Nghiên cứu cây chè dây sapa ( ampelopsis cantoniensis ( hook et arn ) planch vitaceae )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI ♦♦♦♦ VƯƠNG THỊ HỒNG VÂN NGHIÊN CỨU CÂY CHÈ DÂY SAPA (Ampelopsis cantonỉensis (Hook, et Arn.) Planch Vitaceae) Chuyên ngành: Dược Iiệu-dược học cổ truyền Mã số: 03.02.03 LUẬN VÃN THẠC s ĩ DƯỢC HỌC KHÓA (2000-2002) Người hướng dãn : GS.TS PHẠM THANH KỲ Nơi thực : BỘ M ÔN DƯỢC LIỆU TRƯỜNG ĐH DƯỢC HÀ NỘI HÀ NỘI - 2002 Stffccảm , ơn* Trong trình nghiên cứu đề tài nhận quan tâm hướng dẫn tận tình thầy Để tỏ lòng biết ơn tơi xin chân thành cảm ơn: GS.TS Phạm Thanh Kỳ người thầy hết lòng giúp đỡ hướng dẫn tơi hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn: GS Vũ Văn Chuyên KS Nguyễn Văn Chăm - Bộ môn giải phẫu - Trường ĐH Y Hà Nội TS Đỗ Ngọc Thanh - Phòng thí nghiệm trung tâm - Trường ĐH Dược Hà Nội PGS TS Chu Đình Kính - Viện Hóa học TS Trần Vân Hiền - Phòng Đơng y thực nghiệm - Viện Y học cổ truyền Việt Nam Tôi xin chân thành cảm ơn: PGS TS Phạm Quang Tùng - Phòng sau đại học Các thầy cô môn Dược liệu, cán Phòng đào đạo sau đại học mơn, phòng ban khác trường Đại học Dược Hà Nội Các cán Phòng Đơng y thực nghiệm -Viện Y học cổ truyền Việt Nam Đã tạo điều kiện để tơi hồn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn DS Vương Thị Hồng Vân MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Phần I TỔNG QUAN 1.1.Vị trí phân loại, phân bố đặc điểm thực v ậ t 1.1.1 Vị trí phân loại, phân bố đặc điểm thực vật họ Nho (Vitaceae) 1.1.1.1 Vị trí phân loại phân bố họ N h o 1.1.1.2 Đặc điểm thực vật họ N h o 1.1.2 Vị trí phân loại, phân bố đặc điểm thực vật chi Ampelopsis 1.12.1 Vị trí phân loại chi Ampelopsis 1.1.2.2 Số loài phân bô' chi Ampelopsis 1.1.23 Đặc điểm thực vật chi Ampelopsis 1.1.3 Đặc điểm thực vật, phân bố chè dây (Ampelopsis cantoniensis Planch.) 1.2 Những nghiên cứu thành phần hóa học 1.2.1 Những nghiên cứu thành phần hóa học có chi Ampelopsis 1.2.2 Những nghiên cứu thành phần hóa học lồi Ampelopsis cantoniensis Planch 10 1.2.3 Những nghiên cứu myricetin 1.2.5 Những nghiên cứu dihydromyricetin 1 1 1.3 Những nghiên cứu vê tác dụng sinh học công d ụ n g 12 1.3.1 Những nghiên cứu tác dụng sinh học số loài Ampelopsis 1.3.2 Những nghiên cứu tác dụng sinh học chè dây (A cantoniensis Planch.) 14 1.3.3 Công dụng 15 1.3.3.1 Kinh nghiệm dân gian 15 1.3.3.2 Kết nghiên cứu tác dụng điều trị loét dày - hành tá tràng chế phẩm Ampeỉop sản xuất từ chè dây (A cantoniensis Planch.) 16 Phần II NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ú u 18 2.1 Nguyên liệu 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Nghiên cứu thực vật 18 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hoá học 18 2.2.3 Nghiên cứu tác dụng sinh học 19 2.2.3.1 Tác dụng chống oxy h ó a 19 2.2.32 Tác dụng ức chế khối u flavonoid toàn phần 21 Phần III THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 23 3.1 Kết nghiên cứu vê thực vật 23 3.1.1 Đặc điểm hình thái chè dây Sa Pa 23 3.1.2 Đặc điểm vi học chè dây Sa Pa 26 3.1.2.1 Đặc điểm vi phẫu thân 26 3.1.2.2 Đặc điểm vi phẫu 26 3.1.2.3 Đặc điểm bột 27 3.2 Kết nghiên cứu thành phần hóa học 29 3.2.1 Định tính nhóm chất chè dây phản ứng hoá học 29 3.2.2 Định tính flavonoid SKLM 36 3.2.3 Định lượng flavonoid toàn phần 38 3.2.4 Định lượng tanin 39 3.2.5 Chiết xuất flavonoid toàn phần chè dây Sa Pa 41 3.2.6 Phân lập chất chè dây Sa Pa 42 3.2.7 Nhận dạng SPj SP 42 3.2.8 Nhận dạng SP 46 3.3 Kết thử tác dụng chống oxy hóa ức chê khối u 48 3.3.1 Kết thử tác dụng chống oxy hóa 48 3.3.1.1 Thử tác dụng chống oxy hóa bảo vệ tế bào não chuột MF, MFS, SP ị SP2 48 3.3.1.2 Xác định hoạt tính dọn gốc tự anion superoxide 2- ' MF, MFS, SPj SP2 54 3.3.1.3 Thử tác dụng flavonoid toàn phần đến hàm lượng MDA não gan chuột chịu sốc điện stress tâm lý 57 3.3.2 Kết thử tác dụng ức chế khối u flavonoid toàn phần 60 Phần IV BÀN LUẬN VỂ KÊT QUẢ 65 4.1 Về mặt thực vật 65 4.2 Về mặt hóa học 65 4.3 Về mặt tác dụng sinh học Phần IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHU LUC 6 70 DANH MỤC CÁC BẢNG BlỂU TRONG LUẬN VĂN STT Trang Nội dung Ký hiệu Bảng 1.1 Số loài chi họ Nho (Vitaceae) Bảng 1.2 Thành phần hóa học có số lồi chi Ampelopsis Bảng 1.3 Một số flavonoid chi Ampelopsis Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất hữu 35 Bảng 3.2 Vị trí, mầu sắc vết flavonoid SKLM 37 Bảng 3.3 Kết định lượng flavonoid toàn phần 39 chè dây 1 Bảng 3.4 Kết định lượng tanin chè dây 40 Bảng 3.5 Kết SKLM SKG SPj SP 43 Bảng 3.6 So sánh SPị với Fị 44 Bảng 3.7 So sánh SP với F 45 Bảng 3.8 Độ ức chế nồng độ khác MF đến 2 49 phản ứng peroxy hóa lipid dịch đồng thể tế bào não chuột Bảng 3.9 Độ ức chế nồng độ khác MFS đến 49 phản ứng peroxy hóa lipid dịch đồng thể tế bào não chuột 13 Bảng 3.10 Độ ức chế nồng độ khác SPj đến phản ứng peroxy hoá lipid dịch đồng thể tế bào não chuột 50 14 Bảng 3.11 Độ ức chế nồng độ khác SP đến 50 phản ứng peroxy hoá lipid dịch đồng thể tế bào não chuột 15 Bảng 3.12 Hàm lượng MDA thời điểm khác có 52 mặt MF 16 Bảng 3.13 Hàm lượng MDA thời điểm khác có 53 mặt MFS 17 Bảng 3.14 Tác dụng dung dịch MF tạo thành 54 anion superoxide hệ thống xanthine/xanthine oxidase (dd thử MF lmg/lm l) 18 Bảng 3.15 Tác dụng dung dịch MFS tạo thành 55 anion superoxide hệ thống xanthine/xanthine oxidase (dd thử MFS lmg/lm l) 19 Bảng 3.16 Tác dụng dung dịch SPj tạo thành 55 anion superoxide hệ thống xanthine/xanthine oxidase (dd thử SPj 0,5mg/ml) Bảng 3.17 Tác dụng dung dịch SP tạo thành 56 anion superoxide hệ thống xanthine/xanthine oxidase (dd thử SP 0,25mg/lml) 2 Bảng 3.18 Hàm lượng MDA não gan chuột sau sốc điện 59 2 Bảng 3.19 Hàm lượng MDA não gan chuột sau stress tâm 59 lý 23 Bảng 3.20 Kết đo MDA gan thận chuột 64 DANH MỤC CÁC HÌNH TRONG LUẬN VĂN STT Hình 1.1 Nội dung Trang Vị trí chi Ampelopsis hệ thống phân Ký hiệu loai thưc vât Hình 3.1 Ảnh cành chè dây Sa Pa 25 Hình 3.2 Ảnh cành chè dây Sa Pa có hoa (tiêu 25 khơ) Hình 3.3 Ảnh cành chè dây Sa Pa có mang hoa 25 Hình 3.4 Ảnh vi phẫu thân 28 Hình 3.5 Ảnh vi phẫu 28 Hình 3.6 Ảnh bột 28 Hình 3.7 SKLM flavonoid tồn phần 47 Hình 3.8 Sơ đồ chiết xuất flavonoid tồn phần 41 Hình 3.9 Vị trí chất phân lập 47 Hình 3.10 Vết SPị so với myricetin 47 Hình 3.11 Vết SP so với dihydromyricetin 47 13 Hình 3.12 Tinh thể SPj 47 14 Hình 3.13 Tinh thể SP 47 15 Hình 3.14 Tinh thể SP 47 16 Hình 3.15 Biểu đồ so sánh hàm lượng MDA lô điều trị 52 1 1 2 MF lô đối chứng thời điểm khác 17 Hình 3.16 Biểu đồ so sánh hàm lượng MDA lô điều trị 53 MFS lô đối chứng thời điểm khác 18 Hình 3.17 Biểu đồ so sánh tỷ lệ chuột có u 13 tuần 62 thí nghiệm 19 Hình 3.18 Biểu đồ so sánh số lượng u 13 tuần thí 62 nghiệm Hình 3.19 Ảnh chuột gây khối u 63 Hình 3.20 Ảnh chuột điều trị MF 63 Hình 3.21 Ảnh chuột số lơ đối chứng 63 23 Hình 3.22 Ảnh chuột số lơ điều trị 63 24 Hình 3.23 Ảnh chuột số lơ đối chứng 63 25 Hình 3.24 Ảnh chuột số lô điều trị 63 2 2 1 CÁC CHỮ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU ĐCSH Đối chứng sinh học dd Dung dịch E Mật độ quang EDTA Ethylen diamin tetraacetic acid hh Hỗn hợp HP Helicobacter pylori IR Infrared (hồng ngoại) KHTN Khoa học tự nhiên MDA Malonyl dialdehyd MS Mass Spectrum (phổ khối) NBT Nitro Blue Tetrazolium PBS Đệm phosphate SKG Sắc ký giấy SKLM Sắc ký lớp mỏng T1C Nhiệt độ nóng chảy TT Thuốc thử uv Ultraviolet (tử ngoại) XOD Xanthine oxidase Dao động biến dạng V Dao động hóa trị 81 PHỤLỤC FLAVONOID SP2 FLAVONOID F2 Phổ u v Phổ u v Phổ IR P h ổ IR Phổ MS 82 ABS ABS ABS 88448 07092 40292 0005 20 0.00 NM NM NM 292.000 229.000 209 000 Mau SP2 /EtOH Ga i 11 92 SBU 11 Sep 2001 2.0 0 0 ABS B.BBB0 -> 0 0 B a se lin e E rase U ie u R e-sc ale Zoom Use t h e g r a p h i c s c u r s o r , t r a c k , s l o p e _ 500.00 0 0 NM PHỔ TỬNGOẠI CỦA SP2 Label 0 -> More 0 0 0 Rfl Ill a V e e n Q t h Scan ReadSamples Tabulate +-*Scans S c a n d i r e c t o r y : VIEW S t a r t w : 200 nm End u : 400 nm O v e r l a y s c a n s : [Yes] A:\UORK_003 ( 600) Print ■* I t «- I \ U)0 R K _Ũ Ũ w1 Exit Scan fibs Pick Q 531 pk Scatter NetA Method A u t o p r i n t : [No ] Autosave: [No ] S c a n s per s a m p l e : I n t e r v a l : 0 [s e c ] Zoom ZoomOut Functions: Trace Function Print HELP Quit Method name: A:\DEFAULT A u t o s a v e n a m e : [ fì: \ ] s c A N s S a m p ing d e v i c e : N o n e Scan speed: 600 n m / m i n Autoscale Annotate Print Scan S m o o t -h i n g : -15 p1 -oints , Ũ.4500 MAU 292.0 SaveClear F2 [fibs] _ I _ I I— ■0 220 Wavelength PHỔ TỬNGOẠI CỦA F2 (nm) 40 0.0 P E R K IN ELMER « T 32 728.1 y.T -0 4000 3500 3000 2500 2000 PHỔ HỔNG NGOẠI CỦA SP2 01/09/11 08:22 Phong TNTT-DH Duoc Y: scan, 4.0cm-l, smooth Mau SP2 ~r > 1000 cnr1 Use name: Thanh Number of background scans: 32 Resolution: 4000 Sample gain: 1.0 Mừror velocity: 0.6329 Aperture: 100.00 Phase: KBr Disc Date: 2, Decembre 2002 PHỔ HỒNG NGOẠI CỦA F2 F2 (Van) FT- IR NEXUS F ile Operator A cquired Instrum ent S a m p l e Name M isc In fo V i a l Number C:\HPCHEM\1\DATA\N-DIP526.D P h o n g Cau t r u e , V i e n Hoa h o c 18 O c t 101 : pm u s i n g A c q M e t h o d N - D I P 9 B MS Mau SP2 Solvent: CH30H a fif PHỐ KHOI CỦA SP2 87 PHỤ LỤC SP3 Phổ uv Phổ IR Phổ MS 88 ABS ABS 39802 23245 -3 E -5 ABS NM NM 266 667 215.556 Mau S P3-H U an G a in 100 B a s e l in e OFF SBW P age 26 Nou 2002 2.0 450.00 MU DISPLAY DATA 2.0000 0 2000 8000-1 0 0.0000 20 0.00 - -3 0 0 ABS 0 8 -> 0 0 B aselin e E rase U ieu R e-sc ale Zoom Use t h e g r a p h i c s c u r s o r , t r a c k , s l o p e _ 0 0 m 353555 Label PHỔ TỬNGOẠI CỦA SP3 0 0 -> More 0 PER KIN ELMER 02/11/26 15:01 Phong TNTT-DH Duoc X: scan, 4.0cm-l, flat, smooth May SP - H Van PHỔ HỒNG NGOẠI CỦA SP3 « F ile Operator Acquired Instrum ent S a m p l e Name M isc In fo V i a l Number c :\HPCHEM\1\DATA\M-DIP43.D P h o n g Cau t r u e , V i e n h o a h o c Oct 102 1 : am u s i n g A c q M e t h o d N - D I P 9 B MS SP3 S o l v e n t : CH30H , , PHỔ KHOI CỦA SP, o 109 (5.566 m i n ) : M-DIP43.D 91 S P3 abund m/ z m/ z abund 11575 15 1280 50 14848 62 05 51.15 2116 3922 523 52 15 15 53 15 12320 64 306 54 2269 65 05 1218 5 15 6685 66 05 4672 15 67 1260 6306 15 3103 68 6306 15 484 69.15 5859 59.15 15 436 1270 15 60 4375 1626 ji ( 6 m i n ) : M - D I P D SP3 m/ z 15 73 05 15 75 76.05 77 05 78 05 79 05 80 05 81 82 15 abund 374 1502 369 127 582 5068 4478 17616 1830 1239 948 m/ z 83 15 84 05 85 15 86 05 87 89 05 90 05 05 92 93 94 abund 1664 1309 1729 208 541 111 117 374 161 626 385 m/ z 134.95 136.05 137.05 138.05 139.15 140.15 141.05 141.95 143.15 144.05 145.05 abund 6518 613 1312 273 253 180 1465 1088 266 143 105 m/ z abund 95.05 3061 96 05 4491 97 05 2816 98 655 404 99 05 100.05 132 234 101.05 103.05 101 104.05 121 05 05 269 06 05 854 n 109 (5 6 m i n ) : S P3 m/ z abund 107.05 4308 108.05 795 109.05 736 110.05 372 111.05 702 112.15 404 113.05 5357 114.05 411 115.05 310 116.05 143 119.05 189 M-DIP43 D m/z 121.15 122.05 123 05 124.05 125.05 126.05 127.05 129.05 130.15 133.05 134.05 abund 327 201 1568 4273 16600 1491 384 794 148 161 327 m/ z 147.05 149.05 150.05 151.05 152.05 95 154.05 155.05 05 05 165.05 m/ z 167.05 169.95 170.95 172.05 181.05 184.00 185.10 207.00 209.00 90 213 10 m/ z 226.00 227.10 236.20 256.20 abund 207 133 135 245 abund 183 603 165 419 2414 55344 5083 702 102 264 134 abund 285 57656 4837 764 141 304 302 169 204 227 157 m/ z abunđ 92 Library Q uality ID Searched : C:\DATABASE\WILEY275.L : 93 :Benzoic acid , , , - trihydroxy$$ G a l l i c a c i d $ $ - T r i h y d r o x y b e n z o i c a c i d $$G a l l i c a c i d , t e c h $ $ K ys l i n a g a l l o v a $$ K y s e l i n a 93 PHỤ LỤC Phụ lục 4: Bảng tổng kết phát triển u 13 tuần ỏ lơ chuột thí nghiệm SP ... myricetin khơng có tác dụng [23] 1.3.2 Những nghiên cứu tác dụng sinh học chè dây (A cantoniensis Planch .): - Theo kết nghiên cứu nhóm Phạm Thanh Kỳ [13,17,18]: Cao khô chè dây flavonoid: myricetin,... cantoniensis Việt Nam có lồi: A brevipedunculata (Maxim .) Trautv A cantoniensis (Hook, et Arn. ) Planch A heterophylla Sieb et Zucc A japonica (Thunb .) Makino Các lồi có Nam Trung Quốc, Triều Tiên,... (7 ,4 %) dihydromyricetin (1 ,7 %) [17] tanin polyphenol [35] 10 1.2.2 Những nghiên cứu thành phần hóa học lồi Ampelopsis cantoniensis Planch. : 1.2.2.1 Nghiên cứu nước ngoài: Nghiên cứu A cantoniensỉs