Nghiên cứu phân lập và xác định cấu trúc hợp chất steroid từ dịch chiết ethyl acetate cây thạch vĩ họ Dương xỉ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƯƠNG KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN PHAN THÚY HẰNG NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC HỢP CHẤT STEROID TỪ DỊCH CHIẾT ETHYL ACETATE CÂY THẠCH VĨ (Pyrrhosia lingua (Thunb.)Farwell) HỌ DƯƠNG XỈ (Polypodiaceae) KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: Sư phạm Hóa học Phú Thọ, 2017 TRƯỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƯƠNG KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN PHAN THÚY HẰNG NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC HỢP CHẤT STEROID TỪ DỊCH CHIẾT ETHYL ACETATE CÂY THẠCH VĨ (Pyrrhosia lingua (Thunb.)Farwell) HỌ DƯƠNG XỈ (Polypodiaceae) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: Sư phạm Hóa học NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS Triệu Quý Hùng Trường Đại học Hùng Vương Phú Thọ, 2017 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp này, em nhận hướng dẫn trực tiếp TS Triệu Quý Hùng – giảng viên chuyên ngành Hóa học Hữu cơ, giúp đỡ tận tình thầy giáo mơn Hóa học - Khoa Khoa học Tự nhiên - Trường Đại học Hùng Vương Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc em xin chân thành cảm ơn thầy hướng dẫn khoa học TS Triệu Quý Hùng hướng nghiên cứu tận tình hướng dẫn em suốt trình xây dựng, thực hồn thiện khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn quý thầy cô mơn Hóa học, thầy Khoa Khoa học Tự nhiên Trường Đại học Hùng Vương tận tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi thời gian tài liệu có liên quan suốt q trình nghiên cứu giúp em hồn thành khóa luận nhanh sớm Nhân dịp em xin bày tỏ cảm ơn sâu sắc đến Ban Lãnh đạo Trường Đại học Hùng Vương tạo cho em môi trường học tập khoa học, nghiêm túc Cuối em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, người thân bạn sinh viên lớp K11 ĐHSP Hóa học - Trường Đại học Hùng Vương hỗ trợ, động viên em suốt trình học tập thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn tất giúp đỡ quý báu này! Phú Thọ, ngày 12 tháng 05 năm 2017 Sinh viên Phan Thúy Hằng - i- MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC HÌNH iv DANH MỤC CÁC BẢNG vi MỞ ĐẦU 1 Lý lựa chọn đề tài Mục tiêu đề tài 3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chi Pyrrhosia 1.2 Đặc điểm thực vật loài Thạch vĩ 1.3 Các nghiên cứu hóa thực vật chi Pyrrhosia 1.4 Sơ lược lớp chất steroid 10 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 2.1 Đối tượng nghiên cứu 13 2.2 Nguyên vật liệu thiết bị 13 2.2.1 Nguyên vật liệu 13 2.2.2 Thiết bị nghiên cứu 14 2.3 Phương pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Phương pháp ngâm chiết 17 2.3.2 Phương pháp sắc ký 18 2.3.2.1 Phương pháp sắc ký lớp mỏng 18 2.3.2.2 Phương pháp sắc ký cột 20 2.3.3 Phương pháp xác định cấu trúc 21 - ii- 2.3.3.1 Phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân 21 2.3.3.2 Phương pháp phổ hồng ngoại 23 2.3.3.3 Phương pháp phổ khối lượng 24 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 25 3.1 Quá trình điều chế cặn dịch chiết EtOAc Thạch vĩ 25 3.2 Quá trình phân lập chất từ dịch chiết EtOAc Thạch vĩ 26 3.2.1 Khảo sát thành phần định tính lựa chọn dung mơi 26 3.2.2 Quá trình phân lập chất 28 3.3 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 Kết luận 43 Kiến nghị 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 - iii- DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT  Các phương pháp sắc ký TLC Thin Layer Chromatography: Sắc ký lớp mỏng CC Column Chromatography: Sắc ký cột  Các phương pháp phổ H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton 13 C-NMR Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy: Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13 DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer: Phổ DEPT IS Infrared spectroscopy: Phổ hồng ngoại ESI-MS ElectroSpray lonization Mass Spectrometry: Phổ khối lượng s: singlet d: doublet t: triplet m: multiplet dd: double doublet ddt: double double triplet  Tên hợp chất viết theo nguyên Tiếng Anh - iv- DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh Thạch vĩ Hình 1.2 Cấu tạo khung steroid 10 Hình 1.3 Quá trình sinh tổng hợp cholesterol 11 Hình 2.1 Cây Thạch vĩ (tại Lâm Thao) 13 Hình 2.2 Các dung mơi thơng dụng sử dụng phân lập hợp chất thiên nhiên 14 Hình 2.3 Máy cất quay chân khơng 14 Hình 2.4 Cột sắc ký với kích thước khác 15 Hình 2.5 Bình sắc ký lớp mỏng Camag 15 Hình 2.6 Bộ chưng cất dung mơi 16 Hình 2.7 Máy soi UV 16 Hình 2.8 Minh họa sắc ký lớp mỏng 19 Hình 2.9 Minh họa sắc ký cột 20 Hình 2.10 Độ chuyển dịch hóa học proton carbon 21 Hình 2.11 Sự tách vạch phổ 22 Hình 2.12 Ví dụ minh họa phổ 13C-NMR propane-1-ol 23 Hình 2.13 Đỉnh hấp thụ số nhóm nguyên tử 24 Hình 2.14 Phổ ESI-MS saccopetrin A 24 Hình 3.1 Ngâm mẫu Thạch vĩ 25 Hình 3.2 Cặn EtOAc Thạch vĩ 26 Hình 3.3 Kết khảo sát TLC cặn chiết EtOAc Thạch vĩ 27 Hình 3.4 TLC cặn EtOAc Thạch vĩ với hệ dung mơi (III) 27 Hình 3.5 Cột tổng silica gel cặn EtOAc 29 Hình 3.6 Hình ảnh TLC phân đoạn F1÷F7 31 - v- Hình 3.7 Cột phân đoạn F2 32 Hình 3.8 Hình ảnh TLC phân đoạn F2.1÷F2.9 34 Hình 3.9 Cột phân đoạn F2.9 35 Hình 3.10 Hình ảnh TLC phân đoạn F2.9.1÷F2.9.8 36 Hình 3.11 Hình ảnh TLC điều chế phân đoạn 2.9.1 37 Hình 3.12 Hình ảnh TLC màu đèn tử ngoại 37 Hình 3.13 Sơ đồ phân lập dịch chiết EtOAc Thạch vĩ 38 Hình 3.14 Hình ảnh chất PLEA5 sắc ký TLC 38 Hình 3.15 Cấu trúc hợp chất PLEA5 39 Hình 3.16 Phổ ESI-MS PLEA5 39 Hình 3.17 Phổ IR PLEA5 40 Hình 3.18 Phổ 1H-NMR hợp chất PLEA5 41 Hình 3.19 Phổ 13C-NMR PLEA5 42 - vi- DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Giá trị Rf màu sắc vệt chất mỏng 28 Bảng 3.2 Kết phân đoạn thu từ cột tổng EtOAc 29 Bảng 3.3 Kết phân đoạn thu từ phân đoạn F2 33 Bảng 3.4 Kết phân đoạn thu từ phân đoạn F2.9 36 -1- MỞ ĐẦU Lý lựa chọn đề tài Các hợp chất thiên nhiên nguồn cung cấp phân tử có đa dạng lớn cấu trúc hoạt tính sinh học Các cấu trúc khung phân tử thiên nhiên sinh tổng hợp xếp nhóm chức cấu trúc cho phép dự đoán phát triển hình thành cấu trúc phân tử q trình tiến hố thực vật, động vật vi sinh vật để tạo hiệu tối ưu điều chỉnh chức sinh học Hơn nữa, hợp chất có hoạt tính sinh học tìm thấy từ thiên nhiên dùng trực tiếp y học, nhiều hợp chất khác dùng chất dẫn đường (lead compound) phân tử đại cho tổng hợp bán tổng hợp thuốc Việc sử dụng sản phẩm thiên nhiên đóng vai trò nguồn hợp chất dẫn đường làm phong phú, đa dạng cấu trúc hợp chất tổng hợp bán tổng hợp thuốc Hiện nay, hợp chất có nguồn gốc thiên nhiên đóng góp 30% số lượng thuốc thị trường giới tỷ lệ hợp chất giai đoạn thử nghiệm lâm sàng Theo thống kê có 119 hợp chất bắt nguồn từ 90 lồi xem thuốc quan trọng sử dụng hay nhiều nước Các thuốc chống ung thư có nguồn gốc từ thiên nhiên sử dụng điều trị vincristin (Oncovin®), vinca alkaloit từ Catharanthus roseus G Don (Apocynaceae), etoposit dẫn xuất bán tổng hợp podophyllotoxin có thành phần Podophyllum peltatum L (Berberidaceae), paclitaxel (Taxol®), hợp chất taxan diterpenoit từ Taxus brevifolia L (Taxaceae), dẫn xuất irinotecan, topotecan camptothecin, alkaloit phân lập từ Camptotheca accuminata Decne (Nyssaceae), hay thuốc chống sốt rét artemisinin từ Artemisia annua L (Asteraceae) hợp chất minh họa điển hình Nhu cầu điều trị loại bệnh khác nhau, với tượng -31- STT Bình gộp 115÷122 Dội cột Dung mơi rửa giải đoạn 40 mL EtOAc/CH2Cl2 13% 680 mL EtOAc 100% EtOAc 123÷133 Phân Dội cột 990 mL EtOAc 100% Khối lượng (gam) F6 2,58 F7 1,49 EtOAc Các phân đoạn F1-F7 khảo sát lại TLC với hệ dung môi CH2Cl2 /n-Hexane EtOAc/CH2Cl2 cho kết Hình 3.6 (I) (II) (V) (VI) Hình 3.6 Hình ảnh TLC phân đoạn F1÷F7 Giai đoạn 2: Phân lập chất từ phân đoạn nhỏ F2 (7,5g) Bước 1: Chuẩn bị cột -32- Cột có đường kính cm; chiều dài 50 cm rửa sạch, tráng cột cồn, acetone, sấy khơ, lót đáy Chuẩn bị cột silica gel theo phương pháp nhồi cột ướt: Cân 150 gam silica gel, ngâm trương nở ngập n-hexane khoảng 30 phút, trình ngâm dùng đũa thủy tinh khuấy liên tục để đuổi hết bọt khí Rót từ từ hỗn hợp silica gel trương nở vào cột, vừa rót vừa vỗ nhẹ cột để đuổi hết bọt khí, để cột ổn định thời gian 1h Bước : Đưa chất lên cột 7,5 gam cặn chiết EtOAc (kí hiệu F2) hòa với CH 2Cl2 vừa đủ cho tan hết, đem trộn với khoảng 7,5 gam silica gel, làm bay hết dung môi đến thu hỗn hợp bột tơi màu nâu đen Cho từ từ silica gel đính cặn vào cột, vừa cho vừa gõ nhẹ để phần silica gel phân bố vào cột Hình 3.7 Cột phân đoạn F2 -33- Bước 3: Chạy cột Tiến hành rửa giải hệ dung môi CH2Cl2/n-Hexane (0%-65%) Hứng dung dịch rửa giải khoảng 10ml vào lọ có dung tích khoảng 15÷20 ml Kiểm tra sắc ký lớp mỏng, tiến hành gộp lọ có vết chất tương đương mỏng Dội cột dung môi EtOAc Kết thu phân đoạn có kí hiệu từ F2.1 ÷ F2.9 (Bảng 3.3) Bảng 3.3 Kết phân đoạn thu từ phân đoạn F2 Phân đoạn Bình gộp Dung mơi rửa giải F2.1 - 50 550 ml CH 2Cl2/n-Hexane 0% Khối lượng (g) 0,35 F2.2 51 - 70 200 ml CH 2Cl2/n-Hexane 2% 1,01 50 ml CH2Cl2/n-Hexane 2% 250 ml CH 2Cl2/n-Hexane 4% F2.3 71 – 129 250 ml CH 2Cl2/n-Hexane 6% 2,19 100 ml CH 2Cl2/n-Hexane 8% 150 ml CH 2Cl2/n-Hexane 8% F2.4 130 – 155 100 ml CH2Cl2/n-Hexane 10% 1,15 150 ml CH2Cl2/n-Hexane 10% F2.5 156 – 179 100 ml CH2Cl2/n-Hexane 12% 0,53 150 ml CH2Cl2/n-Hexane 12% F2.6 180 – 201 100 ml CH2Cl2/n-Hexane 14% 0,37 150 ml CH2Cl2/n-Hexane 14% F2.7 202 – 243 250 ml CH2Cl2/n-Hexane 16% 0,74 50 ml CH2Cl2/n-Hexane 18% 200 ml CH2Cl2/n-Hexane 18% 250 ml CH2Cl2/n-Hexane 20% 250 ml CH2Cl2/n-Hexane 22% F2.8 244 – 366 250 ml CH2Cl2/n-Hexane 24% 250 ml CH2Cl2/n-Hexane 26% 250 ml CH2Cl2/n-Hexane 30% 0,44 -34- Phân đoạn Bình gộp Dung mơi rửa giải Khối lượng (g) 250 ml CH2Cl2/n-Hexane 35% 200 ml CH2Cl2/n-Hexane 40% 200 ml CH2Cl2/n-Hexane 45% F2.9 367 - 483 200 ml CH2Cl2/n-Hexane 50% 0,28 200 ml CH2Cl2/n-Hexane 55% 200 ml CH2Cl2/n-Hexane 60% 200 ml CH2Cl2/n-Hexane 65% Các phân đoạn F2.1- F2.9 khảo sát lại TLC với hệ dung môi CH2Cl2 /n-Hexane cho kết Hình 3.8 : (I) (II) Hình 3.8 Hình ảnh TLC phân đoạn F2.1÷F2.9 Giai đoạn 3: Phân lập chất từ phân đoạn nhỏ F2.9 (0,28g) Bước 1: Chuẩn bị cột Cột có đường kính cm; chiều dài 50 cm rửa sạch, tráng cột cồn, acetone, sấy khơ, lót đáy bơng Chuẩn bị cột silica gel theo phương pháp nhồi cột ướt: Cân 10 gam silica gel, ngâm trương nở ngập n-hexane khoảng 30 phút, trình ngâm dùng đũa thủy tinh khuấy liên tục để đuổi hết bọt khí Rót từ từ hỗn hợp silica gel trương nở vào cột, vừa rót vừa vỗ nhẹ cột để đuổi hết bọt khí, để cột ổn định thời gian 1h -35- Bước : Đưa chất lên cột 0,28 gam cặn chiết EtOAc (kí hiệu F2.9) hòa với CH 2Cl2 vừa đủ cho tan hết, đem trộn với khoảng 0,28 gam silica gel, làm bay hết dung môi đến thu hỗn hợp bột tơi màu nâu đen Cho từ từ silica gel đính cặn vào cột, vừa cho vừa gõ nhẹ để phần silica gel phân bố vào cột Hình 3.9 Cột phân đoạn F2.9 Bước 3: Chạy cột Tiến hành rửa giải hệ dung môi CH2Cl2/n-Hexane (0%-50%) Hứng dung dịch rửa giải khoảng ml vào lọ có dung tích khoảng 15÷20 ml Kiểm tra sắc ký lớp mỏng, tiến hành gộp lọ có vết chất tương đương mỏng Dội cột dung môi EtOAc Kết thu phân đoạn có kí hiệu từ F2.9.1 ÷ F2.9.8 (Bảng 3.4) -36- Bảng 3.4 Kết phân đoạn thu từ phân đoạn F2.9 Phân đoạn Bình gộp Dung mơi rửa giải Khối lượng (mg) F2.9.1 - 44 F2.9.2 45 - 54 F2.9.3 55 - 69 200 ml CH 2Cl2/n-Hexane 0% 100 ml CH 2Cl2/n-Hexane 5% 100 ml CH 2Cl2/n-Hexane 6% 100 ml CH 2Cl2/n-Hexane 7% 50 ml CH2Cl2/n-Hexane 8% 40 17,3 10,2 50 ml CH2Cl2/n-Hexane 8% F2.9.4 70 - 99 100 ml CH2Cl2/n-Hexane 15% 100 ml CH2Cl2/n-Hexane 20% 67,1 F2.9.5 100 - 107 100 ml CH2Cl2/n-Hexane 25% 7,4 F2.9.6 108 - 130 100 ml CH2Cl2/n-Hexane 30% 100 ml CH2Cl2/n-Hexane 35% 24,9 F2.9.7 131 - 148 200 ml CH2Cl2/n-Hexane 40% 12,3 F2.9.8 149 - 175 100 ml CH2Cl2/n-Hexane 45% 100 ml CH2Cl2/n-Hexane 50% 11,7 Các phân đoạn F2.9.1 - F2.9.8 khảo sát lại TLC với hệ dung môi CH2Cl2 /n-Hexane EtOAc/ n-Hexan cho kết Hình 3.10 (I) (II) (III) Hình 3.10 Hình ảnh TLC phân đoạn F2.9.1÷F2.9.8 -37- Tiến hành sắc ký mỏng phân đoạn nhỏ F2.9.1 hệ dung môi CH2Cl2/n-Hexane 25% Hình 3.11 Hình ảnh TLC điều chế phân đoạn 2.9.1 Bản mỏng sau triển khai sắc ký, màu đèn tử ngoại với bước sóng =254 nm (I) bước sóng =366 nm (II) (Hình 3.12) (I) (II) Hình 3.12 Hình ảnh TLC màu đèn tử ngoại -38- Quá trình phân lập hợp chất PLEA5 từ cặn EtOAc Thạch vĩ trình bày qua Hình 3.13 Hình 3.13 Sơ đồ phân lập dịch chiết EtOAc Thạch vĩ Tiến hành sắc ký mỏng thu 18 mg chất PLEA5 dạng chất rắn màu trắng, không màu đèn tử ngoại hai bước sóng 254 nm, 366 nm màu xanh tím với thuốc thử Ce(SO4)2 (Hình 3.14) Hình 3.14 Hình ảnh chất PLEA5 sắc ký TLC -39- Trên sắc ký lớp mỏng PLEA5 xác định giá trị Rf = 0,5 (CH2Cl2/n-Hexane 40%) 3.3 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập Hình 3.15 Cấu trúc hợp chất PLEA5  Phổ khối phun mù điện tử ESI-MS cho pic ion giả phân tử [M+H]+ = 457, [M-CH 3COOH+H]+ = 397 phù hợp với CTPT C31H52O 2, M=456 (Hình 3.16) Hình 3.16 Phổ ESI-MS PLEA5 -40-  Phổ hồng ngoại PLEA5 có đỉnh hấp thụ 1729 cm 1 đặc trưng cho nhóm C=O phân tử Tín hiệu dao động C-H sp3 quan sát vùng 2935, 2866 cm1 Các đỉnh hấp thụ 1371, 1242 đặc trưng cho liên kết C-O (Hình 3.17) Hình 3.17 Phổ IR PLEA5  Phân tích liệu phổ 1H-NMR PLEA5 cho thấy tương tự với phổ H-NMR -Stitosterol [8] Trên phổ 1H-NMR PLEA5 có tín hiệu proton olefinic H 5,37 ppm (1H, m, H-6), proton nhóm CH liên kết với oxygen H 4,60 ppm (1H, m, H-3); tín hiệu nhóm methyl liên kết với C-sp H 0,68 (3H, s, 18-CH3); 0,82 (3H, d, J=7.0 Hz, 26-CH 3); 0,84 (3H, d, J=7.0 Hz, 27-CH 3); 0,85 (3H, t, J=7.5 Hz, 29-CH 3); 0,92 (3H, d, J=7.0 Hz, 21-CH 3); 1,02 (3H, s, 19-CH 3) Ngoài phổ 1H-NMR PLEA5 có tín hiệu nhóm methyl liên kết với CO H 2.03 ppm (3H, s, CH3-CO) (Hình 3.18) -41- Hình 3.18 Phổ 1H-NMR hợp chất PLEA5  Trên phổ 13 C-NMR cho thấy phân tử PLEA5 chứa nhóm CO C 170,5 ppm, 1CH liên kết với oxy C 74,0 (C-3), 1C-sp2 bậc 139,7 (C-5), CH-sp2 122,7 (C-6); nhóm CH3-sp3 19,8 (C-26); 19,3 (C-19); 19,1 (C21); 18,8 (C-27); 12,0 (C-29); 11,9 (C-18), nhóm CH liên kết với CO 27,8 (CH3-CO) (Hình 3.19) -42- Hình 3.19 Phổ 13C-NMR PLEA5 Kết hợp tài liệu tham khảo [11] cho phép khẳng định PLEA5 Sitosterol acetate -43- KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Trong trình thực đề tài thu kết sau: - Đã điều chế 22,0 gam cặn dịch chiết EtOAc (ethyl acetate) Thạch vĩ - Khảo sát thành phần hóa học định tính cặn dịch chiết EtOAc Thạch vĩ sắc ký lớp mỏng lựa chọn hệ dung môi CH2Cl2/nHexaneEtOAc/CH2Cl2 để phân tách cặn dịch chiết EtOAc thành phân đoạn nhỏ F1-F7 Từ phân đoạn nhỏ F2 phân tách thành phân đoạn nhỏ F2.1-F2.9 Từ phân đoạn F2.9 phân tách thành phân đoạn nhỏ F2.9.1F2.9.8 Từ phân đoạn F2.9.1 phân lập hợp chất (-Sitosterol acetate) (PLEA5) - Cấu trúc hợp chất PLEA5 xác định phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton 1H-NMR, phổ 13C-NMR, phổ ESI-MS, phổ IR Kiến nghị - Tiếp tục phân lập chất phân đoạn lại dịch chiết EtOAc Thạch vĩ - Khảo sát hoạt tính sinh học hợp chất phân lập từ Thạch vĩ - Bán tổng hợp số hợp chất từ Thạch vĩ khảo sát hoạt tính sinh học chúng -44- TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt [1] Võ Văn Chi (2004), Từ điển thực vật thông dụng-Tập 2,NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội [2] Bùi Thu Giang (2016), Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học dịch chiết Ethyl acetate Thạch vĩ (Pyrrhosia lingua (Thunb.) Farwell) họ Dương xỉ (Pollypodiaceae) địa bàn tỉnh Phú Thọ, Khóa luận tốt nghiệp đại học - Trường Đại học Hùng Vương [3] Đỗ Tất Lợi (2011), Những cây thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Thời Đại [4] Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, NXB Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh [5] Nguyễn Thị Sang (2016), Bước đầu nghiên cứu thành phần hóa học dịch chiết n-Hexan Thạch vĩ (Pyrrhosia lingua (Thunb.) Farwell) họ Dương xỉ (Pollypodiaceae) địa bàn tỉnh Phú Thọ, Khóa luận tốt nghiệp đại học - Trường Đại học Hùng Vương [6] Đặng Như Tại, Ngơ Thị Thuận (2010), Hóa học hữu cơ-Tập 1, NXB Giáo dục Việt Nam [7] Nguyễn Đình Thành (2011), Cơ sở phương pháp phổ ứng dụng hóa học, NXB Khoa học kỹ thuật [8] Vu Minh Trang, Phan Minh Giang, Phan Tong Son Phytosterols, taraxerane triterpenoids, and flavonol glycosides from the leaves of Mallotus macrostachyus (Miq.) Muell.-Arg (Euphorbiaceae) Tạp chí Khoa học Cơng nghệ 2010, tập 48, số 6A, tr 11-16 [9] http://nhaxuatban.vinhuni.edu.vn/gioi-thieu-sach/seo/giao-trinh-hopchat-thien-nhien-66253 Tài liệu Tiếng Anh [10] S Furniss, A.J Hannaford, P.W.G Smith, A.R Tatchell (1989),Text book of practical organic chemistry, Longman Scientific Technical -45- [11] Jiliang Hang, Patrick Dussault (2010),“A concise synthesis of βsitosterol and other phytosterols”, Steroids, 75(12), pp 879–883; doi: 10.1016/j.steroids.2010.05.016 [12] K Masuda, H Yamashita, K Shiojima, T Itoh, H Ageta, (1997), Triterpenoids Isolated from Rhizomes of Pyrosia lingua Chem Pharm Bull 45(4) 590- 594 (1997) [13] T.W.G Solomons, C.B Fryhle (2011), Organic chemistry-10th edition, John Wiley  Sons, INC [14] Janice Gorzynski Smith (2008), Organic Chemistry-3rd edition, McGraw-Hil, pp.1138 [15] http://chem.sci.ubu.ac.th/elearning/inmr_en/nmr/c13_nmr/13c_nmr_spectroscopy4.htm Giảng viên hướng dẫn Sinh viên thực TS Triệu Quý Hùng Phan Thúy Hằng ... tận tình thầy giáo mơn Hóa học - Khoa Khoa học Tự nhiên - Trường Đại học Hùng Vương Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc em xin chân thành cảm ơn thầy hướng dẫn khoa học TS Triệu Quý Hùng hướng...TRƯỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƯƠNG KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN PHAN THÚY HẰNG NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC HỢP CHẤT STEROID TỪ... dựng, thực hồn thiện khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn q thầy mơn Hóa học, thầy cô Khoa Khoa học Tự nhiên Trường Đại học Hùng Vương tận tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi thời gian