Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học của cây Hồng rừng thu hái tại Lào Cai

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI LÊ THỊ HÀ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY HỒNG RỪNG THU HÁI TẠI LÀO CAI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI - 2019 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI , LÊ THỊ HÀ Mã sinh viên: 1401164 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY HỒNG RỪNG THU HÁI TẠI LÀO CAI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Mạnh Tuyển DS Văn Thùy Linh Nơi thực Đại học Dƣợc Hà Nội Viện Dƣợc liệu HÀ NỘI – 2019 LỜI CẢM ƠN Trong thời gian làm khóa luận, em nhận đƣợc nhiều giúp đỡ,động viên từ thầy cơ, gia đình bạn bè Để bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc mình, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến PGS.TS Nguyễn Mạnh Tuyển - Bộ môn Dƣợc học cổ truyền - Trƣờng đại học Dƣợc Hà Nội, DS Văn Thùy Linh tận tình hƣớng dẫn, bảo, giúp đỡ em suốt q trình thực khóa luận Đồng thời, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Văn Tài, TS Lê Thành Nghị, ThS Nguyễn Thị Thu Trang - Khoa Hóa thực vật - Viện Dƣợc liệu hƣớng dẫn, dạy em nhiều điều bổ ích suốt q trình thực khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô, anh chị, bạn môn Dƣợc học cổ truyền, môn Thực vật - Trƣờng đại học Dƣợc Hà Nội, khoa Hóa thực vật Viện Dƣợc liệu, Viện sinh thái tài nguyên sinh vật - Viện Hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam, Trạm kiểm lâm Núi Xẻ - Sa Pa, Vƣờn quốc gia Hoàng Liên giúp đỡ, tạo điều kiện cho em suốt trình nghiên cứu Em xin cảm ơn Ban giám hiệu, toàn thể thầy cô Trƣờng đại học Dƣợc Hà Nội dạy em kiến thức bổ ích, giúp đỡ tạo điểu kiện cho em suốt thời gian học tập nghiên cứu Cuối cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè suốt thời gian qua bên động viên, khích lệ giúp em hồn thành tốt khóa luận Hà Nội, ngày 01 tháng 05 năm 2019 Sinh viên Lê Thị Hà MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN ….2 1.1 Tổng quan chi Diospyros L 1.1.1 Vị trí phân loại chi Diospyros L 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Diospyros L 1.2 Tổng quan loài Diospyros kaki .3 1.2.1 Đặc điểm thực vật phân bố loài Diospyros kaki 1.2.2 Một số thuộc loài Diospyros kaki 1.2.3 Thành phần hóa học 1.2.4 Tác dụng dƣợc lý CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 10 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 10 2.1.2 Thiết bị hóa chất nghiên cứu 10 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 11 2.2.1 Giám định tên khoa học đặc điểm thực vật nghiên cứu 11 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 11 2.2.3 Phân lập hợp chất 12 2.2.4 Các phƣơng pháp xác định cấu trúc 14 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 15 3.1 Đặc điểm thực vật Hồng rừng 15 3.1.1 Đặc điểm hình thái 15 3.1.2 Đặc điểm vi phẫu Hồng rừng 17 3.1.3 Đặc điểm bột Hồng rừng 20 3.2 Thành phần hóa học Hồng rừng 21 3.2.1 Định tính sơ nhóm chất dƣợc liệu phản ứng hóa học 21 3.2.2 Chiết xuất 25 3.2.3 Phân lập tinh chế số hợp chất từ Hồng rừng 27 3.2.4 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập đƣợc từ cắn EtOAc 36 CHƢƠNG BÀN LUẬN 40 4.1 Đặc điểm thực vật 40 4.2 Chiết xuất, phân lập, tinh chế, xác định cấu trúc hợp chất 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tên đầy đủ Kí hiệu TLC Thin-layer choromatography Sắc ký lớp mỏng CC Column choromatography Sắc ký cột HPLC High performance liquid choromatography Sắc ký lỏng hiệu cao ESI-MS Electro spray ionization spectrometry Phổ khối lƣợng ion hóa phun bụi điện H-NMR Proton nuclear magnetic resonance spectroscopy Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân proton 13 C-NMR Carbon-13 nuclear magnetic resonance spectroscopy Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân carbon-13 DEPT Distortionless enhancemnt by polarization transfer Phổ DEPT TMS Tetramethyl silan MeOH Methanol DCM Dichloromethan EtOH Ethanol EtOAc Ethyl acetat n-BuOH n-buthanol HOMA-IR Homeostatic model sssessment for insulin resistance Chỉ số kháng insulin LDL Low-density lipoprotein Lipoprotein phân tử lƣợng thấp HDL High-density lipoprotein Lipoprotein phân tử lƣợng cao HMG-CoA Hydroxymethylglutaryl coenzyme A ACAT Acetyl-coenzyme A acetyltransferase D Diospyros DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Cơng thức hóa học flavonoid lồi D kaki [25] .5 Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu phƣơng pháp hóa học…… 24 Bảng 3.2 Khối lƣợng cắn phân đoạn từ dịch chiết ethanol Hồng rừng……… 27 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Một số terpenoid hồng Hình 3.1 Đặc điểm quan sinh dƣỡng Hồng rừng……………………………………………….16 Hình 3.2 Đặc điểm hoa Hồng rừng 16 Hình 3.3 Đặc điểm hoa đực Hồng rừng 17 Hình 3.4 Đặc điểm hạt Hồng rừng 17 Hình 3.5 Vi phẫu phần gân lá Hồng rừng 19 Hình 3.6 Vi phẫu phần phiến Hồng rừng 20 Hình 3.7 Ảnh bột Hồng rừng 21 Hình 3.8 Sơ đồ chiết xuất cắn phân đoạn từ Hồng rừng 26 Hình 3.9 Hình ảnh TLC cao tồn phần với hệ II (DCM:MeOH 96:4) 28 Hình 3.10 Hình ảnh TLC cắn EtOAc với hệ V (DCM:MeOH 96:4) 30 Hình 3.11 Sắc ký đồ khảo sát pha động (methanol:nƣớc cất 55:45) phƣơng pháp HPLC phân tích .33 Hình 3.12 Sắc ký đồ khảo sát pha động (methanol:nƣớc cất 55:45) phƣơng pháp HPLC điều chế .34 Hình 3.13 Quá trình phân lập chất từ cắn phân đoạn EtOAc .35 Hình 3.14 Hình ảnh TLC LH1 ( DCM 100%) 36 Hình 3.15 Cấu trúc hóa học hợp chất LH1 37 Hình 3.16 Hình ảnh TLC A1 (DCM : MeOH 5:1) 37 Hình 3.17 Các tƣơng tác (H→C) phổ HMBC, HSQC hợp chất A1 .39 Hình 3.18 Cấu trúc hóa học hợp chất A1 39 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong năm gần đây, với xu hƣớng “trở với thiên nhiên’’ nhiều nƣớc giới có Việt Nam đẩy mạnh việc nghiên cứu, bào chế sản xuất chế phẩm có nguồn gốc từ thảo dƣợc, thành phần từ tự nhiên để hỗ trợ, phòng ngừa điều trị bệnh, nhƣ nâng cao sức khỏe ngƣời Với vị trí địa lý điều kiện tự nhiên ƣu đãi, Việt Nam có thảm thực vật phong phú đa dạng với khoảng 12.000 lồi thực vật bậc cao, có khoảng 4.000 loài đƣợc sử dụng làm thuốc Tuy vậy, có khoảng 300 lồi vị thuốc đƣợc sử dụng mức độ tƣơng đối phổ biến theo kinh nghiệm dân gian theo y học cổ truyền mà chƣa đƣợc nghiên cứu kỹ đầy đủ [1] Điều cho thấy triển vọng lớn Việt Nam lĩnh vực nghiên cứu phát triển thuốc từ thảo dƣợc Chi Diospyros L thuộc họ Thị (Ebenaceae) chi lớn giới với 500 loài, đƣợc phân bố chủ yếu khu vực nhiệt đới, đa dạng khu vực Đông Nam Á, số lồi Tây Á, Nhật Bản Đơng Nam nƣớc Mỹ [35] Một số loài thuộc chi Diospyros L đƣợc giới nghiên cứu có tác dụng chống oxy hóa, điều trị ung thƣ, hạ cholesterol máu, hạ huyết áp, kháng khuẩn … [25], [39] Hồng rừng thuộc chi Diospyros L tồn phát triển tự nhiên địa bàn Lào Cai Lá Hồng rừng vị thuốc nam quý đƣợc ngƣời dân địa phƣơng sử dụng theo kinh nghiệm với tác dụng: lọc gan, hạ men gan, giải độc gan rƣợu bia, Tuy nhiên có nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học dƣợc liệu Hồng rừng Do để bổ sung sở liệu đặc điểm thực vật thành phần hóa học dƣợc liệu tiến hành đề tài “Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học Hồng rừng thu hái Lào Cai” với số mục tiêu cụ thể nhƣ sau: Mô tả đặc điểm thực vật, đặc điểm vi học giám định tên khoa học Hồng rừng thu hái Sa Pa, Lào Cai Chiết xuất, phân lập xác định số hợp chất Hồng rừng CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Diospyros L 1.1.1 Vị trí phân loại chi Diospyros L Theo hệ thống phân loại thực vật Armen Takhtajan 1987, vị trí phân loại chi Diospyros L đƣợc tóm tắt nhƣ sau [3], [35]: Giới thực vật (Plantae) Ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida) Phân lớp Sổ (Dilleniidae) Liên Đỗ Quyên (Ericanae) Bộ Thị (Ebenales) Họ Thị (Ebenaceae) Chi Diospyros L 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Diospyros L  Đặc điểm thực vật Cây gỗ bụi Lá mọc so le, mọc đối, khơng có kèm Hoa thƣờng đơn tính, khác gốc gốc, lƣỡng tính Hoa đực mọc thành xim nách lá; nhị từ đến nhiều, thƣờng kết hợp thành hai vòng xoắn Hoa thƣờng đơn độc, mọc nách lá; nhị - 16 khơng có; bầu thƣờng có - Đài hoa thƣờng có - thùy Tràng hoa hình chum, hình chng, hình ống, - thùy rụng sớm Quả thịt, mang đài to không rụng Hạt - 10 (hoặc hơn), thƣờng hẹp theo bề ngang [22]  Phân bố Chi Diospyros L chi lớn nhất, phân bố rộng có giá trị kinh tế họ Thị (Ebenaceae) với 500 loài [35] Phân bố rải rác từ vùng ôn đới đến vùng nhiệt đới [7] Khu vực Châu Á - Thái Bình Dƣơng đa dạng với khoảng 300 lồi Ở Việt Nam , chi Diospyros L có khoảng 60 lồi, lồi cho gỗ có giá trị sử dụng lồi có ăn đƣợc D kaki L.f D lotus L [7] Phụ lục 1.3 Tiêu mẫu đối chiếu Diospyros kaki Thunb var silvestris Makino PHỤ LỤC Phụ lục 2: Kết giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu PHỤ LỤC Phụ lục 3.1 Phổ 1H - NMR hợp chất A1 Phụ lục 3.2 Phổ 13C - NMR hợp chất A1 Phụ lục 3.3 Phổ COSY hợp chất A1 Phụ lục 3.4 Phổ DEPT hợp chất A1 Phụ lục 3.5 Phổ HMBC hợp chất A1 Phụ lục 3.6 Phổ HSQC hợp chất A1 Phụ lục 3.7 Phổ ESI - MS (-) hợp chất A1 Phụ lục 3.8 Phổ ESI - MS (+) hợp chất A1 Phụ lục 3.9 Phổ 1H - NMR hợp chất LH1 Phụ lục 3.10 Phổ 13C - NMR hợp chất LH1 Phụ lục 3.11 Phổ 13C - NMR hợp chất LH1 Phụ lục 3.12 Phổ ESI - MS (+) hợp chất LH1 ... phần hóa học dƣợc liệu Hồng rừng Do để bổ sung sở liệu đặc điểm thực vật thành phần hóa học dƣợc liệu tiến hành đề tài Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học Hồng rừng thu hái Lào Cai ...BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI , LÊ THỊ HÀ Mã sinh viên: 1401164 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY HỒNG RỪNG THU HÁI TẠI LÀO CAI KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ... CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 15 3.1 Đặc điểm thực vật Hồng rừng 15 3.1.1 Đặc điểm hình thái 15 3.1.2 Đặc điểm vi phẫu Hồng rừng 17 3.1.3 Đặc điểm bột Hồng rừng