Nghiên cứu tác dụng của polyphenol cây chè dây (ampelopsis cantoniensis) trên một số chỉ số lipid máu và mô bệnh học của xơ vữa động mạch ở thỏ uống cholesterol

Đề tài nghiên cứu nhằm mục đích: Khảo sát tác dụng của polyphenol cây chè dây đến một số chỉ số lipid và hàm lượng malonyl dialdehyd trong huyết tương ở thỏ uống cholesterol; bước đầu khảo sát tác dụng của polyphenol chè dây đến mô bệnh học mảng xơ vữa động mạch ở thỏ uống cholesterol.

TẠP CHÍ KHOA HỌC, Đại học Huế, Số 24, 2004 NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA POLYPHENOL CÂY CHÈ DÂY (AMPELOPSIS CANTONIENSIS) TRÊN MỘT SỐ CHỈ SỐ LIPID MÁU VÀ MÔ BỆNH HỌC CỦA XƠ VỮA ĐỘNG MẠCH Ở THỎ UỐNG CHOLESTEROL Nguyễn Thị Băng Sương Trường Đại học Y khoa, Đại học Huế I ĐẶT VẤN ĐỀ Rối loạn lipid máu bệnh lý phổ biến giới, tỷ lệ mắc bệnh cao cộng đồng, hậu thường dẫn đến xơ vữa động mạch Tai biến xơ vữa động mạch phức tạp, đó, tai biến tim mạch phổ biến có tỷ lệ tử vong cao Hiện nay, xơ vữa động mạch nhiều tai biến khác bệnh lý phổ biến khơng nước có kinh tế phát triển mà nước phát triển, có Việt Nam [3] Điều trị có hiệu hội chứng tăng lipid máu hạn chế phát triển xơ vữa động mạch ngăn ngừa tai biến phức tạp [9] Hiện có nhiều thuốc điều trị hội chứng tăng lipid máu Các thuốc có hiệu lực tốt gây nhiều tác dụng phụ rối loạn tiêu hóa, đau đặc biệt, chúng gây độc cho tế bào gan [7] Ở Việt Nam nước giới, công trình nghiên cứu tác dụng hạ lipid máu khả chống oxy hóa chè xanh, ngưu tất, rau diếp cá, mắc rạc công bố nhiều [1], [2], [4], [5], [6], [8] Trong chè dây có tác dụng hạ lipid máu tốt chưa nghiên cứu, tiến hành đề tài “Nghiên cứu tác dụng polyphenol chè dây (Ampelopsis cantoniensis Planch) số số lipid máu mô bệnh học xơ vữa động mạch thỏ uống cholesterol” với mục tiêu: Khảo sát tác dụng polyphenol chè dây đến số số lipid hàm lượng malonyl dialdehyd huyết tương thỏ uống cholesterol Bước đầu khảo sát tác dụng polyphenol chè dây đến mô bệnh học mảng xơ vữa động mạch thỏ uống cholesterol 35 II CHẤT LIỆU, ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Chất liệu nghiên cứu: Hoạt chất polyphenol chè dây chiết xuất theo qui trình chuẩn Thỏ thực nghiệm thỏ đực, chủng Orytolagus cuniculus, 12 tuần tuổi, khỏe mạnh, có trọng lượng 1,8 - kg/ Cholesterol tinh khiết, acid thiobarbituric, muối Mohr, KCl, acid ascorbic, kit định lượng: cholesterol, triglycerid, LDL - C, HDL – C Phương pháp nghiên cứu: 2.2 Mơ hình thực nghiệm: Cho thỏ uống 0,5 gam cholesterol/kg thân trọng ngày * Chia nhóm thỏ: 30 thỏ đực chia làm nhóm ( I, II, III, IV, V), nhóm con: + Nhóm I: Nhóm chứng, dinh dưỡng bình thường, không cho thỏ uống cholesterol dung dịch polyphenol + Nhóm II: Nhóm thỏ uống cholesterol đơn + Nhóm III, IV, V: uống cholesterol hàng ngày, sau uống thêm dung dịch polyphenol theo liều lượng: 50mg/kg/ngày, 100mg/kg/ngày, 150mg/kg/ngày • Nhóm III: 50 mg polyphenol/ kg thân trọng/ ngày • Nhóm IV: 100 mg polyphenol/ kg thân trọng/ ngày • Nhóm V: 150 mg polyphenol/ kg thân trọng/ ngày * Lấy mẫu máu: Các nhóm thỏ lấy máu tĩnh mạch vào thời điểm ngày 0, ngày 10, ngày 20, ngày 30 để định lượng cholesterol toàn phần, triglycerid, HDL - C, LDL - C MDA huyết tương * Lấy mẫu động mạch chủ xác định tổn thương giải phẫu bệnh Đánh giá mức độ tổn thương xơ vữa động mạch theo bảng phân độ WHO sau: - Độ 0: Các tổn thương xơ mỡ giai đoạn đầu, giai đoạn có lắng đọng hạt mỡ lớp áo chưa rõ lên mặt động mạch - Độ I: Những tổn thương xơ mỡ bắt đầu hình thành chấm vạch mảnh màu vàng đục, rõ mặt động mạch, kết hợp thành mảng nhỏ - Độ II: Tổn thương hình thành mảng lớn cao mặt động mạch, bao gồm chủ yếu mô xơ phản ứng sản vùng tổn thương, có màu trắng đục hay màu trắng vàng 36 - Độ III: Gồm tổn thương phức tạp: loét, chảy máu, hoại tử huyết khối kèm theo calci hóa vùng trung tâm hoại tử - Độ IV: Thành động mạch calci hóa, đơi cịn gọi “xương hóa” làm vách động mạch cứng 37 Nång ®é triglycerid huyÕt t¬ng (mmol/L) III KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Triglycerid huyết tương: 2.8 2.4 Ngµy 1.6 Ngµy 10 Ngµy 20 1.2 Ngµy 30 0.8 0.4 Nhãm I Nhãm II Nhãm III Nhãm IV Nhãm V Nhãm thá nghiªn cøu Biểu đồ 3.1: Nồng độ triglycerid huyết tương nhóm thỏ theo thời gian thc nghim huyết t ơng (mmol/L) Nồng độ cholesterol toàn phÇn Nồng độ triglycerid huyết tương nhóm I II khơng thay đổi q trình thực nghiệm Với nhóm IV V (nhóm thỏ uống polyphenol chè dây liều 100mg/kg/ngày 150 mg/kg/ngày), vào ngày thứ 20 nồng độ triglycerid giảm 2,5 lần so với ngày thấp có ý nghĩa so với nhóm I, II, III Điều chứng tỏ polyphenol chè dây với liều 100mg/kg/ngày có tác dụng giảm nồng độ triglycerid huyết tương từ ngày thứ 20 Nhóm thỏ uống polyphenol chè dây liều thấp 50 mg/kg/ngày đến ngày thứ 30 có thay đổi nồng độ triglycerid, giảm chưa có ý nghĩa thống kê, với liều 50mg/kg/ngày, polyphenol chè dây gây hạ triglycerid huyết tương phải uống với thời gian kéo dài (trên 30 ngày) Cholesterol toàn phần huyết tương: 21 Nhãm I 18 Nhãm I I 15 Nhãm I II 12 Nhãm I V Nhãm V 0 10 20 30 Thêi gian thùc nghiƯ m(ngµy) Biểu đồ 3.2: Nồng độ cholesterol tồn phần huyết tương nhóm thỏ theo thời gian thực nghiệm Đến ngày thứ 20, giảm cholesterol huyết tương xảy mạnh nhóm IV V, nồng độ cholesterol huyết tương chúng thấp rõ rệt so với nhóm uống cholesterol đơn (p < 0,01 ÷ p < 0,001) nhóm uống polyphenol chè 38 Nång ®é HDL-C huyÕt t¬ng (mmol/L) dây liều thấp (p < 0,05) Điều chứng tỏ với liều polyphenol chè dây 100mg/kg/ngày tác dụng hạ cholesterol toàn phần xảy vào ngày thứ 20 với liều 150mg/kg/ngày tác dụng hạ cholesterol huyết tương có ưu việt hơn, nồng độ cholesterol tồn phần nhóm V cịn gấp lần so với nồng độ cholesterol nhóm ngày HDL - Cholesterol huyết tương: 1.8 1.5 1.2 Nhãm I 0.9 Nhãm III Nhãm II Nhãm IV 0.6 Nhãm V 0.3 0 10 20 30 Thêi gian thùc nghiƯm (ngµy) Biểu đồ 3.3: Nồng độ HDL-C huyết tương nhóm thỏ theo thời gian thực nghiệm HDL có tác dụng vận chuyển ngược cholesterol từ tế bào ngoại biên gan để thoái hoá chúng, HDL-C gọi yếu tố bảo vệ chống xơ vữa động mạch Nồng độ HDL-C máu tỷ lệ nghịch với khả bị bệnh tim mạch Với nhóm uống polyphenol chè dây liều 100mg/kg/ngày nhóm uống polyphenol chè dây liều cao 150mg/kg/ngày, từ ngày thứ 10, nồng độ HDL - C huyết tương hai nhóm tăng cao gần gấp hai lần so với ngày (p < 0,05) tăng cao so với nhóm chứng (p < 0,05) Như polyphenol chè dây có tác dụng tăng HDL - C từ ngày thứ 10 với liều 100 mg/kg/ngày Nång ®é LDL-C huyÕt t¬ng (mmol/L) LDL - Cholesterol huyết tương: 18 16 14 NhãmI 12 NhãmII 10 NhãmIII NhãmIV NhãmV 0 10 20 30 Thêi gian thùc nghiƯm(ngµy) Biểu đồ 3.4: Nồng độ LDL-C huyết tương nhóm thỏ theo thời gian thực nghiệm 39 Hàm lợng MDA huyết tơng (nmol/L) Vo ngy th 20, nồng độ LDL - C huyết tương hai nhóm uống polyphenol chè dây liều 100mg/kg/ngày liều 150mg/kg/ngày giảm rõ rệt, 1/3 nồng độ LDL - C huyết tương nhóm uống cholesterol đơn Với nhóm thỏ uống polyphenol chè dây liều thấp 50mg/kg/ngày ta thấy: ngày thứ 20, nồng độ LDL-C huyết tương nhóm thấp mức LDL-C huyết tương nhóm thỏ uống cholesterol đơn thấp mức LDL-C huyết tương nhóm ngày thứ 10 có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Điều nói rằng, liều 50mg/kg/ngày polyphenol chè dây có tác dụng hạ LDL-C từ ngày thứ 20 Hàm lượng Malonyl dialdehyd huyết tương: 3.5 2.5 Ngµy Ngµy 10 1.5 Ngµy 20 Ngµy 30 0.5 Nhãm I NhãmII NhãmIII NhãmIV NhãmV Nhãmthá nghiªn cøu Biểu đồ 3.5: Hàm lượng MDA huyết tương nhóm thỏ theo thời gian thực nghiệm Sự thay đổi MDA huyết tương nhóm thỏ trình thực nghiệm khơng có ý nghĩa thống kê Từ ta nói q trình thực nghiệm 30 ngày, polyphenol chè dây chưa có tác dụng q trình peroxy hóa lipid huyết tương Kết giải phẫu bệnh động mạch chủ nhóm thỏ thực nghiệm: Bảng 3.1: Các mức độ tổn thương xơ mỡ đại thể nhóm nghiên cứu Nhóm thỏ nghiên cứu Số lượng thỏ Khơng có xơ mỡ GĐ GĐ I 6 0 0 0/6 Nhóm II 0 4/6 Nhóm III 1 0 2/6 Nhóm IV 0 0 2/6 Nhóm V 0 0 2/6 Tổng số 30 20 5 0 Nhóm chứng (nhóm I) 40 Có tổn thương xơ mỡ GĐ II GĐ III GĐ IV Tỷ lệ Kết cho thấy nhóm II (uống cholesterol đơn thuần) có tổn thương rõ động mạch chủ: hạt mỡ, chấm mỡ bám thành động mạch, mảng mỡ rộng thành mạch, tổn thương chủ yếu giai đoạn I; ngồi nhóm có tỷ lệ tổn thương cao nhất, chiếm 4/6 Nhóm uống cholesterol bổ sung polyphenol chè dây liều 50mg/kg/ngày có tổn thương chiếm 2/6, mức độ tổn thương vừa giai đoạn I, vừa giai đoạn II Đối với nhóm IV V, tỷ lệ tổn thương động mạch chủ 2/6, mức độ tổn thương nhẹ, giai đoạn Như vậy, ta nói polyphenol chè dây có vai trị ngăn cản lắng đọng lipid thành động mạch, từ hạn chế xuất bệnh xơ vữa động mạch thỏ thực nghiệm Liều polyphenol chè dây cao hạn chế tạo thành mảng vữa IV KẾT LUẬN Polyphenol chè dây có tác dụng làm giảm số triglycerid, cholesterol toàn phần LDL - C làm tăng HDL - C huyết tương; nhiên khơng có tác dụng làm giảm hàm lượng MDA huyết tương thỏ uống cholesterol thực nghiệm thời gian 30 ngày Nghiên cứu tổn thương mô bệnh học cho thấy polyphenol chè dây có tác dụng làm giảm mức độ xơ vữa động mạch thỏ uống cholesterol thực nghiệm Mức tiêu thụ polyphenol chè dây có ảnh hưởng đến mức độ giảm số triglycerid, cholesterol toàn phần, LDL - C huyết tương mức độ tăng HDL - C huyết tương thỏ uống cholesterol thực nghiệm Tác dụng polyphenol chè dây bắt đầu với liều 100mg/kg/ngày, tác dụng rõ liều 150mg/kg/ngày TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Thanh Dương, Lê Thị Hà, Phan Văn Chi, Nguyễn Bích Nhi, Đồn Hùng Tiến cộng Tác dụng chống phóng xạ, giảm cholesterol chế phẩm từ chè xanh, phylamin ngưu tất, Hóa sinh Y học, Hội Y Dược học Việt Nam (1997) 13 -17 Trần Thị Hương Tác dụng dịch chiết chè xanh Việt Nam số số lipid hàm lượng malonyl dialdehyd huyết tương thỏ thực nghiệm, Luận văn thạc sỹ Y học, Trường Đại học Y Hà Nội (2002) Phạm Khuê Vữa xơ động mạch, Bệnh học tuổi già, Nhà xuất Y học Hà Nội, (2000) 178 - 200 Nguyễn Liêm, Triệu Duy Điệt, Đỗ Văn Bình Nghiên cứu tác dụng chống oxy hóa số thuốc Việt Nam, Cơng trình nghiên cứu Y học quân sự, Học viện quân y (1998) 30 - 33 41 Đoàn thị Nhu cộng Nghiên cứu dược lý ngưu tất tác dụng hạ cholesterol máu hạ huyết áp, Tạp chí dược học, (1) (1998) 11 - 13 Chu D.C and Juneja L R General chemical composition of grean tea and its infusion, Chemistry and applications of green tea, CRC Press, Boca Raton - New York (1997) 13 - 20 Demacker PN, Hectors MP, Stalenhoef AF Chylomycron processing in familial dysbetalipoproteinemia studied with vitamin A and E as markers: a new physiological concept, Atherosclerosis; 149 (1) (2000) 169 - 80 Kim M, Masuda M Cancer chemoprevention by green tea polyphenols, Chemistry and applications of green tea, CRC Press, Boca Raton - New York, (1995) 61 - 71 William J Marshall Lipid, lipoprotein and cardiovascular disease, Clinical Chemistry, Mosby (2000) 231 - 51 TÓM TẮT Nghiên cứu tác dụng chống rối loạn lipid máu polyphenol chè dây thực 30 thỏ đực chủng orytolagus curiculus Kết thực nghiệm cho thấy với liều 100mg/kg/ngày, polyphenol chè dây có tác dụng hạ triglycerid, cholesterol tồn phần, LDL - C huyết tương, làm tăng HDL - C huyết tương ngăn cản phát triển mảng xơ vữa động mạch thỏ uống cholesterol thực nghiệm A STUDY OF THE EFFECTS OF THE POLYPHENOL EXTRACTED FROM AMPELOPSIS CANTONIENCES PLANT ON SOME BLOOD LIPID INDICES AND ON ARYERIAL ATHEROSCLEROTIC HISTOPATHOLOGY IN RABBITS FED WITH HIGH CHOLESTEROL REGIME Nguyen Thi Bang Suong College of Medicine, Hue University SUMMARY The study of the effects on blood lipid disorders of the polyphenol extracted from the Ampelosis Cantoniensis plant was carried out on 30 male rabbits of the species Orytolagus Curicus The experimental results showed that when administered at the daily dose of 100 milligram/kg, the extracted polyphenol significantly lowered the serum triglyceride, whole cholesterol, LDL-C; and conversely increased HDL-C and prevented the formation and development of arterial atherosclerotic plaque in the rabbits fed with high cholesterol regime 42 ... có tác dụng làm giảm hàm lượng MDA huyết tương thỏ uống cholesterol thực nghiệm thời gian 30 ngày Nghiên cứu tổn thương mô bệnh học cho thấy polyphenol chè dây có tác dụng làm giảm mức độ xơ vữa. .. TẮT Nghiên cứu tác dụng chống rối loạn lipid máu polyphenol chè dây thực 30 thỏ đực chủng orytolagus curiculus Kết thực nghiệm cho thấy với liều 100mg/kg/ngày, polyphenol chè dây có tác dụng. .. peroxy hóa lipid huyết tương Kết giải phẫu bệnh động mạch chủ nhóm thỏ thực nghiệm: Bảng 3.1: Các mức độ tổn thương xơ mỡ đại thể nhóm nghiên cứu Nhóm thỏ nghiên cứu Số lượng thỏ Khơng có xơ mỡ GĐ