Khảo sát đa dạng di truyền của 16 mẫu/giống nghệ đen (Curcuma zedoaria Rosc.) bằng chỉ thị phân tử ISSR

Đề tài “Khảo sát đa dạng di truyền của 16 mẫu giống nghệ đen (Curcuma zedoaria Rosc.) bằng chỉ thị phân tử ISSR” được thực hiện nhằm đánh giá sự đa dạng và xác định mối quan hệ di truyền của 16 mẫu/giống nghệ đen dựa trên 7 chỉ thị ISSR.

AGU International Journal of Sciences – 2020, Vol 24 (1), 76 – 85 KHẢO SÁT ĐA DẠNG DI TRUYỀN CỦA 16 MẪU/GIỐNG NGHỆ ĐEN (CURCUMA ZEDOARIA ROSC.) BẰNG CHỈ THỊ PHÂN TỬ ISSR Huỳnh Trường Huê1 Trường Đại học An Giang, ĐHQG-HCM Thông tin chung: Ngày nhận bài: 01/08/2018 Ngày nhận kết bình duyệt: 01/05/2019 Ngày chấp nhận đăng: 02/2020 Title: A survey of genetic diversity of 16 Zedoary accessions/varieties (Curcuma zedoaria Rosc.) based on the Inter Simple Sequence Repeat (ISSR) markers Keywords: Curcuma zedoaria Rosc., genetic diversity, ISSR, zedoary Từ khóa: Curcuma zedoaria Rosc., đa dạng di truyền, dấu phân tử ISSR, nghệ đen ABSTRACT This study aims at evaluating the genetic diversity and determining the relationship of 16 zedoary accessions/varieties (Curcuma zedoaria Rosc.) by ISSR markers Analytical result shows a relatively high level of polymorphism, a ratio of 80,1%, 47 out of total 56 bands were polymorphic, with size from 100 - 1.500 bp The dengrogram analysis shows the genetic relationships and diversity among varieties Hereditary similarly coefficent of 16 accessions/varieties ranges from 0,63 to and divides into four groups on the dengrogram: The first group consists of accessions/varieties with the similarly coefficent ranging from 0,76 to 0,95; The second group consists of accessions/varieties with the similarly coefficent is 0,89; The third group consists of accessions/varieties with the similarly coefficent is 0,77; The four group consists of accessions/varieties with the similarly coefficent ranging 0,86-1,00 The results shows that these 16 zedoary accessions/varieties have the difference of genetic diversity and high levels of diversity The overall results show that there are genetic differences between 16 samples / varieties and they have a relatively high genetic diversity TÓM TẮT Đề tài “Khảo sát đa dạng di truyền 16 mẫu giống nghệ đen (Curcuma zedoaria Rosc.) thị phân tử ISSR” thực nhằm đánh giá đa dạng xác định mối quan hệ di truyền 16 mẫu/giống nghệ đen dựa thị ISSR Kết phân tích đoạn mồi ISSR cho tỷ lệ đa hình 80,1%, tổng số 56 băng khuếch đại có 47 băng đa hình, với kích thước từ 100-1.500 bp Kết sơ đồ hình nhánh thể mối quan hệ tính đa dạng di truyền giống Mức độ quan hệ di truyền giống trục hệ số đồng dạng di truyền nằm khoảng từ 0,63 đến chia 16 mẫu/giống thành nhóm: Nhóm thứ có mẫu/giống với mức tương đồng di truyền nằm khoảng 0,76-0,95; Nhóm thứ hai có mẫu giống với mức tương đồng khoảng 0,89; Nhóm thứ ba có mẫu/giống với mức tương đồng 0,77; Nhóm thứ tư có mẫu/giống với mức tương đồng di truyền nằm khoảng 0,86-1,00 76 AGU International Journal of Sciences – 2020, Vol 24 (1), 76 – 85 Các kết cho thấy có khác biệt mặt di truyền 16 mẫu/giống thu thập chúng có đa dạng di truyền cao GIỚI THIỆU ISSR (Nguyễn Lộc Hiền cs., 2013) Bùi Thị Cẩm Hường cs (2016) nghiên cứu đánh giá đa dạng di truyền 20 giống nghệ miền Nam Việt Nam dựa thị phân tử RAPD ISSR Nghệ đen (Curcuma zedoaria Rosc.) lồi thuộc chi Nghệ (Curcuma), họ Gừng (Zingiberaceae) có giá trị dược liệu cao Curcumin secquiterpene hoạt chất sinh học có nghệ đen, chúng có khả kháng nấm, kháng khuẩn, kháng viêm chất chống oxy hố mạnh, chống ung thư (Đỗ Tất Lợi (1995); Jang cs (1997); Phan Minh Giang cs (1998); Wilson cs (2005); Lã Đình Mỡi cs (2005); Trần Thị Việt Hoa cs (2007); Nguyễn Thị Phúc Lộc (2010); Banisalam (2011); Huỳnh Xuân Đào (2011); Võ Châu Tuấn (2014)) Vì vậy, tiềm sử dụng nghệ đen dược liệu lớn loại trồng nhà nghiên cứu quan tâm không giá trị sử dụng mà tính đa dạng di truyền chúng Để góp phần xây dựng sở liệu phục vụ công tác bảo tồn nguồn gen sở cho việc chọn lọc, phát triển nguồn dược liệu nhiều tiềm này, đề tài: “Khảo sát tính đa dạng di truyền 16 mẫu/giống nghệ đen (Curcuma zedoaria Rosc.) thị phân tử ISSR” thực nhằm đánh giá tính đa dạng di truyền 16 mẫu/giống nghệ đen mức độ phân tử DNA xác định mối quan hệ di truyền giống nghệ đen nhằm phục vụ cho công tác bảo tồn nguồn gen chọn giống PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu Bên cạnh nghiên cứu thành phần tinh dầu hay hợp chất sinh học có cơng dụng dược liệu củ nghệ đen, có nghiên cứu đánh giá mức độ đa dạng di truyền cá thể nghệ đen trồng vùng địa lý khác Bangladesh dấu phân tử RAPD (Islam cs., 2005 & 2007) Đánh giá mức độ đa dạng di truyền lồi chi nghệ có nguồn gốc tỉnh Bình Dương dấu phân tử Mẫu củ 16 mẫu/giống nghệ đen thu thập từ địa điểm khác như: An Giang (Tịnh Biên, Tri Tôn, Long Xuyên), Cần Thơ, Đà Lạt, Hà Nội (Trung Tâm Tài Nguyên Thực Vật) Campuchia Các mẫu/giống nghệ đen trồng để lưu giữ giống liếp riêng biệt chăm sóc theo qui trình trồng nghệ Các mẫu/giống trình bày Bảng Bảng Kí hiệu, địa điểm màu thịt củ giống nghệ đen thu thập STT Kí hiệu Nguồn mẫu Màu thịt củ CZ-5739 Trung tâm Tài nguyên thực vật – Hà Nội Vàng nhạt viền xanh dương CZ-1150 Trung tâm Tài nguyên thực vật – Hà Nội Vàng đậm viền xanh dương CZ-1152 Trung tâm Tài nguyên thực vật – Hà Nội Vàng nhạt viền xanh dương CZ-11161 Trung tâm Tài nguyên thực vật – Hà Nội Vàng nhạt viền xanh dương CZ-TB1 Núi Cấm (Tịnh Biên) – An Giang Vàng đậm viền xanh dương CZ-LX Long Xuyên – An Giang Vàng đậm viền xanh dương 77 AGU International Journal of Sciences – 2020, Vol 24 (1), 76 – 85 STT Kí hiệu Nguồn mẫu Màu thịt củ CZ-11154 Trung tâm Tài nguyên thực vật – Hà Nội Vàng nhạt viền xanh dương CZ-HN1 Hà Nội CZ-TT1 Tri Tôn- An Giang Vàng nhạt viền xanh dương 10 CZ-ĐL Đà Lạt Vàng nhạt viền xanh dương 11 CZ-TB2 Tịnh Biên- An Giang Vàng nhạt viền xanh dương 12 CZ-FGB436 Trung tâm Tài nguyên thực vật – Hà Nội 13 CZ-CT Cần Thơ Vàng kem viền tím 14 CZ-TT2 Tri Tơn – An Giang Vàng kem viền tím 15 CZ-HN2 Hà Nội Vàng kem viền tím 16 CZ-CPC Campuchia Vàng kem viền tím màu vàng đậm viền xanh dương Vàng nhạt viền xanh dương 2.2 Thu xử lý mẫu Thu mẫu non giai đoạn lụa, cho vào túi nylon ghi kí hiệu mẫu riêng biệt Mẫu thu cần ly trích trữ tủ đông -20 0C Tránh làm xây xát mẫu, mẫu làm khử trùng cồn 700 trước ly trích DNA 2.3 Ly trích DNA DNA ly trích tinh từ mơ theo phương pháp CTAB (Cetyltrimethyl Amonium Bromide) Doyle Doyle (1990) Khi xây dựng qui trình ly trích DNA có kết hợp chỉnh sửa nồng độ hóa chất cho phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm 2.4 Phản ứng khuếch đại DNA (PCR) Phản ứng PCR thực 16 mẫu/giống nghệ đen với thị phân tử ISSR (Bảng 2) sản xuất công ty Sinh hóa Phù Sa (Vĩnh Long, Việt Nam) Hỗn hợp phản ứng PCR thực với thể tích 10 μl bao gồm nước cất vô trùng, PCR buffer 1X, dNTPs mM, 2,5 mM primer, Taq polymerase U/μl DNA 40 ng/μl Phản ứng ISSR-PCR thực qua 40 chu kỳ gia nhiệt máy PCR GeneAmp PCR system 2700 sau: phút 94 0C, 40 chu kỳ gồm 30 giây 94 0C, 30 giây 45 0C 40 giây 72 0C, cuối phút 72 0C Sản phẩm PCR trữ 0C Bảng Trình tự đoạn mồi ISSR sử dụng Tên đoạn mồi Trình tự ISSR BB3 5’ – CAGCAGCAGCAGCAG – 3’ ISSR BB5 5’ – GTCCTCTCTCTCTCTCTCT – 3’ ISSR BB7 5’ – GGGCGAGAGAGAGAGAG – 3’ ISSR BB9 5’ – GTGGTGGTGGTGRC – 3’ ISSR BB10 5’ – CACCACCACCACRC – 3’ ISSR P14 5’ – AGCAGCAGCAGCGT – 3’ ISSR P15 5’ – TCCTCCTCCTCCTCC – 3’ 78 AGU International Journal of Sciences – 2020, Vol 24 (1), 76 – 85 Sản phẩm PCR điện di gel agarose 1,8% (w/v) dung dịch TAE 1X máy điện di OWL A2 Gel nhuộm chụp ảnh đèn UV Kết khuếch đại đoạn DNA ghi nhận phân tích (Unweighed Pair-Group Averages) (Rohlf, 1997) Method, Arithmetic KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Kết phân tích cho thấy đoạn mồi ISSR thực phản ứng PCR cho băng khuếch đại với DNA 16 mẫu/giống nghệ đen cho băng đa hình (Bảng 3) Tởng cộng có 56 băng hình khuếch đại, với giá trị trung bình ± 2,16 băng/đoạn mồi, đó có 47 băng đa hình chiếm tỷ lệ 80,09 % Số lượng băng đa hình dao động từ băng (đoạn mồi ISSR BB5) đến 10 băng (ISSR BB7) trung bình 6,71 ± 3,09 băng đa hình đoạn mồi 2.5 Phân tích số liệu Tất băng xuất phổ điện di mã hóa thành số theo dạng nhị phân (1 0) ghi nhận tương ứng với băng khuếch đại, tương ứng với băng không khuếch đại Số liệu chuyển hóa lưu trữ phần mềm Excel phân tích xử lý số liệu chương trình NTSys-pc version 2.11a (Numerical Taxonomy System) theo phương pháp UPGMA Bảng Kết khuếch đại DNA 16 mẫu giống nghệ đen với thị ISSR Trọng lượng phân tử (bp) Số băng hình Số băng đa hình Tỷ lệ đa hình (%) ISSR BB3 100 – 1.500 7 100 ISSR BB5 300 – 1.000 50 ISSR BB7 300 – 1.500 10 10 100 ISSR BB9 150 – 1.500 10 90 ISSR BB10 200 – 1.500 9 100 ISSR P14 200 – 1.500 77,78 ISSR P15 100 – 1.000 42,86 Tổng 56 47 Trung bình ± 2,16 6,71 ± 3,09 Tên mồi 79 80,09 AGU International Journal of Sciences – 2020, Vol 24 (1), 76 – 85 M 10 11 12 13 14 15 16 12000 bp 2000 bp 1000 bp Hình Phổ điện di sản phẩm PCR với đoạn mồi ISSR BB7 M: 1kb plus ladder (Invitrogen, USA), 1-16 tương ứng với mẫu/giống nghệ Qua kết phân tích cho thấy đa hình mẫu phân tích cao, tỷ lệ băng đa hình 80,09 % Kết cao kết Singh cs (2012), Taheri cs (2012), Verma cs (2015) sử dụng dấu phân tử ISSR để phân tích đa dạng di truyền giống nghệ, tỷ lệ băng đa hình 78,79%, 77 %, 79,18 % Tuy nhiên, kết thấp kết nghiên cứu Das cs (2011) 98,55%; Saha cs (2016) 86,29% Nguyễn Lộc Hiền cs (2013) 97,37% Bùi Thị Cẩm Hường cs (2016) 97,1% Qua cho thấy, phương pháp đạt hiệu cao việc phân tích mối quan hệ, đánh giá tính đa dạng di truyển mẫu/giống nghệ đen đồng mặt di truyền 37 %, phân bốn nhóm sau: Nhóm I gồm có mẫu/giống số 1, 3, 4, 7, 9, 10, 11, 12 chúng có tương đồng di truyền khoảng từ 76 đến 95% Trong đó, mẫu/giống số (Trung tâm Tài nguyên thực vật - Hà Nội), mẫu/giống số (Tri Tôn-An Giang) tách nhánh riêng biệt có mức tương đồng với mẫu/giống lại từ 76 đến 85% Mẫu có mức tương đồng 89%, chúng thu mẫu từ Trung tâm Tài nguyên thực vật Ba mẫu giống thu từ nơi mẫu 10 (Tri Tôn-An Giang), 11 (Tịnh Biên-An Giang) 12 (Trung tâm Tài nguyên thực vật –Hà Nội) có độ tương đồng 91 %, mẫu 11 12 khác biệt mặt phân tử mức % Chúng có đặc điểm hình thái củ nhánh dài (10,1-12,6 cm), mắt thưa, với độ rộng củ nhánh từ 2,1-2,9 cm Củ có kích thước lớn với độ dài từ 8,7-11,7 cm độ rộng từ 4,5-5,3 cm Màu sắc thịt củ vàng nhạt tái, viền màu xanh dương đậm pha lẫn vào thịt củ, mùi nghệ Cây cao từ 159-162 cm Thân tím có vệt tím gân Kết phân tích Hình cho thấy, 16 mẫu/giống nghệ đen có đa dạng mặt di truyền mức độ phân tử, mẫu/giống có phân nhóm theo mức độ xa gần mặt di truyền Sự khác mức độ phân tử giống biểu hệ số đồng dạng di truyền tương quan xa gần chúng (Bảng 3) Trên giản đồ phân tích đa dạng di truyền 16 mẫu/giống nghệ đen thể qua hệ số tương đồng di truyền khoảng từ 0,63 đến 1; hay nói cách khác chúng có khơng tương Nhóm II có mẫu/giống số với hệ số tương đồng 0,89 Giữa chúng có sai khác mặt 80 AGU International Journal of Sciences – 2020, Vol 24 (1), 76 – 85 phân tử DNA với khoảng cách di truyền 11% Đây mẫu giống thu thập vùng Núi Cấm - An Giang (5) Long Xuyên - An Giang (6) Về đặc điểm hình thái, chúng có màu thịt củ màu vàng đậm viền xanh dương, mùi nghệ nồng, kích thước củ ngắn (7,6 cm) nhỏ với độ rộng 4,5 cm, độ dài củ nhánh ngắn (9-9,3 cm) với đường kính 2,8 cm Cây thấp với chiều cao 123 cm Thân vệt gân có màu tím đậm Qua kết phân nhóm trục hệ số đồng dạng di truyền cho thấy phương pháp tỏ có hiệu việc đánh giá tính đa dạng mẫu/giống khảo sát Các mẫu/giống nghệ đen nghiên cứu biểu đa dạng nhóm mẫu/giống thu thập cao Chúng có phân nhóm theo phân vùng địa lý phân nhóm đa dạng mẫu/giống theo đặc điểm hình thái có tương đồng với (Hình 2, Hình 3) Sự khác mức độ phân tử 16 mẫu giống biểu hệ số đồng dạng di truyền (Bảng 4), qua xác định mối tương quan di truyền hay mức độ tương đồng mẫu giống với nhau, từ xác định khác biệt cấu trúc di truyền cá thể nhóm mẫu phân tích Kết phù hợp với kết nghiên cứu Islam cs (2005 & 2007), đánh giá mức độ đa dạng di truyền cá thể nghệ đen vùng địa lý khác Bangladesh dấu phân tử RAPD Kết cho thấy, cá thể quần thể nghệ đen có đa dạng di truyền cao, mức độ đồng dạng di truyền chúng từ 0,73 đến 97% Taheri cs (2012), xác định đa dạng khác biệt mặt di truyền cá thể lồi mẫu/giống Nghệ từ (Curcuma alismatifolia) trồng Malaysia thị phân tử ISSR, chúng có hệ số đồng dạng di truyền dao động từ 0,4 – 0,58 Verma cs (2015) sử dụng 13 dấu phân tử ISSR đánh giá tính đa dạng xác định mối quan hệ di tuyền cá thể tập đoàn 29 mẫu/giống nghệ vàng (Curcuma longa L.) địa Ấn Độ, với khoảng cách di truyền mẫu/giống từ 0,0 đến 0,6 Nhóm III có mẫu/giống số 8, hệ số tương đồng 0,77 Giữa chúng có sai khác mặt phân tử DNA với khoảng cách di truyền 23% Hai mẫu giống thu thập từ Trung tâm Tài nguyên thực vật - Hà Nội (2) Hà Nội (8) Nhóm có màu thịt củ màu vàng đậm viền xanh dương, mùi nghệ nồng, kích thước củ ngắn (7,3 cm) nhỏ với độ rộng 4,5 cm, độ dài củ nhánh ngắn (8,9-10 cm) có đường kính nhỏ (2,4 cm) Cây có chiều cao từ 132-151 cm Thân vệt gân có màu tím đậm Nhóm IV gồm có mẫu/giống số 13, 14, 15, 16 Giữa chúng có tương đồng di truyền khoảng từ 0,86 đến Trong đó, mẫu 13 14 có độ tương đồng 100 % Mẫu 15 16 có mức tương đồng với mẫu/giống 13 14 86 % 93 % Chúng thu thập từ nhiều vùng khác Cần Thơ (13), Tri TônAn Giang (14), Hà Nội (15) Campuchia (16) Chúng có đặc điểm hình thái khác biệt với ba nhóm Về màu sắc củ có màu vàng kem viền tím Củ có kích thước to nhóm, với độ dài củ từ 10,3- 11,5 cm độ rộng củ từ 6,1- 6,9 cm, đường kính củ nhánh từ 3,2- 3,6 cm chiều dài củ nhánh lại ngắn (8,3- 9,2 cm) Vỏ củ màu nâu mắt ngắn Cây cao nhất, với chiều cao từ 183-190 cm Thân vệt gân có màu tím 81 AGU International Journal of Sciences – 2020, Vol 24 (1), 76 – 85 Hệ số tương đồng Hình Mối quan hệ di truyền 16 mẫu/giống nghệ đen Dùng thị phân tử ISSR phân biệt sai khác cá thể mẫu/giống mức độ phân tử Dấu phân tử ISSR sử dụng hiệu việc đánh giá tính đa dạng di truyển loài chi nghệ (Curcuma), thực Das cs (2011), Singh cs (2012), Taheri cs (2012), Nguyễn Lộc Hiền cs (2013), Mohanty cs (2014), Verma cs (2015), Bùi Thị Cẩm Hường cs (2016), Saha cs (2016) truyền phát cấu trúc di truyền khác biệt cá thể quần thể nghệ đen (Curcuma zedoaria Rosc.) dấu phân tử ISSR Cho nên, tính đa dạng di truyền quần thể nghệ đen thu thập từ địa điểm khác như: An Giang, Cần Thơ, Đà Lạt, Hà Nội Campuchia, thực nghiên cứu sử dụng để phục vụ công tác quản lý, bảo tồn nguồn gen phát triển nguồn giống phục vụ cho sản xuất Đây nghiên cứu thực nhóm nghệ đen nhằm đánh giá tính đa dạng di 82 AGU International Journal of Sciences – 2020, Vol 24 (1), 76 – 85 Bảng Hệ số đồng dạng di truyền giữa 16 mẫu/giống Nghệ đen Mẫu/giống 1-Nhóm I Mẫu/giống 5-Nhóm II 83 AGU International Journal of Sciences – 2020, Vol 24 (1), 76 – 85 Mẫu/giống 2-Nhóm III Mẫu/giống 13-Nhóm IV Hình Dạng củ màu sắc củ mẫu/giống nhóm KẾT LUẬN VÀ KHUYẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Kết phân tích đoạn mồi ISSR cho tỷ lệ đa hình tương đối cao Trong tởng 56 băng khuếch đại có 47 băng đa hình, chiếm tỷ lệ 80,1 %, với kích thước từ 100-1500 bp ưu để xây dựng phát triển nguồn giống dược liệu Cần giải mã trình tự để xác định cấu trúc chuỗi trình tự đặc trưng cho lồi nghệ đen đặc hữu Việt Nam Kết phân tích phần mềm NTSYSpc 2.11a theo phương pháp UPGMA cho thấy mức độ tương đồng 16 mẫu/giống nghệ đen dựa dấu phân tử ISSR nằm khoảng 0,631,00 chia 16 mẫu/giống thành nhóm: Nhóm thứ có mức tương đồng di truyền nằm khoảng 76- 95%; Nhóm thứ hai có mức tương đồng khoảng 89%; Nhóm thứ ba có mức tương đồng khoảng 77%; Nhóm thứ tư có mức tương đồng di truyền nằm khoảng 86-100% TÀI LIỆU THAM KHẢO Banisalam B., Sani W., Philip K., Imdadul H & Khorasani A (2011) Comparison between in vitro and in vivo antibacterial activity of Curcuma zedoaria from Malaysia African Journal of Biotechnology, 10 (55), 1684–5315 Bùi Thị Cẩm Hường., Lưu Thái Danh., Lê Vĩnh Thúc., Huỳnh Kỳ & Nguyễn Lộc Hiền (2016) Khảo sát đa dạng di truyền số giống nghệ miền nam việt nam dựa thị phân tử RAPD ISSR Tạp chı́ Khoa hoc ̣ Trường Đại học Cần Thơ, 3, 11-19 Các kết cho thấy 16 mẫu/giống nghệ đen thu thập An Giang, Cần Thơ, Đà Lạt, Hà Nội Campuchia, qua phân tích dấu phân tử ISSR chúng có khác biệt mặt di truyền thể đa dạng di truyền cao Công ty TNHH MTV Sinh Hóa Phù Sa (PHUSA Biochem) Lơ E4, KCN Bình Minh, TX Bình Minh, Vĩnh Long 4.2 Khuyến nghị Das A., Kesari V., Satyanarayana V.M., Parida A & Rangan L (2011) Genetic relationship of Curcuma species from Northeast India using PCR-based markers Mol Biotechnol, 49(1), 65–76 Trong phân tích di truyền dựa thị phân tử, cần sử dụng thêm đoạn mồi ISSR khác để làm rõ cấu trúc quần thể Cần khảo sát thêm đặc tính sinh lý sinh hố có mẫu nhằm lựa chọn giống tối 84 AGU International Journal of Sciences – 2020, Vol 24 (1), 76 – 85 Đỗ Tất Lợi (1995) Những thuốc vị thuốc Việt Nam Hà Nội: Nhà xuất Y học Phan Minh Giang., Văn Ngọc Hướng., & Phan Tống Sơn (1998) Sesquiterpenoid từ thân rễ nghệ đen Curcuma Zedoaria Berg Roscoe Việt Nam Tạp chí hố học, Số 4, 70-73 Doyle J.J & Doyle J.L (1990) Isolation of plant DNA from fresh tissue Focus, 12, 13-15 Rohlf F.J (1997) NTSYS-pc: Numerical Taxonomy and Multivariate Analysis System version 2.11a Exeter Software Setauket, New York Huỳnh Xuân Đào (2011) Nghiên cứu thành phần cấu tạo số hợp chất củ nghệ đen huyện Vĩnh Thạnh, tỉnh Bình Định (Luận văn thạc sĩ không xuất bản) Trường Đại học Đà Nẵng, Đà Nẵng, Việt Nam Saha, K., Sinha, R.K., Basak, S and Sinha, S (2016) ISSR fingerprinting to ascertain the genetic relationship of Curcuma sp of Tripura American Journal of Plant Sciences, 7, 259266 Islam M.A., Kloppstech K & Esch E (2005) Population genetic diversity of Curcuma zedoaria (Christm.) Roscoe – a conservation prioritised medicinal plant in Bangladesh Conservation Genetics, 6, 1027–1033 Singh, S., Panda, M.K & Nayak, S (2012) Evaluation of genetic diversity in turmeric (Curcuma longa L.) using RAPD and ISSR markers Industrial Crops and Products, 37(1), 284–291 Islam M.A., Meister A., Schubert V., Kloppstech K & Esch E (2007) Genetic diversity and cytogenetic analyses in Curcuma zedoaria (Christm.) Roscoe from Bangladesh Genetic Resources and Crop Evolution, 5, 149–156 Taheri S., Abdullah1 T L., Abdullah N A P & Ahmad Z (2012) Genetic relationships among five varieties of Curcuma alismatifolia (Zingiberaceae) based on ISSR markers Genetics and Molecular Research, 11 (3), 3069-3076 Jang M.K., Sohn D.H & Ryu J.H (1997) A curcuminoid and two sesquiterpenoids from Curcuma zedoaria as inhibitors of nitric oxide synthesis in activated macrophages Arch Pharm Res., 27, 1220-1225 Trần Thị Việt Hoa, Trần Thị Phương Thảo & Vũ Thị Thanh Tâm (2007) Thành phần hóa học tính kháng oxy hóa nghệ đen Curcuma zedoaria Berg trồng việt nam Tạp chí phát triển KH&CN Tập 10, Số 04 Lã Đình Mỡi., Trần Minh Hợi., Dương Đức Huyến., Trần Huy Thái., & Ninh Khắc Bản (2005) Tài nguyên thực vật Việt Nam – Những chứa hợp chất có hoạt tính sinh học, 1, Hà Nội: Nhà xuất Nông Nghiệp Mohanty S., Panda M K., Acharya L & Nayak S (2014) Genetic diversity and gene differentiation among ten species of Zingiberaceae from Eastern India Biotech, 4, 383–389 Verma S., Singh S., Sharma S., Tewari S K., Roy R K., Goel A K… (2015) Essessment of genetic diversity in indigenous turmeric (Curcuma longa) germplasm from India using molecular markers Physiol Mol Biol Plants 21(2), 233–242 Nguyễn Lộc Hiền., Tô Thị Nhựt., Huỳnh Kỳ., & Huỳnh Thanh Tùng 2013 Sự đa dạng di truyền quần thể nghệ (Curcuma sp.) tỉnh Bình Dương Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Phần B: Nông nghiệp, Thủy sản Công nghệ Sinh học, 29, 44-51 Võ Châu Tuấn (2014) Nghiên cứu nuôi cấy tế bào nghệ đen (Curcuma zedoaria Roscoe) khảo sát khả tích lũy số hợp chất có hoạt tính sinh học chúng (Luận án tiến sĩ không xuất bản) Trường Đại học Huế, Huế, Việt Nam Nguyễn Thị Phúc Lộc (2010) Tối ưu hóa điều kiện ni cấy đánh giá khả kháng khuẩn tinh dầu tế bào nghệ đen nuôi cấy hệ lên men 10 L (Đồ án tốt nghiệp không xuất bản) Trường Đại học Huế, Huế, Việt Nam Wilson B., Abraham G., Manju V.S., Mathew M., Vimala B., Sundaresan S (2005) Antimicrobial activity of Curcuma zedoaria and Curcuma malabarica tubers Journal of Ethnopharmacology, 99, 147–151 85 ... 16 mẫu/giống nghệ đen (Curcuma zedoaria Rosc.) thị phân tử ISSR thực nhằm đánh giá tính đa dạng di truyền 16 mẫu/giống nghệ đen mức độ phân tử DNA xác định mối quan hệ di truyền giống nghệ đen. .. hệ di truyền 16 mẫu/giống nghệ đen Dùng thị phân tử ISSR phân biệt sai khác cá thể mẫu/giống mức độ phân tử Dấu phân tử ISSR sử dụng hiệu việc đánh giá tính đa dạng di truyển lồi chi nghệ (Curcuma) ,... Bùi Thị Cẩm Hường cs (2 016) , Saha cs (2 016) truyền phát cấu trúc di truyền khác biệt cá thể quần thể nghệ đen (Curcuma zedoaria Rosc.) dấu phân tử ISSR Cho nên, tính đa dạng di truyền quần thể nghệ