S (2009) Genetics of human male infertility Singaporemed J., 50 (4), 336 - 347 17 Setchell B.P., Waites G.M.H (1970) Changes in the permeability of testicular capillaries and of blood - testis barrier after the injection of cadmium chloride in rat J Endocrinol, (7), 81 - 86 18 Voght P.H (1996), Human Y chromosome function in male germ cell development Advances in Developmental Biology 1(4), 141 - 157 19 Ferlin A., Barbara A., Elena S et al (2007) Molecular and clinical characterization of Y chromosome Microdeletions in infertile men: A 10-year experience in Italy J Clin Endocrinol Metab, 92(3), 762 - 770 20 Kitpramuk T (1995) Male fertility and male infertility assessment Workshop in Andrology, 42-49 21 Longepied G., Saut N., Aknin-Seifer I et al (2010) Complete deletion of the AZFb interval from the Y chromosome in an oligozoospermic man Human Reproduction, 25(10), 2655 - 2663 22 Krausz C., Hoefsloot L., Simoni M et al (2013), EAA/EMQN best practiceguidelines for molecular diiiagnosis of Y-chromosomal microdeletions: state-of-the-art 2013 Andrology 2(1), - 14 23 Trieu H., Richard M., Trounson A (2002) Selected genetic factors associated with male infertility Human Reproduction Update, 8(2), 183 198 24 Muallem A., Shultz J., Pryor J et al (1999) Defining regions of the Y chromosome responsible for male infertility and identification of a fourth AZF region (AZFd) by Y chromosome microdeletion detection Mol Reprod Dev, 53(1), 27 - 41 25 Shah K., Gayathri S Nicola G et al (2003) The genetic basis of infertility Society for Reproduction and Fertility, 126(1), 13 - 25 26 Nguyễn Xuân Bái (2002), Nghiên cứu đặc điểm tinh dịch đồ 1000 cặp vợ chồng vô sinh, Luận văn thạc sỹ y học, Trường Đại học Y Hà Nội 27 Irvine D.S (2002) Male infertility: Causes and management Medical progress 28 Rajalakhshmi M., Sherma R.S., David G.F.X (1989) Seminal fructose in normal and infertile men Contraception, 39, 299 - 306 29.Gonzales G.F (2001) Function of seminal vesicles and their role on male fertility Asian J Androl, (4), 251- 258 30 Schirren C., Schireng A., Hamburg G (1983), Textbook of practical Andrology, 17 - 31 31 Lewis Jones D.I., Aird I.A., Biljan M.M (1996) Effects of sperm activity on zinc and fructose concentrations in seminal plasma Oxford Journals, Human Reproduction, 11 (11), 2465 - 2467 32 WHO (2010), Laboratory manual for the examination and processing of human semen, 5thed, Cambridge University Press 33 WHO (1987), Laboratory manual for the examination of human semen and semen - cervical mucus interaction, Cambridge University Press, - 67 34 Daudin M et al (2000) Congenital bilateral absence of the vas deferens: clinical characteristics, biological parameters, cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene mutations, and implications for genetic counseling Fertility and Sterility, 74, 1164 - 1174 35 Gonzales G.F (1994) Test for androgen activity at the male reproductive tract in infertile men Arch Androl, 32, 235 - 242 36 Schoenfeld C., Amelar R.D., Dubin L et al (1979) Prolactin, fructose, and zinc levels found in human seminal plasma Fertil Steril, 32 (2), 206 - 208 37 Andrade Rocha F.T (2001) Sperm parameters in men with suspected infertility Sperm characteristics, strict criteria sperm morphology 38 analysis and hypoosmotic swelling test J Reprod Med., 46, 577 - 582 Mahmoud Hussein Hadwan, Lamia A Almashhedy, Abdul Razzaq S Alsalman (2013) The Key Role of Zinc in Enhancement of Total Antioxidant Levels in Spermatozoa of Patients with Asthenozoospermia 39 American Journal of Molecular and Cellular Biology, 2, 1178 - 1185 Sonoko Y, Chiemi M, Kazuya K et al (2009) Zinc is an essential trace 40 element for spermatogenesis PubMed,106, 10859-10864 Ebisch I.M, van Heerde W.L, Thomas C.M, et al (2003) C677T methylenetetrahydrofolate reduct- ase polymorphism interferes with the effects of folic acid and zinc sulfate on sperm concentration Fertil 41 Steri,80,1190-1194 Akinloye O, Abbiyesuku F, Oquntibeju O et al (2011) The impact of blood and seminal plasma zinc and copper concentrations on spermogram and hormonal changes in infertile Nigerian men 42 Reproductive Biology, 11, 83-89 Janet C King et al (2000) Determinants of maternal zinc status during 43 pregnancy American Journal of Clinical Nutrition, 71, 1334-1343 Michel V, Jean-Pierre C, Luc C et al (1985) Acid Phosphatase and Zinc in Semen of Subjects with No Clinical Evidence of Prostatic Disease Clin Chem, 31, 878-880 44 Omar F Abdul-Rasheed (2009) The relationship between seminal plasma zinc levels and high molecular weight zinc binding protein and 45 sperm motility in Iraqi infertile men Saudi Med J, 30, 1138-1143 Hasan A, Masood A, Mukhtiar B, Moazzam A et al (2007) Relationship of zinc concentrations in blood and seminal plasma with various semen parameters in infertile subjects Pak J Med Sci, 23, 111-114 PHỤ LỤC BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU Ngày làm bệnh án: I1 II1 III1 - - Mã số BA: HÀNH CHÍNH Họ tên BN: Tuổi: Địa chỉ: Nghề nghiệp: Điện thoại: LÝ DO ĐI KHÁM Lý khám: Khám lần thứ: TIỀN SỬ Lối sống: Thuốc lá: điếu/ ngày Số năm hút: Bia, rượu: cốc/chén/ ngày Luyện tập thể thao: Số lần ăn đậu phụ, uống sữa đậu nành/tuần: Số lần ăn hải sản, thịt đỏ/tuần: Bệnh lý toàn thân: Bệnh toàn thân từ trước đến ( Xơ gan, tiểu đường, béo phì, bệnh tự miễn, tiếp xúc hóa chất, phóng xạ, thuốc gây vơ sinh….): Trong vòng tuần trở lại đây: + Có sốt khơng: + Có căng thẳng, stress khơng: + Có ngộ độc hóa chất, phóng xạ không: - IV1 Bệnh lý phận sinh dục: + Tiền sử chấn thương: + Tiền sử phẫu thuật: + Tiền sử viêm nhiễm (lậu, giang mai,…): KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM Kết tinh dịch đồ Thể tích pH Mật độ Tổn % g sống Hình thái tinh trùng bất thường Vận tốc Đầu Cổ Đuôi Bào tương Kết nồng độ fructose kẽm Nồng độ Kit sử dụng Kit thương mại Kit tự pha chế Fructose Kẽm GHI CHÚ V1 Bảng thu thập số liệu định lượng fructose kẽm Nhóm I II III STT Nồng độ fructose Thương Tự pha mại Nồng độ kẽm Thương Tự pha mại Ghi … … … Kế hoạch nghiên cứu: bắt đầu thực từ tháng 9/2017 đến tháng 6/2018 STT Nội dung cơng việc Viết đề cương Hồn thành quy trình định lượng fructose kẽm Định lượng 300 bệnh nhân kit tự pha kit thương mại Phân tích kết quả, viết luận văn, chỉnh sửa luận văn Thời gian 07- 08/2017 Ghi 09- 10/2017 10/2017- 4/2018 4/2018- 06/2018 Nguồn kinh phí: nằm phần đề tài: “Nghiên cứu phát triển xét nghiệm định lượng fructose kẽm tinh dịch ứng dụng chẩn đốn vơ sinh nam” cấp Bộ Y tế; thuộc Chương trình nghiên cứu khoa học phát triển công nghệ TS Nguyễn Thị Trang chủ nhiệm đề tài phê duyệt tháng 3/ 2017 ... BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI BÍCH MAI NGHIÊN CỨU BỘ XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG FRUCTOSE VÀ KẼM TRONG TINH DỊCH ỨNG DỤNG TRONG CHẨN ĐỐN VƠ SINH NAM TẠI BỆNH VIỆN ĐẠI HỌC... giá thành cao Xuất phát từ vấn đề thực tế trên, thực đề tài: Nghiên cứu xét nghiệm định lượng fructose kẽm tinh dịch ứng dụng chẩn đốn vơ sinh nam Bệnh viện Đại học Y Hà Nội từ năm 2017- 2018 ,... sau: X y dựng quy trình xét nghiệm định lượng fructose kẽm tinh dịch So sánh kết định lượng fructose kẽm tinh dịch xét nghiệm tự pha với kit thương mại Xác định độ nh y độ đặc hiệu xét nghiệm