Nghiên cứu tác dụng giảm đau, chống viêm của cây gối hạc ( leea rubra blume họ gối hạc leeaceae) trên thực nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI ĐẬU THỊ GIANG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GIẢM ĐAU, CHỐNG VIÊM CỦA CÂY GỐI HẠC (Leea rubra Blume HỌ GỐI HẠC LEEACEAE) TRÊN THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI ĐẬU THỊ GIANG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GIẢM ĐAU, CHỐNG VIÊM CỦA CÂY GỐI HẠC (Leea rubra Blume HỌ GỐI HẠC LEEACEAE) TRÊN THỰC NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƢỢC LÝ VÀ DƢỢC LÂM SÀNG MÃ SỐ: 60720405 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thùy Dƣơng TS Phƣơng Thiện Thƣơng HÀ NỘI 2016 LỜI CẢM ƠN Với tất lòng kính trọng biết ơn xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Thùy Dương, môn Dược lực, trường Đại học Dược Hà Nội, người thầy tận tình hướng dẫn, bảo, động viên, khích lệ suốt trình học tập nghiên cứu để hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn TS Phương Thiện Thương NCS Nguyễn Thị Phương, khoa Hóa phân tích – Tiêu chuẩn, Viện Dược liệu bảo giúp đỡ nhiều suốt trình nghiên cứu hoàn thiện luận văn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới toàn thể thầy cô, anh chị kỹ thuật viên, em sinh viên nghiên cứu khoa học môn Dược lực, trường Đại học Dược Hà Nội bên tôi, giúp đỡ trình thực hoàn thiện luận văn Cuối xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè đồng hành, động viên, chia sẻ với gần hai năm học tập nghiên cứu mái trường Dược thân yêu! Hà Nội, ngày 31 tháng năm 2016 Đậu Thị Giang MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan viêm 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Nguyên nhân 1.1.3 Vai trò COX LOX đáp ứng viêm 1.1.4 Các chất trung gian hoá học viêm 1.1.5 Một số thuốc chống viêm 1.2 Tổng quan đau 1.2.1 Định nghĩa 1.2.2 Đƣờng dẫn truyền cảm giác đau 1.2.3 Thuốc giảm đau 1.2.4 Dƣợc liệu có tác dụng giảm đau, chống viêm 10 1.3 Tổng quan gốc tự do, chất chống oxy hóa 12 1.3.1 Nguồn gốc gốc tự 12 1.3.2 Stress oxi hóa, tác hại stress oxi hóa 12 1.3.3 Hệ thống bảo vệ chống gốc tự do, chống oxy hóa thể 15 1.4 Tổng quan dƣợc liệu nghiên cứu 15 1.4.1 Tên khoa học 15 1.4.2 Đặc điểm thực vật 15 1.4.3 Phân bố 16 1.4.4 Thành phần hóa học 16 1.4.5 Công dụng 16 1.4.6 Tác dụng dƣợc lý 16 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU/NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Nguyên vật liệu 18 2.1.1 Động vật nghiên cứu 18 2.1.2 Dƣợc liệu nghiên cứu 18 2.1.3 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 19 2.1.4 Thuốc thử, hóa chất 19 2.1.5 Máy móc, thiết bị, dụng cụ 19 2.2 Thiết kế nghiên cứu 20 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 21 2.3.1 Phƣơng pháp đánh giá tác dụng giảm đau, chống viêm 21 2.3.2 Phƣơng pháp xác định chế chống viêm in vitro 27 2.3.3 Phƣơng pháp xử lý số liệu 32 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 33 3.1 Kết đánh giá tác dụng giảm đau, chống viêm GHL GHR 33 3.1.1 Kết đánh giá tác dụng giảm đau trung ƣơng GHL GHR phƣơng pháp mâm nóng 33 3.1.2 Kết đánh giá tác dụng giảm đau ngoại vi GHL GHR phƣơng pháp gây đau quặn acid acetic 34 3.1.3 Kết đánh giá tác dụng chống viêm cấp GHL GHR mô hình gây phù bàn chân chuột carrageenan 35 3.1.4 Kết đánh giá tác dụng chống viêm mạn GHL GHR mô hình gây u hạt 39 3.2 Kết xác định chế in vitro GHL GHR 41 3.2.1 Kết đánh giá tác dụng ức chế COX in vitro GHL GHR 41 3.2.2 Kết đánh giá tác dụng ức chế LOX in vitro GHL GHR 42 3.2.3 Kết đánh giá tác dụng dọn gốc tự DPPH in vitro GHL GHR 43 3.2.4 Kết đánh giá tác dụng dọn gốc tự superoxid anion (O2-•) in vitro GHL GHR 43 Chƣơng BÀN LUẬN 45 4.1 Bàn luận tác dụng giảm đau, chống viêm GHL GHR 45 4.1.1 Về tác dụng giảm đau GHL GHR mô hình giảm đau mâm nóng 45 4.1.2 Về tác dụng giảm đau GHL GHR mô hình gây đau quặn acid acetic 46 4.1.3 Về tác dụng chống viêm cấp GHL GHR mô hình gây phù carrageenan 47 4.1.4 Về tác dụng chống viêm mạn GHL GHR mô hình gây u hạt 48 4.2 Bàn luận chế chống viêm in vitro GHL GHR 49 4.2.1 Về tác dụng ức chế COX in vitro GHL GHR 50 4.2.2 Về tác dụng ức chế LOX in vitro GHL GHR 51 4.2.3 Về tác dụng quét gốc tự in vitro GHL GHR 52 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt Kí hiệu : Ý nghĩa AA : Acid arachidonic ADN : Acid desoxyribonucleic AMP : Adenosin monophosphat ATP : Adenosin triphosphat COX (1,2) : Enzym cyclooxygenase (1, 2) DMSO : Dimethyl sulfoxid DPPH : 1,1-dimethyl-2-picryhydrazyl GHL : Cao dịch chiết cồn gối hạc GHR : Cao dịch chiết cồn rễ gối hạc IASP : Hiệp hội quốc tế nghiên cứu đau IL : Interleukin INF : Interferon iNOS : NO sythase cảm ứng LCT : Leucotrien LOX : Lypoxygenase MeOH : Methanol NADPH : Nicotinamid adenin dinucleotid phosphat NF-kB : Yếu tố chép nhân NOS : NO synthase NSAID : Thuốc chống viêm không steroid PARP : Poly( ADP-ribose)polymerase PG : Prostaglandin PGI : Protacyclin PGHS-1,2 : Prostaglandin endoperoxid synthase-1,2 PLA2 : Phospholipase A2 POX : Peroxidase RNS : Gốc nitơ hoạt động ROS : Gốc oxi hoạt động TNF : Yếu tố hoại tử u Tx : Thromboxan Danh mục bảng, biểu đồ Tên bảng STT Trang Bảng 3.1 Ảnh hƣởng GHL GHR đến thời gian phản ứng đau chuột nhắt trắng 33 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng GHL GHR đến số đau quặn chuột nhắt trắng 34 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng GHL GHR đến mức độ phù chân chuột (%) theo thời gian 36 Bảng 3.4 So sánh khác biệt mặt thống kê giƣã liều khác GHL GHR mô hình gây phù carraggenan 38 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng GHL GHR đến khối lƣợng u hạt chuột cống trắng 39 Bảng 3.6 So sánh khác biệt mặt thống kê giƣã liều khác GHL GHR mô hình gây u hạt 41 Bảng 3.7 Khả ức chế COX in vitro GHL GHR 42 Bảng 3.8 Khả ức chế LOX in vitro GHL GHR 42 Bảng 3.9 Khả dọn gốc DPPH in vitro GHL GHR 43 10 Bảng 3.10 Khả dọn gốc O2.- in vitro GHL GHR 43 Danh mục hình vẽ, đồ thị Tên hình, tên sơ đồ STT Trang Hình 1.1 Con đƣờng chuyển hóa acid arachidonic thông qua COX Hình 1.2 Con đƣờng chuyển hóa acid arachidonic thông qua 5-LOX Hình 1.3 Cơ chế chống viêm glucocorticoid Hình 2.1 Ảnh chụp gối hạc (Leea rubra Blume, Leaceae) 18 Sơ đồ 2.1 Thiết kế nội dung nghiên cứu 21 Hình 2.2 Quy trình thí nghiệm giảm đau theo phƣơng pháp mâm nóng 22 Hình 2.3 Quy trình thí nghiệm giảm đau ngoại vi phƣơng pháp gây đau quặn acid acetic 24 Hình 2.4 Quy trình thí nghiệm tác dụng chống viêm cấp mô hình gây phù bàn chân chuột carrageenan 25 Hình 2.5 Quy trình thí nghiệm tác dụng chống viêm mạn mô hình gây u hạt 27 10 Hình 3.1 Ảnh hƣởng GHL GHR đến mức độ phù chân chuột (%) theo thời gian 37 11 Hình 3.2 Ảnh hƣởng GHL GHR đến khối lƣợng u hạt chuột cống trắng 40 ĐẶT VẤN ĐỀ Nƣớc ta có khí hậu quanh năm nóng ẩm với hệ thực vật vô phong phú đa dạng Đây nguồn nguyên liệu thiên nhiên quý giá cung cấp nguyên liệu cho ngành hƣơng liệu, mỹ phẩm hóa dƣợc Ngày hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học đƣợc phân lập từ cỏ đƣợc ứng dụng nhiều ngành công nghiệp nhƣ nông nghiệp, chúng đƣợc dùng để sản xuất thuốc phòng, chữa bệnh, thuốc bảo vệ thực vật, làm nguyên liệu cho ngành công ngiệp thực phẩm Những thuốc dân gian với vốn sử dụng phong phú đồng bào dân tộc kho tàng quý giá để khám phá, tìm kiếm nhiều loại thuốc có hiệu lực cao cho công tác phòng chữa bệnh [5], [6], [7], [9] Cây gối hạc có tên khoa học Leea rubra Blume họ Gối hạc Leeaceae đƣợc y học cổ truyền sử dụng trị nhiều chứng bệnh Đông y cho rằng: rễ gối hạc có vị đắng ngọt, tính mát sử dụng tiêu sƣng, thông huyết Nó thƣờng đƣợc sử dụng chữa sƣng tấy, đơn bắp chuối hay phong thấp sƣng đầu gối chữa đau bụng, rong kinh [5], [7] Tuy nhiên công trình khoa học nghiên cứu gối hạc Có số công trình nghiên cứu gần tác dụng chống gốc tự chống oxy số loài thuộc chi Leea mang lại kết khả quan [30], [57], [61], [66] Xuất phát từ thực tế thực đề tài “Nghiên cứu tác dụng giảm đau, chống viêm gối hạc (Leea rubra Blume họ Gối hạc Leeaceae) thực nghiệm” Bộ phận dùng để điều trị viêm đau khớp y học cổ truyền gối hạc đƣợc ghi tài liệu rễ Tuy nhiên, nghiên cứu tiến hành đánh giá tác dụng dƣợc lý liên quan đến tính vị loài phận thƣờng dùng rễ phận dễ thu hái gối hạc Mục tiêu đề tài: Đánh giá tác dụng giảm đau, chống viêm cao dịch chiết cồn rễ gối hạc Xác định chế in vitro sơ cao dịch chiết cồn rễ gối hạc Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan viêm 1.1.1 Khái niệm Viêm tƣợng sƣng, nóng, đỏ, đau đƣợc đề cập tới y học cổ đại khái niệm ban đầu viêm đƣợc hình thành từ sớm song lại khác [77] Viêm phản ứng bảo vệ thể chống lại yếu tố gây bệnh, trình bệnh lý phức tạp bao gồm nhiều tƣợng: tổn thƣơng tổ chức, rối loạn chuyển hóa, rối loạn tuần hoàn, bạch cầu đến ổ viêm thực bào, tế bào tăng sinh [10] 1.1.2 Nguyên nhân Nguyên nhân bên Nguyên nhân bên thƣờng gặp phức tạp bao gồm: Vi sinh vật: vi khuẩn độc tố chúng, virus, ký sinh trùng côn trùng Đây nguyên nhân gây viêm thƣờng gặp - Tác nhân học: chấn thƣơng - Vật lý: nhiệt độ (nóng, lạnh), điện, xạ ion hóa - Hóa học: acid, kiềm, muối kim loại nặng [10] Nguyên nhân bên - Hoại tử tổ chức: tắc mạch, xuất huyết, rối loạn thần kinh dinh dƣỡng Lắng đọng phức hợp miễn dịch (có hoạt hóa bổ thể) (phức hợp kháng nguyên- kháng thể) [10] 1.1.3 Vai trò COX LOX đáp ứng viêm Cyclooxygenase (COX) đƣợc gọi prostaglandin H/G synthase Đây enzym chịu trách nhiệm cho trình sản xuất prostanoid Các phospholipid màng tế bào bị thủy phân phospholipase A2 cho sản phẩm acid arachidonic (AA) Acid arachidonic xúc tác COX cho prostanoid (Hình 1.1) Prostanoid thuật ngữ chung dùng để phân tử bao gồm: prostaglandin (PG), prostacyclin (PGI) thromboxan (Tx) Hai đồng phân COX đƣợc xác định Mô hình gây u hạt đƣợc thực chuột cống đực trắng mức liều thử GHL GHR 100 mg/kg 200 mg/kg Theo kết bảng 3.5 (trang 39) bảng 3.6 (trang 41) cho thấy GHL thể tác dụng chống viêm mạn mức liều 100 mg/kg 200 mg/kg Khi sử dụng liều 100 mg/kg GHL thể tác dụng vƣợt trội so với GHR liều 100 mg/kg (p < 0,01 cân tƣơi, p < 0,05 khô) GHL lại thể tác dụng tốt liều 100 mg/kg, mức liều thấp Tuy nhiên tác dụng liều so với liều 200 mg/kg GHL khác biệt ý nghĩa Nhƣ giải thích liều GHL 100 mg/kg liều cho tác dụng tối ƣu, ta tăng liều tác dụng chống viêm mạn GHL không tăng đƣợc GHR dùng liều 100 mg/kg chƣa thể tác dụng chống viêm mạn, nhƣng tăng mức liều lên 200 mg/kg thể tác dụng chống viêm mạn tốt (p < 0,05 tƣơi khô) Có thể tăng liều GHR tăng tác dụng chống viêm mạn Khi cân tƣơi GHR 200 mg/kg thể tác dụng chống viêm mạn tốt (I% = 34,6 %), nhƣng cân khô GHL 100 mg/kg lại thể tác dụng tốt (I% = 40,1%) Khi cân tƣơi khối lƣợng tăng bao gồm khối lƣợng tăng dịch viêm tăng sinh tế bào, nguyên bào sợi, collage nhƣng sấy khô nƣớc bay hết, tăng khối lƣợng ổ viêm tăng sinh của tế bào, nguyên bào sợi, collagen Nhƣ vậy, qua thử nghiệm giảm đau, chống viêm chuột thí nghiệm chứng minh đƣợc tính khoa học việc sử dụng rễ gối hạc để chữa tiêu sƣng, xung huyết tê thấp, đau nhức xƣơng khớp dân gian Bên cạnh đó, nhận thấy dịch chiết gối hạc cho tác dụng tốt mở hƣớng nghiên cứu khai thác dƣợc liệu gối hạc 4.2 Bàn luận chế chống viêm in vitro GHL GHR Qua thử nghiệm in vivo chứng minh đƣợc tác dụng giảm đau, chống viêm dịch chiết cồn rễ gối hạc Tiếp tiến hành thử nghiệm in vitro để bƣớc đầu xác định chế COX-2 LOX enzyme enzym tham gia vào trình viêm Các dƣợc liệu với tác dụng ức chế COX-2, LOX cho tác dụng chống 49 viêm nhƣng tác dụng phụ NSAID dùng [43] NSAID thuốc đƣợc sử dụng phổ biến giới, nhiên số bệnh liên quan đến viêm thiếu lựa chọn thích hợp chẳng hạn nhƣ viêm khớp dạng thấp, bệnh Alzheimer xơ vữa động mạch Do đó, việc tìm kiếm hợp chất có khả chống viêm mối quan tâm lớn [32] Các NSAID ức chế chọn lọc COX-2 ức chế COX-1 COX-2, nhƣng không ức chế LOX Các enzym COX LOX tham gia chuyển hóa acid arachidonic Khi dùng thuốc NSAID enzym COX bị ức chế, acid arachidonic đƣợc chuyển hóa thông qua enzym LOX, dẫn đến dƣ thừa leucotrien gây nên tác dụng phụ NSAID [32] Quercetin (3,3’,4’,5,7-pentahydroxyflavone) flavonoid phổ biến đƣợc tìm thấy nhiều loại trái rau nhƣ táo, việt quất, hành, nụ bạch hoa Quercetin đƣợc xem chất chống oxi hóa mạnh khả dọn gốc tự [72] Quercetin ức chế hoạt động enzym COX LOX [19] Trong thử nghiệm in vitro quercetin đƣợc sử dụng làm chất đối chứng 4.2.1 Về tác dụng ức chế COX in vitro GHL GHR COX enzym xúc tác cho trình chuyển acid arachidonic thành prostaglandin COX có hai đồng phân COX-1 COX-2 Trong khi, COX-1 có tác dụng trì hoạt động sinh lý bình thƣờng tế bào, có mặt hầu hết tế bào, tham gia vào trình tổng hợp prostaglandin có tác dụng bảo vệ Thì, COX-2 có chức tổng hợp prostaglandin thúc đẩy trình viêm, thấy hầu hết mô với nồng độ thấp, tế bào tham gia phản ứng viêm Trong mô viêm nồng độ COX-2 tăng cao Những thuốc ức chế COX-1 nhiều gây tác dụng không mong muốn, thuốc ức chế COX-2 mạnh có tác dụng chống viêm mạnh mà gây tác dụng phụ [1] GHL GHR chất ức chế không chọn lọc, mà chúng thể khả ức chế COX-1 COX-2 Tƣơng tự, chất đối chứng quercetin thể khả ức chế COX tốt với IC50 cho COX-1, COX-2 lần lƣợt 5,14 ± 0,11 µg/ml 1,37 ± 0,13 µg/ml, quercetin ƣu tiên ức chế chọn lọc COX-2 50 với giá trị IC50 quercetin COX-2 bé khoảng lần so với giá trị IC50 quercetin COX-1 Cả GHL GHR thể khả ức chế COX in vitro tốt IC50 GHL với COX-1, COX-2 lần lƣợt 35,35 ± 0,58 µg/ml 26,89 ± 0,26 µg/ml IC50 GHR với COX-1, COX-2 lần lƣợt 40,78 ± 0,42 µg/ml 30,10 ± 0,31 µg/ml Nhìn chung,GHL GHR thể tác dụng ức chế COX tốt, GHL thể tác dụng ức chế COX tốt GHR, nhiên chúng ức chế không chọn lọc COX 4.2.2 Về tác dụng ức chế LOX in vitro GHL GHR LOX enzym xúc tác cho trình tổng hợp leucotrien từ acid arachidonic Enzym LOX hoạt động mạnh tế bào bạch cầu nhiều tế bào liên quan đến miễn dịch nhƣ: tế bào mast, bạch cầu trung tính, bạch cầu ƣa acid, bạch cầu đơn nhân bạch cầu ƣa base Sau kích hoạt tế bào, acid arachidonic đƣợc cắt từ phospholipid màng tế bào dƣới xúc tác enzym phospholipase A2, LOX xúc tác cho trình chuyển hóa acid arachidonic thành leucotrien, nhóm chất trung gian gây viêm Leucotrien hoạt động nhƣ chất hóa ứng động tế bào, lôi kéo tế bào hệ thống miễm dịch đến ổ viêm [56] Do vậy, chất ức chế hoạt động LOX có khả chống viêm giảm phản ứng dị ứng Một số dƣợc liệu dùng nhƣ nguồn tiềm thuốc ức chế COX-2 / LOX mà lại có tác dụng phụ so với NSAID [65] GHR với giá trị IC50 14,37 ± 0,86 µg/ml thể khả ức chế LOX tốt GHL với IC50 21,50 ± 1,04 µg/ml Cả GHL GHR thể khả ức chế LOX mức so với quercetin, flavonoid đƣợc chứng minh khả ức chế LOX với giá trị IC50 có 2,10 ± 0,91 µg/ml Đối với dịch chiết từ dƣợc liệu, khả ức chế LOX đƣợc đánh giá qua IC50 thử nghiệm in vitro đƣợc đánh giá nhƣ sau [20]: ++++ IC50 [...]... µl (Eppendorf) - Đầu côn, microtube các loại - Đồng hồ bấm giây (Nhật Bản) 2.2 Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu gồm hai nội dung chính để giải quyết hai mục tiêu Nội dung 1: các thử nghiệm in vivo đánh giá tác dụng giảm đau, chống viêm thực nghiệm: Đầu tiên cao dịch chiết cồn lá và rễ gối hạc (GHL và GHR) đƣợc thử tác dụng giảm đau trung ƣơng và ngoại vi trên chuột nhắt trắng để đánh giá tác dụng giảm. .. đau và chọn đƣợc mức liều phù hợp để thử tác dụng chống viêm cấp và mạn trên chuột cống trắng  Tác dụng giảm đau trung ƣơng đƣợc thử trên mô hình mâm nóng  Tác dụng giảm đau ngoại vi đƣợc thử trên mô hình gây đau quặn bằng acid acetic Tiếp đến, GHL và GHR đƣợc đánh giá tác dụng chống viêm trên chuột cống trắng dựa trên các mức liều đƣợc quy đổi từ các thử nghiệm đánh giá tác dụng giảm đau trên chuột... thƣờng lấy rễ gối hạc sắc uống cho mau khỏe ngƣời, ăn uống ngon miệng, đỡ đau ngƣời [6], [7] 1.4.6 Tác dụng dược lý Hiện chƣa có nhiều nghiên cứu về tác dụng của cây Leea rubra nhƣng đã có một số nghiên cứu về các loài thuộc chi Leea nhƣ: Dịch chiết methanol của lá cây Leea asiatica có chứa hàm lƣợng cao flavonoid, phenol và dịch chiết nƣớc của lá cây Leea indica đều thể hiện tác dụng chống oxy hóa... vitamin E, lycopen và ubiquinol là chất chống oxy hóa thân dầu Vitamin E đƣợc xem là chất chống oxi hóa thân dầu mạnh nhất [30] 1.4 Tổng quan về dƣợc liệu nghiên cứu 1.4.1 Tên khoa học Cây gối hạc còn có tên gọi khác là đơn gối hạc, kim kê, bí đại, phỉ tử, mạy chia, cây mũm [7] Tên khoa học Leea rubra Blume, họ Gối hạc (Leeaceae) [7] 1.4.2 Đặc điểm thực vật Là loại cây nhỏ, mọc thành bụi dày, thƣờng cao...  Tác dụng chống viêm cấp đƣợc thử trên mô hình gây phù bằng carrageenan  Tác dụng chống viêm mạn đƣợc thử trên mô hình gây u hạt Nội dung 2: các thử nghiệm in vitro để tìm hiểu cơ chế chống viêm của GHL và GHR  Thử nghiệm đánh giá tác dụng ức chế emzym: COX, LOX  Thử nghiệm đánh giá tác dụng dọn gốc tự do: O2.-, DPPH 20 Nghiên cứu đƣợc thiết kế theo sơ đồ sau: Sơ đồ 2.1 Thiết kế các nội dung nghiên. .. phần hóa học Cho đến nay có rất ít công trình nghiên cứu công bố về thành phần hóa học của cây gối hạc Theo nghiên cứu của Nguyễn Thị Phƣơng và cộng sự, trong lá cây gối hạc có chứa hợp chất phenolic [8] 1.4.5 Công dụng Theo Đông y, rễ gối hạc có vị đắng ngọt, tính mát, có tác dụng tiêu sƣng, thông huyết Do có tác dụng này nên thƣờng đƣợc dùng chữa sƣng tấy, đơn bắp chuối hay phong thấp sƣng đầu gối và... động thần kinh Các tác động cụ thể [2]: 9  Receptor muy ( ): khi kích thích gây tác dụng giảm đau, ức chế hô hấp, co đồng tử, giảm co bóp cơ trơn dạ dày, ruột và gây sảng khoái  Receptor kappa (k): khi kích thích gây tác dụng giảm đau, suy hô hấp, co đồng tử và an thần  Receptor delta ( ): chƣa đƣợc nghiên cứu đầy đủ trên ngƣời, nhƣng trên động vật khi kích thích cũng gây tác dụng giảm đau * Nhóm thuốc... theo sơ đồ sau: Sơ đồ 2.1 Thiết kế các nội dung nghiên cứu 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp đánh giá tác dụng giảm đau, chống viêm 2.3.1.1 Phương pháp đánh giá tác dụng giảm đau trung ương bằng phương pháp mâm nóng Bố trí thí nghiệm: Đánh giá tác dụng giảm đau của thuốc trên thần kinh trung ƣơng bằng phƣơng pháp mâm nóng thực hiện trên chuột nhắt trắng [48] Đặt từng chuột nhắt trắng lên... vào tháng 12 năm 2012 Mẫu đƣợc giám định tên khoa học bởi Tiến sỹ Đỗ Thị Xuyến, Bộ môn Thực vật, Khoa Sinh học, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội và đƣợc lƣu giữ tại Khoa Hóa Phân tích - Tiêu chuẩn, Viện Dƣợc liệu A B Hình 2.1 Ảnh chụp cây gối hạc (Leea rubra Blume, Leeaceae) A Lá cây; B Rễ cây 18 2.1.3 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu Dƣợc liệu sau khi thu hái, phơi sấy khô, xay thô... trú, tác dụng tốt với các chứng đau do viêm ( au khớp, viêm cơ, viêm dây thần kinh, đau răng) * Cơ chế: Thuốc làm giảm tổng hợp prostaglandin F2, làm giảm tính cảm thụ của ngọn dây thần kinh cảm thụ với các chất gây đau của phản ứng viêm nhƣ bradykinin, seretonin….[1] * Các thuốc trong nhóm: paracetamol, ibuprofel, indomethacin, diclofenac,… 1.2.4 Dược liệu có tác dụng giảm đau, chống viêm Độc hoạt, họ