HUMAN HEPATITIS VIRUS VÀ CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT VACCINE VIÊM GAN B

HUMAN HEPATITIS VIRUS VÀ CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT VACCINE VIÊM GAN B

TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY NGUYÊN KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN VÀ CÔNG NGHỆ BÁO CÁO HỌC PHẦN: DI TRUYỀN VI SINH VẬT HUMAN HEPATITIS VIRUS VÀ CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT VACCINE VIÊM GAN B GVHD: TS Võ Thị Phương Khanh Học viên Lớp: Sinh học thực nghiệm K2018 I Human Hepatitis B Virus NỘI DUNG II www.themegallery.com Quy trình sản xuất vaccine viêm gan B I Human Hepatitis B Virus Human Hepatitis B Virus (HBV) virus có cấu trúc ADN phần sợi kép có vỏ thuộc họ Hepadnaviridae, nhân lên gan gây nên rối loạn chức gan Protein HBsAg có bề mặt hạt virus hoàn chỉnh (hạt Dane) lưu hành máu dạng hạt hình ống hình cầu 22nm Nhân bên virus có chứa HBcAg, HBeAg, phân tử ADN phần sợi kép ADN polymeraza phụ thuộc ADN www.themegallery.com I Human Hepatitis B Virus Cấu trúc gen protein HBV có ADN nhỏ biết đến, cấu trúc gen có 3200 cặp bazơ tổ chức đặc biệt dạng vòng, có phần sợi kép Cấu tạo hạt Dane www.themegallery.com I Human Hepatitis B Virus Cấu trúc gen protein  Sợi âm: vòng hồn chỉnh có khung đọc mở (open reading frame: ORF) chứa gen mã hoá đan xen vào nhau:  ORFS - gen tiền S1, tiền S2 S;  ORFC - gen tiền lõi/lõi,  ORFX - gen X ORFP - gen polymeraza  Sợi dương: ngắn có Cấu trúc tổ chức gen HBV chiều dài thay đổi www.themegallery.com I Human Hepatitis B Virus Cấu trúc gen protein  Các gen S tiền S : mã hoá vỏ HBV www.themegallery.com Cấu trúc tổ chức gen HBV I Human Hepatitis B Virus Cấu trúc gen protein  Protein loại nhỏ (SHBs) tạo nên hạt HBsAg  Protein trung bình (MHBs) chứa thành phần tiền S2  Protein bề mặt loại lớn (LHBs) chứa tiền S1 liên kết vào hạt HBsAg thấy nhiều hạt virus trơ  Các nghiên cứu cho protein tiền S đóng vai trò quan trọng q trình kết hợp HBV vào tế bào gan, vị trí gắn đặc hiệu gan www.themegallery.com S1 tiền S2 I Human Hepatitis B Virus Cấu trúc gen protein  Gen ORF-C mã hóa cho HBcAg HBeAg www.themegallery.com Cấu trúc tổ chức gen HBV I Human Hepatitis B Virus Cấu trúc gen protein oHBcAg có vai trò quan trọng việc đóng gói ARN vào nhân virus thành phần thiếu nucleocapsid Không thể phát HBcAg huyết kỹ thuật thơng thường, nhiên tìm thấy nhu mô gan bệnh nhân nhiễm HBV cấp mạn tính www.themegallery.com HBeAg protein hồ tan phát huyết bệnh nhân có tải lượng virus cao, có mặt HBeAg yếu tố bắt buộc cho trình nhân lên virus I Human Hepatitis B Virus Cấu trúc gen protein Gen ORF-P mã hóa cho enzym polymeraza có vai trò quan trọng trình tổng hợp ADN trình kết hợp ARN vào nhân virus www.themegallery.com Cấu trúc tổ chức gen HBV 11 I Human Hepatitis B Virus Cấu trúc gen protein Gen ORF-X mã hóa cho protein X virus (17kD), protein có ảnh hưởng đến việc truyền tín hiệu tính trạng tế bào vật chủ, trình biểu thị gen, nhân lên lan truyền HBV thể Protein X giúp cho nhân lên HBV tác động vào yếu tố tham gia phiên mã, kích thích tăng sinh làm chết tế bào www.themegallery.com Cấu trúc tổ chức gen HBV 12 I Human Hepatitis B Virus Cấu trúc gen protein Gen quan tâm gen S gồm Pre S, Pre S1 Pre S2 HBV  Hai protein Pre S1 Pre S2 có vai trò quan trọng việc kích thích tế bào T giúp đỡ việc tạo kháng thể anti-HBs  Kháng nguyên Pre S có khả tạo kháng thể ngăn chặn kết hợp HBV vào màng tế bào gan www.themegallery.com Cấu trúc tổ chức gen HBV 13 I Human Hepatitis B Virus Quá trình nhân lên Human Hepatitis B Virus Quá trình nhân lên HBV tế bào gan www.themegallery.com 14 I Human Hepatitis B Virus Quá trình nhân lên Human Hepatitis B Virus Bước 1: Tấn công Bước 2: Xâm nhập Bước 3: Dịch mã Bước 4: Phiên mã Bước 5: Tổng hợp genome Bước 6: Lắp ráp Bước 7: Giải phóng www.themegallery.com 15 II Quy trình sản xuất vaccine viêm gan B Chuyển gen vào TB đích www.themegallery.com Biểu gen mong muốn 16 II Quy trình sản xuất vaccine viêm gan B www.themegallery.com 17 II Quy trình sản xuất vaccine viêm gan B Chọn gen mục tiêu: Để có gen S, gen mã hóa cho kháng nguyên bề mặt HBsAg người ta dùng phương pháp tách RNA gen S từ human hepatitis B virus để thực phiên mã ngược thu gen S Phương pháp cho hiệu cao đỡ tốn thời gian phương pháp truyền thống Vector: Vector dẫn từ vòng micromet gọi plasmid episom nấm men hay γEps, điển hình loại pJDB 219 pJDB 219 gồm đoạn liên tiếp pBR322 nhân lên chọn lọc nấm men E.coli có gài pJDB vào NST vector khác nấm men www.themegallery.com 18 II Quy trình sản xuất vaccine viêm gan B Tạo vector tái tổ hợp: -Để tạo DNA tái tổ hợp cần tạo dòng trộn chung theo tỉ lệ định với diện ligase (E.coli) Từ vector tái tổ hợp sẽ hình thành tác dụng ligase làm nối vector với DNA -Vector tái tổ hợp tinh qua tách chiết tủa -Chuyển vector tái tổ hợp vào nấm men Saccharomyces cerevisiae theo đường biến nạp, nhiều phương pháp khác phương pháp vi tiêm, phương pháp xung điện súng bắn gen sốc nhiệt… Nhưng nấm men sử dụng kĩ thuật xung điện hiệu cao www.themegallery.com 19 II Quy trình sản xuất vaccine viêm gan B Sacharomyces cereviriae www.themegallery.com 20 II Quy trình sản xuất vaccine viêm gan B Biểu gen mong muốn : -Dòng tế bào mang gen tái tổ hợp dòng tế bào có mang gen tái tổ hợp, ni mơi trường thích hợp tạo thành khuẩn lạc, nhiên sau bước biến nạp tạo lượng tế bào tái tổ hợp, cần phải tiến hành sàng lọc -Việc sàng lọc thực nhiều phương pháp phương pháp sử dụng oligonucleotid tổng hợp phương pháp sử dụng kháng thể Từ tìm dòng tế bào mang gen tái tổ hợp www.themegallery.com 21 II Quy trình sản xuất vaccine viêm gan B www.themegallery.com 22 TÀI LIỆU THAM KHẢO Đái Duy Ban (2006), Công nghệ gen.NXB Khoa học kĩ thuật Hồn thiện quy trình cơng nghệ sản xuất vaccine viêm gan B tái tổ hợp Bộ Y tế – Bộ khoa học công nghệ, Hà Nội 2004 Phí Đức Long (2004) Đánh giá đáp ứng kháng thể vaccine phòng viêm gan B trẻ có mẹ mang HBsAg Luận án tiến sĩ y học, Đại học y Hà Nội www.themegallery.com 23 XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN !!! www.themegallery.com 24 ... trình sản xuất vaccine viêm gan B Chuyển gen vào TB đích www.themegallery.com Biểu gen mong muốn 16 II Quy trình sản xuất vaccine viêm gan B www.themegallery.com 17 II Quy trình sản xuất vaccine viêm. .. trình sản xuất vaccine viêm gan B I Human Hepatitis B Virus Human Hepatitis B Virus (HBV) virus có cấu trúc ADN phần sợi kép có vỏ thuộc họ Hepadnaviridae, nhân lên gan gây nên rối loạn chức gan. . .HUMAN HEPATITIS VIRUS VÀ CÔNG NGHỆ SẢN XUẤT VACCINE VIÊM GAN B GVHD: TS Võ Thị Phương Khanh Học viên Lớp: Sinh học thực nghiệm K2018 I Human Hepatitis B Virus NỘI DUNG II www.themegallery.com