Nghiên cứu định lượng các hoạt chất pyridoxin hydroclorid naphazolinnitrat chlorpheniramin maleat và phanthenol trong một số thuốc nhỏ mắt đa thành phần bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Bộ YTẾ BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI C Q NGHIÊN c ứu ĐỊNH LƯỢNG CÁC HOẠT CHẤT PYRIDOXIN HYDROCLORID, NAPHAZOLIN NITRAT, CHLORPHENỊRAMỊN MALEAT VÀ PANTHENOL TRONG MỘT SÔ THUỐC NHỎ MẮT ĐA THÀNH PHẦN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) LUẬN ÁN THỌC SV Dược HỌC • • • • ê /r ttụêtt inỊtiuíi : ~KiêHt m/lùêtu tltiổe phẩm rìà iĩòe tíĩt hoe Jitũ sơ : 3.02.05 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : TS THÓI PHAN QUVNH NHƯ TS TRỊNH VfiN iríu HÀ NỘI - 2000 MỤC LỤC Trang Đạt vấn đề Chương : Tổng quan 1.1 Tổng quan hoạt chất pyridoxin hydroclorid, naphazolm nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol phương pháp định lượng 1.1.1 Pyridoxin hydroclorid 1.1.2 Naphazolin nitrat 1.1.3 Chlorpheniramin maleat 1.1.4 Panthenol 1.2 Một số chương trình HPLC áp dụng để định lượng chế phẩm đa thành phần có chứa pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol HPLC 1.2.1 Một số khái niệm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 1.2.1.1 Một số đại lượng đặc trưng 1.2.1.2 Phân loại kỹ thuật HPLC ứng dụng 1.2.1.3 Cách đánh giá píc (Diện tích chiều cao) phương pháp định lượng thường dùng HPLC 1.2.2 Một số chương trình HPLC định lượng hoạt chất pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol 1.2.2.1 Một số cơng thức nhỏ mắt thị trường có chứa thành phần pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol 1.2.2.2 Một số chương trình HPLC định lượng hoạt chất pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol 3 ấ Chương : Đối tượng, nội dung phương pháp nghiên cứu 2.1 Đối tượng nghiên cứu 2.2 Hoá chất dụng cụ 2.3 Nội dung, phương pháp nghiên cứu 10 11 11 12 15 19 20 20 22 31 31 32 33 2.3.1 Khảo sát lựa chọn điều kiện sắc ký chương trình sắc ký 1: Định lượng pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat 2.3.2 Khảo sát lựa chọn điều kiện sắc ký chương trình sắc ký 2: Định lượng panthenol 2.3.3 Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng đồng thời pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol thuốc nhỏ mắt đa thành phần 2.3.4 Đánh giá khả ứng dụng thực tiễn phương pháp định lượng nghiên cứu 34 Chương : Kết - Biện luận 3.1 Kết khảo sát lựa chọn điều kiện sắc ký thích hợp định lượng thành phần 3.1.1 Chương trình sắc ký 1: Định lượng đồng thời pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat 3.1.2 Chương trình sắc ký 2: Định lượng thời Panthenol 3.2 Xác đinh độ ổn định hệ thống sắc ký 3.3 Xác định khoảng tuyến tính phương pháp đinh lượng 3.4 Xác định độ lặp lại phương pháp 3.5 Xác đinh độ phương pháp xây dựng 3.6 Xây dựng phương pháp đinh lượng pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat 3.7 Xây dựng phương pháp định lượng panthenol 37 37 3.8 Áp dụng phương pháp định lượng để định lượng số mẫu lưu hành 34 35 36 38 41 43 44 46 49 52 53 55 Chương : Kết luận - Đề nghị 58 Tài liệu tham khảo 61 Phụ lục DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TAT s d ụ n g t r o n g l u ậ n n DT Diện tích Đ K SK Đ iều kiện sắc ký H PLC Sắc ký lỏng hiệu cao m g% m g / 0 ml nm N anom et SKS Số kiểm soát TCCS T iêu chuẩn sở T R A PH A C O C ông ty Dược phẩm th iết bị vật tư y tế Bộ G iao thông vận tải X N D PTW X í nghiệp Dược phẩm T ru n g ương U V -V IS T ngoại khả kiến M icrom et Ịim nl : M icrolit ng m cg : M icro sam ĐẬT VẤN ĐỂ Trong năm gần đây, thuốc đa thành phần có tác dụng dược lý phối hợp sản xuất, lun hành sử dụng rộng rãi giới nước ta Thuốc nhỏ mắt đa thành phần m ột loại điển hình, ngày ưa dùng nên có nhiều biệt dược sản xuâ't lưu hành : V-Rohto; Tobiorb; Rohto-kodomo soft.; Naphacollyre; Rohto-Antibacteri Thành phần thuốc nhỏ mắt loại thường có tối thiểu bốn hoạt chất số chất sau : kháng sinh sulfamid diệt khuẩn, nấm, virut (chloramphenicol, gentamicin, natri sulfacetamid); kháng histamin (chorpheniramin); giảm nhãn áp (neostigmin); co mạch ngoại vi, giảm sung huyết (naphazolin, tetra hydrozolin); dinh dưỡng giác mạc (pyridoxin, panthenol ) Gần số nhà sản xuất nước nghiên cứu bào chế thuốc nhỏ mắt (APOL TRAPHACO, VIRONDO XNDPTW2) với công thức chứa thành phần sau : Panthenol, naphazolin nitrat, pyridoxin hydroclorid, chlorphenirramin maleat Trong chuyên luận dược điển có đinh tính, định lượng riêng biệt thành phần chế phẩm đơn thành phần phương pháp phương pháp thể tích, phương pháp đo [19] [20] [21 ] [27] [28] [29][30] [31 ] [35] [38][40] [41 ] [42][43] [44], phương pháp đo quang tạo mầu đo quang [22][30][35][36]40][42][44], phương pháp HPLC [36][38] hay phương pháp sắc ký khí [22] Việc định lượng thành phần chế phẩm đa thành phần phương pháp có nhược điểm tốn thời gian công sức, dễ mắc sai số phải chiết tách phức tạp pha loãng nhiều lần, số trường hợp nhiều không tiến hành ảnh hưởng tá dược Trong số cơng trình đăng sách, tạp chí thơng báo kiểm nghiệm Viện kiểm nghiệm có đề cập tới phân tích số dạng thuốc đa thành phần có chứa số thành phần nêu Nhưng chưa thấy có tài liệu đề cập phương pháp định lượng bốn thành phần thuốc nhỏ mat APOL VIRONDO Cũng có số cơng trình phương pháp HPLC để định lượng thành phần nêu, nhiên mặt hay mặt khác, việc áp dụng phòng thí nghiệm ta trở ngại Do vậy, việc kiểm tra, quản lý, giám sát chất lượng chế phẩm có thành phần gặp nhiều khó khăn Qua phân tích cấu trúc, tính chất hố lý thành phần chúng tơi nhận thấy có khả phân tách chúng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Đồng thời, việc áp dụng phương pháp phân tích đại với trợ giúp máy móc thiết bị trở thành xu hướng chung ngành phân tích nước giới khu vực nên chọn phương pháp HPLC phương pháp thích hợp để phân tích trực tiếp thành phần nêu Xuất phát từ yêu cầu thực tiễn công tác kiểm nghiệm phục vụ việc đảm bảo chất lượng thuốc sản xuất nước thuốc ngoại nhập lưu hành thị trường tiến hành đề tài : ‘Nghiên cứu định lượng pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol thuốc nhỏ mắt đa thành phần phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao” với mong muốn phương pháp phân tích đinh lượng bốn thành phần nêu thuốc nhỏ mắt đa thành phần trở thành tài liệu thường quy để áp dụng định lưọng thành phần chế phẩm mà có chứa thành phần nêu Để giải mục tiêu tiến hành nội dung sau : ♦ Nghiên cứu, khảo sát, lựa chọn điều kiên sắc ký thích hợp để đinh lượng trực tiếp pyridoxin, hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol ♦ Xác định độ ổn định thống sắc ký ♦ Xác định khoảng tuyến tính phương pháp ♦ Xác định độ lặp lại phương pháp ♦ Xác định độ phương pháp ♦ Xây dựng phương pháp đinh lượng pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol thuốc nhỏ mắt đa thành phần phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao ♦ Đánh giá khả ứng dụng thực tiễn phương pháp cách áp dụng phương pháp vào định lượng số mẫu lưu hành Chương I TỔNG QUAN 1.1 TỔ N G QUAN VỂ CÁC HOẠT CH  T PY RIDO XIN HYD RO CLO RID, N A PH A ZO LIN NITRAT, CHLORPHENBRAM IN M ALEAT, PA N TH EN O L VÀ CÁC PHƯƠNG PHÁP PH Ư ƠN G PH Á P ĐỊNH LƯỢNG 1.1.1 Pyridoxin hydroclorid [23][38] Cấu trúc hố hoc • C8H u N HC1 PTL : 205,64 Tên khoa học: 5-Hydroxy-6-Methylpyridin-3,4-Dimethanol hydroclorid Tính c h ấ t: - Bột kết tinh trắng gần trắng - Nóng chảy 205°c kèm phân huỷ - Tan phần nước - Tan 100 phần ethanol (96%) - Thực tế không tan cloroform ether -Phổ tử ngoại [25] + Dung dịch 0,001% dung dịch acid hydrocloric 0,1M có cực đại bước sóng từ 288nm đến 296nm với E(1 %, lcm ) từ 425 đến 445 + Dung dịch 0,001% dung dịch đệm phosphat chuẩn 0,025M có cực đại bước sóng từ 248nm đến 266nm với E (l% ,lc m ) từ 175 đến 195 320nm đến 327nm vói E(1 % ,lcm ) từ 345 đến 365 Phương pháp định lượng : Tuỳ theo pyridoxin hydroclorid dạng nguyên liệu thành phẩm m người ta sử dụng phương pháp định lượng cho thích hợp - Đối với pyridoxin hydroclorid dạng nguyên liệu: Dược điển Anh BP 1993 [23], Dược điển Châu Âu 1997 [29], Dược điển Nhật 1996[44], Dược điển Ấn Độ 1996 [32], Dược điển Trung Quốc 1997[42] định lượng phương pháp chuẩn độ mơi trường khan Hồ tan lượng chế phẩm acid acetic khan thêm lượng định dung dịch thuỷ ngân II acetat chuẩn độ dung dịch acid percloric 0,lN Phát điểm kết thúc phép định lượng dùng phương pháp đo dùng thị màu tím tinh thể - Để định lượng dung dịch tiêm pyridoxin hydroclorid , số Dược điển [38],[44] dùng phương pháp đo quang phổ dựa phản ứng pyridoxin với ,6 - dicloroquinon clorimid isopropyl alcol tạo phẩm màu indophenol, sau đo độ hấp thụ dung dịch bước sóng 650nm Phương pháp ứng dụng để định lượng pyridoxin dung dịch tiêm,trong viên nén ,viên nang[38],[44] m ột số dạng thuốc multivitamin Ngoài người ta áp dụng phương pháp đo quang phổ tử ngoại 291nm môi trường acid hydrocloric 0,1M để đinh lượng pyridoxin thuốc tiêm viên nén Phương pháp thực đơn giản, nhanh , áp dụng cho chế phẩm không chứa chất phụ gia có hấp thụ quang làm ảnh hưởng tới định lượng pyridoxin [41] [32] Trong Dược điển Mỹ 23[38] ứng dụng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao(HPLC) với chương trình sau để định lượng pyridoxin hydroclorid dạng nguyên liệu dạng bào chế khác: ♦ Pha động: Trộn 20ml acid acetic khan với l,2g natri hexansulfonat khoảng 1400ml nước bình định mức 2000ml.Điều chỉnh pH dung dịch đến 3,0 acid acetic natri hydroxyd IM Sau thêm 470ml methanol thêm nước đến vạch , lắc lọc ♦ Dung dịch chuẩn nội: Hoà tan acid p-hydroxybenzoic pha động để thu dung dịch có chứa 5mg acid p-hydroxybenzoic lm l dung dịch chuẩn nội ♦ Dung dịch thử chuẩn: Được chuẩn bị cho dung dịch có chứa khoảng 0,05mg pyridoxin hydroclorid 0,05mg acid p-hydroxybenzoic lm l pha động ♦ Tiến hành sắc ký theo chương trình: Cột sắc ký; Lichrosorb RP ( 25cm X 4,6mm,10 ịiin) Tốc độ dòng: l,5m l/ phút Detector : UV- 280nm 1.1.2 Naphazolin nitrat [16][36] Cấu trúc hoá học : C14H14N2 HNOj PTL : 273,3 Tên khoa học : -(l- naphthyl methyl) -2- Imidazolin nitrat Dạng naphazolin hydroclorid : C 14 H 14 N HC1 PTL : 24 6,7 Tính c h ấ t: - Bột kết tinh trắng gần trắng, không màu gần không màu - Tan nước, tan ethanol 96% - Tan không đáng kể cloroform, không tan ether - Dạng naphazolin hydroclorid tan tự nước, ethanol 96% thực tế không tan ether.' - Phổ tử ngoại [25]:Trong dung dịch acid hấp thụ cực đại đỉnh 271, 281, 288, 291nm Ở 281nm có E (l% ,lcm ) 321 Phưong pháp định lượng : - Nguyên liệu dạng nitrat dạng hydroclorid Dược điển dùng phương pháp chuẩn độ mơi trường khan: C hế phẩm hồ tan acid acetic khan thêm lượng định thuỷ ngân acetat chuẩn 55 3.8 ÁP DỤNG PH Ư Ơ N G PH Á P ĐỂ Đ ỊN H LƯ ỢNG M Ộ T s ố M Ẫ LƯU HÀN H Tiến hành : Các điều kiện thao tác (cột, pha động, vận tốc dòng, detector ) tiến hành thực nghiệm phương pháp xây dựng m ục 3.6.và m ục 3.7 Đặc biệt ý chuẩn bị dung dịch chuẩn thử theo phương pháp xây dựng thi tiiỳ vào hàm lượng hoạt chất chế phẩm khác để có cách pha lỗng khác (nồng độ nằm khoảng tuyến tính xác định) cho phù hợp với quy trình định lượng xây dựng Với điều kiện sắc ký lựa chọn, thành phần khác chất phụ gia không ảnh hưởng đến kết định lượng B ảng Kết đinh lượng số chế phẩm lưu hành HÀM LƯỢNG SO VỚI NHÃN (%) TÊN MÂU Pyri 102,90 V-ROHTO Napha 98,05 Chlor 102,90 ROHTO- KODOMO Soft 104,20 ROHTO- KODOMO Soft(VN) 100,60 ROHTO-ANTIBACTE RIA 84,05 100,90 TOBIROB NAPHACOLLYRE Pan 111,45 113,59 99,00 100,50 BÀN LUẬN : Chúng hoàn thành việc xây dựng phương pháp định lượng đồng thời pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol thuốc nhỏ mắt chương trình chạy sắc ký đánh giá 56 phương pháp xãy dựng dựa tiêu chí : xác định khoảng tuyến tính, xác định độ lặp lại độ phương pháp định lượng Kết cho thấy phương pháp định lượng xây dựng phù hợp, cho phép tách định lượng trực tiếp hoạt chất chế phẩm thuốc nhỏ mắt sắc ký đồ cho hình ảnh pic tách tương đối rõ ràng, pic hẹp cân đối, độ phân giải tốt Khi thay đổi điều kiện sắc ký (thành phần tỷ lệ chất pha động,bước sóng phát ) pic khơng cân đối tách trước Chính chúng tơi lựa chọn điều kiện sắc ký nêu suốt q trình thí nghiệm Khoảng tuyến tính bốn chất xây dựng tương đối rộng (từ mcg/ml đến 100mcg/ml) Cả chất cho ta phương trình hổi quy với hệ số tương quan gần ( hệ số tương quan r =0,99916 đến 1,00000) thể mối quan hệ tuyến tính chặt chẽ nồng độ tìmg chất với diện tích pic chúng Điều cho phép định lượng chất nồng độ khoảng tuyến tính khảo sát chất.Chúng tơi chọn khoảng nồng độ thích hợp để định lượng là: Pyridoxin hydroclorid khoảng 5mg% Naphazolin nitrat khoảng l,25m g% Chlorpheniramin maleat khoảng 2mg% Panthenol khoảng mg% iú n g khảo sát độ lặp lại chất thơng qua phân tích sai số tương đối kết phân tích thí nghiệm Kết thống kê hai mẫu thuốc nhỏ mắt cho thấy phương pháp định lượng xây dựng có sai số tương đối nhỏ (< 1,5%), độ lặp lại tốt, = 0,53% 1,25% chlorpheniramin maleat =1,22% 1,49% naphazolin nitrat £ = 1,25% 1,35% pyridoxin hydroclorid 57 = 0,21% 0,78% panthenol chấp nhận phân tích định lượng đồng thời pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, định lượng panthenol chế phẩm nhỏ mắt Đã khảo sát độ phương pháp thông qua kết hai mẫu thuốc nhỏ mắt dựa khả tìm lại lượng cho thêm vào mẫu thử bốn chất ( đạt từ 99,4% đến 101,1% ) 99.4 % - 99,9% naphazolin nitrat 99.5 % - 100,1% pyridoxin hydroclorid 0 , % chlorpheniramin maleat 100,7% - 101,1 % panthenol Như vậy, phương pháp định lượng xây dựng có độ tương đối tốt, phương pháp hoàn toàn đáng tin cậy đảm bảo ứng dụng tốt vào định lượng pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol chế phẩm nhỏ mắt Mặt khác, qua việc áp dụng phương pháp vào thực tế nhận thấy : Phương pháp dễ thực hiện, độ xác cao, chấp nhận Đồng thời số chế phẩm thuốc nhỏ mắt lưu hành thị trường có chứa thành phần không hàm lượng ghi nhãn, điều cảnh báo cho nhà quản lý chất lượng thuốc lưu tâm quản lý chặt chẽ 58 Chương KẾT LUẬN - ĐỂ NGHỊ 5.1 K Ế T LUẬN : Chúng tơi hồn thành mục tiêu ban đầu cơng trình Tim điều kiện sắc ký phù họp, ổn định để định lượng nhanh đồng thời hoạt chất chế phẩm thuốc nhỏ m chương trình sắc ký Chương trìn h sắc k ý l : Đinh lượng thời pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, cblorpheniramin maleat - Máy HPLC - Cột Lichrosorb RP 18 ; 250 X 4mm ; jam - Pha động : Hoà tan l ,l g natri heptansulfonat dung dịch hỗn hợp với tỷ lệ sau : Methanol 60 Nước 38 Acid acetic băng Diethylamin 0,1 - Tốc độ dòng : lm l/phút - Detector : u v - 265nm - Thể tích tiêm : 20j.ll C hương trìn h sác ký : Định lượng panthenol - Máy HPLC - Cột lichrosorb RP 18 ; 250 X 4mm; 10 Ịim - Pha động : dung dịch hỗn hợp với tỷ lệ sau : 59 Nước 97 Acetonitril Acid phosphoric 0,1 - Tốc độ dòng : lm l/phút - Detector : ƯV - 210nm - Thể tích tiêm : 20j.ll Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời hoạt chất pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat phương pháp định lượng panthenol chế phẩm nhỏ mắt đa thành phần - Thời gian phân tích ngắn (dưới 12 phút) - Khoảng tuyến tính đủ rộng cho phép định lượng với nồng độ chất cần khảo sát khoảng : Naphazolin nitrat 6-60 mcg/ml Chlorpheniramin maleat 10 - 10 mcg/ml Pyridoxin hydroclorid 50-400mcg/ml Panthenol 150-750mcg/ml Các phương trình hồi quy thiết lập cho thấy mối quan hệ tuyến tính chặt chẽ nồng độ chất với diện tích pic chúng (hệ số tương quan r = 0,99916- 1,00000 - Phương pháp có độ lặp lại t ố t : có sai số tương đối ngưỡng thống kê a = 0,05 không lớn 1,5% - Phương pháp có độ cao, đáng tin cậy : tỷ lệ tìm lại lượng chất thêm vào mẫu sau định lượng đạtđược trung bình cao từ 99,4% đến 101,1% Áp dụng phương pháp xây dựng vào định lượng số chế phẩm thuốc nhỏ mắt có chứa pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol lưu hành thị trường (06 chế phẩm) Kết khảo sát khẳng định phương pháp định lượng xây 60 dựng đáng tin cây, góp phần vào việc kiểm tra chất lượng thuốc thực tế TCCS thuốc khơng thể thực điều kiện thực nghiệm Việt Nam Về mặt ý nghĩa khoa học, cơng trình áp dụng phương pháp đại phương pháp HPLC vào định lượng trực tiếp bốn hoạt chất pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol chế phẩm thuốc nhỏ mắt đa thành phần chương trình sắc ký mà chưa có tác giả nưóc nghiên cứu Phương pháp nhanh chóng, có độ xác cao, hiệu , thuận tiện cho sở trang bị máy HPLC, cho phép vừa định tính, định lượng châ't có chất chuẩn đối chiếu hoá học Đồng thời cho thấy khả phân tích hữu hiệu thuận tiện kỹ thuật tạo cặp ion sắc ký lỏng pha đảo Đề tài sở khoa học cho việc nghiên cứu xây dựng tài liệu pháp quy ứng dụng rộng rãi để kiểm nghiệm chế phẩm thuốc nhỏ mắt đa thành phần lưu hành thị trường nước ta Về mặt thực tiễn, cơng trình giúp cho sở sản xuất (công ty dược TRAPHACO, ) xây dựng tiêu chuẩn sở góp phần tiêu chuẩn hố thuốc nhỏ mắt có chứa thành phần nêu Điều quan trọng ,phù hợp với xu hướng xây dựng sở sản xuất đạt tiêu chuẩn GMP, góp phần vào cơng tác đảm bảo chất lượng thuốc, nhằm chăm sóc tốt sức khoẻ nhân dãn ĐỂ NGHỊ : - Tiếp tục nghiên cứu phương pháp định lượng đồng thời thành phần nêu thuốc nhỏ mắt đa thành phần phương pháp quang phổ đạo hàm So sánh hai phương pháp định lượng - Đề nghị công ty dược TRAPHACO trang bị máy sắc ký lỏng hiệu cao để tiện việc kiểm tra chất lượng thuốc TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ mơn Hố phân tích Pham Gia Huệ, Trần Tử An Hố phân tích (các phương pháp hố lý phân tích) Trường Đại học Dược Hà Nội - 1998 Phạm Gia Huệ, Nguyễn Tiến Khanh Một sốphươnẹ pháp hoá lý dùng phân tích dược - 1990 Nguyễn Tiến Khanh Thống kê íùig dụng ngành dược Trường Đại học Dược - 1993 Sắc ký lỏng cao áp (Sắc ký lỏng phân giải cao-HPLC) Trung tâm giáo dục phát triển sắc ký Việt Nam (EDC VN) Võ Thị Thu Thu Ỷ Định lượng đồng thời thành phần dexamethason, chloramphenicol naphazolin sổ chế phẩm nhỏ mắt phương pháp sắc kỷ lỏng hiệu cao Cơng trình tốt nghiệp Thạc sĩ Dược học 1998 Thông báo kiểm nghiệm số 2+3 -1996 Tiêu chuẩn chất lượng phương pháp kiểm tra chất lượn‘ị thuốc nhỏ mắt V-ROHTO Công ty ROHTO - METHOLATUM (Việt Nam) Co., Ltd Tiêu chuẩn chất lượìiìị phươniị pháp kiểm tra chất lượng thuốc nhỏ mắt ROH TO-KODOM O Soft Công ty ROHTO - METHOLATUM (Việt Nam) Co., Ltd 9.Tiêu chuẩn sở viên nén Pafemin-fort Công ty dược phẩm & TBVT y tế Bộ giao thông vận tải (TRAPHACO) 10 Analysis of cough mix by high pressure liquid chromatography National pharmaceutical control bureau Ministry of helth Malaysia 11 Analytical abstracts Nov 1997; Vol 59; 11G74; p 1635 12 Analytical abstracts Feb 1997; Vol 59; 2G 11; p.231 13 Analytical abstracts Aug 1997; Vol 59; 8G20; p l 181 14 Analytical abstracts Aug 1997; Vol 59; 8G25; p.l 181 15 Analytical abstracts Sep 1997; Vol 59; 9G140; p 1358 16 Analytical abstracts Feb 1997; Vol 59; 2G37; p.235 17 Analytical abstracts Oct 1996; Vol 58 ; 10G83; p 875 18Analytical abstracts Sept 1991; Vol 53; 9G132; p 966 19 British Pharmacopoeia Ỉ993 ; p 147 20 British Pharmacopoeia 1993', p.207 21 British Pharmacopoeia 1993; p.441,p.442 22 British Pharmacopoeia 1993; p.831 23 British Pharmacopoeia 1993; p.565 24.Bosch, E.;Bou, P; Allemann, H.; Roses,M Retention of ionizable compounds on HPLC PH scale in the methanol! water and the pH values of buffers Anal Chem.; 15 Oct., 68(20); p.3651-3657 25 Clarke's Isolation and Identification of drugs- Second Edition, 1996 26 Eppert, G J HPLC- troubleshooting Par Air on board; par How I degas the mobile phase Labor Praxis; Nov 1996, 20(11) ;p 44-47, p.24-26 27 European Pharmacopoeia - Third Edition - 1997; p 722 28 European Pharmacopoeia - Third Edition - 1997; p 1217 29 European Pharmacopoeia - Third Edition - 1997; p 1410 30 Indian Pharmacopoeia - 1996; p 176, 177 31 Indian Pharmacopoeia - 1996; p.554 32 Indian Pharmacopoeia - 1996; p.644, p.645 33 J H.Knox, JJu ran d Mechanism of Zwitterion- pair chromatography, 1981, Vol.218,355 34.Sandie Lindsay High performance liquid chromatography - Second edition 35 The United States pharmacopeia 23 - the national formulary 18; p 351, 352, 353 36 The United States pharmacopeia 23-the national formulary 18; p.1052 37 The United States pharmacopeia 23-the national formulary 18; p.l 154 38 The United States pharmacopeia 23-ủ.le national formulary 18; p 1347 39 The United States pharmacopeia 23-the national formulary 18; p 1774 40 Pharmacopoeia of the People's Republic of China 1997; p 402, 403 41 Pharmacopoeia of the People 's Republic of China 1997; p 646, 647 42 The Japanese pharmacopoeia - Thirteenth Edition; p 283, 284 43 The Japanese pharmacopoeia - Thirteenth Edition; p 523, 524 44 The Japanese pharmacopoeia - Thirteenth Edition; p.604 45.Rose, M.;Canal, I.; Allemann, H.; Siigur,K.;Bossch, E.: Retention of ionizable compounds on HPLC Effect of pH, ionic strength and mobile phase composition of weak acid Anal*.’Chem.; dec 1996;68(230); p 4094-4111 46 Understanding your chemstation Hewlett Packard; 1997; p.252,253 CÁC ĐẶC TRƯNG THỐNG KÊ ■ * Giá trị trung bình : n X =- Ị x , n /=, Ỳ J(xị - x ý Độ lệch chuẩn Sai số chuẩn * Sai SỐ tương đối : Ĩ=1 s= n -1 ĩ sX s £•- -5 0 TIÊU CHUẨN C SỞ SỞ Y TẾ BỘ GTVT Thuốc nhỏ m 04 - ĐS - 92 - 97 CÔNG TY DƯỢC &TBVT Y TÊ TRAPHACO APOL Có hiệu lực từ : 18 - - 1997 I-YẼU CÂU KỸ THUẬT l.l.C ô n g th ứ c điêu chế: Naphazolin nitrat Chlorpheniram in maleat Pyridoxin hydroclorid Panthenol Natri clorid Nước cất để pha thuốc tièm Hai mươi lăm miligam Mười miligam Một trăm miligam Một trăm miligam Ba trăm miligam Vừa đú trăm mililit 0,025g 0,010g 0,100g 0,100g 0,300g 100ml 1.2 Nguyên liệu: Naphazolin n i t r a t : Đạt tiêu chuẩn Dược điển Anh 1993 Chlorpheniram in m a le a t: Đạt tiêu chuẩn Dược điển Mỹ XXIII Pyridoxin hydroclorid : Đạt tiêu chuán Dược điền Anh 1993 Panthenol : Đạt tiêu chuần Dược điển Mỹ XXIII Natri clorid : Đạt tiêu chuán Dược điền Việt nam I I , tập Nước cất để pha thuốc tiêm : Đạt tiêu chuán Dược điển Việt nam I I , tập - Các chất phụ khác : Đạt tiêu chuần dược dụng 1.3 Chất lượng thành phẩm: 1.3.1: Tính chất: Dung dịch trong, khơng màu 1.3.2 Độ : Đạt 52 TCN 345 - 87 Thuốc nhỏ m - độ 1.3.3 PH : 5,0 - 7,0 1.3.4 Thể tích : Đạt 52 TCN -107 - 87 1.3.5 Định tính : Trong sắc ký đồ phần định lượng, thời gian lưu hoạt chất dung dịch thử phải phù hợp với thời gian lưu chúng dung dịch chuẩn 1.3.6 Định lượng : Hàm lượng Naphazolin nitrat C 14H i4N2 H N , Chlorpheniramin maleat C j6H 19C1N2 C4H40 , Pyridoxin hydroclorid C8H MN HC1 , Panthenol C9H 19N chê phẩm phải đạt 90,0 đến 110,0 % so với hàm lượng ghi nhãn 1.3.7 Độ vô khuẩn : Phải đạt tiêu chuần vò khuẩn II - PHƯƠNG PHÁP THỬ 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 Tính chất: Bằng cảm quan viên phải đạt yêu cầu nêu Độ : Thử theo 52TCN 345 - 87 PH : Thư theo DĐVN II - Tập ( phụ lục 3.15 ) Thể tích : Thử theo 52TCN 107 - 87 Định tính : Thời gian lưu hoạt chất dung dịch thử dung dịch chuẩn sắc ký đô phần định lượng phải giống 2.6 Định lượng : HPLC 2.6.1 Pyridoxin hydroclorid , Naphazolin nitrat Chlorpheniramin m aleat: 2.6.1.1 Hóa chất thuốc thử : Theo BP 93 DĐVN II , tập ( Dùng loại tinh khiết cho sác ký ) - Methanol - Acid acetic băng - Diethylamin - Natri heptansulfonat 2.6.1.2 Điêu kiện sắc ký : - Máy HPLC - C ộ t: RP 18 ( 250 X 4mm , |j.m ) - Detector : u v - 265nm - Tốc độ dòng : lml /phút - Thể tích tiêm : 20 ỊJ.I - Pha động : Hòa tan l,lg natri heptansulfonat lit hỏn hợp Methanol - dung dịch Acid acetic 4% ( k l/ tt) - Diethylamin theo tỷ lệ ( 600 : 400 : ) Đuổi k h í 2.6.1.3 Cách t h : - Dung dịch thử ( T l ) : Định lượng Pyridoxin HCI Naphazolin n itr a t Hút xác 5ml dung dịch chê phẩm vào bình định mức lOOml , thêm dung dịch acid acetic 1% ( k l/tt) vừa đủ , trộn Lọc qua màng lọc milipore 0,45 |im Tiến hành đo HPLC song song điêu kiện với dung dịch chuẩn - Dung dịch thử ( T2 ) : Định lượng Chlorpheniram in maleat Hút xác 5ml dung dịch chế phám vào bình định mức m l, thêm dung dịch acid acetic 1% ( kl/tt ) vừa đủ , trộn đêu Lọc qua màng lọc milipore 0,45 |j.m Tiến hành đo HPLC song song điêu kiện với dung dịch chuẩn - Dung dịch chuẩn : Cân xác khoảng 0,05g chất đôi chiếu ( ĐC ) Chlorpheniramin m a le a t, 0,lg Pyridoxin hydroclorid ( ĐC ) 0,025g Naphazolin nitrat ( ĐC ) vào bình định mức 50ml Thêm khoảng 35 mi nước lắc siêu âm khoảng phút để hòa tan thêm nước vừa đủ Trộn Hút xác lm l dung dịch vào bình định mức 50ml , thêm dung dịch acid acetic 1% vừa đủ , trộn đêu Lọc qua màng lọc milipore 0,45 |am Tiến hành đo HPLC Hàm lượng ( mg ) hoạt chất 100ml chế phẩm tính theo cơng thức : St X me X c A ( mg ) = -«-100% Sex V Trong : - S t , Sc Lần lượt diện tích Píc tương ứng hoạt chất dung dịch chuán dung dịch th - m c Lượng cân chuẩn ( mg ) - c Hàm lướng tương ứng chuẩn - V Độ pha loãng V = 500 đối vói Chlorpheniramin maleat V = 125 Pyridoxin HC1 Naphazolin nitrat 2.6.2 Panthenol : 2.6.2.1 Hóa chất thuốc thử ( T T ) : Theo DĐVN I I , Tập ( Dùng loại tinh khiết sắc ký ) - Acid phosphoric 85% 2.62.2 Điêu kiện sác ký : - Máy HPLC - Cột : RP 18 ( 250 X 4mm , Ị.im ) - Detector : ƯV - 210nm - Tốc độ dòng : lm l /phút - Thề tích tiêm : 20 fil - Pha động : Hỗn hợp đuổi khí nước - acid phosphoric ( 1000: I ) 2.Ó.2.3 Cách t h : - Dung dịch thử : Hút xác 5ml dung dịch chế phẩm vào bình định mức m l, thêm dung mòi động vừa đủ , trộn Lọc qua màng lọc milipore 0,45 |im Tiến hành đo HPLC song song điêu kiện vói dung dịch chuẩn - Dung dịch chuẩn : Cân xác khống 0,lg Panthenol đơi chiếu ( ĐC ) vào bình định mức 100ml Thêm khoảng 80 mi nước lắc siêu âm khoảng phút để hòa tan thèm nước vừa đủ Trộn đêu Hút xác 5ml dung dịch vào bình định mức 25ml , thêm dung môi động vừa đủ , trộn đêu Lọc qua màng lọc milipore 0,45 Tiến hành đo HPLC Hàm lượng mg Panthenol lOOml chế phẩm tính theo theo cơng thức : St X me X c A ( mg ) = — X 100% Sc Trong : - S t , Sc Lân lượt diện tích Píc tương ứng hoạt chất dung dịch chuẩn dung dịch th - m c Lượng cân chuẩn ( mg ) - c Hàm lượng tương ứng chuẩn 2.7 Độ vô khuẩn : Thử theo DĐVN I I , tập III ĐĨNG GĨI, GHI NHÃN, BẢO QUẢN Đóng gói : Nhãn : Bảo quản: Hạn dùng: Đóng lọ 5ml , lO m l, 15m l Rõ ràng, qui chế Noi khô, m át,tránh ánh sáng 24 tháng Hà nội, ngày 18 tháng năm 1997 PHĨ ỌIÁM^LỘC CƠNG TY Vũ Thị Thuận BỘ Y TẾ VĨẺN KIỂM NGHIỂM 48 Hai Bà Trưng Hà nội ĐT: 255471,255341 CỘNG HOÀ Xà HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - H ạnh phúc *** **í +++**** *=1«*+*+*++** PHIẾU KIỂM NGHIỆM S ổ':#T V K N /T C H Mẩu để kiểm nghiệm Thuốc nhỏ mắt Rotan 5ml Nơi sản xuất: Công ty Dược Traphaco Sô lô, sô Đ K , h ạn dùng : 031098 Người nơi gửi mẫu: NT Nơi lấy mẫu : Yêu cầu KN : (ghi rõ nội dung, số,ngày, tháng, : KTCL, xét duyệt TC năm công văn hay giấy tờ kèm theo) Ngày, tháng, năm nhận mẫu 24/12/97 Sô đăng ký KN: 431 TCH Người nhận mảu T h theo : TCCS Tình trạng mảu nhận mở niêm phong để KN: YÊU CẨU 1- Tính c h ấ t: Phải đạt qui định 2- Độ ưong : Phải đạt qui định 3- pH : 5,0 đến 7,0 ‘ 4- Thể tích : 5ml ± 10% 5- Định tính : Phải đáp ứng phep thử định tính hoạt chất Naphazolin niưat, chlorpheniramin maleat, Pyridoxin hydroclorid panthenol - Địnhlượng : Hàm lượng hoạt chất - Naphazolin nitrat (C 14H i 4N 2.H N 3) - Chlorphenừamin maleat (C 16H 19C1N2.C4H 40 4) - Pyridoxin hydroclorid (C 8H u N 3.H Q ) - Panthenol (C gH ^N O J chế phẩm phải đạt từ 90,0 đến 110,0% hàm lượng ghi nhãn 7- Độ vô trùng : Theo qui định Kết luận : KẾT QUẢ Đạt Đạt Đạt (6,2) Đạt Đúng Đạt(104,8%) Đạt (110,0%) Đạt (98,3%) Đạt (96,4%) Đạt 1- Nhất trí với tiêu chuẩn sở 2- Mẫu thử đạt yêu cầu kiểm tra chất lượng theo tiêu chuẩn sở ... tài : Nghiên cứu định lượng pyridoxin hydroclorid, naphazolin nitrat, chlorpheniramin maleat, panthenol thuốc nhỏ mắt đa thành phần phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với mong muốn phương pháp. .. chlorpheniramin maleat, panthenol thuốc nhỏ mắt đa thành phần phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao ♦ Đánh giá khả ứng dụng thực tiễn phương pháp cách áp dụng phương pháp vào định lượng số mẫu lưu hành... HPLC [30][34] : Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) gọi sắc ký lỏng cao áp hay sắc ký lỏng đại Đây phương pháp phân tích sử dụng kỹ thuật tách chất hỗn hợp dựa vào lực khác chất với hai pha: