Nghiên cứu định lượng artesunat khi có mặt dihydroartemisinin và hoặc acid succinic trong thành phẩm viên nén artesunat 50mg bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)

Iiộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ Dược HÀ TRƯỜNG ĐẠI HỌC NỘI Trần Thị Lan Hương NGHIÊN CỨU BỊNH LƯỢNG ARTESUNAT ■ ■ KHI CÓ MẶT DIHYDRO ARTEMISININ VÀ/HOẶC ACID SUCCINIC TRONG THÀNH PHẨM VIÊN NÉN ARTESUNAT 50MG BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NÂNG CAO (HPLC) (LU Ậ N VĂN T H Ạ C s ĩ D Ư Ợ C H Ọ C ) Chuyên ngành: Kiểm nghiệm thuốc - độc chất Mả số: 60 73 15 Người hướng dẩn: PGS.TS Trần Đức Hậu ẦLLữ H n ộ i- 0 LÒI CẢM ON Trước hết, xin b / tô íòng biết ơn ơn sâu sắc tói PGS.TS Trần Dức Hậu, người thả\ỵ tận tình chì bảo hướng dẫn, giúp đõ tơi hồn thành luận văn Nhản dịp nà/, cho tơi b / tỏ lòng biết ơn chân thành đêh: PCS TS Trần Tử An, Trưởng mơn ỉỉũá phần tích, Trường Dại học Dược Hả Nội PCS TS Lê Thành Phước, Trương môn ỉỉố vơ cơ, Trường Dại học Dược Hà Nội TS Trấn Viết ỈỈÙMỊ Trưởng phòng Dào tạo, Tníòng Dại học Dược Hà Nội DS Dương Viết Mậu, Phòng Dào tạo sau dại học, Trường Dại học Dược Hà Nội Tôi xin chân thảnh cảm ơn Dan Giám hiệu nhà trường, tập thê cản phòng Dào tạo - Trường Dại học Dược Mà Nội quan tâm, tạo diều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Trong trình thực hồn thành d ề tài, tơi dã nhận giúp đõ nhiệt tình thẩỵ, vả kỹ thuật viên môn ỉỉũá dược, Dộ môn ỉloổ vơ Dợ mơn ỉiố phẫn tích, tập the cẩn phòng Dáo tạo sau đại học, thư viện Trường Dại học Dược ỉỉả Nội Tôi xin chăn thành b / tỏ lòng biết ơn sầu sắc tất giúp đõ quí báu nà/ Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình bạn b ẻ ln động viên, khích lệ, giúp đõ tơi tận tình Trần Thị Lan Hương DI í A Dihydroartemisinin VlcOH M ethanol SDK Số đăng ký SKS Sỏ kiểm soát XNDP Xí nghiệp dược phám TW Trung ương HPLC Hiqh performance liquid (Sắc ký lỏng hiệu cao) chromatography Rs Resolution (Độ phân giải) tK Retention time (Thời gian lưu) w 11() World health organization (Tổ chức y tè thố giới) STT Ký hiệu Báng 1.1 Một vài loại cột thường dùng HPLC Bán u 3.1 Kết khát) sát tính thích hợp hệ thỏ’nu HPLC Bán£ 3.2 Bảng 3.3 Kết khảo sát khoảng tuyến tính Artesunat 41 Bàng 3.4 Kết đánh giá tính xác phương pháp 43 Bâng 3.5 Kết đánh giá lính phương pháp 44 Bán tí, 3.6 Nội dung Bànẹ 3.7 Báng 3.8 phương pháp Bán^ 3.9 Báng 3.10 41 49 Một số mẫu thuốc viên nén Artesunat 50mg tiến hành định lượng 52 Kết đánh giá độ đồng vồ khối lượng viên Kết đánh giá độ đổne đồu khối 1ượne viên mẫu thuốc số 11 38 Độ phân uiãi uiữa pie Acid succinic, Artesunat mẫu thuốc số 10 Dãy dung dịch kháo sát khoảng tuyến tính DHA Tran li 24 Kết đánh giá độ đồu khối lượng viên 53 54 55 mẫu thuốc số • ỉ1Z Báng 3.11 Kết đánh giá độ khối lượng viên mẫu ihuốc số 13 Báng 3.12 Kết định lượng Artesunat viên nén 56 57 mẫu thuốc số 14 15 16 Bán u 3.13 Bán u 3.14 Bán ^ 3.15 Kết định lượng Aitesunat viên nén mẫu thuốc số Kết định lượnụ Artesunat tronu viên nén mẫu thuốc số 58 59 Kết định lượng Artesunat viên nén mầu thuốc số 60 STT Ký hiệu Hình 3.1 Nội dung Trang Phổ hấp thụ tử ngoại dung dịch Artesunat chuẩn 35 2mi;/ml Đổ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính diện Hình 3.2 42 tích pic nồng độ dung dịch Artesunat Sự tương quan lượng Artesunat Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 ban đầu 45 lượn tỉ, tìm lại Sắc ký đồ dung dịch DHA, nồng độ lme,/ml 47 Sắc ký đổ dung dịch Acid succinic, nồng độ 47 0,5m^/ml Sắc ký đổ dung dịch Artesunat đối chiếu 48 Hình 3.6 mẫu tự tạo Hình 3.7 Hình 3.8 Sắc ký đồ mẫu trắng 48 Sắc ký đồ hỏn hợp Artesunat, DHA, Acid succinic 48 mẫu tự tạo Hình 3.9 Sắc ký đồ dung dịch định lượng mẫu thuốc sơ 61 10 Hình 3.10 Sắc ký đổ dung dịch định lượng mẫu thuốc số 62 11 Hình 3.11 Sắc ký đổ dung dịch định lượng mẫu thuốc số 62 12 Hình 3.12 Sắc ký đồ dung dịch định lượng mẫu thuốc số 62 MỤC LỤC Tranu phụ hìa Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết lắt Danh mục hảng Danh mục hình ĐẶT VÂN ĐỀ Ch ươm: T ổ N G Q U A N 1.1 Cày Thanh hao hoa vàng 1.2 Đại cươnu Artesunat 1.3 Một sô' phương pháp định lượng Artesunat 10 1.4 Các phương pháp định lươna Artesunat viên nén 14 1.5 Nhận xét lựa chọn 16 1.6 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 17 Chương ĐƠÌ TƯỢNG - HOÁ CHẤT- THIẾT bị NỒI DI NG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚƯ 28 2.1 Đòi tượng nghiên cứu 28 2.2 Dụnu cụ, hoá chất 2X 2.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 29 2.3.1 Phương pháp nghiên cứu 29 2.3.2 Nội duntí n u h i ê n cứu 29 2.3.3 Phương pháp xử lý đánh Í2,iá kết 31 Chương THƯC NGHIỆM , KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Khảo sát chọn điều kiện sắc ký 32 32 3.1.1 Kháo sát chọn thành phần pha động tốc độ dònu 32 3.1.2 Khảo sát chọn bước sóng thích hợp 35 3.1.3 Điều kiện sắc ký dã chọn 36 3.2 Lựa chọn dunu mỏi đê hoà tan chiết xuất Artesunat hoàn 36 U)àn khỏi viên nén Artesunat 3.3 Xây dựng đánh uiá phương pháp định lượng Artcsunat tronu 37 viên nén Artesunat 50me, bằnii phươnu pháp HFLC 3.3.1 Kháo sát tính thích hựp hệ thống sắc ký 37 3.3.2 Xãy dựng phương pháp định lưựng 38 3.3.3 Đánh giá phương pháp định lượng 40 3.4 Kết 49 3.5 Ap dụnu phươnu pháp xây dựns, tiến hành định lượng Artcsunat trone vièn nén Arlcsunat 5()mg số sở sản xuất 52 3.5.1 Đánh giá độ vé khối lượng 53 3.5.2 Định lượng 57 3.5.3 Bàn luận 61 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 63 4.1 Kốt luận 63 4.2 Một sô ý kiên đổ xuất 64 TÀI LIỆU TH A M KH ẢO PHỤ LỤC 65 ĐẶT VÂN ĐỂ Sốt rét bệnh xã hội ký sinh trùng sốt rét Plasmodium gây Bệnh phát triển mạnh vùng có khí hậu nóng, ẩm, mưa nhiều châu Á, châu Phi châu Mỹ La tinh Tác nhân truyền bệnh muỗi, khơng phòng ngừa ngăn chặn kịp thời, bệnh lan tràn thành dịch nguy hiểm Theo số liệu thống kê Tổ chức Y tế giới (WHO) số người mắc bệnh sốt rét hàng năm có khoảng từ 100 đến 200 triệu người, có từ dến 1,5 triệu ca tử vong[22],[36] Theo Bộ Y tế, Việt Nam, hàng năm có triệu ca sốt rét, có 30 nghìn ca sốt rét ác tính [25] Việc kiểm sốt sốt rét khó khăn, có tới 1,7 tỷ người sinh sống vùng mà trước sốt rét bị đẩy lùi phát triển trở lại Điều đáng lo ngại ký sinh trùng sốt rét trở nên kháng hầu hết loại thuốc quen thuộc Quinin, Cloroquin, Mìoquin, Primaquin, Quinacrin [31] Vào năm 1972, nhà khoa học Trung Quốc chiết xuất từ Thanh hao hoa vàng chất có tác dụng điều trị sốt rét gọi Quinghaosu (Artemisinin) Chất chứng tỏ hiệu lực điều trị sốt rét nhanh hàng ngàn bệnh nhân bị sốt rét nhiễm chủng p falciparum kháng thuốc khác Hơn Artemisinin dẫn chất có khả vượt qua hàng rào máu não nên có hiệu lực điều trị sốt rét thể não [15], [44] Tuy nhiên, khả hoà tan Artemisinin kém, tỷ lệ tái phát sau dùng cao nên tác dụng điều trị có phần hạn chế Để hoàn thiện tác dụng điều trị Artemisinin, nhà khoa học Trung Quốc giới bán tổng hợp loạt dẫn chất Artemisinin đáng ý Artesunat Với ưu điểm có hoạt lực điều trị mạnh Artemisinin, Artesunat sử dụng rộng rãi Artesunat có dạng bào chế thuốc tiêm thuốc viên Ưu điểm thuốc viên nén dễ sử dụng bảo quản nên dùng để điều trị rộng rãi Việc xây dựng ban hành tiêu chuẩn cho viên nén Artesunat cần thiết Hiện nay, Việt Nam có hai phương pháp thức để định lượng viên nén Artesunat phương pháp ghi tiêu chuẩn ngành (phương pháp đo quang phổ tử ngoại) phương pháp ghi tiêu chuẩn sở (phương pháp chuẩn độ acid-base) Trên thực tế, áp dụng phương pháp này, kết thường không phù hợp Các kết định lượng cho thấy, phương pháp đúng, xác song khơng đặc hiệu Các sản phẩm phân huỷ trình bảo quản nguyên liệu dùng để điều chế Artesunat (DHA acid sucinic) ảnh hưởng lớn tới kết định lượng Khi chế phẩm cần định lượng có lẫn 1% acid sucinic kết định lượng theo phương pháp ghi tiêu chuẩn sở tăng khoảng 6,5% Khi chế phẩm cần định lượng có lẫn 1% DHA kết định lượng theo phương pháp ghi tiêu chuẩn ngành tăng khoảng 1,4% Vì vậy, phương pháp áp dụng để định lượng mẫu Artesunat khơng lẫn lẫn tạp chất Nếu Artesunat lẫn tạp chất DHA acid succinic kết định lượng theo phương pháp nói cao thực tế [12] Để xây dựng phương pháp định lượng Artesunat có tính đặc hiệu cao, đồng thời góp phần làm sở xây dựng tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam, tiến hành đề tài “Nghiên cứu định lượng Artesunat có mặt Dihydroartemisinin và/hoặc Acid succinic thành phẩm viên nén Artesunat 50mg phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC)” với mục tiêu sau: - Xây dựng quy trình kỹ thuật để định lượng Artesunat có mặt dihydroartemisinin và/hoặc acid succinic viên nén Artesunat 50mg phương pháp HPLC - Đánh giá phương pháp xây dựng, đặc biệt ý tới tính đặc hiệu phương pháp - Áp dụng phương pháp xây dựng để định lượng số chế phẩm viên nén có chứa Artesunat 50mg sản xuất lưu hành Việt Nam, qua sơ đánh giá chất lượng chúng CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Cây Thanh hao hoa vàng - Tên khoa học: Artemisia annua L Asteraceae - Tên gọi khác: Ngải si, ngải đắng, ngải hoa vàng, n g ả i - Đặc điểm thực vật: Cây thảo sống hàng năm, cao từ 1- 1,5 m, thân có rãnh, gần không lông, xẻ lông chim lần, thành phiến hẹp, phủ lơng mềm, phiến hình xoan, không lông Cụm hoa đầu hợp thành chùm kép, bắc tổng bao hình trứng hình bầu dục Hoa màu vàng nhạt, cụm hoa gồm hoa, hoa lưỡng tính, xung quanh hoa Quả bế hình trứng, dài mm, khơng có mào lơng, mặt vỏ có tuyến chứa tinh dầu Ra hoa tháng -1 , tháng 10, thường lụi vào tháng Trên thị trường, thường bị lẫn với khác gọi hoàng cao hay xú cao họ Cúc quanh năm màu vàng lục có mùi hơi, hao hoa vàng thật mùa thu vàng, trước có màu lục [18], [37], [39], Cây mọc nhiều nơi giới, chủ yếu tập trung nơi có khí hậu nhiệt đới, ơn đới như: Bắc Mĩ, Nga, Trung Quốc, Mông c ổ , Nhật Bản, Ấn Độ Việt Nam, mọc hoang thành cụm dọc ven sông, suối, chân đồi nơi ẩm thấp, có nhiều tỉnh phía Bắc: Lạng Sơn, Cao Bằng, Quảng Ninh, Thái Nguyên dọc tỉnh miền Trung Hiện nay, trồng quy mô lớn nhiều nơi, chủ yếu lấy để chiết xuất Artemisinin [17],[18] Thanh hao hoa vàng thuốc cổ truyền Trung Quốc sử dụng lâu đời Trong tài liệu y học cổ truyền Trung Quốc có nói đến Quinghao ghi chép sớm chữa tới 52 loại bệnh, có sốt rét Từ đời Hán, năm 168 trước công nguyên người ta dùng Quinghao để chữa bệnh, người Trung Quốc đề xuất cách hạ sốt sau: dùng nắm Quinghao ngâm lít nước, lọc lấy nước Tiếng Anh 32 Bristish pharmacopoeia (2001) volume II, P-A141 - p.A145 33 Due DD, Dc Vires PJ, Khanh NX, Binh LL, Kager PA et al (1994): The pharmacokinetics o f single dose o f Artemisinin in healthy Vietnamese subjects, Am J Trop Med Hyg 51, p.785-790 34 Prof Yuri Kazakevich, Prof H.M Harold M cNair (1996), Text book on High performance liquid chromatography (H PLC), p 127-128, 231239 35 D.L.Klayman (1985), An antimalaria drug from China, Science 288, p.1049-1055 36 Dr Lee S.Seif (1996), "Update on malaria situation in the Western Pacific region", Regional adviser in malaria, WHO/WFRO 37 Nancy Acton, Daniel L Klayman and Iryin J Rollmal (1985), Planta Medica No.3, p.445-446 38 Pharmacopoeia of the people's Republic of China (1997), volume II, P-A30-A32 39 Shi Shan Zhao and Mei Yi Zeng (1985), Planta Medica No3 p.233-237 40 The Merck Index (1996) - Twelfth edition, p 138 41 The United States Pharmacopeia volume II, p 1914-1924 42 WHO (1998), The International Phamacopoeia third edition, volume 3, p.22-24 43 WHO (2004), The International Phamacopoeia third edition, volume 5, p.222 -225 44 WHO (2000), The use of antimalarial drug, Report of a WHO informal consultaion, 13-17, p 76-78 45 Woerdenbag HJ, Charles B Lugi and Niesko Pras (1990), "Artemisia annua L.: a source of novel antimalaria drug", Pharmaceutish Weekblad Sientific edition - 12, p 169 46 Z.M.Zhou, J.C.Ander, N.Chung (1987), Journal of Chromatography, 441, p.77-90 -P I - PHỤ LỤC M ột số sắc ký đồ khảo sát điều kiện sác ký 1.1 Sác kv đ k h ả o sál p H Irong pha đ ộ ng 1.1.1 p H = VN Artesunat 2mg/ml, pha dong MeOH/pH=7, toc 0.8ml/m Sample Name: Vial Number: Sample Type: Control Program: Quantif Method: Recording Time: Run Time (min): N o R e t.T im e V N A r te s u n a t m g /m l, p h a d o n g u n know n d efa u lt 1 /4 /2 0 :3 ; P eak N am e m in 9 3 T ota l: M e O H /p H = RA2 Acid Succinic Artesunat n.a Injection Volume: Channel: Wavelength: Bandwidth: Dilution Factor: Sample Weight: Sample Amount: H eig h t A rea R e l-A re a mAU m A U *m in % 3 8 2 4 8 0 U V _V IS _1 n a n a 0 0 0 0 0 0 A m ou nt Type n.a 4 87.99 n a M * n.a MB* 0 0 0 0 BM * 1.1.2 p H = 7,1 Mau tu tao c= 2mg/ml, pha dong MeOH/pH7,1 Sample Name: Vial Number: Sample Type: Control Program: Quantif Method: Recording Time: Run Time (min): M a u tu t a o c = m g /m l, p h a d o n g M e O H /p H RA4 un know n d efa u lt 1 /1 /2 0 5 :3 9 Injection Volume: Channel: Wavelength: Bandwidth: Dilution Factor: Sample Weight: Sample Amount: 0 U V _V IS _1 n a n a 0 0 0 0 0 0 I1 2Q TĨNH T Ú YÈN TINH cot moi #3 [m odified by A dm inistrator, peaks m a nually assigned] -m AU u v VIS V W L:216 nm 100 - A rte su n a t - 4.377 I 75- 63- 50- 38- 25- 131 - A cid/succirH c - 3.017 - T a p -6 4 - D H A - 12.747 -1 -Ị I— T— r - 0 _ zo N o R e t.T im e 4:0 Peak N am e rn in T ota l: 3.02 4.38 6.24 12.75 Acid succinic Artesunat Tap DHA 6.0 10.0 _8.0_ 15.0 12.0 H eig h t A rea R e l.A re a mAU m A U *m in % 0.987 87.857 1.554 0.085 0.038 32.126 0.802 0.065 0.12 97.26 2.43 0.20 90.482 3 0 0 A m ou nt n.a n.a n.a n.a 0 0 Type BM *A MB* BMB* BMB*A 1.1.3 p H = 7,2 Mau tu tao 2mg/ml, pha dong MeOH/pH 7,2 Sample Name: Vial Number: Sample Type: Control Program: Quantif Method: Recording Time: Run Time (min): N o M a u tu t a o m g /m l, p h a d o n g M e O H /p H ,: RA2 u n know n d efa u lt 1 /3 /2 0 5 :0 P eak N am e R e t.T im e m in Injection Volume: Channel: Wavelength: Bandwidth: Dilution Factor: Sample Weight: Sample Amount: H eig h t A rea R e l.A r e a m AU m A U *m in % 0 U V _V IS _1 n a n a 0 0 0 0 0 0 A m ou nt Type n a 2 1 n.a BM * n a 8 7 n a M * n a n.a MB* T ota l: 9 0 0 0 0 1.2 Sắc k ý 1.2.1 T ố c đ ổ đ ộ kh ả o ,6 s t tố c đ ộ d ò n g m l/p h ú t Mau tu tao 2mg/ml, toe 0,6ml/phut M a u tu t a o m g /m l, t o e d o ,6 m l/p h u t In je c t io n V ia l N u m b e r : RA2 C h a n n e l: u v VIS S a m p le unknow n W a v e le n g t h : n a B a n d w id t h : n a d efa u lt D ilu t io n F a c to r: 0 0 /2 /2 0 :2 S a m p le W e ig h t : 7 S a m p le A m o u n t : S a m p le N a m e : T y p e : C o n tro l P ro g m : Q u a n t if M eth o d : R e c o r d in g R u n T im e T im e : (m in ): 0 V o lu m e : 0 0 0 0 Mau A rt #1 [m odified by A dm inistrator] 70.0' u v VIS V W L nm mAU 0 ' - 4.107 0 - 40,0- 0 - ị 0 - 10.0" - 1 0 T 1- 0.0 N o 2.0 4.0 R e t.T im e 6.0 Peak N am e m in 8.0 10.0 12.0 14.0 H eig h t A rea R e l.A r e a mAU m A U *m in % 17.7 16.0 A m ou nt Type n a 8 n.a BM * 1 n a n.a M * n a 3 0 11.10 n.a 9 0.21 0.67 4 100.00 T ota l: n.a n.a 0 0 MB* BMB* 1.2.2 Tốc độ 0,8 ml/phúi Artesunat chuan 2mg/ml , toc dong 0.8ml/m S a m p le N a m e : A rtesu n at ch u a n m g /m l , t o e d o d o n g n In je c t io n 0 V o lu m e : V ia l N u m b e r : RA3 C h a n n e l: u v VIS S a m p le un know n W a v e le n g t h : n a T y p e : C o n tro l P ro g m : Q u a n t if M e th o d : R e c o r d in g R u n T im e N o T im e : (m in ): R e t.T im e B a n d w id t h : n a d efa u lt D ilu t io n F a c to r: 0 0 1 /1 /2 0 :0 S a m p le W e ig h t : S a m p le A m o u n t : Peak N am e m in 4 T ota l: Acid succinic Artèsunat H eig h t A rea R e l.A r e a m AU m A lT m in % 3 1 9 8 3 0 0 0 0 0 0 A m ou nt n.a n.a 0 0 Type BMB*A BMB*A PHỤ LỤC Một số sác kv đồ đánh giá tính tuyến tính 2.1 Sắc ký đổ d u n g dịch Artcsunal m ẫu viên nén tự tạo l m g / m l c= 1mg/ml mau tu tao pha M e0H/H20 S a m p le N a m e: c= m g /m l m a u tu t a o p h a t r o n g M e O H /H In je c t io n V o lu m e : 0 V ia l N u m b e r : RA5 C h a n n e l: U V _V IS _1 S a m p le unknow n W a v e le n g t h : n a B a n d w id t h : n a T y p e : C o n tro l P ro g m : Q u a n t if M e t h o d : d efa u lt D ilu t io n F a c to r: 0 0 R e c o r d in g 1 /1 /2 0 5 :5 S a m p le W e ig h t : 0 0 S a m p le A m o u n t : R u n T im e T im e : (m in ): 0 0 c==1.5 mg/mỉ mau tu tao pha M e0H/H20 S a m p le N a m e: c = m g /m l m a u tu t a o V ia l N u m b e r : RA6 S a m p le unknow n T y p e : pha tron g M e O H /H In je c t io n Q u a n t if M eth o d : R u n T im e N o T im e : ( m in ): R e t.T im e W a v e le n g t h : n a n a d efa u lt D ilu t io n F a c to r: 0 0 1 /1 /2 0 :1 S a m p le W e ig h t : 5 S a m p le A m o u n t : Peak N am e m in T ota l: U V _V IS _1 B a n d w id t h : C o n tro l P ro g m : R e c o r d in g 0 V o lu m e : C h a n n e l: Acid succinic Artesunat DHA H eig h t A rea R e l.A re a mAU m A lP m in % 0 0 8 9 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 A m ount n.a n.a n.a 0 0 Type BMB* BMB* BMB c= 2mg/ml mau tu tao V ia l N u m b e r : RA4 C h a n n e l: 20.0 u v VIS S a m p le unknow n W a v e le n g t h : n a B a n d w id t h : n a d efa u lt D ilu t io n F a c to r: 1.0000 S a m p le W e ig h t : 1.0000 1.0000 S a m p le N a m e: T y p e : c = m g /m l m a u tu t a o In je c t io n C o n tro l P ro g m : Q u a n t if M eth o d : R e c o r d in g R u n T im e N o T im e : ( m in ): R e t.T im e 11/16/2005 15:38 14.99 Peak N am e m in 2 4 T ota l: Acid succinic Artesunat Tap DHA V o lu m e : S a m p le A m o u n t : H eig h t A rea R e l.A re a m AU m A lT m in % 0 8 2 5 2 0 0 0.20 90.482 33.032 100.00 A m ount n.a n.a n.a n.a 0 0 Type BM *A MB* BMB* BMB*A S a m p le N a m e: c = m g /m l m a u tu t a o p h a t r o n g M e O H /H In je c t io n V o lu m e : 0 V ia l N u m b e r : RA7 C h a n n e l: U V _V IS _1 S a m p le unknow n W a v e le n g t h : n a B a n d w id t h : n a Q u a n t if M e t h o d : d efa u lt D ilu t io n F a c to r: 0 0 R e c o r d in g 1 /1 /2 0 S a m p le W e ig h t : 0 0 T y p e : C o n tro l P ro g m : R u n T im e T im e : (m in ): 1 :2 S a m p le A m o u n t : 0 0 c= mg/ml mau tu tao pha M e0H /H 20 S a m p le N a m e: c = m g /m l m a u tu t a o p h a t r o n g M e O H /H ' In je c t io n 0 V o lu m e : V ia l N u m b e r : RA8 C h a n n e l: U V _V IS _1 S a m p le un know n W a v e le n g t h : n a B a n d w id t h : n a D ilu t io n F a c to r: 0 0 W e ig h t : 0 0 T y p e : C o n tro l P ro g m : Q u a n t if M e t h o d : d efa u lt R e c o r d in g 1 /1 /2 0 :4 S a m p le S a m p le A m o u n t : R u n T im e N o T im e : (m in ): R e t.T im e Peak N am e m in T ota l: 4 Acid succinic Artesunat DHA H e ig h t A rea R e l.A r e a mAU m A U *m in % 9 0 4 4 9 0 0 0 0 4 0 0 0 0 A m ou nt n.a n.a n.a 0 0 Type BMB* BMB* BMB* Mau ta duoc 0 M a u ta d u o c In je c t io n V ia l N u m b e r : RA1 C h a n n e l: U V _V IS _1 S a m p le u n know n W a v e le n g t h : n a B a n d w id t h : n a D ilu t io n F a c to r: 0 0 S a m p le W e ig h t : 0 0 S a m p le N a m e: T y p e : C o n tro l P ro g m : Q u a n t if M e t h o d : d e fa u lt R e c o r d in g 1 /1 /2 0 R u n T im e T im e : (m in ): :0 V o lu m e : S a m p le A m o u n t : 0 0 TINH TU YEN TINH cot m oi # [m o dified by A dm inistrator] ~ _ UV V IS i 15.0 N o R e t.T im e m in T ota l: Peak N am e H e ig h t A rea mAU m A U *m in 0 0 0 0 R e l.A re a A m ount % 0 0 0 Type PHU LỤC M ột sô sác ký đồ định lượng 3.1 Sắc ký đồ định lượng Artesunat mẫu thuốc số Vn Artesunat cua Traphaco 08/2008 0 S a m p le N a m e : V n A r te s u n a t c u a T r a p h a c o /2 0 In je c t io n V ia l N u m b e r : RA4 C h a n n e l: U V _V IS_1 S a m p le unknow n V o lu m e : W a v e le n g t h : n a C o n tro l P ro g m : B a n d w id t h : n a Q u a n t if M e t h o d : d e fa u lt D ilu t io n F a c to r: 0 0 R e c o r d in g 1 /1 /2 0 :5 S a m p le W e ig h t : 0 0 S a m p le A m o u n t : R u n T y p e : T im e N o T im e : (m ill) : P eak N am e R e t.T im e m in A cid s u ccin ic 4 A rtesun at T ota l: DHA H eig h t A rea m AU m A U *m in R e l.A r e a 0 0 A m ount Type % B M ‘A 2 ,2 n.a 7 9 n a M B*A 1 n c i BMBA 0 3 0 0 0 0 17 Vn Artesunat cua Traphaco 12/05 S a m p le N a m e : Vn A r t e s u n a t c u a T r a p h a c o /0 V ia l N u m b e r : RA3 S a m p le un know n T y p e : In je c t io n C o n tro l P ro g m : 0 V o lu m e : C h a n n e l: U V _V IS_1 W a v e le n g t h : n a B a n d w id t h : n a Q u a n t if M e t h o d : d efa u lt D ilu t io n F a c to r: 0 0 R e c o r d in g 1 /2 /2 0 5 :2 S a m p le W e ig h t : 0 0 9 S a m p le A m o u n t : R u n T im e N o T im e : (m in ): P eak N am e R e t.T im e m in A rea R eK A rea m AU m A U *m in % A m ount Type B M *A n a 4 2 9 3 n a M b*A Tap 3 9 n a bM BA DHA 1 4 n a B M B *A 4 0 0 0 A cid s u ccin ic A rtesun at T ota l: H eig h t 0 0 0 0 15 VnArtesunat cua XNTU1 \ S a m p le N a m e: V n A rtesu n at V ia l N u m b e r : RA4 S a m p le unknow n T y p e : cu a XNTU1 In je c t io n C o n tro l P ro g m : 0 V o lu m e : C h a n n e l: uv W a v e le n g t h : n a B a n d w id t h : n a V IS Q u a n t if M e t h o d : d efa u lt D ilu t io n F a c to r: 0 0 R e c o r d in g 1 /1 /2 0 :1 S a m p le W e ig h t : 0 0 S a m p le A m o u n t : R u n T im e : T im e ( m in ) : N o R e t.T im e Peak N am e m in A cid su ccin ic A rtesunat Tap T ota l: DHA H eig h t A rea m AU m A U *m in R eLA rea 1 0 0 A m ou nt T ype % n a 8 n a M B*A 8 n a BM BA n a B M B *A 0 9 6 3 0 0 0 0 B M *A ... Nam, tiến hành đề tài Nghiên cứu định lượng Artesunat có mặt Dihydroartemisinin và/ hoặc Acid succinic thành phẩm viên nén Artesunat 50mg phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) với mục tiêu sau:... acid succinic) phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với detector u v 1.6 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 1.6.1 Nguyên tắc Phương pháp HPLC phương pháp phân tích hố lý, dùng để tách định lượng thành. .. thuật để định lượng Artesunat có mặt dihydroartemisinin và/ hoặc acid succinic viên nén Artesunat 50mg phương pháp HPLC - Đánh giá phương pháp xây dựng, đặc biệt ý tới tính đặc hiệu phương pháp -