Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống
1
/ 66 trang
THÔNG TIN TÀI LIỆU
Thông tin cơ bản
Định dạng
Số trang
66
Dung lượng
1,29 MB
Nội dung
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HUYỀN TRANG NGHIÊNCỨUTÁCDỤNGGIẢMĐAU,CHỐNGVIÊMCỦACẮNDỊCHCHIẾT ETHYL ACETAT NHORỪNG(VITISHEYNEANAROEM & SCHULT., HỌNHOVITACEAE)THỰCNGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HUYỀN TRANG NGHIÊNCỨUTÁCDỤNGGIẢMĐAU,CHỐNGVIÊMCỦACẮNDỊCHCHIẾT ETHYL ACETAT NHORỪNG(VITISHEYNEANAROEM & SCHULT., HỌNHOVITACEAE)THỰCNGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƢỢC LÝ – DƢỢC LÂM SÀNG MÃ SỐ: 8720205 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Đỗ Thị Nguyệt Quế PGS.TS Đỗ Thị Hà HÀ NỘI 2018 LỜI CẢM ƠN Với tất lòng kính trọng u mến tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Đỗ Thị Nguyệt Quế, môn Dược lực, trường Đại học Dược Hà Nội, người thầy tận tình hướng dẫn, bảo, động viên, khích lệ tơi suốt q trình học tập nghiêncứu để tơi hồn thiện luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Đỗ Thị Hà NCS Phùng Thanh Long, khoa Hóa thực vật, Viện Dược liệu, bảo giúp đỡ tơi nhiều suốt q trình nghiêncứu hồn thiện luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn tới tồn thể thầy cơ, anh chị kỹ thuật viên, em sinh viên, bạn học viên nghiêncứu khoa học môn Dược lực, trường Đại học Dược Hà Nội bên tôi, giúp đỡ suốt trình tơi thực hồn thiện luận văn Cuối xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè đồng hành, chia sẻ với gần hai năm học tập nghiêncứu mái trường Dược thân yêu! Hà Nội, ngày 31 tháng năm 2018 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN Tổng quan đau 1.1 Vài nét sinh lý đau 1.2 Thuốc giảm đau Tổng quan viêm 2.1 Khái niệm nguyên nhân gây viêm .5 2.2 Vai trò cyclooxygenase (COX), lypooxygenase (LOX) chất trung gian hóa học đáp ứng viêm 2.3 Thuốc chốngviêm 11 Một số mơ hình thựcnghiệmnghiêncứutácdụnggiảmđau,chốngviêm 13 3.1 Một số mơ hình thựcnghiệmnghiêncứutácdụnggiảm đau 13 3.2 Một số mơ hình thựcnghiệmnghiêncứutácdụngchốngviêm 14 Tổng quan dƣợc liệu nghiêncứu 16 4.1 Đặc điểm thực vật Nhorừng(VitisheyneanaRoem & Schult.) 16 4.2 Thành phần hóa học Nhorừng(VitisheyneanaRoem & Schult.) 17 4.3 Tácdụng sinh học số loài chi Vitis Nhorừng(VitisheyneanaRoem & Schult.) 19 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊNCỨU 25 2.1 Đối tƣợng nghiêncứu 25 2.2 Phƣơng pháp nghiêncứu 27 2.2.1 Đánh giá tácdụnggiảm đau cắndịchchiết ethyl acetat Nhorừng 27 2.2.2 Đánh giá tácdụngchốngviêm cấp cắndịchchiết ethyl acetat Nhorừng 28 2.2.3 Đánh giá tácdụngchốngviêm mạn cắndịchchiết ethyl acetat Nhorừng 30 2.2.4 Đánh giá tácdụng ức chế cyclooxygenase (COX - 2) tế bào trơn động mạch 31 2.2.5 Xử lý số liệu 33 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊNCỨU 34 3.1 Tácdụnggiảm đau ngoại vi cắndịchchiết ethyl acetat Nhorừng mơ hình gây đau quặn acid acetic .34 3.2 Tácdụngchốngviêmcắndịchchiết ethyl acetat Nhorừng 35 3.3 Tácdụng ức chế cyclooxygenase (COX-2) tế bào SMC cắndịchchiết ethyl acetat Nhorừng 41 Chƣơng BÀN LUẬN .43 4.1 Về tácdụnggiảm đau cắndịchchiết ethyl acetat Nhorừng 43 4.2 Về tácdụngchốngviêmcắndịchchiết ethyl acetat Nhorừng .44 4.3 Về khả ức chế enzym Cyclooxygenase (COX) tế bào SMC cắndịchchiếtethylacetatNhorừng 49 KẾT LUẬN 51 Về tácdụnggiảmđau,chốngviêm 51 Về tácdụng ức chế COX-2 tế bào SMC 51 KIẾN NGHỊ 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT COX (1,2) : Enzym cyclooxygenase (1, 2) DPPH : 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl GC : Glucocorticoid HeLa : Tế bào ung thƣ cổ tử cung HepG2 : Tế bào ung thƣ gan ngƣời IASP : Hiệp hội quốc tế nghiêncứu đau IL : Interleukin iNOS : Nitric oxyd synthase INF : Interferon LCT : Leucotrien LPS : Lipopolysaccharid NO• : Gốc nitric oxyd tự NSAIDs : Thuốc chốngviêm không steroid PG : Prostaglandin PGI : Protacyclin SMC: Tế bào trơn động mạch TNF : Yếu tố hoại tử u DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU STT Tên bảng Sơ đồ quy trình thí nghiệmnghiêncứutácdụnggiảm đau cắndịchchiết ethyl acetat nhorừng Sơ đồ 2.1 mơ hình gây đau quặn acid acetic Trang 28 Sơ đồ quy trình nghiêncứutácdụngchốngviêm Sơ đồ 2.2 cấp cắndịchchiết ethyl acetat nhorừng mơ hình gây viêm carrageenin 29 Sơ đồ quy trình nghiêncứutácdụngchốngviêm Sơ đồ 2.3 cấp cắndịchchiết ethyl acetat nhorừng mơ hình gây viêm màng bụng 30 Bảng 3.1 Số đau quặn lô chuột giai đoạn sau gây đau acid acetic 34 Bảng 3.2 Tỉ lệ phù chân chuột cắndịchchiết ethyl acetat Nhorừng 36 Bảng 3.3 Tỉ lệ ức chế phù chân chuột cắndịchchiết ethyl acetat Nhorừng 37 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng cắndịchchiếtethylacetatNhorừng lên thể tích dịch rỉ viêm 38 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng cắndịchchiết ethyl acetat Nhorừng đến số lƣợng bạch cầu dịch rỉ viêm 38 Bảng 3.6 Ảnh hƣởng cắndịchchiết ethyl acetat Nhorừng đến hàm lƣợng protein dịch rỉ viêm 39 10 Bảng 3.7 Khối lƣợng u hạt sau cân ƣớt 40 11 Bảng 3.8 Khối lƣợng u hạt sau cân khô 41 Bảng 3.9 Kết thử tácdụng ức chế COX-2 in vitro tế bào SMC cắndịchchiết ethyl acetat phân đoạn khác Nhorừng(VitisheyneanaRoem & Schult.) 42 12 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ STT Tên Sơ đồ đƣờng dẫn truyền cảm giác đau vị trí tác Hình 1.1 dụng thuốc giảm đau Hình 1.2 Hình 1.3 Hình 1.4 Hình 1.5 CTCT số hợp chất stilbenoid thuộc V heyneana Hình 1.6 Phản ứng chuyển hóa acid arachidonic dƣới xúc tác enzym COX Phản ứng chuyển hóa acid arachidonic dƣới xúc tác enzym LOX Đặc điểm hình thái Nhorừng(Vitisheyneana Roem.& Schult.) Công thức cấu tạo số hợp chất khác thuộc V heyneana Trang 17 18 19 ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam nằm vùng khí hậu nhiệt đới ẩm gió mùa, có nguồn tài nguyên thực vật phong phú đa dạng, có nhiều lồi đƣợc sử dụng làm thuốc Việc sử dụng thuốc thực phẩm bảo vệ sức khỏe có nguồn gốc từ thực vật chủ yếu dựa kinh nghiệm dân gian, chƣa có đầy đủ chứng khoa học để chứng minh tác dụng, chế tác dụng, tácdụng không mong muốn cỏ làm thuốc Trong đó, Nhorừng đối tƣợng gần đƣợc quan tâm nhiều Từ lâu, chi Nho Vitis đƣợc sử dụng làm thuốc với nhiều cơng dụng nhƣ: nho leo có đặc tính làm se, mát, dịu da chốngviêm sƣng đƣợc sử dụng làm trà chữa bệnh tiêu chảy, kinh nguyệt nhiều xuất huyết tử cung, làm thuốc chữa loét miệng thuốc thụt rửa âm đạo nhiều mủ Lá nho leo chữa bệnh giãn tĩnh mạch, bệnh trĩ mao mạch yếu Nhựa cành đƣợc dùng làm thuốc rửa mắt Quả nho khơ có tácdụng long đờm, làm dịu ho [5] Hiện có số nghiêncứu nhà khoa học giới thành phần hóa học, tácdụng sinh học chi Nho, nhƣng chủ yếu V vinifera, số nghiêncứu tiến hành loài V amurensis, V thunbergii Cây Nhorừng (hay gọi nho lơng, nho năm góc, nho ngũ giác, nho tía), tên khoa học Vitis heyneanaRoem & Schult., họNho Vitaceae [5], [7] Trong dân gian, rễ Nhorừng đƣợc dùng để ăn với trầu dùng trị viêm phế quản; làm thuốc lợi tiểu phối hợp với rễ dứa hãm sắc uống trị bệnh lậu Vỏ rễ đƣợc dùng trị kinh nguyệt khơng bạch đới, dùng ngồi điều trị chứng viêm đau nhƣ đòn ngã tổn thƣơng, gân cốt tê đau; tồn dùng trị bệnh sởi; dùng trị bệnh lỵ, mụn nhọt sƣng lở; số tácdụng khác [7] Trên giới nghiêncứutácdụngNhorừng ít, Việt Nam chƣa có nghiêncứutácdụng lồi Vì vậy, để góp phần xây dựng sở liệu Nho rừng, sử dụng làm thuốc, thực đề tài “Nghiên cứutácdụnggiảmđau,chốngviêmcắndịchchiết ethyl acetat Nhorừng(VitisheyneanaRoem & Schult., họNhoVitaceae)thực nghiệm” Với hai mục tiêu nhƣ sau: Đánh giá tácdụnggiảmđau,chốngviêmcắndịchchiết ethyl acetat Nhorừngthựcnghiệm Đánh giá tácdụng ức chế enzym cyclooxygenase in vitro cắndịchchiết ethyl acetat Nhorừngdungdịch acid acetic 1% tácdụng tƣơng đƣơng aspirin 240 mg/kg (p >0,05) Tácdụnggiảm đau cắndịchchiếtethylacetatNhorừng liều 150 mg/kg liều 450 mg/kg tƣơng đƣơng (p >0,05) Nghiêncứu Bakhta cộng tácdụnggiảm đau cao chiết ethanol V vinifera loài thuộc chi nho Vitis mơ hình gây đau quặn acid acetic 0,6% (10ml/kg),cho thấy với mức liều 200, 400 mg/kg mẫu thử làm giảm số đau so với lô chứng lần lƣợt 60,5% 65,5% [18] Từ nghiêncứu dựa kết thựcnghiệm đạt đƣợc, ta thấy cắndịchchiếtethylacetatNhorừng có tácdụnggiảm đau mơ hình gây đau quặn acid acetic 1% hoàn toàn phù hợp Nhƣ vậy, kết qủa thựcnghiệm chứng minh cắndịchchiếtethylacetatNhorừng có tácdụng làm giảm đau quặn tốt, đồng thời phù hợp với kinh nghiệm dân gian sử dụngNhorừng để điều trị đau bụng kinh, đòn ngã tổn thƣơng, đau nhức xƣơng khớp 4.2 Về tácdụngchốngviêmcắndịchchiết ethyl acetat Nhorừng Thành phần hóa học Nhorừng nhóm polyphenol bao gồm flavonoid, stibelnoid… có tácdụngchốngviêm mạnh, tácdụngchốngviêm cấp chốngviêm mạn Trên giới, có số nghiêncứu chứng minh tácdụngchốngviêm in vitro, in vivo chi nho [24], [31], [39] Ngoài ra, dân gian Nhorừng đƣợc dùng để chữa bệnh liên quan đến viêm nhƣ viêm phế quản, phong thấp, đòn ngã tổn thƣơng, gân cốt tê đau… [5] Từ sở chúng tơi lựa chọn tìm hiểu tácdụngchốngviêmcắndịchchiếtethylacetatNhorừng Chúng tiến hành thử tácdụngchốngviêm mơ hình gây viêm cấp (gây phù bàn chân chuột carrageenin, gây tràn dịch màng bụng) mơ hình gây viêm mạn (gây u hạt thựcnghiệm bông) 44 Tácdụngchốngviêm cấp cắndịchchiết ethyl acetat Nhorừng mơ hình gây phù chân chuột carrageenin Chúng tơi lựa chọn mơ hình gây phù chân chuột carrageenin để đánh giá tácdụngchốngviêm cấp So với mơ hình chốngviêm cấp bán cấp khác mơ hình gây phù chân chuột nhất, đơn giản, dễ dàng thực phù hợp cho mục đích sàng lọc lẫn nghiêncứu sâu Đây mơ hình đƣợc sử dụng rộng rãi nhiều nghiêncứu giới Việt Nam để đánh giá tácdụngchốngviêm Indomethacin có đặc tính kháng viêm bật, đƣợc dùng để điều trị bệnh viêm khớp dạng thấp từ vừa đến nặng, viêm khớp mãn tính, viêm khớp gout cấp, viêm cột sống dính khớp…do indomethacin ức chế không chọn lọc enzym cyclooxygenase (COX), ức chế vận động bạch cầu đa nhân, làm giảm q trình sinh tổng hợp mucopolysaccharides Thuốc có nồng độ dịch khớp tƣơng đƣơng với nồng độ huyết tƣơng vòng sau sử dụng [37] Chúng tiến hành đánh giá tácdụngchốngviêm cấp cắndịchchiếtethylacetatdùng cho chuột cống trắng mức liều 85 mg/kg 250 mg/kg, sử dụng chứng dƣơng indomethacin Kết nghiêncứu bảng 3.2 3.3 cho thấy: Indomethacin thể tácdụnggiảm phù chân chuột rõ rệt so với lô chứng thời điểm giờ, giờ, sau gây viêm carrageenin (p < 0,01) Sau gây viêm carrageenin, mức độ phù chân chuột lô uống cắndịchchiếtethylacetatnhorừng liều 85 mg/kg thời điểm (30,14 ± 2,18) (26,14 ±1,88) khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng ( giờ: 43,11± 4,89 ; giờ: 41,16 ± 4,82); p