Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học của rễ ngưu bàng thu hái tại sapa

Tuy nhiên, trong vài chục năm trở lại đây, thế giói nói chung và Việt Nam nói riêng, nhu cầu sử dụng thuốc có nguồn gốc cây cỏ ngày càng gia tăng và đã có rất nhiều loại dược liệu đã đượ

BỘ Y TÊ ■

TRƯỜNG ĐẠI HỌC D ư ợ c HÀ NỘI

HÀ ĐẲNG THÀNH

NGHIÊN c ú u DẶC DIỂM THỰD VẬT VÀ THÀNH PHẦN■ ■ a

HOÁ HỌC CỦA RỄ NGƯU BÀNG THU HÁI TẠI SAPA■ ■

(KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHOÁ 2002

N gười hướng dẫn: T S N g u y ễ n T h ế u A n ^

T S T h á i N g u y ễ n H ù n g T h u

N ơi thực hiện: Bộ m ôn Dược học cổ truyền

Bộ m ôn H oá P hân tích

LỜI CẢM ƠN

Trong quá trình thực hiện khóa luận tốt nghiệp, bên cạnh sự cố gắng của bản thân, tôi đã nhận được sự quan tâm giúp đỡ tận tình của các thầy cô giáo, bạn bè và người thân

Nhân dịp hoàn thành khóa luận, tôi xin bày tỏ lòng biết 0fn sâu sắc đến:

TS Nguyễn Thái An

TS Thái Nguyễn Hùng Thu

là những người đã trực tiếp hưótig dẫn chỉ bảo trong suốt thời gian làm đề tài

Đồng thời, tôi cũng xin gửi lời cảm 0fn tói ThS Hoàng Quỳnh Hoa - Bộ môn Thực vật, người đã tận tình hướng dẫn tôi thực hiện phần nghiên cứu đặc điểm thực vật

Cũng nhân dịp này, tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô, cán bộ, kỹ thuật viên các bộ môn, phòng ban trong trường, đặc biệt là bộ môn Dược học

cổ truyền, Bộ môn Hóa phân tích, Bộ môn Thực vật - Trường Đại học Dược

Hà Nội đã tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong quá trình học tập cũng như trong thời gian thực hiện đề tài

Hà Nội, ngày 20 tháng 5 năm 2007

Sinh viên

Hà Đăng Thành

MỤC LỤC

ĐẶT VẤN Đ Ể 1

PHẦN I.TỔNG Q U A N 3

1.1 THỰC VẬT HỌC 3

1.1.1 Vị trí phân loại của chi Arctium L 3

1.1.2 Đặc điểm thực vật và phân bố của chi Arctium L 3

1.1.3 Đặc điểm thực vật và phân bố của loài Arctium lappa L 3

1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC 4

1.2.1 Trong quả Ngưu bàng (Ngưu bàng tử ) 4

1.2.2 Trong lá : 5

1.2.3 Trong rễ (Ngưu bàng căn): 6

1.3 TÁC DỤNG VÀ CÔNG DỤNG 8

1.3.1 Tác dụng dược lý 8

1.3.2 Công dụng 9

1.4 MỘT SỔ BÀI THUỐC c ó RỄ NGUƯ b à n g 10

PHẦN 2 THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ 12

2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ú u 12

2.1.1 Nguyên liệu 12

2.1.2 Phưoỉng tiện 12

2.1.3 Phương pháp nghiên cứ u 13

2.2 KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 13

2.2.1 Kết quả nghiên cứu về thực v ậ t 13

2.2.1.1 Mô tả c â y 13

2.2.2 Kết quả nghiên cứu về hóa học 17

2.3 BÀN LUẬN 40

PHẦN 3 KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 42

3.1 KẾT LUẬN 42

3.1.1 Về thực v ậ t 42

3.1.2 V ề h o á h ọ c 42

3.2 ĐỀ XUẤT 43

TÀI LIÊU THAM KHẢO 44

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT

SKLM : Sắc ký lớp mỏng

ĐẶT VẤN ĐỂ

Với vị trí địa lý nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới ẩm gió mùa đã tạo cho Việt Nam có một nguồn tài nguyên dược liệu vô cùng phong phú Từ nhiều thế kỉ qua, các loài cây cỏ đã không ngừng được tìm hiểu và khai thác ứng dụng với mục đích phòng và chữa bệnh tạo nên một nền Y học cổ truyền phát triển rực rỡ Với sự phát triển của khoa học kỹ thuật, trong hơn 100 năm qua đã có nhiều hoạt chất mới được phát minh đưa nền y học thế giới tiến lên một bước dài trong sự nghiệp chăm sóc và bảo vệ sức khoẻ con người Tuy nhiên, trong vài chục năm trở lại đây, thế giói nói chung và Việt Nam nói riêng, nhu cầu sử dụng thuốc có nguồn gốc cây cỏ ngày càng gia tăng và đã có rất nhiều loại dược liệu đã được nghiên cứu ứng dụng rộng rãi trong đòi sống hàng ngày trong đó có rễ Ngưu bàng

Rễ Ngưu bàng là một vị thuốc được dùng điều trị đái tháo đường, đau xưoĩig khớp, bệnh ngoài da Gout, làm ra mồ hôi, lọc máu, lợi tiểu và kích thích tiêu hoá được dùng rộng rãi ở nhiều nước trên thế giới như Trung Quốc,

Canada, Ẩ i Độ

Tại Việt Nam, Ngưu bàng mới được dùng chủ yếu là dạng quả (Ngưu bàng tử) trong Y học cổ truyền làm thuốc điều trị cảm cúm, trị viêm phổi, viêm Amidal, tậ sốt, họng hầu sưng đau, cầm máu, giải độc, nhuận tràng Thời gian gần đây, Ngưu bàng căn đã bắt đầu được ngưòi dân Việt Nam biết đến và sử dụng trong chế biến canh dưõĩig sinh Đây là một món ăn và cũng là

một bài thuốc đã được dùng rộng rãi ờ Nhật Bản trong điều trị một số bệnh

như cao huyết áp, tiểu đường Ngưu bàng là loài ưa ẩm, ưa sáng và thích nghi với vùng khí hậu á nhiệt đới núi cao Hiện nay, trong khi rễ Ngưu bàng đang

có mặt tại các công ty dược phẩm như Mediplantex hay trong các cửa hàng thuốc đông dược, trong các siêu thị thì tại Sapa, cây Ngưu bàng vẫn đang được trồng chỉ với mục đích giữ giống mà không phát huy được giá trị Vì vậy, để

góp phần nâng cao giá trị sử dụng của dược liệu, đề tài “Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hoá học của rễ Ngưu bàng thu hái tại Sapa” được tiến hành với các mục tiêu sau:

1 Xác định đặc điểm thực vật và tên khoa học của cây Ngưu bàng thu hái tại Sapa.

2 Định tính thành phần hoá học và xác định hàm lượng một s ố thành phần chính trong rễ Ngưu bàng.

PHẦN 1

TỔNG QUAN

1.1.THựC VẬTHỌC

1.1.1 VỊ trí phân loại của chi Arctium L.

Theo [6], [11], [14], [15], [17], [19] vị trí của chi Arctium trong hệ

thống phân loại thực vật được tóm tắt như sau:

1.1.2 Đặc điểm thực vật và phân bố của chi Arctium L.

Cây thảo, lá ở gốc xếp hình hoa thị, lá ở thân mọc so le Cụm hoa đầu

có bao chung, gồm nhiều lá bắc kéo dài thành mũi nhọn, có móc ở đỉnh, khi chín sẽ thành móc quặp giúp cho sự phát tán nhờ động vật Chi Arctium gồm

10 loài phân bố ở vùng ôn đới cựu lục địa [10] ở nước ta có nhập trồng một

loài \à Arctium lappa L [1].

1.1.3 Đặc điểm thực vật và phân bô của loài Arctium lappa L.

1.1.3.1 Đặc điểm thực vật

Ngưu bàng có tên khoa học là Arctium lappa Linn Asteraceae Cây còn

có các tên gọi khác như Đại đao, Á thực, Hắc phong tử, Thử niêm tử [9]

Cây thảo lớn, sống 2 năm, thân thẳng có khía và phân nhánh, cao l-2m

Lá trái xoan có hình hoa thị ở gốc và mọc so le ở trên thân; phiến lá to, rộng

tới 50cm, gốc hình tim, đầu tù hay nhọn, mép răng cưa hay lượn sóng, có

nhiều lông trắng ở mặt dưới Hoa đỏ hay tím nhạt, họp thành đầu to 3-4cm;

các lá của bao chung kéo dài thành

mũi nhọn, có móc ở chóp Quả bế,

màu xám nâu điểm hồng, có nhiều

móc quặp, phía trên có một mào

lông ngắn màu vàng Rễ tròn và dài,

vùng ôn đối ấm thuộc Nam Âu hoặc

Tây Á Hiện nay, cây mọc tự nhiên Hình 1.1- Ngưu bàng

ở vùng cận Hymalaya thuộc Ấ i Độ, Nepal và Trung Quốc Gây còn được

trồng nhiều n d ở Trung Quốc và Nhật Bản [14].

Ngưu bàng ưa ẩm, ưa sáng và thích nghi với vùng khí hậu á nhiệt đổi núi cao, nhiệt độ trung bình 15®c [19]

Nước ta nhập trồng Ngưu bàng từ năm 1959 làm thuốc ở vùng núi cao

Lai Qiâu, Lào Cai, Nghĩa Lộ [9] ở vùng cao huyện Bát Xát (Lào Cai) khảo sát thấy có cây Ngưu bàng mọc hoang [14]

Ngưu bàng rất dễ nhân trồng Tuy nhiên trong nhiều năm gần đây, cây không được chú ý phát triển nên chỉ còn một số cây được duy trì thường xuyên vói mục đích giữ giống tại Trại thuốc Sapa - Viện Dược Liệu [19]

1.2.1 Trong quả Ngưu bàng (Ngưu bàng tử)

Các công trình nghiên cứu khoa học cho thấy trong quả Ngưu bàng có:

Nhóm Lignan: arctiin (C17H34OH H2O) [14], [28]), hàm lưcmg 15- 21,5% [14], phần aglycon là L-arctigenin, ngoài ra còn isoarctigenin (nếu

dùng KOH 2% thuỷ phân thì sinh ra arctigenin-4-gentiobiosid) [17],

arctigenin [20],[28], (+)-7,8-dydehydro arctigenin [18], diarctigenin, các lappa-ol A, B, c , D, E, F, H, neoarc-B, các etignan A-E, neoarctiin-A, neoarctiin-B [18]

Nhóm sterol: daucosterol [19], [29]

Nhóm polysaccharid: Inulin [19]

Nhóm dầu béo 15-30% [17], 25-30% [14] Thành phần chủ yếu gồm các glycerid của các acid palmatic, stearic, oleic [14], acid arachidic, một ít acid stearic, acid palmatic, trị số lod là 138,83 [17]

Nhóm các thành phần khác: acid chlorogenic, matairecinol [19], [20], [29], germacranolid [19]

0CM3

1.2.2 Trong lá:

Trong lá Ngưu bàng có chứa arctiol (8a - hydroxyeudesmol),

fukinon (dehydrofukinol), fukinol, fukinanolid, p-eudesmol, petasitolon, eremophilen, taraxasterol, onopor- dopicrin [19], arctiin và arctigenin [25] Ngoài ra trong lá còn chứa men oxydase [14]

1.2.3 Trong rễ (Ngưu bàng căn):

Theo một số tài liệu cho thấy trong rễ Nguii bàng có chứa:

có S) [19]

Nhóm acid bao gồm các acid bay hơi được: acid acetic, acid propionic, acid butyric, acid isovaleic [17], [19], acid 3 - hexenoic, acid 3 - octenoic, acid costic [19], acid crotonic [17] Acid không có nhóm OH: acid lauric, acid myristic, acid stearic, acid palmitic [19] Acid polyphenol 3,65% [17], trong

đó có: acid cafeic và acid chlorogenic [17], [19], acid isochlorogenic [15] Acid alkyl của sulfur: acid aretic CÓ kết cấu 5’ - (1 - propynyl) - 2,2' - bithienyl

5 carboxylic acid [17] Acid béo: acid aretic, acid palmitic, acid oleic, acid linoleic [17]

Rễ Ngưu bàng còn chứa methylen C h lo r id , alcohol [17], chất béo 0,4%, hàm lượng lớn chất nhầy [14], [30]; chất đắng, nhựa [14], men peroxidase [18], chất sợi [13].

Trong rễ tươi có tinh dầu, tanin, acid stearic, một carbua hydrogen và một phytosterol [9]

❖ Tác dụng hạ đường huyết:

Theo [15], cao rễ Ngưu bàng có tác dụng hạ glucose máu

❖ Tác dụng ức chếHTV và tế bào ung thư:

Theo nghiên cứu, arctigenin có tác dụng ức chế sự tăng dòng tế bào gây ung thư tuyến tụy bằng cách làm giảm sự tổng hợp glucose [20] Dịch chiết methylen diclorid của Ngưu bàng và artigenin phân lập từ Ngưu bàng có tác dụng làm giảm nguồn dinh dưỡng của yếu tố gây độc tế bào ở nồng độ 0,01

microgam/ml với hiệu quả 1 0 0% [2 0]

Rễ Ngưu bàng có tác dụng chống khối u [17], [30] (tuy nhiên tác dụng này mới được thử nghiệm ban đầu trong ống nghiệm và trên động vật, chưa được thử nghiệm trên người [30]); có khả năng ức chế sự phát triển của virus HIV [27]

Baicalin và genistin ức chế chọn lọc trên DNA polymerase của động vật có vú, trong đó genestin là dược chất kháng đột biến, ức chế chọn lọc trên hoạt động của TdT [28]

♦♦♦ Tác dụng trên gan và chống viêm:

Cao toàn phần rễ Ngưu bàng có tác dụng bảo vệ gan trên mô hình gây tổn thương gan bằng CCI4 và có tác dụng chống viêm trên mô hình gây phù chân chuột bằng carragenin [24]; baicain trong dịch chiết methylen diclorid của Ngưu bàng có tác dụng chống viêm và hạ nhiệt [28]

❖ Tác dụng giảm ho:

Fructan trong rễ Ngưu bàng có biểu hiện tác dụng giảm ho trên mèo tương đương tác dụng của các chế phẩm tổng hợp giảm ho không gây nghiên khác [2 2]

1.3.2 Công dụng

Rễ (Ngưu bàng căn) có vị đắng cay, tính hàn, có tác dụng lợi tiểu (loại được acid uric), khử độc, ra mồ hôi, lợi mật, nhuận tràng, chống giang mai, trị đái đường, chống nọc độc [9]

Theo Hoàng Văn Vinh [17], rễ Ngưu bàng có tác dụng trừ phong nhiệt, tiêu độc sưng, tri phong độc mặt sưng, đầu chuyếnh choáng, họng hầu sưng nóng, đau răng, ho, tiêu khát, mụn nhọt lở ngứa Rễ, thân chữa thương hàn nóng lạnh, trúng phong, mặt sưng, tiêu khát, trúng nhiệt, trục thuỷ Ngoài ra, rễ cắt vụn đảo vói miến ăn chữa đầy bụng Dùng rễ, lá vói chút muối giã đắp để loại mụn nhọt Rễ dưói dạng thuốc sắc để giảm đau, chữa trĩ, chữa viêm thận và lao da

m

Trong Y học cổ truyền Trung Quốc, rễ Ngưu bàng được xem như một dược liệu có tác dụng lọc máu, kích thích tiêu hoá Ngoài ra, còn được dùng trong hay dùng ngoài để điều trị eczema, vẩy nến, đau xương khớp và có tác dụng lợi tiểu Có thể dùng phối hợp vói các vị thuốc khác để điều trị viêm họng, viêm amidal, cảm lạnh, sởi [30]

ở Ấi Độ, rễ Ngưu bàng được coi có tác dụng lợi tiểu, làm ra mồ hôi và phục hồi sức khoẻ [19]

ở Nhật Bản và một số nơi khác, rễ Ngưu bàng được sử dụng như một

loại thức ăn và ngày càng trở nên thông dụng trong một loại chè để chữa ung

thư [30],

Y học hiện đại dùng rễ Ngưu bàng làm thuốc lợi tiểu, ra mồ hôi, lọc máu; dùng trong bệnh thấp khófp, trị đau và sưng khófp; bệnh ngoài da (hắc

lào, trứng cá, mụn nhọn, lở loét) Rễ, cuống lá và thân cây dùng điều trị bệnh

đái tháo đường Dạng cao thuốc hoặc thuốc bột có tác dụng hạ glucose máu và

tăng lượng glycogen trong gan [19]

ở châu Âu, rễ Ngưu bàng được dùng làm thuốc chữa bệnh ngoài da và bệnh

Gout [19] Nhân dân Châu Âu còn dùng lá non và thân Ngưu bàng, có khi cả

rễ giã nhỏ đắp vào nơi rắn rết độc cắn, côn trùng, ong, muỗi đốt (có thể do tác

động của các men oxydase có nhiều trong lá và thân) [2 1]

1.4 MỘT SỐ BÀI THUỐC c ó RỄ NGUU b à n g

- Trị nhiệt độc, đau răng, răng lợi sưng đau:

Ngưu bàng căn 1 đồng cân, giã nước, cho chút muối, nấu thành cao,

mỗi lần dùng bôi lên răng lợi Ngày bôi 2 - 3 lần [17]

- Trị trĩ lở:

Ngưu bàng căn, lệ lô căn hầm cùng ruột già lợn, uống [17]

- Trị tai tự nhiên sưng:

Rễ Ngưu bàng rửa sạch, cắt vụn, giã nhừ, lấy nước 1 thăng, nấu thành

cao đắp lẽn trên chỗ sưng [17]

- Trị chân tay mềm yếu, mệt mỏi không có sức:

PHẦN 2

THựC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ

2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ú ư

2.1.1 Nguyên liệu

Nguyên liệu nghiên cứu là cây Ngưu bàng thu hái ở Sapa.

Mẫu nghiên cứu sau khi thu thập tiến hành làm tiêu bản mẫu cây khô để nghiên cứu đặc điểm thực vật và lưu mẫu tại Phòng tiêu bản Bộ môn Thực vật Trường Đại học Dược Hà Nội

Rễ thu hái loại bỏ rễ con, rửa sạch, thái phiến Đem phơi se rồi đem sấy khô trong tủ sấy có quạt thông gió đến khô Làm nhỏ Cho vào bình đựng có nút kín Bảo quản nơi khô mát để làm thực nghiệm

2.1.2 Phương tiện

21.2.1 Thuốc thử, dung môi, hóa chất

Các thuốc thử, dung môi, hoá chất sử dụng trong nghiên cứu đạt tiêu chuẩn phân tích đã ghi trong Dược điển Việt Nam III [8 ]

- Cân phân tích PRECISA

- Cân kỹ thuật SARTORIƯS

- Máy cất quay BUCHI ROTAVAPOR R-200

- Máy xác định độ ẩm PRECISA

- Dụng cụ cắt vi phẫu cầm tay

- Kính hiển vi LEICA CME

- Bản mỏng tráng sẵn Silicagel Gp254 của hãng MERCK (Đức)

2.1.3 Phương pháp nghiên cứu

2.1.3.1 Nghiên cứu về thực vật

- Nghiên cứu đặc điểm vi học rễ Ngưu bàng theo phương pháp ghi trong [3].

- Quan sát mô tả đặc điểm hình thái thực vật của cây Ngưu bàng theo phương

pháp ghi trong [5]

2.1.3.2 Nghiên cứu về hóa học

- Định tính các nhóm chất chính bằng phản ứng hoá học theo phưomg pháp ghi

trong [2] và [4]

- Xác định độ ẩm dược liệu bằng máy xác định độ ẩm SATORIƯS

- Định tính bằng SKLM theo phương pháp ghi trong [13]

2.2.1 Kết quả nghiên cứu về thực vật

2.2.1.1 Mô tả cây

Tên Việt Nam: Ngưu bàng

Cây thảo, sống 2-3 năm, cao l-l,5m

Thân chưa phát triển cho đến khi cây chưa

ra hoa Đến thời kỳ ra hoa, thân phát triển

lên thẳng khoảng l-l,5m , phân nhánh, có

lông Lá mọc ở gốc hình hoa thị có phiến lá rộng 40-50cm, dài 40-50cm; mặt

dưới có nhiều lông trắng, gốc hình tim rõ, đầu nhọn, mép lượn sóng cuống dài 50-60cm, gốc màu tím Rễ cọc hình trụ tròn và dài, sau 1 năm có đưcmg kính khoảng 2cm, dài khoảng 30cm; sau 2 năm có thể đạt đường kính 8-lOcm, dài 50-70cm Hoa màu đỏ hay tím nhạt, các lá cùa bao chung kéo dài thành mũi

nhọn có móc ở chóp Quả bế (Hình 2.1 và Hình 2.2).

fíình 2.1 - Cây Ngưu bàng

Hình 2.2 - Mẫu thu hái tại thực địa

1 Cây tại thực địa 4 Rễ biến thái

Qua mô tả đặc điểm hình thái của cây, đối chiếu các tài liệu tham khảo,dưói sự giúp đỡ của ThS Hoàng Quỳnh Hoa, mẫu nghiên cứu được kiểm định

tên khoa học là Arctium lappa D.c Asteraceae.

Tiến hành làm tiêu bản mẫu cây khô, tiêu bản được nộp tại phòng tiêu bản Bộ môn Thực vật - Trường Đại học Dược Hà Nội (HNIP) với mã số tiêu bản là HNTP/15215/07 (Phụ lục 1).

2.2.I.2 Đặc điểm vỉ phẫu

Tiến hành cắt vi phẫu rễ Ngưu bàng theo phương pháp nhuộm kép thông thường vổi thuốc nhuộm là đỏ son phèn và xanh methylen

Mặt cắt vi phẫu hình tròn, quan sát từ ngoài vào trong có: Lớp bần gồm

1-2 hàng tế bào hình chữ nhật xếp thành hàng đồng tâm và dãy xuyên tâm (1)

Mô mềm vỏ cấu tạo từ các tế bào thành mỏng nhiều hình dạng xếp lộn xộn (2) Tầng sinh vỏ là những tế bào nhỏ xếp sát vào nhau (3), rải rác có các đám

tế bào cứng Mô mềm ruột là các tế bào thành mỏng hình đa giác (4) Các bó libe xếp theo hướng xuyên tâm (5), phía trong là tầng libe gỗ (6) và các mạch

gỗ xếp tỏa ra từ ruột (7), xen kẽ giữa các mạch gỗ là các bó libe (8) (Hình 2.3)

1

2 3 4 5

2.2.I.3 Đặc điểm vỉ học bột

Bột dược liệu có màu vàng nâu, mùi thơm, vị hơi đắng, ngọt Quan sát dưới kính hiển vi thấy (hình2.4) : Mảnh bần màu vàng đậm (2) Mảnh mô mểm là các tế bào thành mỏng hình đa giác (3) Các bó sợi gồm nhiều sợi xếp sát nhau (4), (5) Nhiều mảnh mạch, bao gồm mạch mạng (7) và mạch xoắn (6) Tinh thể canxioxalat hình khối nằm độc lập (8) hay nằm trong mảnh mạch mạng (9) Các hạt tinh bột hình cầu, có khi là hạt tinh bột đơn (11) hay kép (10) Inulin là những khối hình cầu thường bị vỡ thành các khối hình đa giác màu vàng nhạt (12), (13) (ffinh 2.4)

Hình 2.4 - Đặc điểm bột rễ Ngưu bàng

8 Mảnh mạch mạng mang tinh thể canxioxalat

2.2.2 Kết quả nghiên cứu về hóa học

2.2.2.1 Định tính các nhóm chất trong dược liệu bằng phản ứng hoá học

❖ Định tính ýĩavonoid

Lấy khoảng lOg dược liệu đã làm nhỏ vào bình Soxhlet rồi chiết với ether dầu hoả cho đến khi dung môi trong bình chiết không màu Dược liệu được lấy ra làm khô, cho vào bình nón, thêm 100 ml cồn 90°, đun cách thuỷ trong 10 phút, lọc nóng được dịch chiết cồn đem làm các phản ứng định tính ũavonoid

- Phản ứng Cyanidin:

Cho vào ống nghiệm 1 ml dịch chiết cồn, thêm một ít bột Mg kim loại, thêm tiếp vài giọt HCl đặc, đun cách thuỷ lấy dịch chiết chuyển từ màu vàng sang màu hồng đỏ Phản ứng dưomg tính

- Phản ứng với kiềm:

+ Phản ứng với hơi amoniac: Nhỏ một giọt dịch chiết cồn lên một miếng giấy lọc, hơ khô rồi đặt lên miệng lọ NH3 đã mở nút thấy màu vàng của vết tăng lên rõ r ệ t Phản ứng dương tính

+ Phản ứng với dung dịch NaOH: Cho 1 ml dịch chiết cồn vào ống nghiệm, thêm vài giọt NaOH 10% thấy màu vàng của dung dịch đậm lên Phản ứng dương tính

- Phản ứng với dung dịch PeCỈỊ 5%:

Cho vào ống nghiệm 1 ml dịch chiết cồn, thêm vài giọt dung dịch FeClg 5% thấy xuất hiện tủa xanh đen Phản ứng dương tính

Kết luận: Trong dịch chiết của mẫu nghiên cứu có flavonoid

- Phản ứng Liberman - Burchardat:

Lấy Iml dịch chiết cồn ở trên, thêm 0,5 ml anhydrid acetic Lắc đều, đặt nghiêng ống nghiệm một góc 45°, sau đó thêm đồng lượng H2SO4 đặc theo thành ống nghiệm, ở mặt phân cách giữa 2 lớp chất lỏng thấy xuất hiện vòng tím đỏ Phản ứng dương tính

Kết luận: Trong dịch chiết của mẫu nghiên cứu không có glycosid tim.

*x* Định tính alcaloid

Lấy 2g dược liệu đã làm nhỏ, cho vào bình nón dung tích 100 ml, thêm

30 ml dung dịch H2SO4 2%, đun sổi trong 20 phút Để nguội, lọc dịch chiết vào bình gạn dung tích 100 ml, kiềm hoá dịch lọc bằng dung dịch NH4OH 6N đến pH kiềm (thử bằng chỉ thị màu) Chiết alcaloid dưới dạng base bằng chloroform (10 ml X 3 lần), sau đó chuyển alcaloid sang dạng muối bằng cách lắc với dung dịch H2SO4 2%, Gạn lấy nước để làm các phản ứng định tính:

- Phản ứng với thuốc thử Mayer:

Cho Iml dịch chiết vào ống nghiệm nhỏ, thêm 2-3 giọt thuốc thử Mayer thì không thấy xuất hiện tủa trắng hay vàng nhạt ở mẫu thử Phản ứng âm tính

- Phản ứng với thuốc thử Bouchardat:

Cho Iml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2-3 giọt thuốc thử Bouchardat thì không thấy có kết tủa nâu ở mẫu thử Phản ứng âm tính

- Phản ứng với thuốc thử Dragendorjf:

Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 2 giọt thuốc thử, không thấy kết tủa vàng cam hay đỏ ở mẫu thử Phản ứng âm tính

Kết luận: Trong dịch chiết của mẫu nghiên cứu không có alcaloid.

Định tính coumarin

Lấy khoảng lOg dược liệu đã làm nhỏ vào bình Soxhlet rồi chiết với ether dầu hoả cho đến khi dung môi trong bình chiết không màu Dược liệu được lấy ra làm khô cho vào bình nón, thêm lOOml cồn 90°, đun cách thuỷ trong 10 phút, lọc nóng được dịch chiết cồn đem làm các phản ứng định tính Coumarin

- Phẩn ứng mở, đống vòng lacton:

Cho vào 2 ống nghiệm nhỏ, mỗi ống 1 ml dịch chiết cồn

ống 1 thêm 0,5 ml dung dịch NaOH 10%

ống 2 để nguyên

Đun cả 2 ống nghiệm trên nồi cách thuỷ đến sôi, quan sát thấy ống 1

xuất hiện nhiều tủa đục vàng

Thêm vào cả 2 ống mỗi ống 2 ml nước cất Lắc đều rồi quan sát thấy ống 1 trong hơn ống 2

Thêm vào ống có kiềm vài giọt H ơ đặc thấy xuất hiện nhiều tủa đục vàng Phản ứng dưofng tính

- Quan sát huỳnh quang:

Nhỏ 2 giọt dịch chiết ethanol lên giấy lọc, sau đó nhỏ tiếp lên 1 giọt

NaOH 10% Để khô rồi đem soi dưới ánh sáng tử ngoại ờ x = 365nm, thấy vết

có màu xanh hơi vàng Sau đó làm một mẫu khác tương tự: Nhỏ 2 giọt dịch chiết ethanol lên giấy lọc, thêm 1 giọt NaOH 10%, để khô Qie nửa vết chất thử bằng một mảnh kim loại rồi soi dưới ánh sáng tử ngoại trong khoảng 30 giây, bỏ vật che ra thấy nửa của vết chất thử không che có cường độ màu sáng hơn nửa vết chất thử bị che Phản ứng dưofng tính

- Phản ứng với thuốc thử diazo:

Cho vào ống nghiệm 1 ml dịch chiết ethanol, thêm 2 ml NaOH 10% Đun cách thuỷ sôi 5 phút, để nguội, nhỏ vài giọt TT diazo mới pha thấy xuất hiện tủa đỏ gạch Phản ứng dương tính

- Phản ứng vi thăng hoa:

Cho một ít bột dược liệu vào nắp chai bằng nhôm Đặt lên bếp điện có lưới amian, cho bay hết hơi nước trong dược liệu Đặt trên miệng nắp nhôm một phiến kính trên đó có đặt ít bông thấm nước lạnh Đun nhẹ dưói nắp nhôm Sau 5 phút lấy lam kính ra, để nguội, soi dưới kính hiển vi thấy tinh thể hình kim không màu Nhỏ thêm 1 giọt KI 10% lên phiến kính, soi dưói kính hiển vi thấy tinh thể hình kim màu tím Phản ứng dương tính

Kết luận: Trong dịch chiết của mẫu nghiên cứu có coumarin.

♦♦♦ Định tính tanin

Cho vào bình nón dung tích 100 ml khoảng 3g bột dược liệu, thêm

2 0ml nước cất, đun sôi trên bếp qua lưới amian trong thời gian khoảng 10

Lấy Iml dịch cho vào ống nghiệm, thêm vài giọt gelatin 1 % thấy xuất

hiện tủa bông trắng ở mẫu thử Phản ứng dương tính

- Quan sát hiện tượng tạo bọt:

Qio Ig bột dược liệu vào ống nghiệm to, thêm 5 ml nước cất, lắc mạnh trong 5 phút thấy bọt tạo thành rất ít, cột bọt mất sau 5 phút Phản ứng âm tính

- Các phản ứng tạo màu:

Lấy 5g bột dược liệu đã làm nhỏ cho vào bình nón lOOml, cho vào đó 30ml cồn 90“, đun cách thuỷ sôi trong 5 phút, ỉọc lấy dịch cồn Thêm vào dịch lọc 5ml dung dịch lọc, 5ml dung dịch H2SO4 10%, đun cách thuỷ trong Ih, đem lắc vói lOml chloroform Gạn lấy lớp chloroform, bốc hơi dung môi, cắn được dùng làm các phản ứng định tính sau: