NGHIÊN CỨU NẤM COLLETOTRICHUM SPP. GÂY BỆNH THÁN THƯ TRÊN CÂY ỚT

Thời gian thực hiện từ tháng 08 năm 2008 đến tháng 07 năm 2009 nhằm xác định tác nhân gây bệnh thán thư trên cây ớt và đánh giá khả năng gây bệnh của các loài Colletotrichum trên lá và t

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH

********************

PHẠM THỊ DIỆU PHƯƠNG

NGHIÊN CỨU NẤM COLLETOTRICHUM SPP

GÂY BỆNH THÁN THƯ TRÊN CÂY ỚT

LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP

Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 08/ 2008

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH

********************

PHẠM THỊ DIỆU PHƯƠNG

NGHIÊN CỨU NẤM COLLETOTRICHUM SPP

GÂY BỆNH THÁN THƯ TRÊN CÂY ỚT

i

NGHIÊN CỨU NẤM COLLETOTRICHUM SPP GÂY BỆNH THÁN THƯ

TRÊN CÂY ỚT

PHẠM THỊ DIỆU PHƯƠNG Hội đồng chấm luận văn

Năm 2004 làm nhân viên cho Cty CP Đồng Xanh tại Long An

Tháng 9 năm 2006 theo học cao học chuyên ngành Bảo Vệ Thực Vật tại Trường Đại Học Nông Lâm, Tp HCM

Tình trạng gia đình: Chồng: Văn Hồng Phước, kết hôn năm 2008

Địa chỉ liên lạc: Số 45, Đường số 11, Cư xá Rada, P13, Q6, Tp HCM

Điện thoại di động: 0909 669 647

Email: phphuong2007@yahoo.com

iii

LỜI CAM ĐOAN

Tôi cam đoan đây là công trình nghiên cứu của tôi Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác

Ký tên

iv

LỜI CẢM TẠ

Để hoàn thành luận văn thạc sĩ này, tôi xin được trân trọng ghi ơn và cảm tạ: Ban giám hiệu, Khoa Nông Học, Phòng Sau Đại Học Nông Lâm Tp HCM đã tạo điều kiện cho tôi tham gia khóa học này

Các thầy cô giáo tham gia giảng dạy đã truyền đạt những kiến thức cũng như những kinh nghiệm quí báu cho tôi

Thầy TS Lê Đình Đôn đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài

Các kỹ sư phòng thí nghiệm thuộc Bộ Môn Bảo Vệ Thực Vật Trường Đại Học Nông Lâm, TP.HCM

Ba mẹ, chồng, anh chị em và bạn bè đã động viên tôi trong suốt quá trình học tâp và hoàn thành luận văn này

Phạm Thị Diệu Phương

v

TÓM TẮT

Đề tài “ Nghiên cứu nấm Colletotrichum spp gây bệnh thán thư trên cây ớt”

Các thí nghiệm được tiến hành tại phòng thí nghiệm bệnh cây thuộc Bộ Môn Bảo

Vệ Thực Vât – Khoa Nông Học – Trường Đại Học Nông Lâm Tp HCM Thời gian thực hiện từ tháng 08 năm 2008 đến tháng 07 năm 2009 nhằm xác định tác nhân gây bệnh thán thư trên cây ớt và đánh giá khả năng gây bệnh của các loài

Colletotrichum trên lá và trái đối với các giống ớt

Kết quả xác định có 3 loài C gloeosporioides, C capsici, C acutatum được

phân lập từ thân lá và trái của cây ớt ở các Tỉnh Miền Tây và Đông Nam Bộ Trong

đó loài C capsici phân lập từ thân, lá và loài C gloeosporioides, C acutatum phân lập từ trái của cây ớt Các mẫu nấm C capsici (CCLTG 08 – 1), C gloeosporioides (CCBT 08 – 2), C acutatum (CCTN 08 – 1) chủng lên cây ớt con trồng trong nhà lưới với nồng độ 106 bào tử / ml cho thấy loài C capsici (CCLTG 08 – 1) gây bệnh trên lá của các giống ớt thương mại và giống ớt sừng địa phương Vết bệnh trên lá non xuất hiện ở mép và đuôi lá có hình dạng không xác định Vết bệnh ở lá già có những đốm tròn màu vàng và trên vết bệnh có những vòng tròn đồng tâm

Các mẫu C capsici (CCLTG 08 – 1), C gloeosporioides (CCBT 08 -2), C acutatum (CCTN 08 – 1) chủng lên cây ớt ngoài đồng ruộng với nồng độ 106

bào

tử /ml cho kết quả , loài C gloeosporioides (CCBT 08 -2) và C acutatum (CCTN

08 – 1) gây bệ nh trên trái của các giống ớt thương mại và giống ớt sừng địa

phương, trong khi loài C capsici (CCLTG 08 – 1) không gây bệnh trên trái Mức

độ nhiễm bệnh trên trái của các giống ớt khác nhau , trong đó giống ớt sừng địa

phương nhiễm bệnh thán thư cao nhất Loài C gloeosporioides (CCBT 08 – 2) gây

ra trên bề mặt trái những đốm vàng có nhiều hình vòng tròn đồng tâm và dịch bào

tử màu hồng da cam Loài C acutatum (CCTN08 – 1) gây ra trên bề mặt trái những

vệt màu xám với nhiều hình dạng khác nhau , không tạo vòng tròn đồng tâm Kết

quả xác định có sự khác biệt về tính gây bệnh của các loài Colletotrichum theo bộ

phận của cây ớt ngoài đồng ruộng

vi

SUMMARY

The topic was “Studies on Collectotrichum spp causing the anthracnose

disease of peppers” Experiments were conducted at laboratories under the Plant Protection Department and the experimental farm of the Faculty of Agronomy of the Ho Chi Minh City Nong Lam University, from August 2008 to July 2009 The study aim was to determine the causual agents of anthracnose disease of peppers

and to assess characters of Collectotrichum species infected to the leaf and fruit of

peppers

The results showed that Collectotrichum capsici, C gloeosporioides, and C acutatum were isolated from to stems and leaves of peppers growing in the Western and South East Provinces In which C capsici was isolated to pepper stems, leaves and C gloeosporioides and C acutatum isolated to pepper fruit The fungus samples of C capsici (CCLTG 08 – 1), C gloeosporioides (CCBT 08 – 2) and C acutatum (CCTN 08 – 1) had been inoculated with the concentration of 106spores/ml on young peppers grown in green houses and it showed C capsici (CCLTG 08 – 1) was pathogenetics to the leaves of trade Capsicum and local

Capsicum annuum The spots on young leaves occured on the edges and tail of a

leaf with unspecified shapes The spots on old leaves occured with yellow - pots with the concentric rings

The fungus samples of C capsici (CCLTG 08 – 1), C gloeosporioides (CCBT 08 – 2) and C acutatum (CCTN 08 – 1) inoculated with the concentration

of 106 spores/ml on peppers grown on fields showed that the species C gloeosporioides (CCBT 08 – 2) and C acutatum (CCTN 08 - 1) were pathogenetic

to the fruit of trade capsicum and local capsicum annuum but the species C capsici (CCLTG 08 – 1) nonpathogenic to fruit Infection levels on fruit of various varieties of peppers was not the same, in which, the local capsicum annuum was infected the anthracnose most The species C gloeosporioides (CCBT 08 – 2)

caused yellow spots with the concentric rings and the salmon – colored areas on the surface in the central portions of the lesions consisting of large masses of fungus

vii

spores The species C acutatum (CCTN08 – 1) caused grey streaks on fruit surface

with many different shapes, but no create concentric rings The results also

indicated the differences in pathogenesis of Colletotrichum species in parts of the

plants in the field

2.5 Những nghiên cứu tính kháng bệnh thán thư do nấm Colletotrichum spp 9

i

3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.2 Nội dung nghiên cứu

13 2.2.1 Định danh tên loài của nấm Colletotrichum spp gây bệnh trên lá và trái ớt

13

3.2.2 Đánh giá khả năng gây bệnh của nấm Colletotrichum spp trên lá và trái đối

3.3 Phương pháp nghiên cứu

3.3.1 Định danh tên loài của nấm Colletotrichum spp gây bệnh trên lá và trái ớt 14

3.3.1.2 Khảo sát sự phát triển của nấm Colletotrichum spp ở các mức nhiệt độ

150C, 200C, 250C, 300C và 350C trên môi trường PGA 14 3.3.1.3 Khảo sát tác động của Benomyl đối với nấm Colletotrichum spp

3.3.1.4 Mô tả hình thái và xác định tên loài của nấm Colletotrichum spp

3.3.2 Đánh giá khả năng gây bệnh của nấm Colletotrichum spp trên lá và trái ớt

3.3.3 Phương pháp xử lý số liệu 20

4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

4.2 Sự phát triển của mẫu Colletotrichum spp ở các mức nhiệt độ khi nuôi cấy

4.3 Mô tả hình thái bào tử, giác bám và xác định tên loài Colletotrichum spp 30

ii

4.4 Khảo sát tác động của thuốc Benomyl 50WP đối với các loài Colletotrichum

4.5 Đánh giá khả năng gây bệnh của C capsici thu thập trên lá, C acutatum và C gloeosporioides thu thập trên trái đối với lá một số giống ớt trồng trong nhà lưới 38

4.6 Đánh giá khả năng gây bệnh của C capsici thu thập trên lá, C acutatum và C gloeosporioides thu thập trên trái đối với trái một số giống ớt trồng ngoài đồng

Hình 4.2: Các mẫu bệnh trên lá, trái và thân của cây ớt được thu thập để phân lập ở

Hình 4.3: Các mẫu nấm Colletotrichum spp phân lập được trên cây ớt tại Tiền

Hình 4.4: Sự phát triển của Colletotrichum spp ở các mức nhiệt độ sau 10 ngày

Hình 4.5: Hình dạng bào tử của mẫu nấm CCBT08 – 2 sau 10 ngày nuôi cấy trên

môi trường PGA

31

Hình 4.6: Hình dạng bào tử của mẫu nấm CCLTG08 - 1 sau 10 ngày nuôi cấy trên

môi trường PGA

32

Hình 4.7: Hình dạng bào tử của mẫu nấm CCTN08 - 1 sau 10 ngày nuôi cấy trên

môi trường PGA

32

Hình 4.8: Bào tử nấm Colletotrichum nẩy mầm và hình thành giác bám trong môi

Hình 4.9: Đường kính tản nấm của 3 nhóm Colletotrichum spp trên môi trường

Hình 4.10: Các lô thí nghiệm để phun 3 mẫu (CCBT08 – 2, CCTN08 – 1,

CCLTG08 -1).trên lá của các giống ớt trồng trong nhà lưới

39

Hình 4.11: Triệu chứng bệnh trên lá của các giống ớt sau khi chủng C capsici 14

Bảng 4.2: Nguồn gốc các mẫu nấm Colletotrichum spp phân lập từ cây ớt năm 2008

23

Bảng 4.3: Đường kính trung bình tản nấm Colletotrichum spp ở các mức nhiệt độ sau

10 ngày cấy trên môi trường PGA 28

Bảng 4.4: Mô tả hình thái học của nhóm Colletotrichum spp phân lập được trên

Bảng 4.5: Tỷ lệ % hình dạng bào tử của 20 mẫu nấm Colletotrichum ( n=20) 30

Bảng 4.6 Tỷ lệ bào tử nảy mầm và hình thành giác bám của 3 loài Colletotrichum

Bảng 4.7: Sự phát triển của các mẫu Colletotrichum spp ở nồng độ Benomyl 5µg/l

Bảng 4.8: Phản ứng của lá một số giống ớt đối với nấm Colletotrichum spp

Bảng 4.9: Tỷ lệ bệnh và chỉ số bệnh của một số giống ớt khi phun mẫu CCLTG08

Bảng 4.10: Phản ứng của trái một số giống ớt đối với nấm Colletotrichum spp

trồng ngoài đồng ruộng

v

45

Bảng 4.11: Tỷ lệ bệnh và chỉ số bệnh của một số giống ớt khi phun mẫu CCBT08

Bảng 4.12: Tỷ lệ bệnh và chỉ số bệnh của một số giống ớt khi phun mẫu CCTN08 -

DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ

Biểu đồ 4.1: Đường kính trung bình tản nấm của các nhóm Colletotrichum

có chứa nhiều loại vitamin đặc biệt vitamin C có nhiều trong 2 loài ớt cay và ớt ngọt Trong quả ớt có chứa Capsaicin (C18H27NO3) là một loại Alkaloid có vị cay, chính nhờ chất này mà ớt làm tăng sự ngon miệng trong bữa ăn Ngoài ra Capsaicin còn được dùng làm dược liệu trong y học, chế biến thực phẩm và mỹ phẩm

Cây ớt là một trong những cây trồng quan trọng ở vùng nhiệt đới Tổng số

diện tích trồng ớt trên thế giới 3.729.900 ha đạt sản lượng khoảng 20.000.000 tấn Trong đó có khoảng 1.700.000 ha cho sản xuất trái tươi và khoảng 1.800.000 ha cho

sản xuất ớt khô (FAO, 2003)

Ở Việt Nam cũng như ở nhiều nước khác, sản xuất bị giới hạn rất nghiêm trọng do sâu và bệnh, trong đó dịch hại chính là bệnh thán thư do nấm

Colletotrichum sp gây hại trên trái, thân và lá Bệnh thán thư ảnh hưởng nghiêm trọng trên trái làm giảm năng suất và chất lượng quả ớt ở thời kỳ thu hoạch và bảo quản Đặc biệt ớt trồng trong mùa mưa thường bị bệnh này phá hại nặng có thể làm giảm năng suất, cá biệt lên đến 90% (Nguyễn Danh Vàn, 1997) Ở Tây Nguyên, năm 1997 hàng chục tấn ớt đã bị mất trắng vì bệnh này gây ra Ở Củ Chi (TPHCM) bệnh xuất hiện phổ biến trên các ruộng ớt trồng trong mùa mưa, mức độ nhiễm bệnh trung bình từ 27,19% - 64,31% (Nguyễn Thị Thu Thủy, 2006) Theo Vũ Triệu Mân

Hiện nay, biện pháp phòng trừ chủ yếu là phòng trừ tổng hợp: hạt giống sạch bệnh, vệ sinh đồng ruộng, luân canh tốt, chọn giống có thời gian trái chín nhanh để tránh bị nhiễm nấm, dùng thuốc hóa học Dùng thuốc hóa học trong điều kiện không mưa thì có hiệu quả, nhưng trong trường hợp mưa nhiều bệnh phát triển mạnh thì thuốc ít có hiệu quả do bị rửa trôi Bên cạnh đó, ớt là loại dùng trái tươi, cần phải tránh phun thuốc nhiều có thể để lại dư lượng gây hại cho người tiêu dùng

Những thiệt hại do bệnh gây ra cũng gia tăng đáng kể, một phần chọn lọc giống chủ yếu cho sản lượng cao và sinh trưởng bỏ qua tính kháng bệnh, tác nhân gây bệnh hầu như chưa được đầu tư nghiên cứu chuyên sâu Từ những nguyên nhân trên để góp phần trong công tác chọn tạo các dòng ớt F1 triển vọng có tính kháng cao “Nghiên cứu nấm Colletotrichum spp gây bệnh thán thư trên cây ớt” là cần

thiết và có ý nghĩa khoa học và ứng dụng

1.2 Mục tiêu yêu cầu

Phân lập nấm Colletotrichum spp gây hại trên cây ớt

Đánh giá khả năng gây bệnh của nấm Colletotrichum spp đối với một số

giống ớt

3

Chương 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 Nguồn gốc của cây ớt

Cây ớt thuộc họ cà Solanaceae, thuộc chi Capsicum Có 5 loài được trồng

trọt chính trong tổng số 30 loài ớt bao gồm: Loài Capsicum annuum L, C frutescens, C chinense Jachin, C pendulum Willdenow var pendulum L và C pubescens Ruiz và Pavon Năm loài trồng trọt chính này thuộc 3 trung tâm khởi nguyên khác nhau Mêhico và Guatemala là trung tâm của C annuum; Amazon là trung tâm khởi nguyên của C chinensis và C frutescens; C pendulum và C pubescens thuộc về 2 trung tâm Pêru và Bôlivia Các loài ớt trồng phân biệt chủ yếu

bởi cấu trúc hoa và đặc điểm quả Ớt sừng bò và ớt ngọt thuộc loài C annuum

2.2 Đặc tính sinh học và sinh thái của cây ớt

2.2.1 Đặc tính sinh học

Cây ớt là dạng cây bụi thân gỗ 2 lá mầm, thân thường mọc thẳng, tuy nhiên cũng có giống thân bò, cành có chiều cao trung bình từ 0,5 – 1,5 m Ớt có thể là cây hằng năm hoặc lâu năm nhưng thường được gieo trồng như cây hằng năm

Rễ cây ớt có 2 loại là rễ cọc và rễ chùm Ban đầu ớt có rễ cọc phát triển mạnh sau đó nhiều rễ phụ phát triển tạo ra một hệ thống rễ chùm Rễ ớt ăn nông, có khả năng chịu hạn nhưng không chịu được úng

Lá ớt thuộc dạng lá đơn mọc xoắn trên thân chính Lá có nhiều dạng khác nhau thường gặp nhất là dạng lá mác, lá hình trứng ngược, mép lá ít răng cưa Lông trên lá phụ thuộc vào các loài khác nhau, một số loại có mùi thơm Lá mỏng có kích thước trung bình 1,5 – 12 cm x 0,5 – 7,5 cm

4

Hoa ớt có cấu tạo hoàn thiện, quả thường được sinh đơn độc trên từng nách

lá, chỉ có loài C chinensis thường có 2 - 5 hoa trên một nách lá Hoa mọc thẳng

đứng hoặc buông thõng Trên cuống hoa thường không có li tầng Hoa có màu trắng, một số giống có màu trắng sữa, xanh lam và tía Hoa có 5 – 7 cánh, cuống hoa dài khoảng 1,5 cm, đài ngắn có dạng chuông từ 5 – 7 cái, tai dài khoảng 2 mm bọc lấy quả Nhụy có màu trắng hoặc tím, đầu nhụy có dạng hình tròn Hoa có 5 – 7

nhị đực với ống phấn màu xanh da trời hoặc tía Còn nhóm C, frutescens và C, chinensis có ống phấn màu trắng xanh Có thể phân biệt các nhóm ớt theo màu đốm

chấm ở gốc cánh hoa Kích thước hoa phụ thuộc vào các loài khác nhau, đường

kính hoa trung bình từ 8 – 15 mm Ớt thuộc nhóm cây có hoa lưỡng tính, tự thụ Tuy nhiên ớt có tỷ lệ giao phấn khá cao do vòi nhụy và ống phấn khá chênh lệch nhau ở một số giống Tỷ lệ giao phấn cao đôi khi lên tới 36,5%, nếu nhiệt độ cao tỷ

lệ giao phấn lên đến 90% và được thụ phấn nhờ ong hoặc các loài sâu bọ khác

Quả ớt thuộc loại quả mọng có rất nhiều hạt với thịt quả nhăn và chia làm 2 ngăn Các giống khác nhau có kích thước quả, hình dạng, độ nhăn, màu sắc, độ cay

và độ mềm thịt quả rất khác nhau Quả chưa chín có thể có màu xanh hoặc tím Quả chín có màu đỏ, da cam, vàng, nâu, màu kem, hoặc hơi tím Hạt có dạng thận, màu

vàng rơm, chỉ có hạt của C, pubescens có màu đen Hạt có chiều dài khoảng 3 – 5

mm Một gam hạt ớt cay có khoảng 220 hat, còn ớt ngọt có khoảng 160 hạt (Mai Thị Phương Anh, 2001)

2.2.2 Đặc tính sinh thái

Cây ớt ưa nhiệt độ cao, phát triển thích hợp nhất ở nhiệt độ trung bình từ 20 – 300C, nhiệt độ trên 320C cây sinh trưởng kém, tỷ lệ đậu quả thấp Nhiệt độ thích hợp cho hạt nảy mầm là 25 – 300C, ở nhiệt độ 150C hạt nảy mầm chậm, nhiệt độ dưới 100

C và trên 400C hạt không nảy mầm Ớt không mẫn cảm với thời gian chiếu sáng vì thế ớt có thể trồng quanh năm nhưng là cây ưa sáng nên trời âm u sẽ làm

ớt sinh trưởng được nhưng tỷ lệ nảy mầm và tính chín sớm bị ảnh hưởng Đất chua

và kiềm không thích hợp cho ớt sinh trưởng và phát triển Ớt là cây chịu được mặn,

có thể nảy mầm ở đất có nồng độ muối 4000 ppm và pH = 7,6 Mưa nhiều và tưới trực tiếp lên cây thường xuyên sẽ tạo điều kiện tốt cho nấm bệnh phát triển và tấn công vào cây ớt (Mai Thị Phương Anh , 2001)

2.3 Sự phát sinh và phát tán của bệnh thán thư

Theo Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề (1998), n iệt độ hích hợp cho nấm gây bệnh à 28-300C Bệnh phát triển mạnh ở nhiệt độ c o, ẩm đ c o Bào ử pháttán nhờ mưa, gió và côn rùn Bón đạm n iều, mật đ rồng c o bệnh nặn Nấm

tồn ại trên vỏ hạt giống, trên àn dư c y bệnh Bào ử phân sinh có sức sống c o,tron điều kiện khô mặc d àn dư bị vùitron đất vẫn có hể nảy mầm vào vụ sau

Theo MaiThị Phương Anh (199 ),bệnh hường x ấthiện vào k i trái chín

rộ, lúc hời điểm nhiệt độ c o (3 0C), mưa n iều Theo hí nghiệm của Astut và Suhardi(1 86) khinghiên cứu ảnh hưởn của n iệt đ ồn rữ và sự chín của rái đã kếtluận rằng ở n iệt độ 3 0

C bào ử của C.capsici được hìn hành c o nhất Nhiệt

độ ối thích cho C gloeosporioides phát triển à 2 -3 0C (Kanapathipi lai và ctv,

199 )

Theo Ng yễn Văn Đông (20 2), kết quả hí nghiệm của Basak - AB và ctv (19 6) qua hai mùa ở Bangladesh đưa đến kết luận:tỷ ệ bệnh hay đổi cùng với sựthay đổi của c c yếu ố k í hậu n ư nhiệtđộ,ẩm độ,lượn mưa.Tính mẫn cảm đối

với bện hán hư giữa c c giống có n uồn gốc khá nhau ừ c c quốc gia như:Kore ,USA, India, Thai and hì khá biệt k ông ý n hĩa (Hong-JK và Hwan -BK,

6

1 98), Theo Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề (1 98) và Ng yễn Thị Nghiêm (199 ),bệnh p át triển, lây an mạnh và gây hiệthạinghiêm rọng vào n ữn háng mưa ở Việt Nam

Sự ây nhiễm hường xãy ra rong suốtmùa mưa ẩm.Nhiệt độ hích hợp nhấtcho bệnh p át triển à 2 0C, tuy nhiên sự ây nhiễm vẫn xãy ra ở rên hoặc dướinhiệt độ này Mưa nhiều và ưới nước hường xu ên à c ch ây nhiễm n anh n ất

do bào ử được phát tán và an rộng.Bệnh phát triển mạnh nhất trên những ráichin

mặc dù có hể gây bệnh ở cả rái non,trái trưởng hành và rái đã chin (Melanie vàctv,2004)

2.4 Những tác nhân gây bệnh thán thư tr n ớt

Bệnh d nấm Col etotrichum spp gây ra Theo Kim và ctv, 1 85 C gloeosporioides gây hạitrên rái chín à d ng ‘R’ Trong khiC.gloeosporioides gây hạitrên rái xanh và ráichín à do d ng ‘G’ Trên ớtbện hán hư d ba á n ân gây hại chín là Col etotrichum gloeosporioides, Col etotrichum acutatum, Col etotrich m coc odes (Bla k, 1991) C gloeosp rioides ấn công rên cả 2 giai

đoạn rái xan và rái chín,trong khi C capsici chỉ ấn côn rên giai đoạn rái còn xanh (Park và ctv 19 0) Theo Trần Thị Ba và Phạm Hồn Cúc (1999) và Phạm Hoàng Oanh (20 1) hì có bốn oài nấm Col et otrichum được ìm hấy rên ớtlà: C gloeosporioides, C ca sici C acutatum và C coc odes, nhưng Mai Thị PhươnAnh (1998), Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề (19 8) hì có hêm oài Col etotrichum nigr um gây bệnh rên ớt

Ở Hàn Quốc có hai loài C gloeosporioides và C capsici gây bện hán hưtrên ớt (Kim 199 ) Ở phía nam Florida, năm 199 bệnh hán hư đã an rộng và

lan ra phía Bắc Florida Bệnh xảy ra ro g suốt mùa mưa và gây hại từ khi hình thàn rái đến khi trái chín muồi Có t nhất 3 oài nấm C gloeosporioides, C

capsicivà C coc odesđược ghi nhận à n uyên n ân gây bệnh rên ớt ở Florida.ỞCal fornia bệnh hốitráithán hư do nấm C.a utatum àn phá c y rồng phủ bạtlàm

7

giảm 60 - 70% sản ượng ớt ỞĐài Loan có 3 oài C acutatum, C.gloesp rioides

và C.capsici đã được ìm hấy rên giống ớtCapsicum chinensis (Bla k,199 )

Bệnh thán thư trên ớt là do 5 loài nấm gây hại C gloeosporioides,

C demat um, C coc odes, C acutatum và Glomerel a cingulata. Riêng

C gloeosoprioides ấn cô g rên rái ở ất cả c c giai đoạn n ưng k ông gây hại

trên á và hân c y (Hong và Hwang, 19 8) Ở Thái Lan và In onesia có 2 oài C

gloeosporioides và C Capsici làm giảm năng suất tráitrong suốtmùa mưa (Lin và

ctv,20 2;Voor ips và ctv,2004)

Bệnh hán hư à một trong những bện gây hại n hiêm rọng ở c c v ng

trồng ớt Thái Lan (Oanh và ctv, 20 4; Taylor, 20 7) và vùng nhiệt đới Châu Á

(Sariah,19 9; Shin và ctv,2000; Sharma và ctv,20 5).Tá nhân gây bệnh do n iều

loài Col etotrichum sp:C.ca sici C.acutatum,C gloeosporioides, C.coc odes và

C demat um (Hon và Hwang, 1 98; Gopinath và ctv, 2 06) Trong đó

C gloeosp rioides (Penz) và C capsici (Syd) à á n ân gây bệnh p ổ biến rên

c y ớt Theo Mannandhar và ctv, (1995) C gloeosporioides à á nhân gây bệnh

trên rái ớtở Đài Loan.Theo Go inath và ctv (200 ),C gloeosp rioides à á nhân

gây bệnh rên vùng rồng ớt ở Ấn Độ.Nhữn oài Col etotrichum sp,gây bện rên

nhiều ký chủ ở c c mức đ khá nhau Chẳng hạn, C gloeosp rioides gây hạitrên

c c oại trái n ư:bơ,táo,c p ê arabic ,xoài dâu,quả hạnh và ổi (Agwan a và ctv,

1 97; Fre man và ctv, 1 98; Mart ne – Culebras và ctv,2000; Sander và Korsten,

2003; Xiao và ctv, 2 04; Amusa và ctv,2005).Theo Trần Thị Vân (200 ) có 3 oài

C acutatum, C gloeosporioides và C capsici gây hại trên ớt ở c c vùng như Đà

Lạt Hóc Mô và Củ Chi

Theo Gniffke (2003), bệnh thán thư ớt có thể gây ra bởi 4 loài nấm

Colletotrichum: C acutatum, C capsici, C gloeosporioides và C coccodes Trong

đó 3 loại đầu thường thấy nhiều ở những vùng nóng ẩm trên thế giới Mặc dù bệnh

thán thư là một trong những bệnh nghiêm trọng nhất trên cây ớt nhưng chưa có

bằng chứng nào cho thấy rằng có dòng ớt thương mại sở hữu gen kháng bệnh

8

Theo Vũ Triệu Mân (1998), bệnh thán thư ớt ở Việt Nam do 2 loài nấm

Colletotrichum nigrum và Colletotrichum capsici gây ra và 2 loài nấm thường phá hoại làm trái ớt bị thối nhanh chóng Đĩa cành C nigrum có đường kính từ 120 – 280 µm có

nhiều lông gai đen nhọn ở đỉnh, kích thước từ 55 - 190 x 6,5 - 65 µm, bào tử phân sinh hình bầu dục hoặc hình trụ hai đầu tròn, không màu, đơn bào, kích thước 18 – 25 x 3

µm , cành bào tử phân sinh ngắn hình gậy kích thước 20 – 25 x 2,5 µm Nấm C capsici

đĩa cành có đường kính 70 – 100 µm, lông gai có màu nâu sẫm, đỉnh hơi nhạt có nhiều ngăn ngang và dài tới 150 µm, bào tử phân sinh, không màu, đơn bào, hơi cong hình lưỡi liềm, kích thước 17 - 28 x 3 - 4 µm

Bảng 2.1:Những á nhân gây bệnh hán hư rên ớt

Australia

Colletotrichum acutatum, C

atramentarium, C dematium, C

gloeosporioides var, minor, C

gloeosporioides var, gloeosporioides

Simmonds, 1965

Paul and Behl, 1990 Indonesia C acutatum, C capsici, C

Korea C, acutatum, C gloeosporioides, C

Myanmar (Burma) Gloeosporium piperatum E, and E,,

Papua New Guinea C capsici, C gloeosporioides Pearson và ctv, 1984

1997 Taiwan C acutatum, C capsici, C

gloeosporioides

Manandhar và ctv,

1995 Thailand C acutatum, C capsici, C

1983

Vietnam C acutatum, C capsici, C

gloeosporioides, C nigrum Don và ctv, 2007

9

2.5 Những nghiên cứu tính kháng bệnh thán thư do nấm Colletotrichum spp

Theo kết quả nghiên cứu của Lê Thị Kiều Oanh (2003), có 15 mẫu nấm

C capsici và C gloeosporioides được thu thập từ các vùng khác nhau, chia làm 5 nhóm dựa vào đặc điểm hình thái và tỷ lệ phát triển Qua kết quả của thí nghiệm đánh giá khả năng gây bệnh của các mẫu nấm đối với 5 giống ớt: Mun Dam, She Fha, Khee Nhu, Mae Ping và Louang cho thấy giống ớt Mae Ping có vết bệnh lớn nhất (do

nấm C capsici) so với 4 giống khác: Mun Dam, She Fha, Khe Nhu và Louang

Theo kếtquả nghiên cứu của Ng yễn Ngọc Trì(20 4),số vếtbệnh rên á ớtcủa nghiệm hức xử ý SA nồng đ 5 0 p m và 1.00 ppm giảm rõ rệt so với đối chứng khôn xử ý SA và ở nồng độ 1 00 ppm hìSA bảo vệ h àn oàn được c y ớt ở giai

đoạn 6 á k ỏisự ấn cô g của Col etotrichum spp.vớikhả năn bảo vệđạt100%

Theo Trần Thị Vân (200 ),tron 3 phương pháp được sử dụng để chủn bệnh

lên rái ớt ở ro g phò g hí n hiệm à gây vết thương, khôn gây vết thươn và

quét thì p ương pháp chủng gây vết thương bệnh nặng nhất Tuy nhiên, phươn

pháp khôn gây vết thương có mức độ gây bệnh c o Do đó a sử dụng phươn

pháp ph n nấm đều ên oàn mặt trái k i chủng ở n oài đồn ruộng mà k ông gây

vếtthương.Qua kếtquả hí ng iệm ngoài đ ng ruộn cho hấy giống hương mạicó

tỷ ệ bện hấp hơn so với giốn chủng n iễm Mẫu C acutatum gây bệnh rên

giống ớt thương mại và giống chủng nhiễm c o hơn so với C glo eosp rides Điều

này cho hấy rong cù g điều kiện hínghiệm hìmẫu C acutatum có k ả năng gây

bệnh mạnh hơn so vớimẫu C gloeosporioides.

2.6 Triệu chứng bệnh thán thư

Theo Trần Thị Ba (199 ),vếtbệnh úc đầu hình ròn,ú g nước,hơi lõm xuống

sau đó an dần ra và có dạn hình ròn hoặc hình bầu dục (Phạm Hoàng Oanh,

2001),tâm vết bệnh có màu đen, viền màu xám,bên ron có n iều v ng đồng âm

và n ữn chấm nhỏ i t màu đen n ô ên c o Bệnh gây hại chủ yếu rên rái àm

tráimất thương phẩm

10

Theo Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề (1 98),vếtbện ban đầu à một đ m nhỏbất kỳ vị rí nào của rái có màu đen hơi lõm và ú g nước Nếu gặp điều kiện hích

hợp sau 2 - 3 ngày vết bệnh có hể rộng kh ảng 1 cm Ran giới giữa mô ành và

mô bệnh à một đườn viền màu nâu đen chạy dọc quanh vếtbệnh.Trên bề mặt vết

bệnh có n ững chấm nhỏ i t đó chín à đĩa c nh của nấm.Nhiều vết bện iên kết

vớinhau gây hốiquả.Vếtbện khô có màu rắn vàng và bẩn

Ngoàira,vết bệnh hường có dạng ròn hay bầu dục,những chấm nhỏ it màu vàng hường xếp hàn n ữn v ng đồng âm và khi vết bện k ô vỏ quả có hiện

tượn õm sâu và hành những v ng nhăn gợn són Tro g điều kiện ẩm ướt hấy vết bệnh có màu hồn c m rên bề mặt vết bện , tâm vết bệnh màu đen (Mai Thị

Phương Anh,199 )

Theo Bla k (19 1), bệnh hán hư ớt do 3 á nhân gây hại chính à nấm

C gloeosporioides, C acutatum và C coc odes. Triệu chứn điển hình xuất hiện

đầu iên rên rái già dưới dạng nhữn vết bệnh nhỏ, thấm ướt õm xuốn và an

rộng rất n anh Cá vết bện có hể an rộng đến 3 - 4 cm đường kính rên c c rái

ớt lớn Cá vết bệnh phát triển ối đa sẽ õm xuống và có màu ừ đỏ đậm đến nâu

nhạt có hể rông hấy được c c mô sinh rưởng màu sậm của nấm bệnh với sốlượng hay đổi Cá khối bào ử có màu vàn da bò nhạt hoặc màu hồng c hồi xuất

hiện rãi rá hoặc ập rung heo những vòng ròn đồn âm rên c c vết bệnh Đôikhi c c vết bệnh cũng phát triển rên c c rái no Ở một số vùn , triệu chứng bệnthường xãy ra à chết rạp rước và sau khi nảy mầm, chềt hoại chồi hoặc đ m á

Bệnh có p ân bố rộn rên nhiều vùng rồng ớt tro g điều kiện ướiphun h ặc nước

trời Mầm bện có hể nằm rong hạt ồn ưu ro g àn dư hực vậtvà có p ạm viký chủ rộng

2.7 Tổng quan về nấm Colletotrichum

Theo tài liệu tổng hợp của Sharma năm 1989 nấm Colletotrichum được mô

tả gồm có 11 loài (Von Arx, 1957; Sutton, 1973), Alexopoulos và Mims (1979) thì

đề xuất trên 1000 loài hình thức trong giống này đã được mô tả trước đây và phần lớn đều trùng tên Theo ý kiến gần nhất của Baxter và cộng sự (1985),

11

Colletotrichum được giới thiệu có 21 loài trong đó C coccodes, C dematium, C gloeosporioides, C graminicola, C falcatum và C capsici là những loài thường gây bệnh thán thư (anthracnose)

Nấm Colletotrichum có sợi nấm nội sinh, mảnh, phân nhánh, không màu, có

vách ngăn, sợi nấm có nội bào và gian bào; Nhiều hạt dầu được sản xuất trong mỗi

tế bào của hệ sợi nấm; Khi chin sợi nấm trở nên sậm màu và bện xoắn lại thành dạng chất nền nhỏ dưới lớp ngoài cùng

Colletotrichum sinh sản vô tính bằng bào tử đính, bào tử đính phát triển trên cuống bào tử trong dạng quả thể là cụm cuống bào tử: Cụm cuống bào tử có dạng đĩa phẳng, mặt sau có cấu trúc phấn mịn, mỗi cụm cuống bào tử gồm lớp chất nền, bề mặt sản sinh cuống bào tử trong suốt Cùng với bào tử và cuống bào tử là các lông cứng trên mỗi cụm cuống bào tử, lông dài cứng, thuôn nhọn, không phân nhánh và đa bào cấu trúc như tơ cứng và Frost (1964) mô tả một vài loài của nấm Colltotrichum

có hoặc không có lông cứng có thể được kiểm soát bởi sự thay đổi độ ẩm

Sự hình thành một số lớn của bào tử gây nứt gãy trên biểu bì vật chủ, gặp điều kiện thuận lợi, mỗi bào tử mọc từ một đến nhiều ống mầm để hình thành sợi nấm Sợi nấm già đôi khi hình thành vách dày, màu nâu sậm, hình cầu hoặc không đều gọi là hậu bào tử (Chlamydospores) có thể ở tận cùng hoặc chen giữa sợi nấm

để tồn tại trong thời gian dài và khi tách ra chúng cũng mọc mầm để hình thành sợi nấm mới

12

Hình 2.1: Cấu trúc cụm cuống bào tử của một vài loại nấm Colletotrichum gây hại cây trồng A: Cụm bào tử của Colletotrichum lindemuthianum; B, cụm bào tử của C faltacum ; C, cuống bào tử và bào tử đính của C graminicola; D, bào tử nảy mầm

(Sharma, 1998)

13

Chương 3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

- Thời gian thực hiện từ tháng 08/2008 đến tháng 07/ 2009

- Mẫu được thu ở các tỉnh Tiền Giang , Bến Tre, Vĩnh Long, Tây Ninh

- Phân lập nấm và các thí nghiệm trong phòng được thực hiện tại phòng thí nghiệm Bộ Môn Bảo Vệ Thực Vật, Khoa Nông Học – Trường Đại Học Nông Lâm TP HCM

3.2 Nội dung nghiên cứu

3.2.1 Định danh tên loài của nấm Colletotrichum spp gây bệnh trên lá và trái ớt

- Phân lập các mẫu Colletotrichum spp được thu thập từ lá và trái ớt

- Khảo sát sự phát triển của các mẫu Colletotrichum spp ở các mức độ nhiệt

độ 150

C, 200C, 250C, 300C và 350C trên môi trường PGA

- Mô tả hình thái và xác định tên loài của các mẫu Colletotrichum spp đã phân

lập được

- Khảo sát tác động của thuốc Benomyl đối với các mẫu Colletotrichum spp

nuôi cấy trên môi trường PGA

3.2.2 Đánh giá khả năng gây bệnh của nấm Colletotrichum spp trên lá và trái đối với một số giống ớt

Thí nghiệm 1: Đánh giá khả năng gây bệnh của Colletotrichum spp thu thập trên lá và Colletotrichum spp thu thập trên trái đối với lá của một số giống ớt

trồng trong nhà lưới

Thí nghiệm 2: Đánh giá khả năng gây bệnh của Colletotrichum spp thu thập trên lá và Colletotrichum spp thu thập trên trái đối với trái của một số giống ớt

trồng ngoài đồng ruộng

14

3.3 Phương pháp nghiên cứu

3.3.1 Định danh tên loài của nấm Colletotrichum spp gây bệnh trên lá và trái ớt

Theo tài liệu của Barnett và Hunter (1998), Sutton, (1980)

3.3.1.1 Phân lập và nuôi cấy

Lá, thân và trái ớt bị bệnh được thu thập từ các giống ớt sừng và giống ớt hiểm trên vườn trồng năm 2008 tại các tỉnh Tiền Giang, Bến Tre, Vĩnh Long và Tây Ninh Thời gian lấy mẫu từ tháng 04 năm 2008, mỗi vùng lấy từ 3 vườn trồng, mỗi vườn trồng thu 1 mẫu lá, thân và trái Các vườn trồng này cách nhau qua vườn trồng cây khác

Phương pháp phân lập: dùng que cấy khử trùng lấy bào tử trên vết bệnh của trái ớt đem cấy vào môi trường agar nước Khi nấm mọc thì cấy truyền qua đĩa môi trường PGA Đối với mẫu thân lá ớt bị bệnh được khử trùng bằng cồn 70% trong 30 giây, rồi rửa lại bằng nước cất vô trùng 3 - 4 lần Mẫu bệnh được cắt nhỏ và để khô trong tủ cấy trên giấy thấm vô trùng Sau khi mẫu lá khô cấy

vào đĩa Petri có chứa môi trường agar nước Khi nấm Colletotrichum mọc cấy

truyền qua môi trường PGA bằng phương pháp cấy truyền sợi nấm

- Phương pháp tiến hành:

Cấy 1 khoanh nấm có đường kính 4 mm cùng độ tuổi (lấy từ mép tản nấm 4 ngày tuổi) vào trung tâm của đĩa petri ở vị trí úp ngược cho nấm tiếp xúc với môi trường Các đĩa Petri được đặt ở nhiệt độ phòng (25 - 280

C)

Mô tả hình thái, màu sắc và đo đường kính tản nấm trên môi trường nuôi cấy 2 ngày/ lần cho đến khi mọc chạm thành đĩa

3.3.1.2 Khảo sát sự phát triển của nấm Colletotrichum spp.ở các mức nhiệt độ

15 0 C, 20 0 C, 25 0 C, 30 0 C và 35 0 C trên môi trường PGA

Mỗi mẫu nấm được cấy trên 3 đĩa môi trường PGA có đường kính là

90 mm và 20 ml môi trường

Phương pháp tiến hành: cấy một khoanh nấm có đường kính 4mm cùng

độ tuổi (lấy từ mép tản nấm 4 ngày tuổi) vào trung tâm của đĩa Petri ở vị trí úp ngược cho nấm tiếp xúc với môi trường Các đĩa thí nghiệm được đặt trong tủ

3.3.1.3 Khảo sát tác động của Benomyl đối với nấm Colletotrichum spp

trên môi trường PGA

Theo phương pháp của Tailhinhas (2002) sử dụng Benomyl để định danh

loài Colletotrichum

Sử dụng môi trường PGA làm thí nghiệm Nồng độ thuốc được sử dụng 5µg/l Phương pháp tiến hành: môi trường PGA được hấp khử trùng 1210

C, 1atm trong 20 phút Sau đó để môi trường giảm bớt nhiệt độ, cho thuốc vào lắc thật đều rồi đổ ra đĩa petri (20 ml/ đĩa) Cấy 1 khoanh nấm có đường kính 4 mm cùng độ tuổi (lấy từ mép tản nấm 4 ngày tuổi vào trung tâm của đĩa petri ở vị trí

úp ngược cho nấm tiếp xúc với môi trường Các đĩa petri sau khi cấy được ủ trong tối 5 ngày, đặt ở nhiệt độ trong phòng

Mô tả hình thái, màu sắc và đo đường kính tản nấm 2 ngày/ lần

3.3.1.4 Xác định tên loài của mẫu nấm Colletotrichum spp đã phân lập được

Dựa vào màu sắc của tản nấm, bào tử nấm được thu từ những tản nấm có màu sắc khác nhau để quan sát

- Mỗi mẫu quan sát 100 bào tử để xác định hình dạng bào tử

- Phương pháp: nhỏ dung dịch bào tử lên lam kính và đặt vào trong đĩa có lót giấy giữ ẩm, quan sát sự nảy mầm và sự hình thành giác bám của bào tử sau

4, 8, 12 giờ, dưới kính hiển vi (40X)

- Các chỉ tiêu theo dõi: Tính tỉ lệ bào tử nảy mầm và bào tử hình thành giác bám.Màu sắc và hình thành giác bám, đo chiều dài và chiều ngang của 20

giác bám dưới kính hiển vi (40X)

16

3.3.2 Đánh giá khả năng gây bệnh của Colletotrichum spp trên lá và trái ớt

đối với một số giống ớt

3.3.2.1 Thí nghiệm 1: Đánh giá khả năng gây bệnh của Colletotrichum spp thu

thập trên lá và Colletotrichum spp thu thập trên trái đối với lá một số giống ớt trồng

trong nhà lưới

Các giống ớt thí nghiệm:

- V1: Ớt sừng vàng F1 TN 243 – Trang Nông – Việt Nam, kích thước trái to

và dài, trái hướng địa Khi chín trái vàng đỏ.Tính kháng bệnh thán thư chưa được biết

- V2: bún F1 TN 155 – Trang Nông – Việt Nam, kích thước trái nhỏ và dài, trái hướng địa Khi chín trái màu đỏ Tính kháng bệnh thán thư chưa được biết

- V3: chỉ thiên F1 TN 278 – Trang Nông – Việt Nam, kích thước trái nhỏ và ngắn, trái chỉ thiên Khi chín trái màu đỏ Tính kháng bệnh thán thư chưa được biết

- V4: Ớt hiểm F1 CN 019 – Chánh Nông – Việt Nam, kích thước trái nhỏ và ngắn, trái chỉ thiên Khi chín trái màu đỏ Tính kháng bệnh thán thư chưa được biết

- V5 : Ớt lai F1 Nông Trường – Cty TNHH Nông Nghiệp Chánh Phong, kích thước trái to và dài, trái hướng địa Khi chín trái màu đỏ Tính kháng bệnh thán thư chưa được biết

- V6: Ớt hiểm F1 Số 01 – Cty TNHH Nông Nghiệp Chánh Phong, kích thước trái nhỏ và ngắn, trái chỉ thiên Khi chín trái có màu đỏ Tính kháng bệnh thán thư chưa được biết

- V7: Giống ớt sừng địa phương (do nông dân để giống qua vài thế hệ) Tính kháng bệnh thán thư chưa được biết

- V8: Giống ớt hiểm địa phương (được thu thập từ những cây ớt hoang dại) Tính kháng bệnh thán thư chưa được biết

17

Sử dụng dòng Colletotrichum sp1 được phân lập từ lá ớt và dòng Colletotrichum sp2 Colletotrichum sp3 được phân lập từ trái ớt ở các tỉnh Tiền

Giang, Bến Tre, Vĩnh Long, Tây Ninh

Phương pháp tiến hành: Thí nghiệm được bố trí ngẫu nhiên với 3 mẩu nấm cho 10 giống ớt Mỗi giống ớt trồng 3 cây

Phương pháp chuẩn bị dung dịch bào tử: Bào tử nấm được thu từ khuẩn lạc 7 - 10 ngày tuổi trên môi trường PGA bằng cách cho nước cất vô trùng lên

bề mặt khuẩn lạc rồi dùng phiến lam vô trùng cào nhẹ lên Dùng vải màn sạch lọc lấy dịch bào tử, sau đó nhỏ lên buồng đếm hồng cầu Thomas để điều chỉnh nồng độ bào tử cần dùng 106 bào tử /ml (Nguyễn Ngọc Trì, 2004)

Chuẩn bị hạt giống theo qui trình kỹ thuật trồng ớt cay – Công ty TNHH

TM Trang Nông Ngâm hạt giống trong nước sạch không bị phèn mặn từ 6 – 8 giờ, sau đó ngâm ướt với thuốc trừ nấm Benofun 50WP trong 30 phút, vớt lên rửa sạch để ráo nước, lấy khăn ẩm gói hạt giống lại và cho vào bao nylon cột kín miệng để hạn chế bốc thoát hơi nước Sau cùng đem gói giống ủ Hầu hết các giống ớt bắt đầu nảy mầm từ 48 giờ sau Đem gieo những hạt đã nứt mầm vào túi nylon, đừng để hạt ra rễ quá dài, cây mầm sẽ lên yếu và khi gieo dễ bị gãy mầm

Thành phần đất vào túi nylon có kích thước 10 cm x 25 cm theo tỷ lệ như sau: Đất mặt tơi xốp 60%, phân chuồng hoai mục 29%, tro trấu 10%, phân lân 0,5 – 1%, vôi 0,2 – 0,3%

Trộn đều thành phần trên và sàng kỹ để loại bỏ rác và cục đất to trước khi

vô túi nylon Sau khi gieo hạt vào túi nylon, rải một lớp mỏng phân chuồng hoai sàng kỹ để lấp kính hạt, rải thuốc Basudin hạt đề phòng kiến, dế và sâu đất phá hại Tưới đẫm nước, giữ ẩm để hạt dễ nảy mầm Khi cây ớt phát triển khoảng 7 -

10 ngày có thể tưới NPK, DAP và urê

Phương pháp chủng :Khi cây ớt được 20 ngày tuổi (cây khoảng 5 – 6 lá thật) thì tiến hành phun huyền phù bào tử nấm với mật số bào tử là 106 bào tử/ ml

(Nguyễn Ngọc Trì, 2004) Cây ớt sau khi chủng nấm Colletotrichum sp được ủ

18

tối, ẩm độ 98% trong 24 giờ nhằm tạo điều kiện thích hợp cho nấm xâm nhiễm

và sau đó chuyển ra điều kiện nhà lưới cho bệnh phát triển

Chỉ tiêu theo dõi: Trên mỗi giống ghi nhận tỷ lệ bệnh, chỉ số bệnh, đường kính trung bình của vết bệnh, số lượng vết bệnh và cấp bệnh trên lá sau 5, 8, 11

và 14 NSC theo thang đánh giá cấp của Ullasa và ctv (1981)

Cấp 1: không có vết bệnh trên lá

Cấp 2: 10% diện tích vết bệnh trên lá

Cấp 3: 11-20% diện tích vết bệnh trên lá

Cấp 4: 21-50% diện tích vết bệnh trên lá

Cấp 5: 51% hoặc hơn 51% diện tích vết bệnh trên lá

Qua thí nghiệm 1 so sánh mức độ gây hại của nấm Colletotrichum sp1 Colletotrichum sp2 Colletotrichum sp3., đối với lá của 10 giống ớt trồng trong nhà lưới

3.3.2.2 Thí nghiệm 2: Đánh giá khả năng gây bệnh của nấm Colletotrichum spp

thu thập trên lá và Colletotrichum spp thu thập trên trái đối với trái của một số

giống ớt trồng ở ngoài đồng ruộng

Sử dụng 10 giống ớt giống như thí nghiệm 1

Nồng độ bào tử chủng: Dựa vào kết quả thí nghiệm trên trái (Trần Thị Vân, 2006) chọn nồng độ bào tử 106 bào tử / ml để chủng ở ruộng cho cả 2 dung dịch bào tử thu thập từ lá và trái ớt

Sử dụng dòng nấm Colletotrichum sp1 được phân lập từ lá ớt và dòng nấm Colletotrichum sp2 Colletotrichichum sp3 được phân lập từ trái ớt ở các

tỉnh Tiền Giang, Bến Tre, Vĩnh Long, Tây Ninh

Phương pháp thực hiện

Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với 3 mẫu nấm cho 10 giống

ớt Mỗi giống ớt có 3 cây, 2 giống được bố trí song song trên cùng một liếp

 Kỹ thuật trồng và chăm sóc ớt ngoài đồng ruộng Trồng cây con: Giá thể sử dụng phân trùn, xơ dừa, đất trộn theo tỷ lệ 1 : 1: 1, Supper lân 0,2 – 0,5 kg/1 kg giá thể Tưới nước giữ ẩm trước khi trồng Gieo 2 hạt/

19

hốc, khi cây có 1 - 2 lá thật thì phun thuốc Viben C hòa trong nước để trừ bênh thối

cổ rễ

Làm đất: Mặt luống rộng 1,1 - 1,2 m, luống cao 30 cm, rãnh rộng 20 – 30

cm, hàng cách hàng 50 - 60 cm, cây cách cây 30cm Sau đó bón phân theo công thức sau: phân chuồng: 800 – 1000 kg/sào, supper lân: 34 kg/sào Trộn đều đất với phân rồi dùng bạt phủ lên theo từng luống, sử dụng bạt khổ 120 cm để trồng hàng kép Khi trồng dùng ống có đường kính 8 - 10cm để đục lỗ

Chăm sóc: Bón thúc: 100% urê(15kg), 50% supper lân(17kg), KCL(15kg) chia làm 4 lần, Lần thứ 1: bón 10-15 ngày sau khi trồng, các lần sau đó bón cách nhau 20 ngày Tưới nước 2 ngày / 1 lần

Phòng trừ sâu: Phun thuốc Trebon, ở 2 mặt lá để diệt trừ nhện và rầy chích hút lá

Cách chủng (Theo tài liệu của Trần Thị Vân, 2006)

Pha dung dịch có nồng độ bào tử là 106

bào tử / ml với Tween 80 (0,03% -

0,05%) vào trước khi phun để tạo độ dính, pha 1 giọt (0,5µl) Tween 80 cho 100ml dung dịch bào tử Sau đó lắc đều và dùng bình phun nấm xịt đều lên toàn bộ cây Phun khi ô thí nghiệm có 50% cây ớt có trái đầu tiên Sau khi phun nấm chú ý giữ

ẩm cho cây

Các chỉ tiêu theo dõi

Thời gian xuất hiện bệnh tính từ khi phun chủng đến khi có vết bệnh

Xác định tỷ lệ bệnh (TLB), chỉ số bệnh (CSB), số lượng vết bệnh, đường kính trung bình vết bệnh

Xác định tỷ lệ trái bệnh (TLB) thán thư: Đếm số trái bị bệnh và tổng số trái điều tra ( trái điều tra có chiều dài >3 cm ) từ đó tính tỷ lệ bệnh theo công thức:

TLB (%) = (A/B) x100

Trong đó: A- số trái ớt bị bệnh

B- tổng số trái ớt điều tra

Chỉ số bệnh thán thư được tính theo công thức:

CSB (%) = ( Σ( a x b ) / ( N x T )) x 100

T- trị số cấp bệnh cao nhất trong bảng phân cấp đã dùng

N- tổng số toàn bộ trái điều tra

Phân cấp bệnh hại trái ớt theo thang cấp (G,L Hartman và T,C Wang, 1989) như sau:

Cấp 0: không có vết bệnh trên trái

Cấp 1: vết bệnh chiếm từ 1-2% diện tích trái ớt

Cấp 2: vết bệnh chiếm từ 3 -8% diện tích trái ớt

Cẩp 3: vết bệnh chiếm từ 9-15% diện tích trái ớt

Cấp 4: vết bệnh chiếm hơn 15 % diện tích trái ớt

Qua thí nghiệm 2 so sánh mức độ gây hại của nấm Colletotrichum sp1, Colletotrichum sp2, Colletotrichum sp3, đối với trái của 10 giống ớt trồng ngoài

đồng ruộng

3.3.3 Phương pháp xử lý số liệu

Tính toán xử lý số liệu các thí nghiệm bằng phân tích thống kê ANOVA và

so sánh các trung bình bằng trắc nghiệm LSD với phần mềm xử lý thống kê SPSS phiên bản 11.5 Thực hiện chuyển đổi số liệu theo hướng dẫn của Trần Công Thiện (1999), Tính toán số liệu bằng Excell

21

Chương 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

4.1 Các mẫu Colletotrichum spp phân lập được trên cây ớt

Dựa vào đặc điểm vết bệnh đặc trưng của nấm Colletotrichum spp trên cây ớt

để thu thập mẫu bệnh Vết bệnh trên trái là những đốm màu đen có viền màu xám, bên trong vết bệnh có những vòng tròn đồng tâm và những chấm nhỏ li ti màu đen nhô lên cao, bề mặt vết bệnh lõm xuống, ướt và quan sát kỹ sẽ thấy các hạt bào tử màu cam Vết bệnh trên lá là những đốm màu vàng nâu, trên vết bệnh có những vòng tròn đồng tâm, nhiều nhưng không làm chết lá và thường xuất hiện ở lá già Vết bệnh trên thân làm cây bị gãy hoặc chết khô, vết bệnh dài có màu đen hoặc nâu sáng

Căn cứ vào các đặc điểm đặc trưng của nấm Colletotrichum như sợi nấm nội

sinh, mảnh, phân nhánh, có vách ngăn Trên bề mặt môi trường nuôi cấy thường xuất hiện các giọt dầu là những khối bào tử thường có màu cam đến đỏ Bào tử đơn bào trong suốt có dạng hình trụ, hình thoi, hay hình lưỡi liềm có thể nhọn hay tròn ở hai đầu hoặc 1 đầu nhọn 1 đầu tròn Trên ổ nấm quan sát có các lông cứng (setae) thuôn nhọn, không phân nhánh và đa bào cấu trúc như tơ cứng

Dựa vào màu sắc khuẩn lạc phân lập trên môi trường PGA có thể chia các

mẫu nấm Colletotrichum spp đã phân lập được ra làm 3 nhóm:

Nhóm có khuẩn lạc màu trắng hồng trên môi trường PGA phân lập được 9 mẫu, nhóm có khuẩn lạc màu đen và có hạt nhỏ li ti màu đen xuất hiện trên mặt thạch phân lập được 8 mẫu, nhóm có khuẩn lạc màu trắng xám phân lập được 3 mẫu

22

Hình 4.2: Các mẫu bệnh trên lá, trái và thân của cây ớt được thu thập để phân lập ở

Tiền Giang, Bến Tre, Vĩnh long, Tây Ninh

Màu trắng

hồng

Màu đen

24

Hình 4.3: Các mẫu Colletotrichum spp phân lập được trên cây ớt tại Tiền

Giang, Bến Tre, Tây Ninh

4.2 Sự phát triển của mẫu Colletotrichum spp ở các mức nhiệt độ khi nuôi cấy

trên môi trường PGA

Màu sắc tản nấm, hình dạng và mức độ sinh sản bào tử của 3 nhóm nấm

Colletotrichum đều bị ảnh hưởng của nhiệt độ Ở nhiệt độ 150C nhóm nấm màu trắng hồng có sợi nấm mọc nổi trên mặt thạch có màu trắng, mặt dưới tản nấm có màu cam nhạt, bào tử xuất hiện có màu hồng da cam, mép tản nấm có màu trắng và không đều

Nhóm nấm màu trắng xám có sợi nấm mọc nổi trên mặt thạch có màu trắng xám, mặt dưới tản nấm có màu đen đậm, bào tử xuất hiện có màu đen, mép tản nấm không đều Nhóm nấm màu đen có hạt nhỏ li ti có sợi nấm mọc nổi trên mặt thạch

có màu trắng vàng, ở gần tâm tản nấm có những hạt nhỏ màu đen, bào tử xuất hiện

có màu đen, mặt dưới tản nấm có màu đen đậm ở gần tâm tản nấm và nhạt dần ra phía ngoài

25

Ở nhiệt độ 200

C và 250C nhóm nấm màu trắng hồng có sợi nấm mọc sát mặt thạch có màu trắng hồng hơi xám, có xuất hiện giọt dầu màu hồng da cam ở gần tâm tản nấm, mặt dưới tản nấm có màu hồng da cam và những vòng tròn đồng tâm, nhóm nấm màu trắng xám ở nhiệt độ 250

C có sợi nấm dài màu trắng xám còn ở nhiệt độ 200C sợi nấm ngắn hơn màu trắng sáng và giọt dầu màu hồng da cam ở gần tâm tản nấm, nhóm nấm màu đen có sợi nấm mọc nổi trên mặt thạch màu trắng, mép tản nấm có màu trắng đục mọc đều nhau, bào tử xuất hiện tập hợp lại thành các hạt màu đen nổi lên trên mặt thạch

Ở nhiệt độ 300C nhóm nấm màu trắng hồng có sợi nấm mọc sát mặt thạch màu trắng hồng, có bào tử màu hồng da cam, mặt dưới tản nấm có màu hồng da cam đậm Nhóm nấm trắng xám có sợi nấm mọc nổi trên mặt thạch màu trắng, gần tâm tản nấm sợi nấm kém phát triển Nhóm nấm màu đen có hạt nhỏ li ti sợi nấm mọc nổi trên mặt thạch có màu trắng, gần tâm tản nấm xuất hiện bào tử tập hợp lại thành những hạt li ti màu đen

Theo Kendrick và Walker (1948); Slade và ctv (1987), nhiệt độ thích hợp

cho sự phát triển của nấm Colletotrichum sp là 20 - 240

C và phát triển hạn chế ở nhiệt độ trên 300

C Qua các kết quả thí nghiệm về nhiệt độ cho thấy nhóm nấm

Colletotrichum màu trắng hồng, nhóm nấm Colletotrichum màu đen có hạt nhỏ li ti

và nhóm nấm Colletotrichum màu trắng xám thích hợp với nhiệt độ trong khoảng

200C – 300C và nhiệt độ 350C cả 3 nhóm nấm đều không phát triển

Ở các mức nhiệt độ sau 10 ngày nuôi cấy trên môi trường PGA cho thấy mỗi nhóm nấm đều có màu sắc, hình dạng tản nấm khác nhau, nhóm nấm trắng xám phát triển cao nhất, nhóm nấm trắng hồng phát triển thấp nhất Nhiệt độ trung bình hàng năm ở Việt Nam từ 22 - 270C là điều kiện thích hợp cho 3 nhóm này phát triển