Nghiên cứu định lượng azelastin hydroclorid và benzalkonium clorid trong chế phẩm thuốc xịt mũi nozeytin bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN HOÀNG YẾN NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG AZELASTIN HYDROCLORID VÀ BENZALKONIUM CLORID TRONG CHẾ PHẨM THUỐC XỊT MŨI NOZEYTIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2020 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN HOÀNG YẾN MÃ SINH VIÊN: 1501566 NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG AZELASTIN HYDROCLORID VÀ BENZALKONIUM CLORID TRONG CHẾ PHẨM THUỐC XỊT MŨI NOZEYTIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: ThS Ngô Minh Thúy Nơi thực hiện: Bộ mơn Hóa phân tích – Độc chất HÀ NỘI – 2020 LỜI CẢM ƠN Khóa luận thực Bộ mơn Hóa phân tích – Độc chất, Trường Đại học Dược Hà Nội hướng dẫn ThS Ngô Minh Thúy Để hồn thành khóa luận này, thân tơi nhận nhiều giúp đỡ từ thầy cô giáo, gia đình bạn bè Hiện khóa luận hồn thành, tơi xin phép bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc chân thành đến họ Đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới ThS Ngô Minh Thúy, người thầy tận tình hướng dẫn, bảo ln động viên khích lệ tơi suốt q trình làm thực nghiệm Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn tới TS Lê Đình Chi ThS Vũ Ngân Bình ln sẵn sàng cho lời khuyên, hướng nghiên cứu trình thực đề tài Đồng thời, tơi xin trân trọng cảm ơn thầy cô giáo, anh chị kỹ thuật viên Bộ mơn Hóa phân tích – Độc chất, Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện, giúp đỡ động viên tơi hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn tới bạn bè, người thân gia đình ln tạo điều kiện, quan tâm, giúp đỡ, động viên suốt trình học tập, nghiên cứu Cuối xin kính chúc thầy anh chị ln mạnh khỏe, hạnh phúc thành công công việc sống Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2020 Sinh viên Nguyễn Hoàng Yến MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan đối tượng nghiên cứu 1.1.1 Đặc điểm azelastin hydroclorid benzalkonium clorid 1.1.2 Một số phương pháp phân tích định lượng 1.2 Tổng quan sắc ký lỏng hiệu cao 1.2.1 Nguyên tắc 1.2.2 Phân loại 1.2.3 Sắc ký lỏng pha đảo 1.2.4 Các kỹ thuật định lượng HPLC 10 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.1 Đối tượng nghiên cứu 12 2.2 Nguyên vật liệu, thiết bị 12 2.2.1 Hóa chất 12 2.2.2 Thiết bị, dụng cụ 12 2.3 Nội dung nghiên cứu 13 2.4 Phương pháp nghiên cứu 13 2.4.1 Khảo sát bước sóng phát 13 2.4.2 Khảo sát điều kiện sắc ký 13 2.4.3 Khảo sát nồng độ định lượng 14 2.4.4 Thẩm định quy trình 14 2.4.5 Áp dụng phương pháp 18 2.4.6 Xử lý kết 18 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 19 3.1 Quy trình chuẩn bị mẫu 19 3.1.1 Chuẩn bị mẫu thử 19 3.1.2 Chuẩn bị mẫu placebo 19 3.1.3 Chuẩn bị dung dịch chuẩn 19 3.1.4 Chuẩn bị mẫu thử thêm chuẩn 20 3.2 Quy trình chuẩn bị dung môi pha động 22 3.3 Khảo sát phương pháp 22 3.3.1 Lựa chọn bước sóng 22 3.3.2 Khảo sát điều kiện sắc ký 23 3.3.3 Khảo sát nồng độ định lượng 26 3.4 Phương pháp phân tích đồng thời AZH BAC 27 3.5 Thẩm định phương pháp 27 3.5.1 Độ thích hợp hệ thống (system suitability) 27 3.5.2 Độ chọn lọc (selectivity) 28 3.5.3 Đường chuẩn khoảng tuyến tính (linearity) 30 3.5.4 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) 31 3.5.5 Độ chụm phương pháp (precision) 32 3.5.6 Độ (trueness) 33 3.6 Ứng dụng phương pháp phân tích chế phẩm thuốc xịt mũi thị trường 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tên tiếng Anh tên khoa học Tên tiếng Việt ACN Acetonitrile Acetonitril AZH Azelastine hydrochloride Azelastin hydroclorid BAC Benzalkonium chloride Benzalkonium clorid HPLC High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao LOD Limit of Detection Giới hạn phát LOQ Limit of Quantitation Giới hạn định lượng MeOH Methanol Methanol Reversed Phase High Performance Liquid Sắc ký lỏng hiệu cao Chromatography pha đảo RP-LC Reversed Phase Liquid Chromatography Sắc ký lỏng pha đảo RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn RP-HPLC TB Gíá trị trung bình THF Tetrahydrofuran Tetrahydrofuran TLC Thin Layer Chromatography Sắc ký lớp mỏng UV Ultraviolet Tử ngoại DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số phương pháp phân tích định lượng HPLC Bảng 2.1 Các điều kiện pha động khảo sát 14 Bảng 3.1 Cách pha dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp 20 Bảng 3.2 Cách pha mẫu thêm chuẩn AZH 21 Bảng 3.3 Cách pha mẫu thêm chuẩn BAC 22 Bảng 3.4 Kết độ ổn định hệ thống 28 Bảng 3.5 Kết khảo sát đường chuẩn 30 Bảng 3.6 Kết xác định LOD LOQ 32 Bảng 3.7 Kết độ lặp lại ngày khác ngày 32 Bảng 3.8 Kết độ AZH 33 Bảng 3.9 Kết độ BAC 33 Bảng 3.10 Kết định lượng azelastin hydroclorid chế phẩm 34 Bảng 3.11 Kết định lượng benzalkonium clorid chế phẩm 34 DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo azelastin hydroclorid Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo benzalkonium clorid Hình 1.3 Thuốc xịt mũi Nozeytin Hình 2.1 Cách xác định tỷ lệ tín hiệu nhiễu 16 Hình 3.1 Phổ hấp thụ UV AZH BAC 23 Hình 3.2 Kết khảo sát thành phần pha động 24 Hình 3.3 Kết khảo sát pH đệm 25 Hình 3.4 Kết khảo sát tốc độ dịng bước sóng 210 nm 26 Hình 3.5 Sắc ký đồ kết độ chọn lọc 29 Hình 3.6 Hình 3.7 Đồ thị biểu diễn mối tương quan tuyến tính diện tích pic nồng độ azelastin hydroclorid Đồ thị biểu diễn mối tương quan tuyến tính diện tích pic nồng độ benzalkonium clorid 30 31 ĐẶT VẤN ĐỀ Một thành phần quan trọng chế phẩm thuốc đa liều chất bảo quản kháng khuẩn Các thành phần có tác dụng làm giảm nguy xâm nhập vi khuẩn sau dùng phần chế phẩm Theo quy định quốc tế hành, tiêu chuẩn thành phẩm thuốc phải có quy định giới hạn chất bảo quản có sử dụng cơng thức bào chế, tên hàm lượng chất phải ghi nhãn thuốc Tại thời điểm sản xuất, sản phẩm cần chứa lượng chất bảo quản kháng khuẩn công bố (trong phạm vi ± 20% dao động cho phép sản xuất kiểm nghiệm) [2] Một chất bảo quản kháng khuẩn thường sử dụng công thức thuốc nhỏ mũi benzalkonium clorid Ở Việt Nam, phương pháp định lượng benzalkonium clorid thuốc xịt mũi azelastin hydroclorid sắc ký lỏng hiệu cao công bố [5] Các chế phẩm azelastin hydroclorid thường chứa thành phần chất bảo quản benzalkonium clorid Tính đến giới có số phương pháp phát triển để định lượng hai chất đồng thời với nhau, nhiên chưa có nghiên cứu cơng bố Việt Nam Chính vậy, tơi tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu định lượng Azelastin hydroclorid Benzalkonium clorid chế phẩm thuốc xịt mũi Nozeytin phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao” đối tượng cụ thể chế phẩm thuốc xịt mũi Nozeytin với hai mục tiêu chính: Xây dựng thẩm định phương pháp phân tích azelastin hydroclorid benzalkonium clorid sắc ký lỏng hiệu cao Ứng dụng phương pháp để định lượng azelastin hydroclorid benzalkonium clorid chế phẩm CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan đối tượng nghiên cứu 1.1.1 Đặc điểm azelastin hydroclorid benzalkonium clorid Azelastin hydroclorid dạng muối hydroclorid azelastin, hợp chất phthalazinone thuộc nhóm thuốc kháng histamin hệ thứ hai, có đặc tính chống dị ứng giãn phế quản [12] O N CH3 N N HCl Cl Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo azelastin hydroclorid Công thức phân tử: C22H24ClN3O HCl Danh pháp: 1(2H)-Phthalazinone, 4-[(4-clorophenyl)methyl]-2-(hexahydro-1methyl-1H-azepin-4-yl), monohydroclorid Tên khác: 4-(p-Clorobenzyl)-2- (hexahydro-1-methyl-1H -azepin-4-yl)-1(2H)-phthalazinone monohydroclorid Phân tử lượng: 418,36 Tính chất vật lý: Bột trắng gần trắng, dạng tinh thể Tan ethanol metylen clorid; tan nước [29] Azelastin bào chế dạng thuốc xịt mũi, nhỏ mắt dạng uống để điều trị viêm mũi dị ứng, hen suyễn viêm kết mạc dị ứng Azelastin làm giảm chảy nước mũi, hắt nghẹt mũi; có hiệu chống lại hen suyễn tập thể dục dị ứng bệnh nhân hen suyễn ngoại sinh [12] Thuốc nhỏ mắt azelastin định để điều trị chỗ viêm kết mạc dị ứng theo mùa lâu năm [28] Cơ chế tác dụng bao gồm ức chế giải phóng histamin từ tế bào mast ức chế co thắt phế quản histamin leukotrien [12] Các thuốc xịt mũi chứa azelastin hydroclorid thường chế phẩm đơn hoạt chất kết hợp với số corticosteroid (mometasone furoate, fluticasone propionate…) 4500 Diện tích pic (mAU.s) 4000 y = 22.503x + 5.96 R² = 0.9976 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 50 100 150 200 Nồng độ (µg/mL) Hình 3.7 Đồ thị biểu diễn mối tương quan tuyến tính diện tích pic nồng độ benzalkonium clorid Nhận xét: Từ đồ thị ta thấy, khoảng nồng độ khảo sát, tương quan tuyến tính nồng độ diện tích pic khảo sát sau: - Azelastin hydroclorid: tuyến tính khoảng nồng độ 52,5 – 157,5 µg/mL, hệ số tương quan r = 0,999; hệ số chắn nồng độ 100%: Y = 0,40% (< 2,0%) - Benzalkonium clorid: tuyến tính khoảng nồng độ 62,5 – 187,5 µg/mL, hệ số tương quan r = 0,999; hệ số chắn nồng độ 100%: Y = 0,21% (< 2,0%) Kết luận: Phương pháp khảo sát có khoảng tuyến tính với AZH BAC đạt u cầu 3.5.4 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) LOD LOQ BAC xác định dựa tỷ lệ tín hiệu nhiễu (S/N) pic BAC Dựa đáp ứng pic mẫu chuẩn 50% mẫu trắng, tính tỷ lệ S/N), từ ước lượng khoảng nồng độ LOD LOQ AZH BAC Chuẩn bị mẫu khoảng nồng độ ước lượng tiến hành sắc ký mục 3.4 Kết trình bày bảng 3.6 31 Bảng 3.6 Kết xác định LOD LOQ LOD (µg/mL) S/NLOD LOQ (µg/mL) S/NLOQ AZH 1,2 3,5 4,0 12 BAC 15,0 50,0 10 3.5.5 Độ chụm phương pháp (precision) Chuẩn bị mẫu mục 2.4.4 pha theo quy trình mục 3.1, tiến hành sắc ký mục 3.4 Kết trình bày bảng 3.7 Bảng 3.7 Kết độ lặp lại ngày khác ngày SBAC (mAU.s) SAZH (mAU.s) Tổng % HL AZH % HL BAC BAC BAC 2021,7 2078,2 718,6 2796,8 108,3 98,2 2013,1 2080,1 731,4 2811,5 107,9 98,7 2003,2 2111,7 723,6 2835,3 107,4 99,4 2007,0 2105,7 717,7 2823,4 107,6 99,0 2009,9 2141,3 752,3 2893,6 107,7 101,3 2007,8 2125,6 742,5 2868,1 107,6 100,5 TB1 (n = 6) 107,8 99,5 RSD1 (%) 0,3 1,2 Ngày STT 1944,2 2051,6 760,7 2812,3 102,9 99,8 2031,1 2066,8 750,3 2817,1 107,6 99,9 2021,7 2067,8 777,3 2845,1 107,1 100,9 2030,8 2062,6 791,7 2854,3 107,6 101,3 2042,1 2056,6 761,5 2818,1 108,2 100,0 2048,2 2066,1 741,8 2807,9 108,5 99,6 TB2 (n = 6) 107,0 100,2 RSD2 (%) 1,9 0,7 TB (n = 12) 107,4 99,9 RSD (%) 1,4 1,0 Nhận xét: RSD hàm lượng AZH BAC mẫu độ lặp lại ngày 12 mẫu độ lặp lại khác ngày không lớn 2,0% 32 Kết luận: Phương pháp khảo sát có độ lặp lại tốt với AZH BAC 3.5.6 Độ (trueness) Chuẩn bị mẫu mục 2.4.4 pha theo quy trình mục 3.1, tiến hành sắc ký mục 3.4 Kết độ thu hồi trình bày bảng 3.8 3.9 Bảng 3.8 Kết độ AZH STT CAZH thêm (µg/mL) S (mAU.s) CAZH thu hồi (µg/mL) % thu hồi (%) 30,18 1598,3 29,3 97,2 31,38 1631,2 31,1 99,0 31,50 1634,9 31,3 99,2 50,30 2003,7 50,6 100,5 52,30 2019,3 51,4 98,2 52,50 2038,6 52,4 99,8 70,42 2405,0 71,6 101,6 73,22 2405,8 71,6 97,8 73,50 2433,2 73,0 99,4 Trung bình (%) RSD (%) 98,5 1,1 99,5 1,2 99,6 1,9 Trung bình (%) RSD (%) 101,9 0,4 99,3 1,3 98,1 0,2 Bảng 3.9 Kết độ BAC STT CBAC thêm (µg/mL) Stổng (mAU.s) CBAC thu hồi (µg/mL) % Thu hồi (%) 25,0 2224,2 25,6 102,3 25,0 2222,0 25,5 101,9 25,0 2219,8 25,4 101,5 50,0 2773,6 50,0 100,0 50,0 2776,0 50,1 100,2 50,0 2749,6 48,9 97,8 75,0 3304,1 73,6 98,1 75,0 3309,1 73,8 98,4 75,0 3202,1 73,5 98,0 Nhận xét: Độ thu hồi AZH BAC nằm khoảng 98 – 102% RSD mức nồng độ 80%, 100%, 120% nhỏ 2,0% 33 Kết luận: Phương pháp đạt yêu cầu độ khoảng nồng độ khảo sát với AZH BAC 3.6 Ứng dụng phương pháp phân tích chế phẩm thuốc xịt mũi thị trường Tiến hành: Chuẩn bị mẫu thử độc lập với từ chế phẩm Nozeytin (số lô SX: 004/19) mẫu chuẩn 100% mục 3.1 chạy sắc ký với điều kiện mục 3.4 Yêu cầu: Hàm lượng azelastin hydroclorid: Do chế phẩm khơng có chuyên luận - dược điển áp dụng giới hạn hàm lượng thường quy định với hoạt chất thuốc xịt mũi, tức từ 90,0% đến 110,0% so với hàm lượng ghi nhãn Hàm lượng benzalkonium clorid: Nằm giới hạn thường quy - định với chất bảo quản kháng khuẩn, tức từ 80,0% đến 120,0% so với hàm lượng ghi nhãn [2] Kết quả: Kết định lượng azelastin hydroclorid benzalkonium clorid trình bày bảng 3.10 3.11 Bảng 3.10 Kết định lượng azelastin hydroclorid chế phẩm STT mAZH chuẩn (mg) HL chuẩn (%) Sthử Schuẩn (mAU.s) (mAU.s) HLAZH (%) 2021,7 10,5 99,4 2003,2 108,3 1948,6 2009,9 107,4 107,7 TB 107,8 Bảng 3.11 Kết định lượng benzalkonium clorid chế phẩm STT Cchuẩn (mg/mL) 0,125 Sthử (mAU.s) BAC BAC Tổng 2068,3 718,6 2786,9 2102,0 723,6 2825,6 2089,7 752,3 2842,0 TB Schuẩn (mAU.s) HLBAC (%) 99,5 2801,4 100,9 101,4 100,6 34 Nhận xét: Hàm lượng azelastin hydroclorid benzalkonium clorid chế phẩm Nozeytin (số lô SX: 004/19) nằm khoảng giới hạn cho phép Kết luận: Chế phẩm đạt yêu cầu hàm lượng hoạt chất giới hạn chất bảo quản kháng khuẩn theo tiêu chuẩn thường quy định 35 BÀN LUẬN Nghiên cứu xây dựng thẩm định phương pháp phân tích đơn giản, hiệu xác, sử dụng kỹ thuật HPLC để định lượng đồng thời AZH BAC thuốc xịt mũi Các phương pháp định lượng đồng thời AZH BAC trước Hassouna [18] Rao [15] sử dụng pha tĩnh cột sắc ký CN, pha động gồm đệm phosphat 50 mM ACN So với cột CN, nghiên cứu sử dụng cột C18 thông dụng ổn định hơn, pha động sử dụng nồng độ đệm phosphat thấp hơn, an tồn cho hệ thống Dung môi pha mẫu sử dụng nước cất, đơn giản thuận tiện so với việc sử dụng dung môi pha động hay hỗn hợp ACN : nước Phương pháp xây dựng có khoảng tuyến tính rộng, thích hợp để áp dụng định lượng đồng thời AZH BAC chế phẩm tương tự thị trường Ngoài ứng dụng định lượng BAC tồn phần, phương pháp sử dụng để xác định tỷ lệ thành phần alkyl BAC dựa vào tỷ lệ diện tích pic, qua tính hàm lượng thành phần 36 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu đưa số kết luận sau: - Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng azelastin hydroclorid benzalkonium clorid: + Pha tĩnh: Cột Vertisep GES C18 (250 x 4,6 mm, µm) (Vertical) + Pha động: Hỗn hợp ACN : đệm phosphat (10 mM, pH 3,5) = 75 : 25 (v/v) + Tốc độ dịng: 1,1 mL/phút + Bước sóng phát hiện: 290 nm AZH 210 nm BAC + Thể tích tiêm mẫu: 20 µL + Nồng độ định lượng: AZH 100 µg/mL BAC 125 µg/mL - Đã thẩm định phương pháp với tiêu chí theo hướng dẫn ICH - Định lượng chế phẩm thuốc xịt mũi Nozeytin hàm lượng AZH mg/mL BAC 0,125 mg/mL: đạt hàm lượng hoạt chất giới hạn chất bảo quản kháng khuẩn theo tiêu chuẩn thường quy định Kiến nghị Dựa kết nghiên cứu, xin đưa vài đề xuất sau: - Tiến hành thẩm định thêm tiêu chí độ ổn định phương pháp - Khảo sát tăng tính cân xứng pic BAC cách thêm triethylamin vào pha động Triethylamin liên kết với số vị trí hoạt động bề mặt silica nên ngăn cản lưu giữ chất phân tích vị trí - Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ tới thời gian lưu Tăng nhiệt độ cột làm giảm thời gian lưu làm giảm lượng dung mơi pha động cần dùng, chí giảm tỷ lệ ACN pha động, tiết kiệm chi phí - Áp dụng phương pháp để định lượng lô khác chế phẩm thuốc xịt mũi Nozeytin - Kết nghiên cứu áp dụng phương pháp tham khảo, từ xây dựng phương pháp định lượng đồng thời azelastin hydroclorid benzalkonium clorid phù hợp điều kiện kỹ thuật sở nghiên cứu 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ Y tế (2017), Dược điển Việt Nam V tập 1, NXB Y học, Hà Nội, tr.135 Bộ Y tế (2017), Dược điển Việt Nam V tập 2, NXB Y học, Hà Nội, tr.PL-21, PL-238 Bộ Y tế (2011), Kiểm nghiệm dược phẩm, NXB Y học, Hà Nội, tr.88-91 Bộ Y tế (2012), Hóa phân tích tập 2, NXB Y học, Hà Nội, tr.181-188 Lê Đình Chi, Phạm Thị Hiền, Dương Minh Tân, Lê Quang Thảo (2018), “Xác định hàm lượng benzalkonium clorid chế phẩm dung dịch xịt mũi kỹ thuật HPLC”, Tạp chí Dược học, 512, tr.80-83 Phan Thị Thùy Chi, Phạm Thị Hà, Lê Thị Thiên Hương, Trần Việt Hùng (2014), “Định lượng benzalkonium clorid thuốc xịt mũi Medimax-F phương pháp HPLC”, Tạp chí Kiểm nghiệm thuốc, 12(43), tr.7-10 Tiếng Anh A A Gouda, R ElSheikh, H ElSaied (2015), “Extractive Spectrophotometric Determination of Azelastine Hydrochloride in Pure Form and Pharmaceutical Formulations”, Canadian Chemical Transactions, 3(1), pp.29-41 A Chyła, E Zelazowska (1999), “Using of thin-layer chromatography for identification and quantitative determination of benzalkonium chloride in eye drops”, Acta Poloniae Pharmaceutica, 56(6), pp.419-423 Al Aani H., Al Nukkary Y (2016), “Determination of benzalkonium chloride in ophthalmic solutions by stabilityindicating HPLC method: Application to a stability study”, Journal of Applied Pharmaceutical Science, 6(5), pp.80-89 10 Boovizhikannan Thangabalan, Palanirajan Vijayaraj kumar (2012), “RP-HPLC determination of azelastine in pure and in ophthalmic formulation”, International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Research, 17(2), pp.62-64 11 British Pharmacopoeia (2013) 12 J.K.Aronson (2006), Meyler’s Side Effects of Drugs (15th edition), pp.387-421 13 Jure Zakrajsek, Vladimir Stojic, Simona Bohanec and Uros Urleb (2015), “Quality by Design Based Optimization of a High Performance Liquid Chromatography Method for Assay Determination of Low Concentration Preservatives in Complex Nasal Formulations”, Acta Chimica Slovenica, 62, pp.72-82 14 K Kova´cs-Hadady, I Fa´bia´n (1998), “The determination of benzalkonium chloride in eye-drops by difference spectrophotometry”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 16, pp.733–740 15 K Lakshmi Narasimha Rao, K Padmaja Reddy, K Sudheer Babu, K Soloman Raju, K Visweswara Rao, Jafer Vali Shaik (2010), “Simultaneous Estimation of Fluticasone propionate, Azelastine Hydrochloride, Phenylethyl alcohol and Benzalkonium chloride by RP-HPLC Method in Nasal spray premetations”, International Journal of Research in Pharmaceutical Sciences, 1(4), pp.473-480 16 H A Merey, S S El-Mosallamy, N Y Hassan, B A ElZeany (2016), “Simultaneous determination of Fluticasone propionate and Azelastine hydrochloride in the presence of pharmaceutical dosage form additives”, Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy, 160 17 Hassouna M E M., Abdelrahman M M., Mohamed M A (2017), “Determination of Azelastine Hydrochloride and Benzalkonium Chloride in Their Ophthalmic Solution by Different Spectrophotometric Methods”, World Journal of Applied Chemistry, 2(2), pp.48-56 18 Hassouna M E M., Abdelrahman M M., Mohamed M A (2017), “Simultaneous determination of Azelastine hydrochloride and benzalkonium chloride by RP-HPLC method in their ophthalmic solution”, Journal of Forensic Science and Criminal Investigation, 1(3), 555565 19 ICH (1996), Q2B Validation of Analytical Procedures: Methodology 20 Mallik, R., Raman, S., Liang, X., Grobin, A W., & Choudhury, D (2015), “Development and validation of a rapid ultra-high performance liquid chromatography method for the assay of benzalkonium chloride using a quality-by-design approach”, Journal of Chromatography A, 1413 21 M R Elghobashy, O M Badran, M Y Salem, K M Kelani (2014), “Stability indicating spectrophotometric and chromatographic methods for the determination of azelastine hydrochloride in presence of its alkaline degradant”, Analytical Chemistry: An Indian Journal, 14(4), pp.135-142 22 N N Salama, S A Abdel-Razeq, S Abdel-Atty, N El-Kosy (2014), “Development and validation of densitometry TLC stability indicating method for quantitative determination of azelastine hydrochloride and emedastine difumarate in their drug products”, British Journal of Pharmaceutical Research, 4(1), pp.79-92 23 Pratik Kumar Gupta, Vibha Chaturvedi (2017), “An Analytical Study for Development and Validation of Method for Estimation of Total Benzalkonium chloride Content as a Preservative in Azelastine hydrochloride Pharmaceutical Ophthalmic Formulation by Reverse Phase Liquid Chromatography Approach”, International Journal of Pharmaceutical Sciences and Drug Research, 9(5), pp.268-274 24 Poonam D Dighe, Vijay S Wakale, Dama.G.Y, Shridhar S Shejwal, Kiran K.Shinde, Arshu P Patel, Soniya S Satpute (2019), “Assay Method Development and Validation for Simultaneous Estimation of Mometasone Furoate and Azelastine HCL for Nasal Spray by RP-HPLC”, MAT Journals, 1(2) 25 R Dubey, S Das, S Roychowdhury, K K Pradhan, M Ghosh (2013), “Validated HPTLC Method for the Determination of Azelastine hydrochloride in Bulk Drug and Dosage Form”, PHARMBIT, 27(1), pp.9-11 26 S A Abdel-Razeq, M M Foaud, N N Salama, S Abdel-Atty, N El-Kosy (2011), “Voltammetric Determination of Azelastine-HCl and Emedastine Difumarate in Micellar Solution at Glassy Carbon and Carbon Paste Electrodes”, Sensing in Electroanalysis, 6, pp.289-305 27 S A Abdel-Razeq, N N Salama, S Abdel-Atty, N El-Kosy (2012), “Thermoanalytical study and purity determination of azelastine hydrochloride and emedastine difumarate”, Pharmaceutica Analytica Acta, 3(8), 1000176 28 Sweetman SC (2007), Martindale: The Complete Drug Reference (36th edition), Pharmaceutical Press London, UK, pp.568-1629 29 The United States Pharmacopoeia (2017), USP40 – NF 35 30 Y H Hou, C Y Wu, W H Ding (2002), “Development and validation of a capillary zone electrophoresis method for the determination of benzalkonium chlorides in ophthalmic solutions”, Journal of Chromatography A, 976(1-2), pp.207-213 PHỤ LỤC Sắc ký đồ độ thích hợp hệ thống bước sóng 210 nm AZH BAC Lần BAC AZH Lần BAC BAC AZH BAC Lần BAC AZH Lần BAC BAC AZH Lần BAC BAC AZH BAC Lần BAC Sắc ký đồ độ thích hợp hệ thống bước sóng 290 nm AZH AZH AZH AZH AZH AZH Lần Lần Lần Lần Lần Lần Sắc ký đồ đường chuẩn BAC bước sóng 210 nm 50% AZH BAC BAC 75% AZH BAC BAC 100% AZH BAC BAC AZH 125% BAC BAC AZH 150% BAC BAC Sắc ký đồ đường chuẩn AZH bước sóng 290 nm 50% AZH 75% AZH 100% AZH AZH AZH 125% 150% ... YẾN MÃ SINH VIÊN: 1501566 NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG AZELASTIN HYDROCLORID VÀ BENZALKONIUM CLORID TRONG CHẾ PHẨM THUỐC XỊT MŨI NOZEYTIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP... ? ?Nghiên cứu định lượng Azelastin hydroclorid Benzalkonium clorid chế phẩm thuốc xịt mũi Nozeytin phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao? ?? đối tượng cụ thể chế phẩm thuốc xịt mũi Nozeytin với hai mục tiêu... dựng thẩm định phương pháp phân tích azelastin hydroclorid benzalkonium clorid sắc ký lỏng hiệu cao Ứng dụng phương pháp để định lượng azelastin hydroclorid benzalkonium clorid chế phẩm CHƯƠNG