ĐẶC điểm lâm SÀNG, x QUANG, DI TRUYỀN PHÂN tử và kết QUẢ bước đầu điều TRỊ BỆNH NHÂN có hội CHỨNG LOẠN sản NGOẠI bì THIẾU TUYẾN mồ hôi

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI THUYẾT MINH ĐỀ CƯƠNG ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP CƠ SỞ Tên đề tài: ĐẶC ĐIỂM LÂM SÀNG, X-QUANG, DI TRUYỀN PHÂN TỬ VÀ KẾT QUẢ BƯỚC ĐẦU ĐIỀU TRỊ BỆNH NHÂN CÓ HỘI CHỨNG LOẠN SẢN NGOẠI BÌ THIẾU TUYẾN MỒ HƠI Cơ quan chủ quản: Trường Đại học Y Hà Nội Đơn vị chủ trì: Phòng Quản lý Khoa học cơng nghệ Trường Đại học Y Hà Nội Chủ nhiệm đề tài: PGS.TS VÕ TRƯƠNG NHƯ NGỌC TS CHU ĐÌNH TỚI HÀ NỘI – 2017 Mẫu 1.1 - NCKHCS THUYẾT MINH ĐỀ CƯƠNG ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP CƠ SỞ Tên đề tài: Đặc điểm lâm sàng, x-quang, di truyền phân tử kết bước đầu điều trị bệnh nhân có hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến mồ hôi Thời gian thực hiện: 12 tháng Cấp quản lý: Cấp sở Từ tháng 05 năm 2017 đến tháng 05 năm 2018 Chủ nhiệm đề tài: 4.1 Họ tên: PGS.TS.Võ Trương Như Ngọc Học hàm: Phó giáo sư Học vị: Tiến sỹ Chun mơn: Bác sĩ Răng Hàm Mặt Chức vụ: Phó trưởng phòng QLKHCN- Trường Đại học Y Hà Nội Trưởng mơn Răng trẻ em Phó giám đốc trung tâm kỹ thuật cao Răng hàm mặt- Viện Đào tạo Răng hàm mặt- Trường Đại học Y Hà Nội Điện thoại : 0945786868 Email : nhungoc@hmu.edu.vn; votruongnhungoc@gmail.com Địa quan : Số Tôn Thất Tùng, Đống Đa, Hà Nội Địa nhà riêng: 4.2 Họ tên: Chu Đình Tới Học hàm/Học vị: Tiến sĩ Chuyên môn: Y sinh học Chức vụ: Bộ môn/đơn vị: Trung tâm Nghiên cứu Y học phân tử Nauy Địa chỉ: Khoa Y học, Đại học Oslo Nauy, Nauy Điện thoại: 004792508300 Email: dinhtc@ncmm.uio.no chudinhtoi.hnue@gmail.com Các cán tham gia nghiên cứu: 1) Họ tên: Trần Thị Mỹ Hạnh Đơn vị: Viện Đào tạo Răng Hàm Mặt 2) Họ tên: Đào Thị Hằng Nga Đơn vị: Viện Đào tạo Răng Hàm Mặt 3) Họ tên: Lương Minh Hằng Đơn vị: Viện Đào tạo Răng Hàm Mặt 4) Họ tên: Lê Thị Thùy Linh Đơn vị: Viện Đào tạo Răng Hàm Mặt 5) Họ tên: Nguyễn Hà Thu Đơn vị: Viện Đào tạo Răng Hàm Mặt 6) Họ tên: Vũ Mạnh Tuấn Đơn vị: Viện Đào tạo Răng Hàm Mặt 7) Họ tên: Nguyễn Viết Đa Đô Đơn vị: Viện Đào tạo Răng Hàm Mặt 8) Họ tên: Dương Đức Long Đơn vị: Viện Đào tạo Răng Hàm Mặt 9) Họ tên: Bùi Văn Nhơn Đơn vị: Phòng QLKHCN_ĐH Y HN 10) Họ tên: Tống Thị Khuyên Đơn vị: Phòng QLKHCN_ĐH Y HN Các sinh viên tham gia nghiên cứu: 1) Họ tên: Biện Thị Nhàn Đơn vị: Y4 RHM 2) Họ tên: Phạm Thị Hoàng Anh Đơn vị: Y4 RHM 3) Họ tên: Nguyễn Thùy Dung Đơn vị: Y4 RHM 4) Họ tên: Nông Tiểu Phương Đơn vị: Y4 RHM Mục tiêu nghiên cứu đề tài: 1) Mô tả đặc điểm lâm sàng, xquang bệnh nhân có hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến mồ 2) Mô tả số đặc điểm di truyền phân tử bệnh nhân có hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến tiết mồ 3) Nhận xét kết bước đầu điều trị hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến mồ Tình hình nghiên cứu ngồi nước: Tổng quan tình hình nghiên cứu thuộc lĩnh vực đề tài Nêu tính cấp thiết nghiên cứu - Tổng quan tình hình nghiên cứu thuộc lĩnh vực đề tài: + Các nghiên cứu nước thuộc lĩnh vực nghiên cứu Jing Wang, Wei Wei Ha, Wen Wang (2014) One mutation of the ED1 gene in a Chinese Han Family with X-linked hypohidrotic ectodermal dysplasia Ann Dermatol, 26, 111 – 113 Wei Yin, Xiaoqian Ye, Huali Fan (2013) Methylation state of the EDA gene promoter in Chinese X-linked hypohidrotic ectodermal dysplasia carriers Plos One, 8(4) Kumar M.N, Srinivas P, Ramadevi S (2012) Hypohidrotic ectodermal dysplasia with anodontia: A rare case – Rehabilitation by prosthetic management Journal Indian academy of clinical medicine, 24(4), 342 – 345 Lee H.E, Chang I.K, Myung I (2012) Topical minoxidil treatment for congenital alopecia in hypohidrotic ectodermal dysplasia Journal American Academy of Dermatology, 10, 19 Mehmet-Sinan Dogan, Michele Callea (2015) An evaluation of clinical, radiological and three-dimensional dental tomography findings in ectodermal dysplasia cases, Journal Med Oral Patol Oral Cir Bucal, V.20(3), May 2015, e340-e346 + Các nghiên cứu nước thuộc lĩnh vực nghiên cứu : Chưa có Nụ cười biểu độc đáo khuôn mặt riêng có người Thành phần tạo nên nụ cười răng, đẹp khiến nụ cười trở nên hấp dẫn Nhưng bất thường ảnh hưởng tới toàn vẹn răng, ảnh hưởng tới nụ cười Một bất thường thường gặp tượng thiếu bẩm sinh Đây tượng bất thường trình hình thành phát triển Có thể nhiều không mọc cung hàm, đồng thời không thấy hay mầm nằm xương hàm phim xquang khơng có dấu hiệu cho thấy bị nhổ hay lý khác Một chẩn đoán thiếu bẩm sinh khơng mọc khoang miệng khơng biểu xquang, đồng thời khơng có chứng cho thấy bị nguyên nhân khác như: nhổ răng, tai nạn, sâu răng… Khoảng tuổi sữa mọc đầy đủ vĩnh viễn mọc đầy đủ (ngoại trừ hàm lớn thứ ba) vào khoảng 12 tới 14 tuổi Vì vậy, việc khám lâm sàng trẻ em 3- tuổi phù hợp để chẩn đoán thiếu sữa bẩm sinh, trẻ từ 12 – 14 tuổi phù hợp để chẩn đoán thiếu vĩnh viễn bẩm sinh (ngoại trừ hàm lớn thứ ba) Tùy thuộc vào nhóm răng, phim xquang chẩn đốn thiếu bẩm sinh sớm Nên sử dụng phim toàn cảnh kết hợp với thăm khám lâm sàng để chẩn đoán bất thường trình phát triển Tất sữa mầm hàm lớn vĩnh viễn thứ nhìn thấy xquang lúc trẻ sinh Thân hàm nhỏ thứ nhất, hàm nhỏ thứ hai hàm lớn vĩnh viễn thứ hai bắt đầu khống hóa lúc gần tuổi tất vĩnh viễn ngoại trừ hàm lớn thứ ba bắt đầu khống hóa lúc tuổi Sự hình thành hàm lớn thứ ba thay đổi Thường khoảng – 10 tuổi bắt đầu xuất hình ảnh hàm lớn thứ ba xquang, xuất muộn (14 tới 18 tuổi) Sự hình thành kéo dài nhiều năm, giai đoạn khống hóa khác phụ thuộc vào chủng tộc, giới, gia đình cá nhân Đặc biệt, hàm nhỏ thứ hai bắt đầu khống hóa chậm, chẩn đốn sai thiếu xquang Vì vậy, chẩn đốn thiếu răng vĩnh viễn nên thực sau tuổi ngoại trừ hàm lớn thứ ba sau 10 tuổi cần nghiên cứu hàm lớn thứ ba Trên giới có nhiều cơng trình nghiên cứu tỷ lệ thiếu bẩm sinh với kết khác nhau, vùng địa lý chủng tộc như: Nhật Bản 8,5% [1], Malysia 2,8% [2], NaUy 4,5% [3], Úc 6,3% [4], Hàn Quốc 11,3% [5] Các nghiên cứu cho thấy tượng thiếu bẩm sinh biểu đa dạng từ số lượng, vị trí, hình thái…Thiếu bẩm sinh phân loại thành thiếu đơn độc thiếu nằm hội chứng Bệnh loạn sản ngoại bì giảm tiết mồ loại bệnh thiếu bẩm sinh hội chứng thường gặp Đây bệnh di truyền ảnh hưởng tới tổ chức ngoại bì như: da, lơng, tóc, móng, răng….và gây ảnh hưởng lớn tới chất lượng sống bệnh nhân [6] Nguyên nhân gây tượng thiếu bẩm sinh yếu tố mơi trường, di truyền, đột biến gen xảy trình phát triển phơi thai Để tìm hiểu ngun nhân tượng thiếu bẩm sinh, nhà khoa học bác sỹ hàm mặt giới tiến hành nhiều cơng trình nghiên cứu khác [6], [7] Qua cơng trình nghiên cứu này, tác giả thống đột biến gen nguyên nhân chủ yếu gây tượng thiếu bẩm sinh Đột biến gen EDA ngun nhân dẫn đến bệnh loạn sản ngoại bì giảm tiết mồ Thuật ngữ loạn sản ngoại bì (Ectodermal dysplasias - EDs) để nhóm bệnh khơng đồng bệnh ảnh hưởng tới tổ chức ngoại bì như: tóc, răng, móng tuyến Tình trạng bệnh có đặc điểm tổ chức ngoại bì đơn gọi loạn sản ngoại bì (ED) Tình trạng bệnh có triệu chứng ngoại bì kết hợp với dị dạng khác gọi hội chứng loạn sản ngoại bì Có 150 bệnh loạn sản ngoại bì miêu tả phân loại 11 phân nhóm lâm sàng [8], với chứng thay đổi kiểu di truyền tính di truyền khơng đồng Chẩn đoán bệnh nhân bị bệnh loạn sản ngoại bì giảm tiết mồ sau sinh ba triệu chứng điển hình sau [9], [10], [11]: -Lơng, tóc mỏng thưa Tóc thường có màu sáng, dễ gãy mọc chậm -Giảm tiết mồ hôi Hầu hết bệnh nhân bị bệnh loạn sản ngoại bì giảm tiết mồ có tuyến mồ người bình thường, nặng khơng có tuyến mồ hơi, giảm hoạt động chức tuyến mồ hôi Tiết mồ hôi phương pháp chủ yếu để thể kiểm sốt thân nhiệt; mồ bốc từ da làm mát thể Khơng thể tiết mồ hôi dẫn đến thân nhiệt cao gây nguy hiểm cho thể -Thiếu bẩm sinh, thường thiếu nhiều không răng, thiếu sữa vĩnh viễn Những lại thường có kích thước nhỏ bình thường hình dạng thay đổi, trước thường có thân hình nón Buồng tủy hàm lớn thường bị kéo dài Bệnh nhân bị loạn sản ngoại bì giảm tiết mồ có kiểu mặt thẳng đặc trưng gồm: trán nhơ, môi dày mũi tẹt Kiểu mặt nghiêng lõm phẳng, góc mũi mơi tù, xương hàm lùi, giảm chiều cao tầng mặt trước góc mặt phẳng hàm [12] Các đặc điểm khác bao gồm: da quanh mắt có màu tối, nhăn mỏng; bệnh da mạn tính eczema; mũi giảm khả ngửi Tuy nhiên, bệnh nhân có trí tuệ thể chất hồn tồn bình thường Nữ giới mang đột biến gen EDA biểu kiểu hình nhẹ hơn, mức độ phụ thuộc vào kết tượng khử hoạt tính nhiễm sắc thể X Di truyền lặn liên kết với nhiễm sắc thể giới tính X, nữ giới người mang gen bệnh Khoảng 60% - 80% trường hợp bệnh nhân mang gen bệnh loạn sản ngoại bì di truyền giảm tiết mồ biểu số đặc điểm bệnh Những triệu chứng thường nhẹ thường biểu thiếu vài hay bất thường, tóc thưa, giảm nhẹ chức tuyến mồ Tuy nhiên, có người mang gen bệnh có triệu chứng nặng [11] Hình 8.1 Hình ảnh bệnh nhân bị loản sản ngoại bì giảm tiết mồ [13] Thiếu bẩm sinh gây sai khớp cắn, ảnh hưởng tới phát triển xương hàm, từ dẫn đến thẩm mỹ, chức nhai bị giảm sút, ảnh hưởng tới tâm lý khả giao tiếp bệnh nhân Vì vậy, việc tìm hiểu nguyên nhân gây tượng thiếu bẩm sinh để phòng ngừa, điều trị, đồng thời tư vấn cho bố mẹ bệnh nhân việc quan trọng Vấn đề ngày nhận quan tâm nghiên cứu nhiều nhà khoa học giới Điều trị cho bệnh nhân bị thiếu bẩm sinh, đặc biệt bệnh nhân bị mắc bệnh loạn sản ngoại bì giảm tiết mồ kế hoạch điều trị phức tạp, phối hợp nhiều chuyên khoa Cần có hợp tác tốt bác sỹ chỉnh hình mặt, bác sỹ phục hình răng, bác sỹ da liễu bác sỹ tâm lý Với bệnh nhân bị thiếu nắn chỉnh để đóng khoảng làm phục hình Với bệnh nhân bị thiếu nhiều hay không làm hàm giả tháo lắp, cấy ghép implant cho bệnh nhân Điều trị cho bệnh nhân bị bệnh loạn sản ngoại bì giảm tiết mồ tập trung vào ba đặc trưng bệnh Mục tiêu giúp cho trẻ có phát triển tâm lý xã hội tốt nhất, điều trị vấn đề miệng để đạt chức thẩm mỹ, phòng ngừa tăng thân nhiệt cao - Lơng, tóc mỏng thưa: Đội tóc giả cơng thức kỹ thuật chăm sóc tóc thưa đặc biệt Đã có tác giả báo cáo trường hợp trẻ em mắc bệnh HED điều trị cách bôi thuốc Minoxidil chỗ cho hiệu tốt [14] - Giảm tiết mồ hôi: Vào ngày thời tiết nóng, bệnh nhân phải cung cấp đủ nước đưa vào mơi trường mát có điều hòa khơng khí, hay chai xịt nước Mỗi bệnh nhân tự có cách kiểm sốt thân nhiệt riêng mình, chọn mơi trường sống làm việc phù hợp Bác sỹ người hướng dẫn giúp bệnh nhân thích nghi với tình trạng - Thiếu răng:  Điều trị phải sớm, từ phục hồi đơn giản đến hàm giả tháo lắp Tạo hình lại thân bệnh nhân trẻ để cải thiện thẩm mỹ khả nhai cho bệnh nhân  Điều trị nắn chỉnh cần thiết  Implant vùng trước hàm chứng minh thành công trẻ em từ tuổi trở lên [15] Sử dụng sản phẩm chăm sóc da để điều trị bệnh eczema ban đỏ, đồng thời bảo vệ da bệnh nhân trời Tuy nhiên, Việt Nam chưa có cơng trình nghiên cứu ngun nhân, đặc điểm di truyền phân tử gây nên tượng thiếu bẩm sinh Để tìm hiểu sâu đặc điểm nguyên nhân tượng này, thực đề tài: “Đặc điểm lâm sàng, xquang di truyền phân tử kết bước đầu điều trị bệnh nhân có hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến mồ hơi”, với ba mục tiêu sau: - Mô tả đặc điểm lâm sàng, xquang bệnh nhân có hội chứng loạn sản - ngoại bì thiếu tuyến mồ Mơ tả số đặc điểm di truyền phân tử bệnh nhân có hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến tiết mồ - Nhận xét kết bước đầu điều trị hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến mồ Đối tượng phương pháp nghiên cứu: * Đối tượng nghiên cứu: Đối tượng nghiên cứu bệnh nhân bị thiếu bẩm sinh đến khám điều trị Trung tâm kỹ thuật cao - Viện Đào Tạo Răng Hàm Mặt - Đại Học Y Hà Nội Khoa Răng hàm mặt – Bệnh viện Đại học Y Hà Nội từ năm 2013-2017 Tiêu chuẩn lựa chọn: - Bệnh nhân chẩn đoán TRBS: Một chẩn đốn thiếu bẩm sinh khơng mọc khoang miệng không biểu xquang, đồng thời khơng có chứng cho thấy bị nguyên nhân khác như: nhổ răng, tai nạn, sâu răng… - Bệnh nhân có đầy đủ hồ sơ bệnh án, mẫu hàm, phim xquang toàn cảnh sọ nghiêng từ xa - Bệnh nhân, bố mẹ bệnh nhân đồng ý tham gia nghiên cứu Tiêu chuẩn loại trừ: - Bệnh nhân nguyên nhân khác tai nạn răng, sâu răng, nhổ nhầm răng, … - Bệnh nhân thiếu khe hở mơi vòm miệng * Thời gian : Từ tháng năm 2017 đến tháng năm 2018 * Địa điểm nghiên cứu: - Trung tâm kỹ thuật cao – Viện Đào Tạo Răng Hàm Mặt – Đại Học Y Hà Nội - Khoa Răng hàm mặt – Bệnh viện Đại học Y Hà Nội - Viện nghiên cứu hệ gen quốc gia – Tầng 8, nhà B4, 18 Hoàng Quốc Việt, Cầu Giấy, Hà Nội * Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu thiết kế theo phương pháp mô tả chùm ca bệnh gặp, gồm có hai nội dung sau: - Mô tả đặc điểm lâm sàng, xq di truyền phân tử bệnh nhân có hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến mồ - Bước đầu nhận xét kết điều trị bệnh nhân Đây trường hợp đặc biệt, gặp, điều trị lâu dài thường đến 18 tuổi kết thúc tập trung vào mơ tả biện pháp điều trị, hợp tác bệnh nhân hài lòng bệnh nhân gia đình… Nghiên cứu thiết kế theo phương pháp mô tả cắt ngang - Mẫu nghiên cứu Cỡ mẫu: chọn mẫu thuận tiện, tất bệnh nhân chúng tơi có thờigian từ năm 2013 đến 2018 - Thiết bị, dụng cụ phương tiện dùng nghiên cứu + Ghế, máy nha khoa + Bộ dụng cụ khám miệng thông thường gồm: khay, gương, gắp, thám trâm + Thìa lấy dấu, dụng cụ đo kích thước cung + Máy chụp xquang panorama cephalometric + Các dụng cụ, phần mềm đo số cung mặt + Phương tiện lấy máu máy xét nghiệm gen * Các biến số số nghiên cứu: Bảng 9.1 Các biến số nghiên cứu Mục tiêu Nhóm biến số Mơ tả đặc điểm lâm sàng, x quan Đặc điểm lâm sàng Biến số cụ thể Số lượng thiếu Vị trí thiếu Khớp cắn hàm Độ cắn chìa Độ cắn phủ Chỉ số/định nghĩa bổ xung/phân loại Phân loại mã bệnh tổ chức y tế giới WHO Nhóm theo danh pháp Theo phân loại Angle Theo ba mức độ Theo ba mức độ Loại biến số Phương pháp thu thập Khám Định lâm sàng, lượng xquang uốc tế Định tính Khám lâm sàng Định tính Khám lâm sàng Định lượng Định lượng Đo Đo Công cụ Gương Gắp Thám châm Đèn Mẫu hàm Thước đo Phần mềm đo phim Vistadent Phim toàn cảnh nghiên cứu phải thấy rõ Bao gồm: Lỗ ống tai ngoài, bờ ổ mắt, hàm phải cắn khít + Phần sọ xác định đường yên bướm, xương mũi, đường khớp trán mũi + Phần xương hàm xác định sàn hố mũi, gai mũi trước, hõm mũi trước, trần vòm miệng, khe bướm, cửa giữa, hàm lớn thứ + Phần xương hàm xác định lồi cằm, bờ sau, bờ trước, bờ (cả vỏ vỏ ngoài) xương hàm dưới, lồi cầu, cửa giữa, hàm lớn thứ + Phần mềm xác định rõ đường chu vi phần mềm Vẽ phim sọ mặt nghiêng phần mềm VistaDent, phim sọ mặt nghiêng ghi nhận thông số để đánh giá: Bảng 9.2 Bảng góc cần đo giá trị chuẩn phim sọ mặt nghiêng [63] Giá trị Chỉ số Xương Răng Mô mềm Chỉ số SNA (°) SNB (°) ANB (°) SN – GoGn (°) SN – OcP (°) FH – SGn (°) SN – (°) NA – (°) (mm) MnP – ī (°) NB – ī (°) (mm) – ī (°) Góc mũi môi (°) Ls – E (mm) Li – E (mm) 14 Steiner X ± SD 82 ± 80 ± 2±2 32 14 53-66 (59,4) 104 ± 5,8 22 91,5 ± 7,5 25 131 o 90 - 110o 0 Hình 9.3 Phân tích phim sọ mặt nghiêng B Vật liệu phương pháp nghiên cứu sàng lọc đột biến gen EDA Chúng sử dụng phương pháp giải trình tự gen để nghiên cứu phát đột biến gen EDA a Vật liệu - Bệnh nhân: Bệnh nhân chẩn đoán sơ mắc hội chứng loạn sản ngoại bì giảm tiết mồ với triệu chứng điển hình: Triệu chứng lâm sàng, xquang Tóc mảnh, thưa, yếu, xoăn, sáng màu Thiếu nhiều khơng răng, lại có hình thể bất thường Khơng có tuyến mồ có Da khơ, có nhiều nếp nhăn, thiếu sắc tố Khơng có sống hàm sống hàm thấp Tầng mặt thấp so với tầng mặt khác bệnh nhân Rất lơng khơng có lông mày, lông mi Kiểu mặt đặc trưng gồm: trán nhơ, mơi dày mũi tẹt Móng tay giòn, mỏng, dễ gãy - Các cặp mồi sử dụng nhân gen EDA: EDA1, EDA2, EDA3, EDA4, EDA5, EDA6, EDA7, EDA8 - Hóa chất Bộ kit Wizard® Genomic DNA Purification, GeneJET PCR Purification Kit Các hóa chất dùng cho kỹ thuật PCR (đệm, MgCl2, dNTPs…) Các hóa chất dùng cho kỹ thuật giải trình tự DNA: dNTP, ddNTPs, 15 DNA polymerase, EDTA… Các hóa chất khác - Thiết bị Trong q trình nghiên cứu, chúng tơi sử dụng trang thiết bị Viện Công nghệ Sinh học, Viện Nghiên cứu hệ gen: Tủ lạnh sâu -20 oC, -80oC; lò vi sóng; cân phân tích; máy đo pH; máy ly tâm cao tốc, máy xác định trình tự… b Phương pháp - Tách chiết DNA tổng số từ máu người DNA tách từ máu bệnh nhân theo hướng dẫn sử dụng Wizard® Genomic DNA Purification Kit có cải tiến Q trình thí nghiệm thực theo bước cụ thể sau: + Phá vỡ tế bào + Thu DNA + Loại bỏ RNA dịch DNA tổng số + Loại bỏ protein + Tinh DNA tổng số - Điện di gel agarose + Chuẩn bị gel agarose 0,8% + Tra mẫu DNA vào giếng điện di + Chạy điện di + Nhuộm DNA + Quan sát chụp ảnh - Xác định nồng độ DNA - PCR (Polymerase chain reaction) phương pháp tổng hợp lượng lớn DNA in vivo sở mẫu khn Q trình tổng hợp DNA kéo dài từ mồi dựa nguyên tắc bắt cặp đặc hiệu đoạn DNA có trình tự bổ sung khả kéo dài chuỗi enzyme bền nhiệt (phổ biến Taq polymerase – phân lập từ vi khuẩn chịu nhiệt Thermus aquaticus) PCR gồm chuỗi nhiều chu kỳ, chu kỳ có ba bước: biến tính, gắn mồi kéo dài chuỗi Kết sau khoảng 2-3 giờ, lượng DNA khuếch đại lên hàng triệu lần - Tinh DNA từ sản phẩm PCR - Phân tích giải trình tự gen Ngun tắc chung: Trình tự nucleotide quan tâm xác định 16 nguyên tắc phương pháp Sanger: tạo đoạn DNA sợi nucleotide, kết thúc ddNTP đánh dấu huỳnh quang Phân tích trình tự gen: Kết nhận phân tích máy tính phần mềm Sequencing Analysis 5.2; Bioedit 7.0; Seqscape 2.5 Từ chương trình tiến hành: - So sánh trình tự đoạn DNA với trình tự chuẩn - Phân tích sai khác để đưa dự đoán cần thiết * Xử lý phân tích số liệu Các số liệu thu thập dựa phiếu khám, mẫu thạch cao, phim xquang kết sàng lọc đột biến gen Số liệu nhập vào máy tính, xử lý phần mềm SPSS 16.0 Dùng phương pháp thống kê y học để phân tích số liệu Kiểm định đại lượng χ2 test, Fisher exact test, t – test * Biện pháp khống chế sai số Chúng chọn lựa đối tượng đạt tiêu chuẩn Thống cách thức thu thập thông tin - Các số liệu kiểm tra cẩn thận hai lần, đồng thời so sánh ngẫu nhiên với kết đo bác sĩ khác - Cách khống chế sai số: + Để khống chế sai số xác định tư đầu chụp phim sọ mặt, chọn ngẫu nhiên 10 bệnh nhân để chụp lần 1, sau tuần chúng tơi tiến hành chụp lại lần với bác sỹ xquang Phân tích so sánh số lần lần trắc nghiệm Krustal – Wallis Kết chấp nhận so sánh cặp lần lần cho kết p > 0,05 + Tập huấn kĩ thuật cho người đo: Tập huấn chuyên gia nhân trắc, bác sỹ chỉnh nha Trước tiến hành đo đạc thức, người đo rút mẫu nghiên cứu ngẫu nhiên 20 người, đo tất phép đo lần, tính tốn hệ số tương quan Pearson phần mềm SPSS 16.0 Chỉ tiến hành đo đạc tất phép đo có hệ số tương quan Pearson > 0,8 + Thống dụng cụ đo loại đơn vị thước đo có chuẩn mực + Đo điều kiện, tiêu chuẩn 17 * Khía cạnh đạo đức nghiên cứu - Các đối tượng nghiên cứu đọc bảng thông tin nghiên cứu, ký cam kết tham gia nghiên cứu (bảng thơng tin có phần phụ lục) Nếu trẻ em 18 tuổi cần có đồng ý cha mẹ - Đối tượng nghiên cứu khơng phải nộp chi phí cho nghiên cứu - Các thông tin thu thập bệnh nhân giữ bí mật tuyệt đối dùng với mục đích nghiên cứu - Phải đảm bảo vấn đề vơ trùng q trình khám lâm sàng lấy máu làm xét nghiệm gen - Đối tượng nghiên cứu tư vấn phương pháp điều trị, yếu tố nguyên nhân, đặc điểm di truyền Các đặc điểm di truyền phân tử có ích vấn đề tư vấn trước sinh cho bệnh nhân 10 Kết dự kiến đề tài * Dự kiến kết nghiên cứu 10.1 Đánh giá đặc điểm chung mẫu nghiên cứu - Đặc điểm tuổi giới đối tượng nghiên cứu - Đặc điểm đối tượng nghiên cứu 10.2 Phân bố thiếu theo vị trí thiếu 10.3 10.4 10.5 10.6 Phân bố thiếu bẩm sinh theo hàm – hàm Phân bố thiếu bẩm sinh theo vùng trước – sau Phân bố thiếu bẩm sinh theo vị trí hay gặp Phân bố theo số lượng thiếu Đánh giá đặc điểm lâm sàng bệnh nhân thiếu bẩm sinh Phân bố khớp cắn vùng hàm theo nhóm thiếu Độ cắn phủ Độ cắn chìa Kết phim sọ mặt nghiêng Các đặc điểm lâm sàng, xquang di truyền phân tử bệnh nhân loạn sản ngoại bì giảm tiết mồ - Các đặc điểm lâm sàng, xquang - Kết xác định đột biến gen EDA nhóm bệnh nhân loạn sản ngoại bì giảm tiết mồ 10.7 Kết bước đầu điều trị * Khả ứng dụng Số liệu đề tài góp phần vào kho số liệu để xây dựng tỷ lệ bệnh thiếu 18 bẩm sinh Việt Nam bước đầu điều trị bệnh loạn sản ngoại bì dẫn tới thiếu bẩm sinh * Các sản phẩm đề tài: - Một báo cáo khoa học - Là tài liệu đào tạo (sinh viên, học viên sau đại học) - Sau nghiệm thu đăng 02 báo khoa học 11 Tài liệu tham khảo Endo T, Ozoe R, Kubota M, et al (2006) A survey of hypodontia in Japanese orthodontic patients Am J of Orthod Dent Orthop, 129, 29 – 35 Nik-Hussein N.N (1989) Hypodontia in the permanent dentition: a study of its prevalence in Malaysian children Aust Orthod J, 11, 93 – 95 Nordgarden H, Jensen J.L, Storhaug K (2002) Reported prevalence of congenitally missing teeth in two Norwegian countries Community Dent Health, 19, 258 – 262 Polder B.J, Van't Hof M.A, Van der Linden FPGM, et al (2004) A metaanalysis of the prevalence of dental agenesis of permanent teeth Community Dent Oral epidemiol, 32, 217 – 226 Young Ho Kim (2010) Investigation of hypodontia as clinically related dental anormaly: Prevalence and Characteristics ISRN Dentistry, 2011, 246135 Sharma J, Mamatha G.P (2008) Hereditary ectodermal Dysplasia Rev Clin Pesq Odontol, 4(1), 35 – 40 Vastardis H (2000) The genetics of human tooth agenesis: new discoveries for understanding dental anomalies Am J Orthod Dentofacial Ortho, 117, 650 – 656 Pinheiro M, Freire-Maia N (1994) Ectodermal dysplasis: a clinical classification and a causal review Am J Med Genet, 53, 153 – 162 Weech A.A (1929) Hereditary ectodermal dysplasia Amer J Dis Child, 37(6), 766 10.Itthagarun A, King N.M (1997) Ectodermal dysplasia: a review and case report Quintessense Int, 28(9), 595 – 602 11.Cambiaghi S, Restano L, Paakkonen K, et al (2000) Clinical findings in mosaic carriers of hypohidrotic ectodermal dysplasia Acrh Dermatol, 136, 217 – 224 12.Bondarets N, McDonald F (2000) Analysis of the vertical facial form in 19 patient with severe hypodontia Am J Phys Anthropol, 111, 177 – 184 13.Georg C S, Charlotte O, Sigrid Tinschert et al (2004) Molecular mechanism of tooth development and malformations Oral Biosci Med, 2, 77 – 91 14.Lee H.E, Chang I.K, Myung I (2012) Topical minoxidil treatment for congenital alopecia in hypohidrotic ectodermal dysplasia Journal American Academy of Dermatology, 10, 19 15.Santhos K, Mamta H.N, Vishnu R (2010) Dental implants in children and adolescents Indian Journal of Multidisciplinary Dentistry, 1, 12 Phụ lục (nếu có): 03 phụ lục BẢN CUNG CẤP THÔNG TIN CHO ĐỐI TƯỢNG THAM GIA NGHIÊN CỨU Tên nghiên cứu: Đặc điểm lâm sàng, x-quang, di truyền phân tử kết bước đầu điều trị bệnh nhân có hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến mồ Phiên bản: ………… Ngày…… …./…….…/ ………………… Tên nhà tài trợ: Mã số đối tượng: ………………………………………………………… Nghiên cứu viên chính: PGS TS Võ Trương Như Ngọc Đơn vị chủ trì: Viện Đào Tạo Răng hàm mặt- Trường Đại học Y Hà Nội Trình bày vấn đề liên quan đến nghiên cứu: - Thiếu bẩm sinh gây sai khớp cắn, ảnh hưởng tới phát triển xương hàm, từ dẫn đến thẩm mỹ, chức nhai bị giảm sút, ảnh hưởng tới tâm lý khả giao tiếp bệnh nhân Vì vậy, việc tìm hiểu nguyên nhân gây tượng thiếu bẩm sinh để phòng ngừa, điều trị, đồng thời tư vấn cho bố mẹ bệnh nhân việc quan trọng Vấn đề ngày nhận quan tâm nghiên cứu nhiều nhà khoa học giới Tuy nhiên Việt Nam chưa có cơng trình nghiên cứu ngun nhân, đặc điểm di truyền phân tử nên thực đề tài - Mô tả đặc điểm lâm sàng, xquang bệnh nhân có hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến mồ - Mơ tả số đặc điểm di truyền phân tử bệnh nhân có hội chứng loạn 20 sản ngoại bì thiếu tuyến tiết mồ hôi - Nhận xét kết bước đầu điều trị hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến mồ hôi - Nghiên cứu thiết kế theo phương pháp mô tả chùm ca bệnh gặp, dự kiến tiến hành 30 bệnh nhân có thiếu bẩm sinh từ 5/2017 đến 5/2018 - Địa điểm nghiên cứu tại:  Trung tâm kỹ thuật cao – Viện Đào Tạo Răng Hàm Mặt – Đại Học Y Hà Nội  Khoa Răng hàm mặt – Bệnh viện Đại học Y Hà Nội  Viện nghiên cứu hệ gen quốc gia – Tầng 8, nhà B4, 18 Hoàng Quốc Việt, Cầu Giấy, Hà Nội Tiêu chuẩn lựa chọn đối tượng vào nghiên cứu - Bệnh nhân chẩn đoán thiếu bẩm sinh: Một chẩn đốn thiếu bẩm sinh khơng mọc khoang miệng không biểu xquang, đồng thời khơng có chứng cho thấy bị nguyên nhân khác như: nhổ răng, tai nạn, sâu răng… - Bệnh nhân có đầy đủ hồ sơ bệnh án, mẫu hàm, phim xquang toàn cảnh sọ nghiêng từ xa - Bệnh nhân, bố mẹ bệnh nhân đồng ý tham gia nghiên cứu Tiêu chuẩn loại trừ khỏi nghiên cứu - Bệnh nhân nguyên nhân khác tai nạn răng, sâu răng, nhổ nhầm răng, … - Bệnh nhân thiếu khe hở mơi vòm miệng Ai người đánh giá thông tin cá nhân y khoa để chọn lọc bạn tham gia vào nghiên cứu ? Các bác sỹ chuyên khoa Răng hàm mặt bác sỹ chuyên khoa di truyền học Số người tham gia vào nghiên cứu: 20-30 bệnh nhân Miêu tả rủi ro bất lợi xảy - Đối tượng tham gia nghiên cứu khoảng thời gian tham gia nghiên cứu, buồn nôn lấy dấu đau lấy máu xét nghiệm Miêu tả lợi ích đối tượng cộng đồng từ nghiên cứu - Lợi ích đối tượng nghiên cứu: Được khám phát thiếu 21 bẩm sinh Được lấy dấu mẫu hàm để xác định khớp cắn, đo đạc số, độ dài, rộng cung hàm Được chụp phim X-quang để phát bất thường cung hàm, đo số khuôn mặt Với đối tượng thiếu nhiều (>6 răng) lấy máu làm xét nghiệm di truyền phân tử Được tư vấn phương pháp điều trị, yếu tố nguyên nhân, đặc điểm di truyền, đặc biệt đặc điểm di truyền phân tử có ích vấn đề tư vấn trước sinh cho bệnh nhân - Lợi ích cộng đồng: Xác định tỷ lệ thiếu bẩm sinh nhóm trẻ tuổi sinh sống Việt Nam Từ có góc nhìn sơ khớp cắn số khuôn mặt, mối liên quan trẻ thiếu nhiều bệnh di truyền trẻ em Những khoản chi trả nghiên cứu - Trẻ tham gia nghiên cứu khám miệng, lấy dấu, chụp xquang (phim panorama cephalometric), lấy máu xét nghiệm di truyền phân tử tư vấn phương pháp điều trị, đặc điểm di truyền phân tử có hồn tồn miễn phí Công bố phương pháp cách điều trị thay 10 Trình bày phương pháp lưu giữ mật hồ sơ nhận dạng đối tượng tham gia nghiên cứu - Danh tính trẻ hồ sơ bệnh án bảo mật Những thông tin nghiên cứu lưu trữ Viện Đào Tạo Răng Hàm Mặt- Trường Đại học Y Hà Nội cung cấp cần thiết 11 Chỉ rõ quan quản lý kiểm tra hồ sơ đối tượng - Cơ quan quản lý có quyền yêu cầu đáp ứng từ phận lưu trữ sở liệu đề tài từ Viện Đào tạo Răng hàm mặt- Trường Đại học Y hà Nội 12 Vấn đề bồi thường/hoặc điều trị y tế có thương tích xảy (ở đâu có thơng tin khác) - Đối tượng tham gia nghiên cứu điều trị miệng hoàn tồn miễn phí q trình tham gia nghiên cứu có gây tổn thương cho - Đối tượng tham gia nghiên cứu điều trị y tế miễn phí q trình lấy máu có làm ảnh hưởng đến sức khỏe - Đối tượng tham gia nghiên cứu không nhận hỗ trợ y tế 22 không tuân thủ nghiêm ngặt yêu cầu nghiên cứu đề 13 Người để liên hệ có câu hỏi - Mọi thắc mắc nghiên cứu, quyền đối tượng nghiên cứu có thương tích liên quan đến nghiên cứu xin liên hệ trực tiếp với nghiên cứu viên - PGS TS Võ Trương Như Ngọc Điện thoại: 0945786868 Email: votruongnhungoc@gmail.com 14 Sự tự nguyện tham gia - Người tham gia quyền tự định, dựa tự nguyện trẻ gia đình, khơng bị ép buộc tham gia - Người tham gia rút lui thời điểm mà không cần lý Hà Nội, ngày …… tháng …… năm Họ tên chữ ký nghiên cứu viên 23 ĐƠN TÌNH NGUYỆN THAM GIA NGHIÊN CỨU (Áp dụng cho đối tượng tình nguyện tham gia nghiên cứu cần phải bí mật danh tính) Tơi cha/mẹ trẻ Xác nhận Tôi (là cha/mẹ trẻ) đọc thông tin đưa cho nghiên cứu “Đặc điểm lâm sàng, x-quang, di truyền phân tử kết bước đầu điều trị bệnh nhân có hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến mồ hôi” tại……………………………………………………………………………… … Phiên ………., ngày ……/……/………, …… Trang), cán nghiên cứu giải thích nghiên cứu thủ tục đăng ký tình nguyện tham gia vào nghiên cứu - Tơi có thời gian hội cân nhắc tham gia vào nghiên cứu - Tôi hiểu tơi có quyền tiếp cận với liệu mà người có trách nhiệm mơ tả tờ thơng tin - Tơi hiểu tơi có quyền rút khỏi nghiên cứu vào thời điểm lý Tơi đồng ý bác sỹ chăm sóc sức khỏe thông báo việc tham gia nghiên cứu Đánh dấu vào thích hợp (quyết định không ảnh hưởng khả bạn tham gia vào nghiên cứu ): Có Khơng 24 Tơi đồng ý tham gia nghiên cứu PHIẾU NGHIÊN CỨU HÀNH CHÍNH Họ tên:……………………………………………………………… Tuổi:…………………………………………………………………… Giới:…………………………………………………………………… Địa chỉ:………………………………………………………………… Ngày khám:…………………………………………………………… Họ tên bố:……………………………………………………………… Họ tên mẹ:…………………………………………………………… KHÁM CHUYÊN KHOA Khám lâm sàng Số lượng thiếu a Thiếu (< răng) b Thiếu nhiều (>6 răng) c Khơng Vị trí thiếu a Răng hàm nhỏ b Răng cửa c Răng cửa bên hàm d Vùng khác Khớp cắn hàm a Angle I b Angle II c Angle III 25 Trên mẫu hàm Độ cắn chìa Độ cắn phủ Trên phim sọ nghiêng Số đo góc: Giá trị Chỉ số Chỉ số Giá trị SNA (°) SNB (°) ANB (°) SN – GoGn (°) SN – OcP (°) FH – SGn (°) SN – (°) NA – (°) (mm) MnP – ī (°) NB – ī (°) (mm) – ī (°) Góc mũi mơi (°) Ls – E (mm) Li – E (mm) Xương Răng Mô mềm Các đặc điểm bệnh loạn sản ngoại bì giảm tiết mồ 4.1 Các triệu chứng lâm sàng + Tóc mỏng thưa Có Khơng + Mồ Có + Da khơ, bong vảy Có Khơng + Móng khơ, dễ gãy Có Khơng + Trán nhơ Có Khơng + Mơi dày Có Khơng + Răng Thiếu 26 bình thường Thiếu nhiều Không + Các bệnh khác (bệnh da) Có Khơng Tiền sử gia đình + Anh, chị em bệnh nhân có bị bệnh HED Có Khơng + Bố bệnh nhân có bị bệnh HED 1 Có Khơng + Mẹ bệnh nhân có bị bệnh HED Có Khơng 4.2 Kết xét nghiệm gen EDA Đột biến gen EDA: Có Khơng Ký tên người tham gia Ngày / tháng / năm ……………………………………………………… …………………… Nếu cần, * Ghi rõ họ tên chữ ký người làm chứng Ngày / tháng / năm ……………………………………………… Ghi rõ họ tên chữ ký người hướng dẫn …………………… Ngày / tháng / năm ……………………………………………… …………………… 13 Tiến độ thực đề tài Từ tháng 05/2017 đến tháng 05/2018 - Tháng 03/2017 đến tháng 04/2017: Lập đề cương - Tháng 05/2017 đến tháng 01/2017: Thông quan hội đồng, lấy số liệu - Tháng 02/2017 đến tháng 05/2018: Xử lý số liệu viết báo cáo, nghiệm thu đề tài 14 Kinh phí thực đề tài (chủ nhiệm đề tài tự lo kinh phí) 50.000.000 (Năm mươi triệu đồng) Trong đó: - Kinh phí xây dựng đề cương, hồn thiện cơng cụ nghiên cứu quy trình nghiên cứu: 35.000.000 (Ba mươi lăm triệu đồng) - Kinh phí điều tra, xử lý phân tích số liệu: 10.000.000 (Mười triệu 27 đồng) - Các chi khác: 5.000.000 (Năm triệu đồng) Hà Nội, ngày tháng năm 20… Ý kiến Đơn vị/Bộ môn (Ký ghi rõ họ tên) Chủ nhiệm đề tài (Ký ghi rõ họ tên) Ban Giám hiệu Phòng QL KH&CN (Trường ĐHYHN) 28 ... Mô tả đặc điểm lâm sàng, xquang bệnh nhân có hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến mồ 2) Mơ tả số đặc điểm di truyền phân tử bệnh nhân có hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến tiết mồ hôi 3)... nguyên nhân, đặc điểm di truyền phân tử nên thực đề tài - Mô tả đặc điểm lâm sàng, xquang bệnh nhân có hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến mồ hôi - Mô tả số đặc điểm di truyền phân tử bệnh nhân. .. bệnh nhân có hội chứng loạn sản ngoại bì thiếu tuyến mồ hôi , với ba mục tiêu sau: - Mô tả đặc điểm lâm sàng, xquang bệnh nhân có hội chứng loạn sản - ngoại bì thiếu tuyến mồ hôi Mô tả số đặc điểm