NGHIÊN CỨU KẾT QUẢ THỤ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM BẰNG PHƯƠNG PHÁP TESE-ICSI TẠI BỆNH VIỆN BƯU ĐIỆN

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BỘ Y TẾ VƯƠNG VŨ VIỆT HÀ NGHIÊN CỨU KẾT QUẢ THỤ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM BẰNG PHƯƠNG PHÁP TESE-ICSI TẠI BỆNH VIỆN BƯU ĐIỆN ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC HÀ NỘI – 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BỘ Y TẾ VƯƠNG VŨ VIỆT HÀ NGHIÊN CỨU KẾT QUẢ THỤ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM BẰNG PHƯƠNG PHÁP TESE-ICSI TẠI BỆNH VIỆN BƯU ĐIỆN Chuyên ngành : Sản phụ khoa Mã số : 62721301 ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS.PHẠM BÁ NHA HÀ NỘI - 2017 CÁC CHỮ VIẾT TẮT E2 : Etradion FSH : Follicle Stimulating Hormone ICSI : Intraplasmic Sperm Injection IVF : In-vitro-Fertilization LH : Luteinizing Hormone MESA : Microsurgical Epididymal Aspiration PESA : Percutanous Epididymall Aspiration TESA : Testicular Sperm Aspiration TESE : Testicular Sperm Extraction WHO : World Health Organiziating MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Sự sinh tinh 1.1.1 Giai đoạn tinh nguyên bào 1.1.2 Giai đoạn tinh bào 1.1.3 Giai đoạn tinh tử .5 1.2 Cấu trúc tinh hoàn 1.3 Cấu trúc ống sinh tinh 1.4 Cấu trúc siêu vi thể tinh trùng .10 1.4.1 Đầu tinh trùng .10 1.4.2 Cổ tinh trùng 11 1.4.3 Đuôi tinh trùng 12 1.5 Các nguyên nhân ảnh hưởng đến trỉnh sinh tinh 12 1.5.1 Nguyên nhân nội tiết .12 1.5.2 Nguyên nhân từ tinh hoàn .13 1.5.3 Nguyên nhân sau tinh hoàn 14 1.5.4 Các nguyên nhân khác 15 1.6 Các phương pháp đánh giá chức sinh sản người đàn ông 16 1.6.1 Xét nghiệm nội tiết huyết 16 1.6.2 Xét nghiệm tinh dịch đồ 16 1.6.3 Đánh giá kích thước tinh hồn 17 1.6.4 Đánh giá mật độ mào tinh 17 1.7 Khơng có tinh trùng .17 1.8 Những nghiên cứu TESE 22 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .24 2.1 Đối tượng nghiên cứu 24 2.1.1 Tiêu chuẩn chọn lựa 24 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ 24 2.1.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu .24 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu .24 2.2.2 Cơ mẫu nghiên cứu .24 2.2.3 Các tiêu nghiên cứu 24 2.2.4 Qui trình TESE 25 2.2.5 Qui trình tạo phơi phương pháp ICSI 26 2.3 Xử lý số liệu: .32 2.4 Đạo đức nghiên cứu 32 CHƯƠNG 3: DỰ KIẾN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 33 CHƯƠNG 4: DỰ KIẾN BÀN LUẬN 37 DỰ KIẾN KẾT LUẬN 37 DỰ KIẾN THỜI GIAN NGHIÊN CỨU .38 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng 3.5 Bảng 3.6 Bảng 3.7 Bảng 3.8 Bảng 3.9 Bảng 3.10 Bảng 3.11 Bảng 3.12 Phân bố tuổi chồng 33 Phân bố tuổi vợ 33 Phân nhóm vơ sinh cặm vợ chồng .33 Phân bố thời gian muộn cặp vợ chồng 34 Số lần làm thụ tinh ống nghiệm 34 Đặc điểm số nang thứ cấp 34 Đặc điểm thủ thuật TESE .34 Liên quan nồng độ hormone chồng kết TESE .35 Nồng độ FSH máu chồng với kết TESE 35 Thể tích tinh hồnv ề kết TESE 35 Mật độ tinh hoàn kết TESE 36 Kết TESE – ICSI 36 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình 1.2 Hình 1.3 Hình 1.4 Hình 1.5 MESA 19 TESA 20 TESE 21 Micro - TESE 21 Tỷ lệ thành công TESE 22 ĐẶT VẤN ĐỀ Hiếm muộn giới nói chung Việt Nam nói riêng ngày quan tâm, theo thống kê WHO, năm 2010 toàn giới có khoảng 48,5 triệu căp vợ chống gặp vấn đề việc cố gắng có Thụ tinh ống nghiệm(IVF) đời năm 1977, đứa trẻ sinh từ thụ tinh ống nghiệm 1978 Anh đánh dấu mốc quan trọng chuyên ngành muộn mở hội có cho hàng triệu cặp vợ chồng toàn giới [11] [16] Tiêm tinh trùng vào bào tương(ICSI) noãn bắt đầu có từ năm 1992 bước đột phá điều trị muộn, khác với IVF cổ điển, ICSI cần tinh trùng với trứng nên áp dụng với nguyên nhân từ phía người chồng: tinh trùng ít, di dạng, tinh trùng khơng di động khơng có tinh trùng tinh dịch [11] Khơng có tinh trùng tinh dịch chiếm 15% số trường hợp vô sinh nam chia thành không tắc nghẽn tắc nghẽn, tinh trùng tắc nghẽn chiếm 40% trường hợp khơng có tinh trùng có đặc điểm: xuất tinh bình thường nội tiết bình thường, khả sinh tinh tinh hồn bình thường.Trường hợp khơng tắc nghẽn chiếm 60%, bao gồm trường hợp phơi nhiễm với chất độc, bất thường phát triển ống sinh tinh, suy tuyến yên ,suy tinh hoàn Lấy tinh trùng trường hợp khơng tắc nghẽn bao gồm có: TESE, TESA, micro TESE, giới có nhiều nghiên cứu phương pháp TESE Việt Nam phương pháp TESE áp dụng hỗ trợ sinh sản đem lại hi vọng cho nhiều cặp vợ chồng, năm 2016 bệnh viện Bưu Điện bước đầu áp dụng thành công phương pháp có thành cơng định Vì tơi xin làm đề tài: “Nghiên cứu kết thụ tinh ống nghiệm phương pháp TESE- ICSI bệnh viện Bưu Điện” với mục tiêu sau: Mô tả đặc điểm lâm sàng cận lâm sàng bệnh nhân TESE bệnh viện Bưu Điện năm 2016-2017 Nghiên cứu kết thụ tinh ống nghiệm nhóm bệnh nhân 35 - NTH kiểm tra tên, số thứ tự bệnh nhân đĩa nuôi có giống với tên số thứ tự đĩa PDE hay không - NTH1 xem lại số trứng nhặt để định số lần tách trứng, lần tách tối đa 10 trứng - Dùng pipet hút trứng từ đĩa ủ trứng, hút lên/xuống giọt HYASE khoảng 10 lần cho lớp tế bào hạt tách - Dùng số nhanh chóng hút bỏ lớp dịch phía sau hút nhặt trứng sang giọt G-IVF đĩa tách Rửa môi trường hyase trứng cách chuyển trứng sang giọt môi trường G-IVF khác - Dùng kim tách hút lên/xuống trứng để loại bỏ tế bào hạt xung quanh trứng - Dùng load chuyển trứng tách sang đĩa PDE Phân loại trứng theo giai đoạn phát triển: GV, MI, MII, thối hóa - Cất đĩa PDE lại tủ ni - Ghi lại số trứng sau tách, số trứng loại thời gian lên bảng Quy trình ICSI Sau trứng tách nuôi đĩa PDE khoảng 30phút lấy ra, với tinh trùng sau lọc rửa để ICSI (phương pháp đưa tinh trùng vào bào tương trứng để thụ tinh tạo thành phôi) - Chuẩn bị: - Trứng ủ đĩa PDE lấy khỏi tủ nuôi cấy đưa vào chamber (tủ thao tác nhiệt độ 37, CO2 6%) 36 - Tinh trùng tương ứng với trứng người vợ - NTH2 kiểm tra lại số thứ tự chọc hút tên bệnh nhân đĩa trứng ống đựng tinh trùng giống - Đĩa ICSI để load trứng tinh trùng vào: hình minh họa bên dưới, thông thường làm đĩa, đĩa phủ kín dầu Số thứ tự bệnh nhân Số thứ tự đĩa ICSI (1, 2, 3) 1 Số thứ tự giọt ICSI để load trứng vào Dải PVP để load tinh trùng vào Giọt tráng kim - Đĩa P.I: dung để nuôi cấy trứng sau tiêm ICSI 37 Tên ngày P.I MẶT TRÊN Thực hiện:  Bước - NTH2: Load tinh trùng, trứng vào đĩa tiêm ICSI Tùy vào số lượng chất lượng tinh trùng báo vào để định thể tích load cách load tinh trùng cho hợp lý (thông thường khoảng 5000 tinh trùng/1 dải PVP 5µl, có trường hợp đặc biệt: load vào dải môi trường vào đĩa HA Số trứng chia cho đĩa (≤6 trứng/1 đĩa), trứng/1 giọt môi trường thao tác, load trứng trưởng thành MI vào đĩa tiêm, trứng GV nghi thối hóa load vào giọt cuối đĩa cuối - NTH1: Tráng kim, lấy áp lực kim holding ICSI Tiến hành bắt tinh trùng (tối đa tinh trùng/ lần thao tác tiêm), chà xát đoạn tinh trùng, sau bất động tinh trùng hút vào pipette cho đầu hướng mũi kim Bắt trứng kim holding 38 Giữ trứng trưởng thành với cực cầu vị trí 12 6h Tiêm tinh trùng vào bào tương trứng Những trứng chưa trưởng thành bất thường khơng tiêm kéo phía giọt thao tác  Bước - NTH2: Rửa trứng tiêm sau kết thúc trình tiêm buồng thao tác IVF, rửa trứng giọt số 7, nuôi trứng giọt G1 từ 1-6 trứng nuôi group lí tưởng trứng/giọt 30-40µl, trứng chưa tiêm cất giữ chờ tiêm trứng trưởng thành có nhu cầu Cất đĩa PI vào nơi quy định - NTH1: Kiểm tra chéo đĩa rửa PI Kiểm tra/Đánh giá kết sau kết thúc qui trình Vệ sinh khu vực vi thao tác, kí vào giấy tờ check list liên quan Kiểm tra đầy đủ lượng đĩa vị trí để case ICSI ngày trước khỏi lab Kết kiểm tra sau tiêm ICSI 16-18 giờ, trứng thụ tinh bình thường giữ lại, loại bỏ trứng thụ tinh bất thường thối hóa 2.3 Xử lý số liệu: - Làm số liệu tay trước xử lý số liệu - Các số liệu thu thập theo biểu mẫu thống Phân tích xử lý số liệu máy tính phần mềm SPSS 16.0 - Phương pháp thống kê tính tỷ lệ phần tram 39 - Kiểm định test λ2 - Dùng Student test để so sánh khác giá trị trùng bình - Sự khác có ý nghĩa thống kê p < 0,05 2.4 Đạo đức nghiên cứu - Đây nghiên cứu hồi cứu kết hợp tiến cứu, sử dụng số liệu có sẵn hồ sơ bệnh án, khơng can thiệp trực tiếp vào dối tượng nghiên cứu Vì ko vi phạm đạo đức nghiên cứu Tất thông tin mã hóa giữ bí mật - Nghiên cứu đồng ý hội đồng đề cương, hội đồng đạo đức bệnh viện Bưu Điện CHƯƠNG DỰ KIẾN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Bảng 3.1 Phân bố tuổi chồng Tuổi N % < 20 21-30 31-40 >40 Tổng Bảng 3.2 Phân bố tuổi vợ Tuổi < 20 21-30 31-40 N % 40 Tổng Bảng 3.3 Phân nhóm vơ sinh cặm vợ chồng Nhóm vơ sinh N % Vô sinh I Vô sinh II Tổng Bảng 3.4 Phân bố thời gian muộn cặp vợ chồng Thơi gian muộn 1-2 năm 3-4 năm >5 năm Tổng N % Bảng 3.5 Số lần làm thụ tinh ống nghiệm Số lần TTON N % lần lần lần Tổng Bảng 3.6 Đặc điểm số nang thứ cấp Số nang noãn N % 15 Tổng Bảng 3.7 Đặc điểm thủ thuật TESE N Có tinh trùng Khơng có tinh trùng Tổng % 41 Bảng 3.8 Liên quan nồng độ hormone chồng kết TESE Nhóm NC Nồng độ LH Testosteron Prolactin Có tinh trùng Nhóm NC Nồng độ FSH Khơng có tinh trùng p Khơng có tinh Có tinh trùng p trùng Bảng 3.9 Nồng độ FSH máu chồng với kết TESE FSH N % 15 Tổng Bảng 3.10 Thể tích tinh hồn kết TESE Thể tích tinh hồn 15ml Tổng N % 42 Bảng 3.11 Mật độ tinh hoàn kết TESE Mật độ N % Mềm Căng Tổng Bảng 3.12 Kết TESE – ICSI Số lượng Tỷ lệ thụ tinh Tỷ lệ chuyển phôi Tỷ lệ thai lâm sàng Tỷ lệ sinh sống Tỷ lệ có thai chuyển phơi đơng lạnh n % 43 44 CHƯƠNG DỰ KIẾN BÀN LUẬN Bàn luận dựa kết thu DỰ KIẾN KẾT LUẬN Kết luận dựa mục tiêu đề 45 46 DỰ KIẾN THỜI GIAN NGHIÊN CỨU - Từ 01/06/2017 đến 31/08/2017: Viết đề cương nghiên cứu - Từ 01/09/2017 đến 30/09/2017: Chỉnh sửa đề cương nghiên cứu - Từ 01/10/2017 đến 31/10/2017: Báo cáo thông qua đề cương - Từ 01/11/2017 đến 30/04/2018: Thu thâp số liệu nghiên cứu - Từ 01/05/2018 đến 31/07/2018: Xử lý số liệu, viết đề tài nghiên cứu - Từ 01/08/2018 đến 30/09/2018: Chỉnh sửa đề tài - Từ 01/10/2018 đến 30/11/2018: Dự kiến bảo vệ đề tài nghiên cứu PHIẾU THU THẬP SỐ LIỆU ĐÁNH GIÁ KẾT QUẢ TESE – ICSI TẠI BỆNH VIỆN BƯU ĐIỆN Mã số: 1- Họ tên: Vợ: năm sinh Chồng: năm sinh 2- Para VSI 3- Thời gian vô sinh VSII năm 4- XN NT vợ: FSH LH 5- XN NT chồng: FSH E2 LH 6- Thể tích tinh hồn: 7- Ngun nhân vơ sinh:Nguyên phát 8- Kết TESE: Có tinh trùng a Số lượng b Khả di động 9- Kết TESE- ICSI: a Số phôi: b Chất lượng phôi 10- Chuyển phôi: a Beta hCG: b Siêu âm thai: c Sinh sống: Prolactin Testosteron Prolactin mật độ: Thứ phát tinh trùng TÀI LIỆU THAM KHẢO Trần Quán Anh (2002), "Tinh trùng",Bệnh học giới tính nam, Nhà xuất y học, pp.72-122 A M Bernie, R Ramasamy P N Schlegel (2013), "Predictive factors of successful microdissection testicular sperm extraction", Basic Clin Androl 23, pp A Carpi, E Sabanegh J Mechanick (2009), "Controversies in the management of nonobstructive azoospermia", Fertil Steril 91(4), pp 963-70 Goldstein M Gorelick JI (1993), "Loss of fertility in men with varicocele", Fertil Steril, pp 59:613-6 Nguyễn Đức Hinh (2003), "Vơ sinh nam", chẩn đốn điều trị vô sinh, nhà xuất y học Hà Nội pp.149-156 Lê Thụy Hồng Khả Hồ Mạnh Tường (2011), "Sự sinh tinh",Thụ tinh ống nghiệm, Nhà xuất giáo dục Việt Nam, pp.41-59 Đỗ Kính (1998), "Hệ sinh dục nam",Mô học, Nhà xuất y học Hà Nội, 368-397 Nguyễn Khắc Liêu (2003), "Đại cương vơ sinh", "sinh lý kinh nguyệt, "Thăm dò nội tiết nữ", "Sự phát triển nang nỗn phóng nỗn", "Hội chứng q kích buồng trứng", "Thăm dò phóng nỗn", Chẩn đốn điều trị vơ sinh, VIện BVBMVTSS, Nhà xuất y học, pp.1-7;77-80;88-99 Goldstein M (2012), Surgical Management of Male Infertility, in Campbell-Walsh Urology, Elsevier Saunders: Philadelphia, pp.648-687 10 Chumpol Pholpramool (1995), "Spem maturation",Workshop in Andrology, pp.22-23 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Nguyễn Thị Ngọc Phượng (2010), ""Lịch sử phát triển kỹ thuật hỗ trợ sinh sản giới Việt Nam",www.suckhoesinhsan.org.com.vn" R Ramasamy cộng (2009), "Successful fertility treatment for Klinefelter's syndrome", J Urol 182(3), pp 1108-13 R A Schoor cộng (2002), "The role of testicular biopsy in the modern management of male infertility", J Urol 167(1), pp 197-200 I D Sharlip cộng (2002), "Best practice policies for male infertility", Fertil Steril 77(5), pp 873-82 D H Shin P J Turek (2013), "Sperm retrieval techniques", Nat Rev Urol 10(12), pp 723-30 Nagy ZP Silber SJ, Liu J et al (1991), "Conventional invitro fertilization versus intracytoplasmic sperm injection for patients requiring microsurgical sperm aspiration", Hum Reproduction, pp 1705-1709 Cao Ngọc Thành H.Micheal Runge (2004), "Giải phẫu quan sinh sản nam giới", Nội tiết học sinh sản nam học, Nhà xuất y học pp.242-247 Hồ Mạnh Tường, Vương Thị Ngọc Lan Nguyễn Thành Như (2002), " Kỹ thuật tiêm tinh trùng vào bào tương noãn", Y học Việt Nam 6/2002, pp.1-6 Đặng Quang Vinh (2003), "Khơng có tinh trùng: Phân loại điều trị", vô sinh vấn đề mới, Nhà xuất y học, pp.45-49 V Vloeberghs cộng (2015), "How successful is TESE-ICSI in couples with non-obstructive azoospermia?", Hum Reprod 30(8), pp 1790-6 WHO (2010), ""Laboratory manual for the examination and processing of human seman", Human Reproduction", pp 314-320 ... chồng, năm 2016 bệnh viện Bưu Điện bước đầu áp dụng thành công phương pháp có thành cơng định Vì xin làm đề tài: Nghiên cứu kết thụ tinh ống nghiệm phương pháp TESE- ICSI bệnh viện Bưu Điện với mục... TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BỘ Y TẾ VƯƠNG VŨ VIỆT HÀ NGHIÊN CỨU KẾT QUẢ THỤ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM BẰNG PHƯƠNG PHÁP TESE-ICSI TẠI BỆNH VIỆN BƯU ĐIỆN Chuyên ngành : Sản phụ khoa Mã số : 62721301 ĐỀ... sàng bệnh nhân TESE bệnh viện Bưu Điện năm 2016-2017 Nghiên cứu kết thụ tinh ống nghiệm nhóm bệnh nhân 3 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Sự sinh tinh Sinh tinh chuỗi q trình phức tạp với mục đích tạo tinh