Nghiên cứu định lượng các hoạt chất pyridoxin hydroclorid naphazolinnitrat chlorpheniramin maleat và phanthenol trong một số thuốc nhỏ mắt đa thành phần bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Bộ YTẾ Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI hoàng mỹ hường NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG CÁG HOẠT c HẤT PYRIDOXIN HYDROCLORID, NAPHAZOLIN NITRAT, CHLORPHENIRAMIN MALEAT VÀ PANTHENOL TRONG MỘT SỐ THUỐC NHỎ MẮT ĐA THÀNH PHẦN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC Ký LỎNG HIỆU Nă NG CAO (HPLC) LUẬN ÁN THỌC SV • • Dược HỌC • • ^ ỉttn jê n n ụ n h : ~Kỉểni m jíiiè iit íliiríe p li ẩ tn Oil itò í' ehíYt ito e Jtlã s ấ : NCÌƯỜI HƯỚNÍ Ỉ D Ẫ N K flO A HỌC ; TS THIÍI PHHN ỌUVNH NHƯ íĩ ' TS TR.ÍNH VÌỈN LRU > ' 'í ^ 'ỹ HÀ NỘI - 2000 MỤC LỤC Trang Đặt vấn đề Chương : Tổng quan 1.1 Tổng quan hoạt chất pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol phương pháp định lượng 1.1.1 Pyridoxin hydroclorid 1.1.2 Naphazolin nitrat 1.1.3 Chlorpheniramin maleat 1.1.4 Panthenol 1.2 Một số chương trình HPLC áp dụng để định lượng chế phẩm đa thành phần có chứa pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chloipheniramin maleat, panthenol HPLC 1.2.1 Một số khái niệm phưcmg pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 1.2.1.1 Một số đại lượng đặc trưng 1.2.1.2 Phân loại kỹ thuật HPLC ứng dụng 1.2.1.3 Cách đánh giá píc (Diện tích chiều cao) phương pháp định lượng thường dùng HPLC 1.2.2 Một số chương trình HPLC định lượng hoạt chất pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol 1.2.2.1 Một số công thức nhỏ mắt thị trường có chứa thành phần pyridoxin hydroclorid, naphazolm nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol 1.2.2.2 Một số chương trình HPLC định lượng hoạt chất pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chloipheniramin maleat, panthenol 3 Chương : Đối tượng, nội dungvà phương pháp nghiên cứu 2.1 Đối tượng nghiên cứii 2.2 Hoá chất dụng cụ 2.3 Nội dung, phương pháp nghiên cứu 10 11 11 12 15 19 20 20 22 31 31 32 33 2.3.1 Khảo sát lựa chọn điềukiện sắc ký chương trình sắc ký 34 1: Định lượng pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat 2.3.2 Khảo sát lựa chọn điềukiện sắc ký chương trình sắc ký 34 2: Đinh lượng panthenol 2.3.3 Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng đồng thời 35 pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol thuốc nhỏ mắt đa thành phần 2.3.4 Đánh giá khả ứngdụng thực tiễn phương pháp 36 đinh lượng nghiên cứu Chương : Kết - Biện luận 3.1 Kết khảo sát lựa chọn điều kiện sắc ký thích hợp định lượiìg thành phần 3.1.1 Chương trình sắc ký 1; Đinh lượng đồng thời pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat 3.1.2 Chương trình sắc ký 2: Định lưọmg đồng thời Panthenol 3.2 Xác định độ ổn định hệ thống sắc ký 3.3 Xác định khoảng tuyến tính phương pháp định lượng 3.4 Xác định độ lặp lại phương pháp 3.5 Xác định độ phương pháp xây dimg 3.6 Xây dựng phương pháp định lượng pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat 3.7 Xây dựng phương pháp định lượng panthenol 3.8 Áp dụng phương pháp định lượng để định lưọmg số mẫu lưu hành 37 37 38 41 43 44 46 49 52 53 55 Chương : Kết luận - Đề nghị 58 Tài liệu tham khảo 61 Phụ lục DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT sử d ụ• n g t r o n g lu ậ•n n • DT Diện tích ĐKSK Điều kiện sắc ký H PLC Sắc ký lỏng hiệu cao mg% mg/lOOml nm N anom et SKS Số kiểm soát TCCS Tiêu chuẩn sở TRA PHA CO Công ty Dược phẩm thiết bị vật Bộ Giao thơng vận tải XNDPTW X í nghiệp Dược phẩm Trung ưưiig UV-VIS Tử ngoại khả kiến M icrom et ịim mcg : M icrolit : M icrogam ĐẶT VẤN ĐỂ Trong năm gần đây, thuốc đa thành phần có tác dụng dược lý phối hợp sản xuất, lưu hành sử dụng rộng rãi giới nước ta Thuốc nhỏ mắt đa thành phần loại điển hình, ngày ưa dùng nên có nhiều biệt dược sản xuất lưu hành : V-Rohto; Tobiorb; Rohto-kodomo soft.; Naphacollyre; Rohto-Antibacteri Thành phần thuốc nhỏ mắt loại thường có tối thiểu bốn hoạt chất số chất sau : kháng sinh sulfamid diệt khuẩn, nấm, virut (chloramphenicol, gentamicin, natri sulfacetamid); kháng histamin (chorpheniramin); giảm nhãn áp (neostigmin); co mạch ngoại vi, giảm sung huyết (naphazolin, tetra hydrozolin); dinh dưỡng giác mạc (pyridoxin, panthenol ) Gần số nhà sản xuất nước nghiên cứu bào chế thuốc nhỏ mắt (APOL TRAPHACO, VIRONDO XNDPTW2) với công thức chứa thành phần sau : Panthenol, naphazolin nitrat, pyridoxin hydroclorid, chlorpheniưamin maleat Trong chuyên luận dược điển có đinh tính, định lượng riêng biệt thành phần chế phẩm đơn thành phần phương pháp phương pháp thể tích, phương pháp đo [19] [20][21][27][28][29][30][31][35][38][40][41][42][43][44], phương pháp đo quang tạo mầu đo quang [22][30][35][36]40][42][44], phương pháp HPLC [36][38] hay phương pháp sắc ký khí [22] Việc định lượng thành phần chế phẩm đa thành phần phưomg pháp có nhược điểm tốn thời gian công sức, dễ mắc sai số phải chiết tách phức tạp pha loãng nhiều lần, số trường hợp nhiều kliông tiến hành ảnh hưỏmg tá dược Trong số cơng trình đăng sách, tạp chí thơng báo kiểm nghiệm Viện kiểm nghiệm có đề cập tới phản tích số dạng thuốc đa thành phần có chứa số thành phần nêu Nhưng chúng tơi chưa thấy có tài liệu đề cập phương pháp định lượng bốn thành phần thuốc nhỏ mat APOL VIRONDO Cũng có số cơng trình phương pháp HPLC để định lượng thành phần nêu, nhiên mặt hay mặt khác, việc áp dụng phòng thí nghiệm ta trở ngại Do vậy, việc kiểm tra, quản lý, giám sát chất lượng chế phẩm có thành phần gặp nhiều khó khăn Qua phân tích cấu trúc, tứửi chất hố lý thành phần chúng tơi nhận thấy có khả phân tách chúng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Đổng thời, việc áp dụng phương pháp phân tích đại với trợ giúp máy móc thiết bị trở thành xu hướng chung ngành phân tích nước giới khu vực nên chọn phương pháp HPLC phương pháp thích hợp để phân tích trực tiếp thành phần nêu Xuất phát từ yêu cầu thực tiễn công tác kiểm nghiệm phục vụ việc đảm bảo chất lượng thuốc sản xuất nước thuốc ngoại nhập luu hành thị trưcmg tiến hành đề tài : ‘Nghiên cứu định lượng pyridoxin hydroclorid, naphazolin n itrat, chlorpheniram in m aleat, panthenol thuốc nhỏ m đa thành phần phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao” với mong muốn phương pháp phân tích định lượng bốn thành phần nêu thuốc nhỏ mắt đa thành phần trở thành tài liệu thường quy để áp dụng định lưọng thành phần chế phẩm mà có chứa thành phần nêu Để giải mục tiêu tiến hành nội dung sau : ♦ Nghiên cứu, khảo sát, lựa chọn điều kiên sắc ký thích hợp để đừứi lượng trực tiếp pyridoxin, hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol ♦ Xác định độ ổn đinh hệ thống sắc ký ♦ Xác định khoảng tuyến tính phương pháp ♦ Xác định độ lặp lại phương pháp ♦ Xác định độ phương pháp ♦ Xây dựng phương pháp đinh lượng pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol thuốc nhỏ mắt đa thành phần phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao ♦ Đánh giá khả ứng dụng thực tiễn phương pháp cách áp dụng phương pháp vào định lượng số mẫu liru hành Chương I TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỂ CÁC HOẠT CHÂT PYRIDOXIN HYDROCLORBD, NAPHAZOLIN NưRAT, CHLORPHENIRAMIN MALEAT, PANTHENOL VÀ CÁC PHƯƠNG PHÁP PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG 1.1.1 Pyridoxin hydroclorid [23][38] Cấu trúc hoá học * HO CH3 HO HCI HO CgHuNOj HCl PTL : 205,64 T ên k h o a học: 5-Hydroxy-6-Meứiylpyridin-3,4-Dimetìianol hydroclorid T ín h c h ấ t : - Bột kết tinh trắng gần trắng - Nóng chảy 205°c kèm phân huỷ - Tan phần nước - Tan 100 phần ethanol (96%) - Thực tế không tan cloroform ether -Phổ tử ngoại [25] + Dung dịch 0,001% dung dịch acid hydrocloric 0,1M có cực đại bước sóng từ 288nm đến 296nm với E( 1%, 1cm) từ 425 đến 445 + Dung dịch 0,001% dung dịch đệm phosphat chuẩn 0,025M có cực đại bước sóng từ 248nm đến 266nm với E (l% ,lcm ) từ 175 đến 195 320nm đến 327nm với E (l% ,lcm ) từ 345 đến 365 Phương pháp định lượng : Tuỳ theo pyridoxin hydroclorid dạng nguyên liệu thành phẩm mà người ta sử dụng phương pháp định lượng cho thích hợp - Đối với pyridoxin hydroclorid dạng nguyên liệu: Dược điển Anh BP 1993 [23], Dược điển Châu Âu 1997 [29], Dược điển Nhật 1996[44], Dược điển Ấn Độ 1996 [32], Dược điển Trung Quốc 1997 [42] định lượng phương pháp chuẩn độ mơi trường khan Hồ tan lượng chế phẩm acid acetic khan thêm lưọfng định dung dịch thuỷ ngân II acetat chuẩn độ dung dịch acid percloric 0,lN.Phát điểm kết thúc phép định lưọng dùng phương pháp đo dùng thị màu tím tinh thể - Để đinh lượng dung dịch tiêm pyridoxin hydroclorid , số Dược điển [38],[44] dùng phương pháp đo quang phổ dựa phản ứng pyridoxin với 2,6 - dicloroquinon clorimid isopropyl alcol tạo phẩm màu indophenol, sau đo độ hấp thụ dung dịch bước sóng 650nm Cl + Cl — N: Cl H3C CH, OH Phương pháp ứng dụng để định lượng pyridoxin dung dịch tiêm,trong viên nén ,viên nang[38],[44] số dạng thuốc multivitamin Ngoài người ta áp dụng phương pháp đo quang phổ tử ngoại 291nm môi trường acid hydrocloric , 1M để định lượng pyridoxin thuốc tiêm viên nén Phương pháp thực đơn giản, nhanh , áp dụng cho chế phẩm khơng chứa chất phụ gia có hấp thụ quang làm ảnh hưởng tới định lượng pyridoxm [41] [32] Trong Dược điển Mỹ 23[38] ứng dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao(HPLC) với chương trình sau để định lượng pyridoxin hydroclorid dạng nguyên liệu dạng bào chế khác: ♦ Pha động: Trộn 20ml acid acetic khan với l,2g natri hexansulfonat khoảng 1400ml nước bình định mức 2000ml.Điều chỉnh pH dung dịch đến 3,0 acid acetic natri hydroxyd IM Sau thêm 470ml methanol thêm nước đến vạch , lắc lọc ♦ Dung dịch chuẩn nội: Hoà tan acid p-hydroxybenzoic pha động để thu dung dịch có chứa 5mg acid p-hydroxybenzoic Iml dung dịch chuẩn nội ♦ Dung dịch thử chuẩn: Được chuẩn bị cho dung dịch có chứa khoảng 0,05mg pyridoxin hydroclorid 0,05mg acid p-hydroxybenzoic Iml pha động ♦ Tiến hành sắc ký theo chương trình: Cột sắc ký; Lichrosorb RP Tốc độ dòng: 1,5ml/ phút Detector : ƯV- 280nm ( 25cm X 4,6mm,10 Ịim) 1.1.2 Naphazolin nitrat [16][36] Cấu trúc hoá hoc : HNO3 c , 4H ,n ,.h n o , PTL : 273,3 T ên k h o a h ọ c : 2-(l- naphthyl methyl) -2 - Imidazolin nitrat Dạng naphazolin hydroclorid : ’ C,4 H,4 N HCl PTL : 24 6,7 T ín h c h a t : - Bột kết tinh trắng gần trắng, không màu gần không màu - Tan nước, tan ethanol 96% - Tan không đáng kể cloroform, không tan ether - Dạng naphazolin hydroclorid tan ụr nước, ethanol 96% thực tế không tan ether.' - Phổ tỉr ngoại [25]:Trong dung dịch acid hấp thụ cực đại đỉnh 271, 281, 288, 291nm 281nm có E (l% ,lcm ) 321 Phương pháp định lượng : - Nguyên liệu dạng nitrat dạng hydroclorid Dược điển dùng phương pháp chuẩn độ mơi trường khan: Chế phẩm hồ tan acid acetic khan thêm lượng định thuỷ ngân acetat chuẩn 54 3.7.2.Cách thử : - Dung dịch chuẩn : Cân chúih xác khoảng ,lg panthenol (ĐC) vào bình định mức lOOml thêm khoảng 80ml nước lắc siêu âm khoảng phút để hồ tan, thêm nước vừa đủ, lắc Hút xác 5ml dung dịch vào bình định mức 25ml, thêm dung mơi động vìra đủ lắc Lọc qua màng lọc millipore 0,45|im.Tiến hành đo HPLC - Dung dịch thử : hút xác 5ml dung dịch chế phẩm vào bình đinh mức 25ml, thêm dung mơi động vừa đủ, lắc đều, lọc qua màng lọc milipore 0,45íim Nồng độ panthenol dung dịch tiêm khoảng 20mg% Tiến hàiih đo HPLC song song điều kiện với dung dịch chuẩn ♦ CÁCH TÍNH KẾT QUẢ: Cơng thức xác định hàm lưọfng hoạt chất có chế phẩm so với nhãn Sr-M, c V, 100 X ( % ) = - X 100% s, V , N Trong : - Sj., Sc diện tích trung bình pic tương ứng hoạt chất dung dịch thử dung dịch chuẩn - Mc lượng cân chuẩn (g) - c hàm lượng tương ứng chuẩn - N hàm lượng (%) hoạt châ't nhãn (g/lOOml) - Vj, Vp độ pha loãng dung dịch thử dung dịch chuẩn Trong phương pháp xây dimg trên, độ pha loãng : Pyridoxin hydroclorid = 5/100; V,, = /1 0 x /1 0 Naphazolin nitrat = 5/100; Vc = /1 0 x /1 0 = /1 0 x /1 0 ơiloipheniram in maleat Vt = 5/25; Ve Panthenol V^ = 5/25; V,, = /1 0 x /2 55 3.8 ÁP DỤNG PHƯƠNG PHÁP ĐỂ ĐỊNH LƯỢNG MỘT s ô MẪU LƯU HÀNH Tiến hành : Các điều kiện thao tác (cột, pha động, vận tốc dòng, detector ) tiến hành thực nghiệm phương pháp xây dựng mục 3.6.và mục 3.7 Đặc biệt ý chuẩn bị dung dịch chuẩn thử theo phương pháp xây dựng tuỳ vào hàm lượng hoạt chất chế phẩm khác để có cách pha loãng khác (nồng độ nằm khoảng tuyến túih xác định) cho phù hợp với quy trình định lượng xây dựng Với điều kiện sắc ký lựa chọn, thành phần khác chất phụ gia không ảnh hưởng đến kết định lượng Bảng Kết định lượng số chế phẩm lưu hành TEN MAU HÀM LƯỢNG SO V(3l NHÃN (%) Pyri V-ROHTO Napha 102,90 98,05 Chlor 102,90 ROHTO- KODOMO Soft 104,20 ROHTO- KODOMO Soft(VN) 100,60 ROHTO-ANTIBACTERIA 84,05 TOBIROB 100,90 NAPHACOLLYRE Pan 111,45 113,59 99,00 100,50 BÀN LUẬN : Chúng tơi hồn thành việc xây dựng phương pháp định lượng thời pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol thuốc nhỏ mắt chương trình chạy sắc ký đánh giá 56 phương pháp xây dựng dựa tiêu chí ; xác định khoảng tuyến tính, xác định độ lặp lại độ phương pháp định lượng Kết cho thấy phương pháp định lượng xây dựng phù hợp, cho phép tách định lượng trực tiếp hoạt chất chế phẩm thuốc nhỏ mắt sắc ký đồ cho hình ảnh pic tách tương đối rõ ràng, pic hẹp cân đối, độ phân giải tốt Khi thay đổi điều kiện sắc ký (thành phần tỷ lệ chất pha động,bước sóng phát ) pic khơng cân đối tách trước Chính lựa chọn điều kiện sắc ký nêu suốt q trình thí nghiệm Khoảng tuyến tính bốn chất chúng tơi xây dựng tương đối rộng (từ mcg/ml đến lOOmcg/ml) Cả chất cho ta phương trình hồi quy vói hệ số tương quan gần ( hệ số tương quan r =0,99916 đến ,00000) thể mối quan hệ tuyến tính chặt chẽ nồng độ chất với diện tích pic chúng Điều cho phép định lượng chất nồng độ khoảng tuyến tứứi khảo sát chất.Chúng chọn klioảng nồng độ thích hợp để định lượng là: Pyridoxin hydroclorid khoảng 5mg% Naphazolin nitrat khoảng 1,25mg% Qilorpheniramin maleat khoảng mg% Panthenol khoảng 20mg% Chúng khảo sát độ lặp lại tìmg chất thơng qua phân tích sai số tương đối kết phân tích thí nghiệm Kết quảthống kê hai mẫu thuốc nhỏ mắt cho thấy phương pháp định lượng xây dựng có sai số tương đối nhỏ (< 1,5%), độ lặp lại tốt, = 0,53% 1,25% chlorpheniramin maleat s =1,22% 1,49% naphazolin nitrat = 1,25% 1,35% pyridoxin hydroclorid 58 Chương KẾT LUẬN - ĐỂ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN : Chúng tơi hồn thành mục tiêu ban đầu cơng trình 'lìm điều kiện sắc ký phù hợp, ổn đinh để định lượng nhanh đồng thời hoạt chất chế phẩm thuốc nhỏ mắt chưng trình sắc ký Chương trình sắc k ý l : Định lưọng thời pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chloipheniramin maleat - Máy HPLC - Cột Lichrosorb RP 18 ; 250 X 4mm ; 5ụ.m - Pha động : Hoà tan l,lg natri heptansulfonat dung dịch hỗn hợp với tỷ lệ sau : Methanol 60 Nước 38 Acid acetic băng Diethylamin 0,1 -Tốc độ dòng : Iml/phút - Detector : v - 265nm - Thể tích tiêm : 20|.il Chương trình sắc ký : Định lượng panthenol - Máy HPLC - Cột lichrosorb RP 18 ; 250 X 4mm; 10 |.im - Pha động : dung dịch hỗn hợp với tỷ lệ sau : 59 Nước 97 Acetonitril Acid phosphoric 0,1 - Tốc độ dòng : Iml/phút - Detector : ưV - 21 Onm - Thể tích tiêm : 20f.ll Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời hoạt chất pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat phương pháp định lượng panthenol chế phẩm nhỏ mắt đa thành phần - Thời gian phân tích ngắn (dưới 12 phút) - Khoảng tuyến tính đủ rộng cho phép định lượng vói nồng độ chất cần khảo sát khoảng : Naphazolin nitrat 6-60 mcg/ml Qilorpheniramin maleat 10-1 OOmcg/ml Pyridoxin hydroclorid 50-400mcg/ml Panthenol 150-750mcg/ml Các phương trình hồi quy thiết lập cho thấy mối quan hệ tuyến tính chặt chẽ nồng độ chất với diện tích pic chúng (hệ số tương quan r = 0,99916 - 1,00000 - Phương pháp có độ lặp lại tốt : có sai số tirơng đối ngưỡng thống kê a = 0,05 khơng lớn 1,5% - Phương pháp có độ cao, đáng tin cậy : tỷ lệ tìm lại lượng chất thêm vào mẫu sau định lượng đạt trung bình cao từ 99,4% đến 101, 1% Áp dụng phươiig pháp xây dimg vào định lượng số chế phẩm thuốc nhỏ mắt có chứa pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chloipheniramin maleat, panthenol liai hành thị trường (06 chế phẩm) Kết khảo sát khẳng định phương pháp định lượng xây 60 dựng đáng tin cậy, góp phần vào việc kiểm tra chất lượng thuốc thực tế TCCS thuốc thực điều kiện thực nghiệm Việt Nam Về mặt ý nghĩa khoa học, cơng trình áp dụng phương pháp đại phương pháp HPLC vào định lượng trực tiếp bốn hoạt chất pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol chế phẩm thuốc nhỏ mắt đa thành phần chương trình sắc ký mà chưa có tác giả nước nghiên cứu Phương pháp nhanh chóng, có độ chúih xác cao, hiệu , thuận tiện cho sở trang bị máy HPLC, cho phép vừa định tính, định lượng chất có chất chuẩn đối chiếu hố học Đồng thời cho thấy khả phân tích hữu hiệu thuận tiện kỹ thuật tạo cặp ion sắc ký lỏng pha đảo Đề tài sở khoa học cho việc nghiên cứii xây dựng tài liệu pháp quy ứng dụng rộng rãi để kiểm nghiệm chế phẩm thuốc nhỏ mắt đa thành phần lưu hành thị trường nước ta Về mặt thực tiễn, cơng trìnli giúp cho sở sản xuất (công ty dược TRAPHACO, ) xây dựng tiêu chuẩn sở góp phần tiêu chuẩn hố thuốc nhỏ mắt có chứa thành phần nêu ' Điều quan trọng ,phù hợp với xu hưóìig xây dựng sở sản xuất đạt tiêu chuẩn GMP, góp phần vào cơng tác đảm bảo chất lượng thuốc, nliằm chăm sóc tốt sức khoẻ nhân dân ĐỂ NGHỊ : - Tiếp tục nghiên cứu phương pháp định lượng đồng thời thành phần nêu thuốc nhỏ mắt đa thành phần phương pháp quang phổ đạo hàm So sánh hai phương pháp định lượng - Đề nghị công ty dược TRAPHACO trang bị máy sắc ký lỏng hiệu cao để tiện việc kiểm tra chất lượng thuốc TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ mơn Hố phân tích Phạm Gia Huệ, Trần Tử An Hố phân tích (các phương pháp hố lý phân tích) Tnrờng Đại học Dược Hà Nội - 1998 Phạm Gia Huệ, Nguyễn Tiến Khaiih M ột sốphư ơìig pỉìáp hố lý dùng pììân tích dược - 1990 Nguyễn Tiến Khaiih Thống kê íùig dụng Iigàìiỉi dược Trường Đại học Dược - 1993 A.sắc kỷ lỏng cao áp (Sắc ký lỏng phân giải cao-H PLC} Tmng tâm giáo dục phát triển sắc ký Việt Nam (EDC VN) Võ Thị Thu Thuỷ Định Ỉượỉig đồng thòi tììànỉì pỉìầìi dexaniethason, chloramphenicol naphazoliii m ột s ổ chếpììẩnì fihỏ m pỉnửXỉìíỉ pháp sắc kỷ lỏìig hiệu cao Cơng trình tốt nghiệp Thạc sĩ Dược học 1998 Thông báo kiểm nghiệm số 2+3 -1996 Tiêu cỉmẩti cììđt ỉượng vù phươìiiị pìiủp kiểm tra chất lượng tìiuốc nhỏ mắt V-ROHTO ' ' Cơng ty ROHTO - METHOLATƯM (Việt Nam) Co., Ltd Tiêu chuẩỉi chất ỈKcpig phươìig pìiâp kiểm tra cìiất Iưmiẹ tìiuốc nhỏ mắt ROH TO-KODOM O Soft ' ’ ' Công ty ROHTO - METHOLATUM (Việt Nam) Co., Ltd 9.Tiêu chuẩn sở viên nén Fafemin-fort Công ty dược phẩm & TBVT y tế Bộ giao thông vận tải (TRAPHACO) 10 A nalysis o f coiigìi mix l)y ỉiigìì pressure liquid cìironiatograpìiy National pharmaceutical control bureau Ministry of helth Malaysia 11 Analytical abstracts Nov 1997; Vol 59; 11G74; p 1635 12 A nalytical abstracts Feb 1997; Vol 59; 2G 11; p.231 13 Analytical abstracts Aug 1997; Vol 59; 8G20; p 1181 14 Analytical abstracts Aug 1997; Vol 59; 8G25; p.l 181 15 Analytical abstracts Sep 1997; Vol 59; 9G140; p 1358 16 Analytical abstracts Feb 1997; Vol 59; 2G37; p.235 \1 Analytical abstracts Oct 1996; Vol 58 ; 10G83; p 875 {^ A n alytical abstracts Sept 1991; Vol 53; 9G132; p 966 19 British Pharmacopoeia 1993 ; p 147 20 Britisii Pharmacopoeia 1993\ p.207 21 British Piiarniacopoeia 1993; p.441,p.442 22 British Pharmacopoeia ]993; p.831 23 British Pharm acopoeia 1993; p.565 24.Bosch, E.;Boii, P; Allemaiin, H.; Roses,M Retention o f ionizable conipounds on HPLC methanol/ w ater and tiie pH values ofhiijfers PH scale in the Anal Chem.; 15 Oct., 68(20); p.3651-3657 25 1996 Clarke's Isolation and Identificatioii of drugs- Second Edition, 26 Eppeit, G J HPLC- troubleshooting P ar Air on board; p a r H ow I de^as the m obile phase Labor Praxis; Nov 1996, 20(11) ;p 44-47, p.24-26 27 European Pharm acopoeia - Third Edition - 1997; p 722 28 European Fliarniacopoeia - Third Edition - 1997; p 1217 29 European Pharmacopoeia - Third Edition - 1997; p 1410 30 Indian Pharm acopoeia - 1996; p 176, 177 31 Indian Pharmacopoeia - 1996; p.554 32 Indian Pharmacopoeia - 1996', p.644, p.645 33 J H.Knox, JJiirand Mechanism o f Zwitterion- p a ir ciironiatography, 1981, V ol.218,355 34.Sandie Lindsay Higỉi performance liquid cỉìroniatograpỉiy - Second edition 35 The United States pharmacopeia 23 - the national foiTnulary 18; p 351, 352, 353 36 Tỉie United States pỉiarnìacopeia 23-\he national foiTnulaiy 18; p 1052 37 The United States piiarniacopeia 23-the, national foiTnulary 18; p 1154 38 The Uniti’d States pharmacopeia 23-the national foiTnulaiy 18; p 1347 39 Tiie United States pharmacopeia 23-the national foiTnulaiy 18; p 1774 40 Piiarmacopoeia o f the People 's Republic o f China 1997; p 402, 403 41 Pharniacopoeia o f the People's Republic o f China 1997; p 646, 647 42 The Japanese pharmacopoeia - Thirteenth Edition; p 283, 284 43 The Japanese piiarmacopoeia - Thirteenth Edition; p 523, 524 44 The Japanese pỉiarniacopoeia - Thirteenth Edition; p.604 45.Rose, M.;Canal, I.; Allemarm, H.; Siigur,K.;Bossch, E.: Retention o f ionizable conipoiifids on HPLC Effect o f pH , ionic strength and m obile phase composition o f weak acid Anal Chem.; dec 1996;68(230); p 4094-4111 46 Understanding your cỉìenistatioiì Hewlett Packard; 1997; p.252,253 CÁC ĐẶC TRƯNG THỐNG KÊ ■ _ * Giá trị trung bình : Độ lệch chuẩn ri x = l ỉ , i : i=l n -1 Sai số chuẩn Sai số tương đối : s - íS X X 100 TIÊU CHUẨN C SỞ SỞ Y TẾ BỘ GTVT Thuốc nhỏ mắt - Đ S - 92 - 97 CÔNG TY DƯỢC & TBVT APOL C ó hiệu lực từ : Y TẾ TR APH A CO 18 - - 1997 I-YẼU CÂU KỶ THUẬT l.l.C ông thức điều chế: Naphazolin nitrat Chlorpheniram in maleat Pyridoxin hydroclorid Panthenol Natri clorid Nước cất để pha thuốc tiêm Hai mươi lăm miiigam 0,025g Mười m iligam Một trăm m iligam Một trăm m iligam ,0 g 0,1 OOg ,1 0 g Ba trăm miỉigatn 0,300g lOOml Vừa đú trăm mililit 1.2 Nguyên liệu: Naphazolin n itr a t: Đạt tiêu chuẩn Dược điển Anh 1993 Chlorpheniram in m a le a t: Đạt tiêu chuẩn Dược điền Mỹ XXIII Pyridoxin hydroclorid : Đạt tiêu chuẩn Dược điển Anh 1993 P a n th en o l: Đạt tiêu chuẩn Dược điển Mỹ XXIII Natri clorid : Đạt tiêu chuẩn Dược điển Việt nam I I , tập Nước cất để pha thuốc tiêm : Đạt tiêu chuán Dược điền Việt nam I I , tập Các chất phụ khác : Đạt tiêu chuẩn dược dụng 1.3 Chất lượng thành phẩm: 1.3.1: Tính chất: Dung dịch trong, không màu 1.3.2 Độ : Đạt 52 TC N 345 - 87 Thuốc nhỏ mát - độ 13 PH : 5,0 - 7,0 1.3.4 Thể tích : Đạt 52 TC N -1 - 87 1.3.5 Định tính : Trong sắc ký đồ phần định lượng, thời gian lưu hoạt chất dung dịch thử phải phù hợp với thời gian lưu chúng dung dịch chuẩn 1.3.6 Định lượng : Hàm lượng Naphazolin nitrat Cj Hj N H N O , Chlorpheniram in maleat C16H19CIN2 C4H4O4 , Pyridoxin hydroclorid CgHjjNOj HCl , Panthenol C9H19NO4 ch ế phẩm phải đạt 90,0 đêri 110,0 % so với hàm lượng ghi nhãn 1.3.7 Đô vô khuẩn : Phải đạt tiêu chuần vô khuẩn II - PHƯƠNG PHÁP THỬ 2.1 2.2 2.3 2.4 Tính chất: Bằng cảm quan viên phải đạt yêu cầu nêu Độ : Thử theo 52TCN 345 - 87 PH : Thử theo DĐVN II - Tập ( phụ lục 3.15 ) Thể tích : Thử theo 52TCN 107 - 87 2.5 Định tính : Thời gian lưu hoạt chất dung dịch thử dung dịch chuẩn SÁC ký đồ phần định lượng phải giông 2.6 Định lượng : HPLC 2.6.1 Pyridoxin hydroclorid , Naphazolin nitrat Chlorpheniram in m a le a t: 2.6.1.1 Hóa chất thuốc thử : Theo BP 93 DĐVN II , tập ( Dùng loại tinh khiết cho sác k ý ) - M ethanol - Acid acetic băng - Diethylam in - Natri heptansulfonat 2.6.1.2 Điêu kiện sác ký : - Máy HPLC - C ộ t : RP 18 { 250 X 4mm , Ịiin ) - Detector : u v - 265nm - Tốc độ dòng : Im l /phút - Thể tích tiêm : 20 - Pha động : Hòa tan l , l g natri heptansulfonat lit hỏn hợp M ethanol - dung dịch Acid acetic % ( k l/t t ) - Diethylam in theo tỷ ỉệ ( 600 : 400 : ) Đuổi k h í 2.6.1.3 Cách t h : - Dung dịch thử ( T l ) : Định lượng Pyridoxin HCl Naphazolin n itr a t Hút xác 5ml dung dịch ch ế phẩm vào bình định mức lOOml , thêm dung dịch acid acetic 1% ( k l/t t ) vừa đủ , trộn đêu Lọc qua màng ỉọc m ilipore 0,45 ịiin Tiến hành đo HPLC song song điêu kiện với dung dịch chuẩn - Dung dịch thử ( T2 ) : Định lượng Chlorpheniram in m aleat Hút xác 5ml dung dịch ch ế phẩm vào bình định mức m l, thêm dung dịch acid acetic 1% ( k l/t t ) vừa đủ , trộn đêu Lọc qua màng lọc m ilipore 0,45 Ịiin Tiên hành đo HPLC song song điêu kiện với dung dịch chuẩn - Dung dịch chuẩn : Cân xác khoảng 0,05g chất đơi chiếu ( ĐC ) Chlorpheniram in m a lea t, ,lg Pyridoxin hydroclorid ( ĐC ) 0,025g Naphazolin nitrat ( ĐC ) vào bình định mức 50ml Thêm khoảng 35 ml nước lắc siêu âm khoảng phút để hòa tan thêm nước vừa đủ Trộn đêu Hút xác Im ỉ dung dịch vào bình định mức 50ml , thêm dung dịch acid acetic 1% vừa đủ , trộn Lọc qua màng lọc m ỉlipore 0,45 ^im Tiến hành đo HPLC Hàm lượng ( mg ) hoạt chất lOOml ch ế phẩm tính theo còng thức : St X me X c A ( mg ) = Trong : - H-100% Sex V - S t , S c Lần lượt diện tích Píc tương ứng hoạt chất dung dịch chuẩn dung dịch t h - m c Lượng cân chuấn ( mg ) - c Hàm lướng tương ứng chuẩn - V Độ pha loãng V = 500 Chlorpheniram in m aleat ♦ V = 125 Pyridoxin HCI Naphazolin nitrat 2.6.2 P a n th en o l: 2.6.2.I Hóa chất thuốc thử ( T T ) : Theo DĐVN I I , Tập ( Dùng loại tinh khiết sắc ký ) - Acid phosphoric 85% 2.Ó.2.2 Điêu kiện sác ký : - Máy HPLC - C ột: RP 18 ( 250 X4mm , (am ) - Detector : u v - 210nm - Tốc độ dòng : Im l /phút - Thể tích tiêm : 20 |il - Pha động : Hỗn hợp đuổi khí nước - acid phosphoric ( 1000: ) 2.Ó.2.3 Cách th : - Dung dịch thử : Hút xác 5ml dung dịch chế phẩm vào bình định mức m l, thêm dung mòi động vừa đủ , trộn đêu Lọc qua màng lọc m ilipore 0,45 |am Tiến hành đo HPLC song song điều kiện vói dung dịch chuẩn - Dung dịch chuẩn : Cân xác khoảng ,lg Panthenol đối chiếu ( ĐC ) vào bình định mức lOOml Thêm khoảng 80 mỉ nước lác siêu âm khoảng phút để hòa tan thêm nước vừa đủ Trộn đêu Hút xác 5ml dung dịch vào bình định mức 25ml , thêm dung môi động vừa đủ , trộn đêu Lọc qua màng lọc miHpore 0,45 p.m Tiến hành đo HPLC Hàm lượng tng Panthenol lOOmi ch ế phẩm tính theo theo cơng thức : St Xlĩic X c A ( mg ) = - X 100% Sc Trong : - S t , Sc Lần lượt diện tích Píc tương ứng hoạt chất dung dịch chuẩn dung dịch thử - m c Lượng cân chuẩn ( mg ) - c Hàm lượng tương ứng chuẩn 2.7 Độ vô khuẩn : Thử theo DĐVNII, tập III ĐÓNG GÓI, GHI NHÃN, BẢO QUẢN Đóng gói : Đóng lọ m l, lO m l, m l Nhãn : Rõ ràng, qui chế Bảo quản: Nơi khô, m át,tránh ánh sáng Hạn dùng: 24 tháng Hà nội, ngày 18 tháng năm 1997 PHÓ Q IÁ ^ E tỌ C CÔNG TY ^D$ Vũ Thị Thuận BỘ Y TẾ VĨÊN K IỂM N G H IỂM C Ộ N G HƠÀ XÃ HỘ I C H Ủ N G H ĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc ^ 48 Hai Bà Trưng Hà nội ĐT: 255471,255341 *Ỉỉi ỉ