KHẢO SÁT ĐA DẠNG DI TRUYỀN VÀ TÍNH GÂY BỆNH CỦA NẤM Corynespora cassiicola (Berk. Curt.) Wei PHÂN LẬP TỪ CÂY CAO SU VÀ CÁC CÂY KÝ CHỦ KHÁC

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH ************************* NGUYỄN ĐƠN HIỆU KHẢO SÁT ĐA DẠNG DI TRUYỀN VÀ TÍNH GÂY BỆNH CỦA NẤM Corynespora cassiicola (Berk & Curt.) Wei PHÂN LẬP TỪ CÂY CAO SU VÀ CÁC CÂY KÝ CHỦ KHÁC LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 11/2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC NƠNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH ************************* NGUYỄN ĐƠN HIỆU KHẢO SÁT ĐA DẠNG DI TRUYỀN VÀ TÍNH GÂY BỆNH CỦA NẤM Corynespora cassiicola (Berk & Curt.) Wei PHÂN LẬP TỪ CÂY CAO SU VÀ CÁC CÂY KÝ CHỦ KHÁC Chuyên ngành: Bảo vệ thực vật Mã số : 60 62 10 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Hướng dẫn Khoa học: TS NGUYỄN ANH NGHĨA Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 11/2011 KHẢO SÁT ĐA DẠNG DI TRUYỀN VÀ TÍNH GÂY BỆNH CỦA NẤM Corynespora cassiicola (Berk & Curt.) Wei PHÂN LẬP TỪ CÂY CAO SU VÀ CÁC CÂY KÝ CHỦ KHÁC NGUYỄN ĐÔN HIỆU Hội đồng chấm luận văn: Chủ tịch: GS TS PHẠM VĂN BIÊN Viện Khoa học Kỹ thuật Nông Nghiệp Miền Nam Thư ký: TS VÕ THỊ THU OANH Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Phản biện 1: TS LÊ ĐÌNH ĐƠN Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Phản biện 2: TS TRẦN THỊ THÚY HOA Hiệp hội Cao su Việt Nam Ủy viên: TS TỪ THỊ MỸ THUẬN Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh i LÝ LỊCH CÁ NHÂN Tôi tên Nguyễn Đôn Hiệu, sinh ngày 04 tháng 10 năm 1979 thành phố Huế Con Ơng Nguyễn Đơn Hùng Bà Đồn Thị Nga Tốt nghiệp tú tài năm 1998 Trường Phổ thông Trung học Bến Cát, Huyện Bến Cát, Tỉnh Bình Dương Tốt nghiệp Đại học năm 2004 ngành Nông học, hệ qui dài hạn Trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh Sau làm việc Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Viện Nghiên cứu Cao su Việt Nam từ năm 2004, chức vụ nghiên cứu viên Tháng năm 2009 theo học Cao học chuyên ngành Bảo vệ Thực vật Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh Địa liên lạc: Viện Nghiên cứu Cao su Việt Nam, Lai Khê, Lai Hưng, Bến Cát, Bình Dương Điện thoại: 0918 696 053 Email: donhieurriv@gmail.com ii LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu mà tiến hành tổ chức thực hiện, hướng dẫn TS Nguyễn Anh Nghĩa Cơng trình nghiên cứu phần đề tài cấp Tập Đồn Cơng nghiệp Cao su Việt Nam “Nghiên cứu bệnh rụng nấm Corynespora cassiicola gây cao su ký chủ khác Việt Nam” ThS Phan Thành Dũng làm chủ nhiệm đề tài Những số liệu luận văn trung thực phép công bố với đồng ý chủ nhiệm đề tài quan chủ trì đề tài (Biên xác nhận đính kèm phần phụ lục) Tác giả cơng trình Nguyễn Đơn Hiệu iii LỜI CẢM TẠ Thành kính khắc ghi cơng ơn Ba, Mẹ người thân gia đình tận tụy hy sinh, âm thầm đóng góp cho suốt trình học tập Chân thành cảm tạ Ban Giám hiệu, Thầy Cô giáo Khoa Nông học, Phòng Sau Đại học - Trường Đại học Nơng Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho tơi tham gia khóa học tận tình hướng dẫn học tập suốt thời gian từ 2009 đến Xin chân thành cảm tạ Ban lãnh đạo Viện Nghiên cứu Cao su Việt Nam Bộ môn Bảo vệ Thực vật tạo điều kiện thuận lợi cho tơi tham gia khóa Cao học thực luận văn Lòng biết ơn xin gởi đến Thầy Nguyễn Anh Nghĩa tận tình hướng dẫn truyền đạt cho tơi nhiều kiến thức q báu suốt q trình thực đề tài giúp tơi hồn thành luận văn Xin cảm ơn kỹ sư Nguyễn Thị Thanh Trang, kỹ thuật viên Lê Thị Ngọc Mai, kỹ thuật viên Nguyễn Văn Hải (Bộ môn Bảo vệ Thực vật), ThS Lê Thị Thùy Trang, kỹ sư Huỳnh Đức Định kỹ sư Huỳnh Thị Minh Tâm (phòng Cơng nghệ Sinh học)/Viện Nghiên cứu Cao su Việt Nam tích cực giúp đỡ việc thực thí nghiệm thuộc đề tài Cuối cùng, xin gởi lời cảm ơn đến bạn học viên Cao học chuyên ngành Bảo vệ Thực vật Khóa 2009 động viên giúp đỡ tơi suốt thời gian học tập Trường Nguyễn Đôn Hiệu iv TÓM TẮT Đề tài “Khảo sát đa dạng di truyền tính gây bệnh nấm Corynespora cassiicola (Berk & Curt.) Wei phân lập từ cao su ký chủ khác” thực Viện Nghiên cứu Cao su Việt Nam, xã Lai Hưng, huyện Bến Cát, tỉnh Bình Dương, thời gian thực từ tháng năm 2010 đến tháng năm 2011 Mục tiêu nghiên cứu đề tài khảo sát đa dạng di truyền 38 mẫu phân lập (MPL) nấm C cassiicola phân lập từ nhiều dòng vơ tính (DVT) cao su số ký chủ khác xác định tính gây bệnh, khả lây nhiễm chéo MPL nấm C cassiicola đại diện cho phân nhóm di truyền nguồn gốc ký chủ Kết giải trình tự vùng rDNA-ITS khẳng định đoạn DNA có kích thước 559 bp trình tự vùng rDNA-ITS 38 MPL giống gần hoàn toàn ngoại trừ nucleotide đơn đa hình (SNPs) phát vùng ITS1 vị trí 135 Kết phân chia 38 MPL thành nhóm riêng biệt, nhóm gồm 21 MPL có cytosine (C) nucleotide vị trí 135 nhóm gồm 17 MPL có thymine (T) vị trí Phân tích mối quan hệ di truyền mẫu phân lập C cassiicola dựa kỹ thuật ISSR, tổng số 88 băng DNA khuếch đại từ mồi ISSR, với tỷ lệ đa hình 94,3% Cây phân nhóm di truyền tạo từ phân tích UPGMA dựa hệ số Nei Li chia 38 MPL thành nhóm Đối chiếu kết phân nhóm chính, cho thấy có trùng khớp hồn tồn với nhóm thu từ phân tích trình tự vùng rDNA-ITS 38 MPL nghiên cứu Kết cho thấy có phân nhóm theo vùng địa lý mức thấp có mối quan hệ di truyền gần MPL từ ký chủ khác vùng Lai Khê Mức độ gây bệnh MPL (CoryLK02, CoryPK01, CoryLK26, CoryLK38) điều kiện phòng thí nghiệm cắt rời DVT cao su, đu đủ bí đao sau ngày biến động từ mức xâm nhiễm nhẹ với vết bệnh nhỏ không màu nằm vị trí chủng mức xâm nhiễm nặng với vết bệnh lớn hình thành sợi nấm vết chủng Chỉ số bệnh trung bình (%) từ 0,0 - 100% tương ứng với cấp bệnh trung bình biến thiên từ 0,0 - 4,0 Cả MPL xâm nhiễm tất DVT cao su, MPL có nguồn gốc từ cao su MPL CoryLK02 có khả xâm v nhiễm đu đủ bí đao MPL CoryPK01 khơng có khả MPL CoryLK26 (phân lập từ đu đủ) có khả xâm nhiễm đu đủ cao su, MPL Cory LK38 (phân lập từ bí đao) khơng có khả xâm nhiễm bí đao, cao su mà xâm nhiễm đu đủ Khả lây nhiễm chéo MPL điều kiện nhà lưới DVT cao su, đu đủ bí đao sau 10 ngày chủng biến động từ mức không gây nhiễm, đến nhẹ với vài vết bệnh đốm nhỏ nhìn kỹ thấy nặng với triệu chứng rõ ràng số DVT cao su Tất MPL gây bệnh toàn DVT cao su, số bệnh trung bình (%) biến thiên từ 0,0 - 57,6%, cấp bệnh trung bình từ 0,0 - 2,9 MPL CoryLK02 gây bệnh đu đủ bí đao MPL CoryPK01 khơng có khả lây nhiễm chéo MPL CoryLK26 khả gây bệnh trên đu đủ lây nhiễm chéo sang cao su không gây triệu chứng lây nhiễm bí đao Trong đó, MPL CoryLK38 khơng có khả gây bệnh bí đao mà ghi nhận triệu chứng bệnh lây nhiễm chéo sang cao su đu đủ vi SUMMARY A study entitled “Diversity and pathogenicity of the fungus Corynespora cassiicola (Berk & Curt.) Wei isolated from rubber tree and other hosts" was conducted in Rubber Research Institute of Vietnam, Lai Hung Commune, Ben Cat District, Binh Duong Province The study was carried out from April 2010 to April 2011 to analyse the diversity among 38 C cassiicola isolates and pathogenicity of isolates represent distinct groups and different host sources DNA sequencing confirmed the DNA fragments generated from 38 isolates were equal in length with 559 bp and the rDNA-ITS regions of all these isolates were identical with the exception one single nucleotide polymorphisms (SNPs) detected at base pair 135 in ITS1 region From the analysis, the rDNA-ITS sequences segregated the 38 studied isolates into distinct groups Group 1, includes 21 isolates, contained cytosin (C); group 2, includes 17 isolates, contained thymin (T) at base pair 135 The ISSR markers analyses with primers have produced 88 DNA bands in which 94.3% were polymorphism Dendrogram produced from UPGMA analysis based on Nei and Li’s coefficient also divided the 38 studied isolates into main clusters The isolates in each cluster corresponded to those of groups obtained from rDNA-ITS sequencing analyses These results inferred close genetic relations among some isolates obtained from different hosts at Lai Khe area In laboratory condition, the infection level of representative isolates (CoryLK02, CoryPK01, CoryLK26, CoryLK38) on rubber clones, papaya and white pumpkin after days inoculated on detached leaves varried from no visible lesion to small dark discolouration below droplet and then to fully prominent large lesion with or without mycelium growth The percent disease intensity values varried from 0.0 to 100.0% and the average infection score was from 0.0 to 4.0 respectively, all of the representative isolates could infect leaves of rubber clones The CoryLK02 isolate, collected from rubber tree, could infect on papaya and white pumpkin leaves, but the CoryPK01 isolate (also obtained from rubber tree) could not infect these host leaves The CoryLK26 isolate (obtained from papaya) only infected papaya leaves and rubber vii leaves While the CoryLK38 isolate could infect not only on white pumpkin and rubber leaves but also on papaya leaves In greenhouse condition, after 10 days of inoculation, the infection level of representative isolates on rubber clones, papaya and white pumpkin showed from no any symptom to clear symptoms on leaves of rubber clones The percent disease intensity was from 0.0 to 57.6% and the average infection score varried from 0.0 to 2.9 respectively, all of the representative isolates could infect on leaves of rubber clones Similar to the result of detached leaf assay, CoryLK02 isolate caused slight infection on papaya and white pumpkin, but the CoryPK01 isolate showed not any symptom on these hosts The isolate CoryLK26 was pathogenic on papaya and caused slight infection on all of the rubber clones in this study While the CoryLK38 isolate was not only pathogenic on white pumpkin but also on rubber tree and papaya viii DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CĨ LIÊN QUAN ĐÃ CƠNG BỐ VÀ ĐƯỢC CHẤP NHẬN ĐĂNG TẢI Nguyễn Đôn Hiệu, Nguyễn Anh Nghĩa Phan Thành Dũng (2011) Phân tích đa dạng di truyền nấm Corynespora cassiicola phân lập từ cao su số ký chủ khác kỹ thuật giải trình tự vùng ITS-DNA thị phân tử ISSR Tạp chí Khoa học Công nghệ Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn, số 19, trang 46 – 53 Nguyễn Đôn Hiệu, Nguyễn Anh Nghĩa Phan Thành Dũng (2011) Xác định tính gây bệnh nấm Corynespora cassiicola phân lập từ cao su số ký chủ khác phương pháp cắt rời Tạp chí Khoa học Công nghệ Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn, số 22, kỳ tháng 11 năm 2011 65 PHỤ LỤC Phụ lục Qui trình ly trích DNA nấm C cassiicola theo phương pháp dùng QIAGEN DNEASY PLANT KITS Cho 100 mg sợi nấm vào cối (đã làm lạnh nitơ lỏng), nghiền mẫu nấm với nitơ lỏng thành dạng bột mịn Cho bột nấm vào eppendorf 1,5 ml, đặt vào khay đá chuẩn bị trước, mở nắp tube để nitơ lỏng bay Cho vào tube 400 µl AP1(đã ủ 65oC 10 phút); Thêm µl RnaseA; Vortex; Ủ 65oC 10 phút, thời gian ủ nhiệt nên đảo tube – lần Thêm 150 µl AP2, dùng pipet để trộn dung dịch, ủ hộp đá phút nhằm mục đích kết tủa chất tẩy rửa, protein, đường cao phân tử Ly tâm 14.000 vòng/phút phút để loại bỏ chất kết tủa Dùng pipet chuyển dịch lỏng bên vào cột màu tím, ly tâm 14.000rpm phút Chuyển dịch lỏng vào tube (eppendorf 1,5 ml, không kèm với Kit) Chú ý cẩn thận không làm rã pellet đáy tube (Về mặt lý thuyết thu lượng dịch phân rã 450 µl Tuy nhiên, nhiều trường hợp lượng dịch phân rã thu nhỏ Trong trường hợp này, phải đo ghi chép thể tích cẩn thận để tính thể tích buffer thêm vào bước tiếp theo) Thêm 1,5 lần thể tích AP3/E trộn pipet Sau thêm AP3/E vào, tượng kết tủa xảy khơng ảnh hưởng đến việc sử dụng Dneasy; Chú ý buffer thêm vào AP3/E; Pipet trực tiếp AP3/E vào dung dịch phân rã (không màu) trộn Chuyển 650 µl hỗn hợp lỏng bước vào DNeasy mini spin column ml collection tube (column không màu kèm Kit) Ly tâm 8.000 rpm/1 phút, loại bỏ dịch lỏng, sử dụng ml collection tube bước sau 10 Lặp lại bước phần dung dịch lại bước Ở bước 10, DNA dịch phân rã hấp thụ vào cột hút DNA 11 Đặt cột hút DNA DNeasy mini spin column vào ml collection tube (đi kèm Kit) Thêm 500 µl AW, ly tâm 800 rpm/5 phút, loại bỏ dịch lọc Đảm bảo ethanol thêm vào AW 12 Thêm 500 µl AW vào DNeasy mini spin column Ly tâm 14.000 rpm/2 phút để làm khô màng hấp phụ DNA Loại bỏ dịch lọc tube đựng dịch lọc 13 Chuyển cột hấp thụ DNA vào ống tube (eppendorf 1,5 ml, không kèm Kit) Pipet 50 – 100 µl buffer AE trực tiếp vào màng DNeasy, ủ phút (15 – 25oC) Ly tâm 8.000 rpm/1 phút để hoà tan thu hoạch DNA 14 Lập lại bước 13 lần 66 Phụ lục Kết đo OD 38 MPL nấm C cassiicola Mã DNA 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 Lần 0.050 0.032 0.038 0.038 0.040 0.041 0.036 0.038 0.043 0.047 0.042 0.044 0.045 0.079 0.044 0.095 0.041 0.057 0.044 0.033 0.036 0.045 0.039 0.036 0.087 0.067 0.077 0.091 0.039 0.039 0.077 0.069 0.077 0.083 0.049 0.039 0.077 0.068 I260 I280 Lần Lần Lần Lần Lần 0.042 0.035 0.017 0.022 0.025 0.036 0.032 0.018 0.021 0.019 0.035 0.032 0.020 0.019 0.018 0.038 0.038 0.022 0.023 0.028 0.039 0.037 0.021 0.019 0.024 0.032 0.038 0.028 0.019 0.019 0.033 0.033 0.016 0.017 0.017 0.038 0.040 0.020 0.027 0.028 0.039 0.036 0.027 0.023 0.025 0.040 0.044 0.030 0.031 0.025 0.047 0.048 0.024 0.028 0.029 0.057 0.053 0.030 0.033 0.032 0.048 0.049 0.030 0.031 0.032 0.077 0.080 0.043 0.052 0.054 0.042 0.047 0.021 0.030 0.033 0.085 0.085 0.042 0.062 0.063 0.042 0.037 0.023 0.023 0.020 0.069 0.071 0.033 0.035 0.046 0.038 0.046 0.022 0.020 0.024 0.037 0.033 0.017 0.019 0.016 0.036 0.036 0.021 0.021 0.021 0.038 0.040 0.028 0.024 0.025 0.037 0.037 0.017 0.017 0.021 0.039 0.037 0.020 0.020 0.022 0.081 0.087 0.050 0.048 0.065 0.075 0.066 0.037 0.045 0.045 0.085 0.086 0.045 0.047 0.051 0.090 0.090 0.058 0.060 0.060 0.039 0.040 0.026 0.025 0.026 0.039 0.038 0.021 0.021 0.022 0.071 0.077 0.043 0.047 0.052 0.065 0.066 0.045 0.043 0.044 0.085 0.086 0.045 0.047 0.051 0.082 0.082 0.050 0.050 0.052 0.049 0.050 0.029 0.032 0.029 0.039 0.038 0.021 0.021 0.021 0.079 0.079 0.049 0.050 0.050 0.071 0.069 0.040 0.045 0.045 67 I260 I280 1.98 1.72 1.84 1.56 1.81 1.68 2.04 1.55 1.57 1.52 1.69 1.62 1.53 1.58 1.58 1.59 1.82 1.73 1.94 1.98 1.71 1.60 2.05 1.81 1.56 1.64 1.73 1.52 1.53 1.81 1.58 1.52 1.73 1.63 1.64 1.84 1.58 1.60 DNA (ng/μl) 191 141 153 153 168 155 155 155 159 173 192 211 188 319 180 359 174 279 191 155 152 167 173 162 342 287 352 358 157 168 304 264 352 339 204 169 317 283 UBC 828 Band 1.CoryLK02 2.CoryLK22 3.CoryLK23 4.CoryLK24 5.CoryLK25 6.CoryLK26 7.CoryLK27 8.CoryLK28 9.CoryLK29 10.CoryLK30 11.CoryLK31 12.CoryLK32 13.CoryLK33 14.CoryLK34 15.CoryLK35 16.CoryLK36 17.CoryLK37 18.CoryLK38 19.CoryDT01 20.CoryDT02 21.CoryDT03 22.CoryDT04 23.CoryDT05 24.CoryDT06 25.CoryDT07 26.CoryTN02 27.CoryPG01 28.CoryDP02 29.CoryDP03 30.CoryDP04 31.CoryCC01 32.CoryCC02 33.CoryDN03 34.CoryDN04 35.CoryKT03 36.CoryKT04 37.CoryPK01 38.CoryQN02 UBC 826 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 3.7 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 1 1.8 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1.6 1 1 1 1 0 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 1.5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 0 0 1 1 1.4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 Size (bp) Primer Phụ lục Ma trận nhị phân 88 băng DNA tổng hợp từ 38 MPL nấm C cassiicola sử dụng primer ISSR 0.9 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 1 0 0.85 10 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.8 11 1 1 0 0 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0.75 12 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0.7 13 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0.5 14 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0.4 15 1 1 1 1 1 1 0 0 1 0 0 1 1 1 0 1 0.35 16 0 0 0 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.3 17 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 1 0 1 1 0.2 18 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2.2 19 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1.6 20 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1 21 1 1 1 1 0 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 0.8 22 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.75 23 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0.6 24 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0.23 25 1 1 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 68 UBC 840 UBC 850 Mj3 Band 1.CoryLK02 2.CoryLK22 3.CoryLK23 4.CoryLK24 5.CoryLK25 6.CoryLK26 7.CoryLK27 8.CoryLK28 9.CoryLK29 10.CoryLK30 11.CoryLK31 12.CoryLK32 13.CoryLK33 14.CoryLK34 15.CoryLK35 16.CoryLK36 17.CoryLK37 18.CoryLK38 19.CoryDT01 20.CoryDT02 21.CoryDT03 22.CoryDT04 23.CoryDT05 24.CoryDT06 25.CoryDT07 26.CoryTN02 27.CoryPG01 28.CoryDP02 29.CoryDP03 30.CoryDP04 31.CoryCC01 32.CoryCC02 33.CoryDN03 34.CoryDN04 35.CoryKT03 36.CoryKT04 37.CoryPK01 38.CoryQN02 1.75 26 0 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1.5 27 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1.1 28 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 29 0 1 1 1 1 0 0 1 0 0 1 0 0 0 Size (bp) Primer UBC 835 0.9 30 0 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 0 0 0 0.75 31 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0.7 32 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 0 0.6 33 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 0 0.5 34 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0.35 35 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0.25 36 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.2 37 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0.6 38 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0.3 39 0 1 0 1 1 1 0 0 0 0 0 1 1 0 0 40 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1.75 41 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1.5 42 1 1 1 1 1 1 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1.2 43 0 1 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 44 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0.8 45 1 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1 0 1 1 1 0 0.6 46 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0.5 47 0 1 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.4 48 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0.35 49 0 1 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0.25 50 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 0 2.7 51 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2.1 52 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1.8 53 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1.7 54 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1.5 55 0 1 0 1 0 1 0 0 0 0 1 1 0 1 1 1.45 56 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 69 Mj4 Mj5 37.CoryPK01 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 1 38.CoryQN02 36.CoryKT04 0 30.CoryDP04 0 29.CoryDP03 0 28.CoryDP02 0 27.CoryPG01 0 26.CoryTN02 0 25.CoryDT07 24.CoryDT06 0 23.CoryDT05 0 22.CoryDT04 0 21.CoryDT03 0 20.CoryDT02 0 19.CoryDT01 35.CoryKT03 34.CoryDN04 33.CoryDN03 32.CoryCC02 31.CoryCC01 18.CoryLK38 17.CoryLK37 16.CoryLK36 15.CoryLK35 14.CoryLK34 13.CoryLK33 12.CoryLK32 11.CoryLK31 10.CoryLK30 0 9.CoryLK29 0 8.CoryLK28 0 7.CoryLK27 0 6.CoryLK26 0 5.CoryLK25 0 4.CoryLK24 3.CoryLK23 2.CoryLK22 0 1.CoryLK02 57 58 Band 1.4 1.35 Size (bp) Primer Mj3 (tt) 1 59 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 1 1 1 1 0.75 60 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0.7 61 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0.6 62 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 1 1 0 0 0.4 63 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.3 64 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 65 0 1 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 66 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1.75 67 1 0 1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1.5 68 1 0 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1.4 69 1 0 1 0 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1.35 70 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1.3 71 0 1 0 1 0 1 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 1 72 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 1 1 0 0.75 73 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0.6 74 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.55 75 0 1 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.5 76 0 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0.35 77 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0.25 2.5 78 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 79 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 1.35 80 1 1 1 1 1 1 0 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 1.3 81 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1.2 82 1 1 1 1 1 1 0 0 0 1 0 1 1 1 1 0.9 83 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0.75 84 0 1 1 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 1 1 0 0 0.6 85 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0.5 86 0 1 0 1 0 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 0 0.25 87 1 1 1 1 1 1 0 0 0 1 1 1 1 1 0 0.2 88 1 1 0 1 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 70 71 37.CoryPK01 36.CoryKT04 35.CoryKT03 0.59 0.55 0.52 0.53 0.91 34.CoryDN04 0.86 0.61 0.58 0.55 0.59 0.79 33.CoryDN03 0.96 0.84 0.60 0.60 0.56 0.58 0.83 32.CoryCC02 0.64 0.65 0.62 0.86 0.79 0.79 0.78 0.62 31.CoryCC01 0.66 0.92 0.90 0.89 0.62 0.61 0.57 0.59 0.88 30.CoryDP04 0.55 0.77 0.54 0.53 0.49 0.77 0.79 0.82 0.78 0.51 29.CoryDP03 0.83 0.59 0.89 0.58 0.57 0.54 0.90 0.90 0.90 0.80 0.56 28.CoryDP02 0.89 0.80 0.65 0.80 0.61 0.59 0.59 0.82 0.82 0.84 0.81 0.58 27.CoryPG01 0.75 0.75 0.62 0.61 0.73 0.60 0.63 0.60 0.78 0.73 0.72 0.71 0.58 26.CoryTN02 0.64 0.57 0.63 0.55 0.70 0.70 0.71 0.69 0.74 0.62 0.61 0.60 0.54 0.77 25.CoryDT07 0.50 0.74 0.78 0.74 0.66 0.58 0.69 0.60 0.58 0.50 0.67 0.69 0.71 0.67 0.49 24.CoryDT06 0.93 0.53 0.80 0.81 0.71 0.62 0.61 0.72 0.60 0.61 0.55 0.70 0.66 0.68 0.67 0.51 23.CoryDT05 0.64 0.58 0.81 0.66 0.62 0.56 0.54 0.69 0.66 0.67 0.66 0.76 0.59 0.52 0.54 0.61 0.74 22.CoryDT04 0.94 0.61 0.58 0.78 0.63 0.58 0.53 0.51 0.69 0.63 0.67 0.66 0.76 0.56 0.49 0.51 0.58 0.74 21.CoryDT03 0.66 0.66 0.72 0.72 0.61 0.71 0.81 0.80 0.68 0.63 0.85 0.61 0.60 0.62 0.75 0.71 0.70 0.75 0.59 20.CoryDT02 0.70 0.59 0.62 0.74 0.74 0.54 0.75 0.69 0.69 0.63 0.59 0.67 0.61 0.62 0.51 0.68 0.64 0.66 0.74 0.50 19.CoryDT01 0.84 0.72 0.59 0.62 0.58 0.58 0.54 0.58 0.59 0.60 0.54 0.57 0.64 0.58 0.57 0.54 0.59 0.55 0.57 0.66 0.52 18.CoryLK38 0.92 0.81 0.75 0.66 0.69 0.65 0.65 0.60 0.65 0.67 0.67 0.57 0.60 0.71 0.61 0.59 0.59 0.66 0.61 0.63 0.69 0.58 17.CoryLK37 0.57 0.54 0.54 0.66 0.72 0.69 0.53 0.53 0.78 0.61 0.56 0.65 0.55 0.69 0.74 0.70 0.70 0.70 0.64 0.61 0.60 0.56 0.71 16.CoryLK36 0.70 0.58 0.58 0.63 0.56 0.60 0.63 0.60 0.57 0.61 0.62 0.55 0.56 0.54 0.72 0.64 0.72 0.73 0.65 0.58 0.57 0.56 0.55 0.67 15.CoryLK35 0.96 0.66 0.56 0.56 0.61 0.51 0.58 0.61 0.60 0.58 0.57 0.58 0.53 0.51 0.51 0.68 0.59 0.67 0.67 0.61 0.54 0.53 0.54 0.53 0.63 14.CoryLK34 0.53 0.55 0.48 0.70 0.67 0.62 0.63 0.55 0.58 0.64 0.64 0.51 0.55 0.55 0.59 0.50 0.51 0.63 0.53 0.51 0.51 0.59 0.58 0.56 0.55 0.49 13.CoryLK33 0.59 0.68 0.72 0.74 0.63 0.59 0.65 0.63 0.77 0.77 0.67 0.67 0.68 0.66 0.59 0.56 0.49 0.69 0.63 0.70 0.70 0.66 0.59 0.58 0.57 0.56 0.68 12.CoryLK32 0.70 0.53 0.96 0.98 0.70 0.56 0.56 0.61 0.53 0.58 0.60 0.57 0.55 0.59 0.62 0.53 0.53 0.51 0.70 0.62 0.70 0.71 0.62 0.56 0.55 0.54 0.53 0.64 11.CoryLK31 0.91 0.76 0.49 0.91 0.89 0.74 0.54 0.54 0.60 0.52 0.64 0.64 0.59 0.59 0.58 0.61 0.51 0.49 0.50 0.71 0.58 0.70 0.70 0.64 0.52 0.51 0.53 0.51 0.66 10.CoryLK30 0.85 0.79 0.91 0.56 0.78 0.81 0.81 0.63 0.60 0.65 0.63 0.74 0.74 0.64 0.64 0.68 0.63 0.56 0.54 0.49 0.74 0.63 0.74 0.75 0.70 0.57 0.56 0.55 0.56 0.73 9.CoryLK29 0.94 0.78 0.71 0.95 0.61 0.70 0.74 0.73 0.65 0.61 0.67 0.65 0.79 0.77 0.66 0.66 0.67 0.65 0.58 0.55 0.50 0.71 0.65 0.71 0.72 0.67 0.58 0.57 0.56 0.57 0.70 8.CoryLK28 0.58 0.57 0.52 0.58 0.59 0.69 0.56 0.61 0.57 0.70 0.74 0.72 0.73 0.56 0.59 0.58 0.58 0.54 0.61 0.62 0.69 0.70 0.54 0.70 0.56 0.54 0.51 0.68 0.64 0.63 0.71 0.53 7.CoryLK27 0.56 0.76 0.83 0.93 0.91 0.77 0.47 0.89 0.91 0.72 0.53 0.53 0.56 0.53 0.63 0.63 0.55 0.55 0.59 0.57 0.50 0.51 0.49 0.72 0.59 0.72 0.73 0.65 0.53 0.52 0.51 0.50 0.67 6.CoryLK26 0.94 0.54 0.73 0.81 0.92 0.94 0.72 0.51 0.92 0.94 0.67 0.57 0.57 0.59 0.51 0.56 0.59 0.58 0.56 0.58 0.61 0.51 0.51 0.49 0.69 0.60 0.70 0.70 0.61 0.54 0.53 0.52 0.51 0.63 5.CoryLK25 0.60 0.68 0.69 0.83 0.78 0.65 0.61 0.83 0.63 0.59 0.64 0.73 0.63 0.60 0.57 0.70 0.78 0.76 0.59 0.59 0.66 0.59 0.60 0.60 0.58 0.65 0.70 0.66 0.64 0.67 0.62 0.59 0.58 0.59 0.67 4.CoryLK24 0.92 0.64 0.72 0.65 0.88 0.82 0.69 0.65 0.88 0.58 0.63 0.67 0.77 0.62 0.59 0.59 0.66 0.78 0.75 0.58 0.58 0.68 0.58 0.58 0.59 0.57 0.69 0.69 0.65 0.66 0.68 0.61 0.60 0.59 0.58 0.71 3.CoryLK23 0.93 0.87 0.61 0.70 0.65 0.86 0.80 0.67 0.63 0.83 0.58 0.61 0.65 0.72 0.59 0.55 0.55 0.66 0.75 0.72 0.57 0.57 0.65 0.58 0.58 0.55 0.53 0.69 0.66 0.65 0.66 0.68 0.58 0.57 0.56 0.58 0.71 2.CoryLK22 1.CoryLK02 2.CoryLK22 3.CoryLK23 4.CoryLK24 5.CoryLK25 6.CoryLK26 7.CoryLK27 8.CoryLK28 9.CoryLK29 10.CoryLK30 11.CoryLK31 12.CoryLK32 13.CoryLK33 14.CoryLK34 15.CoryLK35 16.CoryLK36 17.CoryLK37 18.CoryLK38 19.CoryDT01 20.CoryDT02 21.CoryDT03 22.CoryDT04 23.CoryDT05 24.CoryDT06 25.CoryDT07 26.CoryTN02 27.CoryPG01 28.CoryDP02 29.CoryDP03 30.CoryDP04 31.CoryCC01 32.CoryCC02 33.CoryDN03 34.CoryDN04 35.CoryKT03 36.CoryKT04 37.CoryPK01 38.CoryQN02 1.CoryLK02 Phụ lục Hệ số tương đồng Nei Li’s 38 mẫu phân lập thiết lập từ ma trận nhị phân 0.95 0.92 0.97 0.83 0.80 0.82 0.56 0.57 0.56 0.52 Phụ lục Kết phân tích biến lượng số bệnh (%) cao su, đu đủ bí đao (thí nghiệm chủng bệnh cắt rời điều kiện phòng thí nghiệm) Kết phân tích biến lượng sau ngày chủng bệnh MPL CoryLK02                                              The ANOVA Procedure                                         Class Level Information               Class         Levels    Values             NT                 9    Bidao Dudu PB255 PB260 RRIV1 RRIV124 RRIV3 RRIV4 RRIV5                                       Number of observations    27                                           The ANOVA Procedure  Dependent Variable: CSB (%)                                                     Sum of           Source                      DF         Squares     Mean Square    F Value    Pr > F           Model                        8     10904.74667      1363.09333     135.77     F           NT                           8     10904.74667      1363.09333     135.77     F         Model                        8     17990.45185      2248.80648      25.32     F         NT                           8     17990.45185      2248.80648      25.32     F           Model                       12     8967.997778      747.333148      34.69     F           NHAC                         4     1045.069778      261.267444      12.13     F           Model                       12     5294.591556      441.215963      35.16     F           NHAC                         4       47.159111       11.789778       0.94    0.4537           NT                           8     5247.432444      655.929056      52.27