Nghiên cứu tính an toàn và tác dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc GT1 trên thực nghiệm

Bộ giáo dục và đào tạo Bộ y tế trường đại học y Hμ Nội Trương thị huyền NGHIÊN CứU TíNH AN TOμN Vμ TáC DụNG GIảM ĐAU, CHốNG VIÊM CủA BμI THUốC GT1 TRêN THựC NGHIệM Chuyên ngành : Y

Trang 1

trường đại học y Hμ Nội

Trang 2

Bộ giáo dục và đào tạo Bộ y tế

trường đại học y Hμ Nội

Trương thị huyền

NGHIÊN CứU TíNH AN TOμN Vμ TáC DụNG

GIảM ĐAU, CHốNG VIÊM CủA BμI THUốC GT1

TRêN THựC NGHIệM

Chuyên ngành : Y học cổ truyền Mã số : 60 72 60

Trang 3

Acid uric Chống viêm không steroid Cyclooxygenase

Trang 4

môc lôc

ĐẶT VẤN ĐỀ 0

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 10

1.1 TỔNG QUAN VỀ VIÊM VÀ ĐAU THEO Y HỌC HIỆN ĐẠI 10

1.1.1 Viêm 10

1.1.2 Đau 13

1.1.3 Các thuốc giảm đau, chống viêm 15

1.2 TỔNG QUAN VIÊM VÀ ĐAU THEO Y HỌC CỔ TRUYỀN 18

1.2.1 Sơ lược quan niệm viêm và đau theo y học cổ truyền 18

1.2.2 Chứng thống phong theo quan niệm của y học cổ truyền 19

1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU CÁC THUỐC Y HỌC CỔ TRUYỀN CÓ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU, CHỐNG VIÊM TRÊN THẾ GIỚI VÀ TRONG NƯỚC 21

1.3.1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới 21

1.3.2 Tình hình nghiên cứu trong nước 22

1.4 TỔNG QUAN VỀ BÀI THUỐC NGHIÊN CỨU 25

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31

2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 31

2.1.1 Thuốc và các hoá chất và các máy móc dùng trong nghiên cứu 31

2.1.2 Động vật thực nghiệm 32

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33

2.2.1 Nghiên cứu độc tính cấp 33

2.2.2 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn trên thỏ theo đường uống 33 2.2.3 Nghiên cứu tác dụng giảm đau 34

2.2.4 Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp 35

2.2.5 Phương pháp gây viêm mạn (gây u hạt) 37

2.3 ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 38

2.4 XỬ LÝ SỐ LIỆU 38

Trang 5

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 39

3.1 NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP CỦA GT1 39

3.2 NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA CAO GT1 39

3.2.1 Tình trạng chung và sự thay đổi thể trọng của thỏ 39

3.2.2 Đánh giá chức năng tạo máu 40

3.2.3 Đánh giá chức năng gan 44

3.2.4 Đánh giá chức năng thận 47

3.2.5 Thay đổi về mô bệnh học 48

3.3 TÁC DỤNG GIẢM ĐAU 62

3.3.1 Tác dụng giảm đau trung ương theo phương pháp “mâm nóng”.62 3.3.2 Tác dụng giảm đau theo phương pháp gây quặn đau bằng acid acetic 62

3.4 TÁC DỤNG CHỐNG VIÊM 64

3.4.1 Tác dụng chống viêm cấp 64

3.4.2 Tác dụng chống viêm mạn tính 67

CHƯƠNG 4 BÀN LUẬN 69

4.1 TÍNH AN TOÀN CỦA BÀI THUỐC GT1 69

4.1.1 Độc tính cấp 69

4.1.2 Độc tính bán trường diễn 69

4.2 TÁC DỤNG GIẢM ĐAU, CHỐNG VIÊM CỦA BÀI THUỐC GT1 75 4.2.1 Tác dụng giảm đau 75

4.2.2 Tác dụng chống viêm 78

4.3 CƠ CHẾ GIẢM ĐAU, CHỐNG VIÊM CỦA BÀI THUỐC GT1 82

KẾT LUẬN 90

KIẾN NGHỊ VÀ ĐỀ XUẤT 92

Trang 6

DANH MỤC BẢNG

Bảng 3.1 Ảnh hưởng của GT1 đến thể trọng thỏ 32

Bảng 3.2 Ảnh hưởng của GT1 đến số lượng hồng cầu trong máu thỏ 33

Bảng 3.3 Ảnh hưởng của GT1 đến hàm lượng huyết sắc tố trong máu thỏ 34

Bảng 3.4 Ảnh hưởng của GT1 đến hematocrit trong máu thỏ 34

Bảng 3.5 Ảnh hưởng của GT1 đến thể tích trung bình hồng cầu trong máu thỏ 35

Bảng 3.6 Ảnh hưởng của GT1 đến số lượng bạch cầu trong máu thỏ 35

Bảng 3.7 Ảnh hưởng của GT1 đến công thức bạch cầu trong máu thỏ 36

Bảng 3.8 Ảnh hưởng của GT1 đến số lượng tiểu cầu trong máu thỏ 36

Bảng 3.9 Ảnh hưởng của GT1 đến hoạt độ AST trong máu thỏ 37

Bảng 3.10 Ảnh hưởng của GT1 đến hoạt độ ALT trong máu thỏ 38

Bảng 3.11 Ảnh hưởng của GT1 đến nồng độ bilirubin toàn phần trong máu thỏ 38

Bảng 3.12 Ảnh hưởng của GT1 đến nồng độ albumin trong máu thỏ 39

Bảng 3.13 Ảnh hưởng của GT1 đến nồng độ cholesterol trong máu thỏ 39

Bảng 3.14 Ảnh hưởng của GT1 đến nồng độ creatinin trong máu thỏ 40

Bảng 3.15 Ảnh hưởng của cao GT1 lên thời gian phản ứng với kích thích nhiệt 55

Bảng 3.16 Số cơn quặn đau của chuột sau khi tiêm acid acetic 56

B¶ng 3.17 Độ tăng thể tích chân chuột sau khi gây viêm 57

Bảng 3.18 Mức độ ức chế phản ứng phù chân chuột cống trắng của cao GT158 Bảng 3.19 Ảnh hưởng của cao GT1 đến thể tích dịch rỉ viêm trong ổ bụng chuột cống trắng 59

Bảng 3.20 Ảnh hưởng của cao GT1 đến số lượng bạch cầu trong dịch rỉ viêm trong ổ bụng chuột cống trắng 59

Bảng 3.21 Ảnh hưởng của cao GT1 đến hàm lượng protein trong dịch rỉ viêm trong ổ bụng chuột cống trắng 60

Bảng 3.22 Trọng lượng trung bình u hạt thực nghiệm 61

Trang 7

DANH MỤC HÌNH

Hình 1.1: Vị trí tác dụng của CVKS và corticoid trong tổng hợp PG 9 Hình 1.2: Vai trò sinh lý của COX-1 và COX-2 9

Trang 8

DANH MỤC ẢNH

Ảnh 3.1: Hình thái vi thể gan thỏ lô chứng (thỏ số 61) (HE x 400) 42

Ảnh 3.2: Hình thái vi thể gan thỏ lô chứng (thỏ số 66) (HE x 400) 42

Ảnh 3.3: Hình thái vi thể gan thỏ lô trị 1 (thỏ số 13) 43

Ảnh 3.7: Hình thái vi thể thận thỏ lô chứng (thỏ số 61) (HE x 400) 45

Ảnh 3.8: Hình thái vi thể thận thỏ lô chứng (thỏ số 66) (HE x 400) 46

Ảnh 3.9: Hình thái vi thể thận thỏ lô trị 1 (thỏ số 13) 46

Ảnh 3.13: Hình ảnh vi thể gan thỏ lô chứng (thỏ số 62) 49

Ảnh 3.14: Hình ảnh vi thể gan thỏ lô chứng (thỏ số 69) 50

Ảnh 3.15: Hình ảnh vi thể gan thỏ lô trị 1 (thỏ số 14) 50

Ảnh 3.19: Hình ảnh vi thể thận thỏ lô chứng (thỏ số 62) 53

Ảnh 3.20: Hình ảnh vi thể thận thỏ lô chứng (thỏ số 68) 53

Ảnh 3.21: Hình ảnh vi thể thận thỏ lô trị 1 (thỏ số 14) 54

Ảnh 3.22: Hình ảnh vi thể thận thỏ lô trị 2 (thỏ số 5) 54

Trang 9

ĐẶT VẤN ĐỀ

Viêm và đau là hai triệu chứng thường gặp trong nhiều bệnh như viêm khớp, gút… Viêm vừa là một phản ứng bảo vệ cơ thể chống lại yếu tố gây bệnh, vừa là phản ứng bệnh lý vì quá trình viêm gây ra tổn thương, hoại tử, rối loạn chức năng cơ quan… có thể ở mức độ rất nặng nề nguy hiểm.Theo tổ chức y tế thế giới (WHO): Đau là một cảm giác khó chịu và một kinh nghiệm xúc cảm gây

ra bởi tổn thương tế bào thực thể hoặc tiềm tàng Đau là một cơ chế tự bảo vệ cơ thể, cảm giác đau xuất hiện tại một vị trí nào đó khi bị tổn thương, nó tạo nên một đáp ứng nhằm tránh tác nhân gây đau [7], [8], [9], [10]

Sự xuất hiện kháng sinh giúp cho thầy thuốc xử trí hiệu quả các bệnh có viêm do nhiễm khuẩn Còn các nguyên nhân gây viêm khác thì chủ yếu vẫn là điều trị triệu chứng viêm là chính Bệnh nhân thường được chỉ định dùng các thuốc chống viêm, giảm đau steroid và không steroid: Diclofenac, Voltarene, nhưng đặc biệt bị hạn chế do gây nhiều tác dụng phụ nguy hiểm Cũng đã có tác giả [46], [55], [56] đề cập đến việc dùng vitamin E với tác dụng chống oxy hoá như một liệu pháp bổ sung vào phác đồ điều trị viêm nói chung và viêm khớp nói riêng

Nước ta có nguồn dược liệu rất phong phú và một nền y học cổ truyền lâu đời Ngày nay, kết hợp học cổ truyền và y học hiện đại là phương châm của nền y học nước ta Nhiều bài thuốc, vị thuốc có tác dụng tốt trên lâm sàng nhưng chưa được nghiên cứu sâu về thành phần hóa học, tác dụng dược lý, độc tính, khả năng dung nạp và cơ chế tác dụng

Cha ông ta từ ngày xưa đã biết dùng các cây thuốc nam để chữa bệnh với phương châm “phù chính khu tà”, tức là dùng các vị thuốc và bài thuốc có tác dụng nâng cao sức đề kháng của con người, điều hoà rối loạn chức năng của tạng phủ giúp cơ thể đẩy lùi tác nhân gây bệnh [33], [34] Liệu pháp dùng thuốc hiện nay vẫn có một vị trí quan trọng Nhiều loại thuốc cũ đã được cải

Trang 10

tiến, nhiều loại thuốc mới được ra đời Dựa vào các thành tựu của y học hiện đại, các nhà khoa học Việt nam từng bước nghiên cứu nhằm làm sáng tỏ cơ chế tác dụng, dược động học, khả năng dung nạp thuốc để đạt tính an toàn, hiệu quả các vị thuốc và bài thuốc trong kho tàng quý báu của y học cổ truyền như vai trò chống viêm, giảm đau của các vị thuốc y học cổ truyền

Thực hiện phương châm kết hợp Y học hiện đại (YHHĐ) với Y học cổ truyền (YHCT), khai thác thác thế mạnh của YHCT Trên cơ sở bài thuốc cổ truyền tam diệu thang, chúng tôi đã xây dựng thành bài thuốc GT1 và ứng dụng điều trị bệnh gút có hiệu quả, làm giảm nhiều các triệu chứng đau và viêm Để khẳng định tác dụng của các vị thuốc và có cơ sở khoa học cho việc

triển khai nghiên cứu trên lâm sàng; đề tài: “Nghiên cứu tính an toàn và tác

dụng giảm đau, chống viêm của bài thuốc GT1 trên thực nghiệm” được

Trang 11

Viêm vừa là một phản ứng bảo vệ cơ thể chống lại yếu tố gây bệnh, vừa là phản ứng bệnh lý vì quá trình viêm gây ra tổn thương, hoại tử, rối loạn chức năng

cơ quan…có thể ở mức độ rất nặng nề nguy hiểm [8]

1.1.1.2 Nguyên nhân gây viêm

Mọi nguyên nhân dẫn đến tổn thương và làm chết một lượng tối thiểu tế bào tại chỗ đều có thể gây viêm tại chỗ đó Có thể xếp thành 2 nhóm lớn [8]

* Nguyên nhân bên ngoài:

- Cơ học: từ sây sát nhẹ tới chấn thương nặng

- Vật lý: nhiệt độ quá cao hoặc quá thấp làm thoái hoá protid tế bào gây tổn thương enzym; tia xạ vì tạo ra các gốc oxy tự do gây phá huỷ một số enzym oxy hoá, còn gây tổn thương ADN

- Hoá học: các chất hoá học gây huỷ hoại tế bào hoặc phong bế các hệ enzym chủ yếu

- Sinh học: là nguyên nhân phổ biến nhất gồm virut, vi khuẩn, nấm

Trang 12

* Nguyên nhân bên trong:

Có thể gặp như thiếu oxy tại chỗ, hoại tử mô, xuất huyết

Ngoài ra, viêm có thể bị gây ra do phản ứng kết hợp kháng nguyên - kháng thể như viêm cầu thận, viêm trong hiện tượng Arthus

1.1.1.3 Phân loại viêm

Có nhiều cách phân loại, mỗi cách đưa lại một lợi ích riêng [8]:

- Theo nguyên nhân: viêm nhiễm khuẩn và viêm vô khuẩn

- Theo vị trí: viêm nông, viêm sâu

- Theo dịch rỉ viêm: viêm thanh dịch, viêm tơ huyết, viêm mủ

- Theo diễn biến: viêm cấp và viêm mạn Cấp khi thời gian diễn biến ngắn (vài phút - vài ngày) và có đặc điểm tiết dịch chứa nhiều protein huyết tương và xuất ngoại nhiều bạch cầu đa nhân trung tính; mạn khi diễn biến vài ngày - tháng hoặc năm và biểu hiện về mô học là sự xâm nhập của lympho bào và đại thực bào, sự tổn thương và sửa chữa (với sự tăng sinh của mạch máu và mô xơ)

1.1.1.4 Cơ chế bệnh sinh

Viêm là hiện tượng bệnh lý bao gồm một loạt những thay đổi tại chỗ và toàn thân, bắt đầu ngay khi tác nhân gây viêm xâm nhập vào cơ thể Đặc

trưng của phản ứng viêm là sự thay đổi tính thấm thành mạch, hoạt hóa một

số tế bào và những thay đổi về chuyển hóa, về sinh tổng hợp và giáng hóa trong nhiều mô, cơ quan khác nhau Trong phản ứng viêm, các tế bào như bạch cầu đa nhân trung tính, đại thực bào, bạch cầu ưa acid, bạch cầu ưa base,

tế bào nội mô sản xuất ra các chất trung gian hoá học như prostaglandin, histamin, serotonin, leucotrien Các chất trung gian hoá học vừa giải phóng lại hoạt hoá một số tế bào khác giải phóng các polypeptid gọi là các cytokin như interleukin (1,2,3), TNF Các chất này cũng đóng vai trò quan trọng trong

quá trình viêm, từ đó gây ra hàng loạt các biến đổi và rối loạn [7], [8]

Trang 13

Tăng tính thấm thành mạch là biểu hiện quan trọng trong phản ứng viêm Các nguyên nhân gây viêm gây tổn thương tế bào làm cho các lysosom giải phóng enzym thuỷ phân gây tăng tính thấm thành mạch Tác nhân gây

viêm cũng kích thích tế bào mastocyte làm giải phóng histamin, serotonin

gây giãn mạch, tăng tính thấm thành mạch Đồng thời các cytokin tích luỹ trong ổ viêm tác động rất mạnh lên mạch máu gây giãn mạch, tăng tính thấm thành mạch Ngoài ra các tác nhân gây viêm còn hoạt hóa bổ thể, tạo prostaglandin, kích thích tế bào mastocyte giải phóng histamin và serotonin gây tăng tính thấm thành mạch [8]

Rối loạn tuần hoàn xuất hiện ngay sau phản xạ co mạch Tác động của các chất trung gian hoá học, các sản phẩm của yếu tố gây viêm (độc tố, hoá chất), các sản phẩm hoạt động thực bào của bạch đầu gây rối loạn tuần hoàn tại ổ viêm, biểu hiện bằng xung huyết, ứ trệ tuần hoàn

Bạch cầu thoát mạch và hình thành dịch rỉ viêm Ngay sau giai đoạn xung huyết động mạch, bạch cầu đã bắt đầu thoát mạch và làm nhiệm vụ thực bào Nhiều yếu tố ảnh hưởng đến quá trình xuyên mạch của bạch cầu, trong

đó các phân tứ bám dính đóng vai trò quan trọng Nhờ chúng mà bạch cầu di chuyển bằng chân giả, bám vào thành mạch, chui qua kẽ và tiến tới ổ viêm

Do tăng tính thấm thành mạch protein, fibrinogen thoát mạch hình thành dịch

rỉ viêm Thành phần dịch rỉ viêm dần dần được bổ sung các chất từ máu, các

sản phẩm chuyển hoá hoặc các sản phẩm giải phóng từ tế bào [7], [8]

Rối loạn chuyển hóa trong quá trình viêm Trong ổ viêm chuyển hóa ưa khí chỉ xảy ra trong giai đoạn xung huyết động mạch, sau đó là xung huyết tĩnh mạch làm tăng chuyển hoá kỵ khí gây nhiễm acid (nồng độ H+ tăng), ứ đọng các sản phẩm chuyển hoá dở dang của protid, acid nhân, lipid gây tăng

áp lực thẩm thấu gây đau Các phản ứng tại ổ viêm gây tăng mạnh sử dụng O2

dẫn đến tạo ra các gốc tự do từ O2 chúng có vai trò quan trọng trong việc diệt

Trang 14

khuẩn nhưng đồng thời cũng là những chất tham gia vào gây viêm và tổn thương mô [7], [8]

Tăng sinh tế bào và tái tạo mô là giai đoạn cuối cùng của quá trình viêm Viêm được kết thúc bằng một quá trình phát triển tế bào và tái tạo mô Hình ảnh đặc trưng là các mạch máu mới được hình thành, các sợi của mô liên kết được sản xuất, tạo cơ sở để mô sẹo hình thành thay thế cho nhu mô cũ

Nóng, đỏ là do giãn mạch, rối loạn vận mạch, thoát mạch các phần tử hữu hình, lưu lượng tuần hoàn tăng, chuyển hoá tại chỗ tăng

Đau là do viêm làm tổn thương tế bảo phá hủy mô gây đau, đồng thời các sản phẩm chuyển hóa của quá trình viêm kích thích vào ngọn dây thần kinh gây cảm giác đau

Như vậy, viêm là một quá trình bệnh lý không chỉ gây rối loạn tại chỗ

mà còn ảnh hưởng sâu sắc tới toàn thân

1.1.2 Đau

1.1.2.1 Khái niệm

Theo tổ chức y tế thế giới (WHO) đau là một cảm giác khó chịu và một kinh nghiệm xúc cảm gây ra bởi tổn thương tế bào thực thể hoặc tiềm tàng Đau là một cơ chế tự bảo vệ cơ thể, cảm giác đau xuất hiện tại một vị trí nào đó khi bị tổn thương, nó tạo nên một đáp ứng nhằm tránh tác nhân gây đau [9]

Cảm giác đau là một cảm giác đặc biệt, khác với các cảm giác khác Cảm giác này thông báo cho não biết kích thích có hại cho cơ thể và cần có các cơ chế

Trang 15

sinh lý và tâm lý để loại trừ kích thích đó Cảm giác đau là một cảm giác phức tạp

“Đau là một trải nghiệm khó chịu về cảm giác cũng như về cảm xúc do tổn thương có thực ở mô hoặc được cho là có tổn thương như thế gây ra” [10]

1.1.2.2 Receptor đau

* Vị trí: receptor đau ở da, mô là những đầu tự do của dây thần kinh

Chúng được phân bố rộng trên lớp nông của da và các mô bên trong như màng xương, thành động mạch, mặt khớp, màng não, là thành bao quanh các tạng, đường dẫn mật Nói chung, các mô nằm sâu ít có receptor đau, nhưng nếu các mô này bị tổn thương rộng hoặc mạn tính thì vẫn gây cảm giác đau

nhờ hoạt động cộng kích thích [10]

* Các loại receptor: các kích thích lên receptor đau là các kích thích cơ

học, nhiệt, hóa học Hầu hết các receptor đau tiếp nhận mọi loại kích thích, tuy nhiên cũng có receptor nhạy cảm hơn với một kích thích nhất định

Nói chung receptor đau với nhiệt độ hóa học và nhiệt nhận cảm giác đau cấp còn mọi loại receptor đau đều nhận cảm giác đau mạn tính

Các receptor đau không có khả năng thích nghi nên cảm giác đau luôn tồn tại để thông báo cho cơ thể biết là có tác nhân có hại và vị trí của tác nhân này Thậm chí, nếu nguyên nhân gây đau kéo dài thì các receptor đau còn tăng tính hưng phấn (giảm ngưỡng kích thích) và truyền cảm giác đau mạnh

hơn [10]

1.1.2.3 Dẫn truyền cảm giác đau

Cảm giác đau cấp được truyền vào sừng sau tủy sống theo các sợi có myelin với tốc độ 6-30 mét/giây; cảm giác đau mạn tính truyền theo sợi không có myelin với tốc độ 0,5-2 mét/giây Nếu chỉ ức chế sợi có myelin thì mất cảm giác đau cấp Nếu ức chế sợi không myelin bằng thuốc tê tại chỗ thì mất cảm giác đau chậm Trong tủy, các nơron này đi lên hoặc đi xuống từ 1 đến 3 đốt tủy và tận cùng ở chất xám sừng sau Nơron thứ hai bắt chéo sang

Trang 16

cột trắng trước bên đối diện và lên não theo nhiều đường: bó tủy sống - đồi thị,

bó tủy sống - cấu tạo lưới tận cùng ở hành não, cầu não, não giữa ở cả hai bên

Từ cấu tạo lưới nằm ở các vùng này, có nhiều nơron đi tới các nhân của đồi thị

và một số vùng ở nền não, có những sợi đi lên hoạt hóa vỏ não Nơron thứ ba từ

đồi thị lên nhiều vùng ở nền não và vùng cảm giác đau ở vỏ não [10]

1.1.2.4 Trung tâm nhận thức cảm giác đau

Đường dẫn truyền cảm giác đau tận cùng ở cấu trúc lưới của thân não, trung tâm dưới vỏ như nhân lá trong của đồi thị và vùng S-I, S-II, vùng đỉnh, vùng trán của não Kích thích vào những vùng này cảm giác đau

Cấu trúc lưới và trung tâm dưới vỏ vừa có chức năng nhận thức đau vừa tạo ra các đáp ứng về tâm lý khi đau

Vỏ não có chức năng phân tích cảm giác đau tinh vi, phân biệt vị trí,

đánh giá mức độ đau [10]

1.1.2.5 Đặc điểm của cảm giác đau

Receptor tiếp nhận cảm giác đau không có tính thích nghi

Cảm giác đau hay đi kèm với cảm giác xúc giác và khi đi kèm với cảm giác xúc giác thì việc cảm giác đau sẽ chính xác hơn

Cảm giác đau cấp thường xác định vị trí chính xác hơn so với cảm giác đau chậm (đau tạng)

Có nhiều tác nhân gây đau nhưng dù tác nhân nào thì cũng gây đau do tổn thương mô, do thiếu oxy mô hoặc do co cơ

1.1.3 Các thuốc giảm đau, chống viêm

Dựa trên cơ sở những hiểu biết về viêm, người ta xác định các thuốc chống viêm phải làm giảm hoặc đối lập với các chất trung gian hoá học trong phản ứng viêm

Trang 17

1.1.3.1 Cơ chế tác dụng của các thuốc chống viêm

Hình 1.1: Vị trí tác dụng của CVKS và corticoid trong tổng hợp PG [11]

Hình 1.2: Vai trò sinh lý của COX-1 và COX-2 [11]

Trang 18

1.1.3.2 Các nhóm thuốc giảm đau, chống viêm

* Nhóm thuốc chống viêm không steroid (CVKS):

Có tác dụng chống viêm, giảm đau và hạ nhiệt [13]

- Dẫn xuất acid salicylic: Acid salicylic, Acid acetylsalicylic (Aspirin), Methyl salicylat

- Dẫn xuất pyrazolon: Phenylbutazon (hiện nay dùng hạn chế); Phenazon (Antipyrin), Aminophenazon (Pyramidon), Metamizol (Analgin), hiện nay không dùng nữa vì có nhiều độc tính với máu, với thận

- Dẫn xuất indol: Indometacin, Sulindac, Etodolac

- Dẫn xuất enolic acid: Oxicam (Piroxicam, Meloxicam và Tenoxicam)

- Dẫn xuất acid propionic: Ibuprofen, Naproxen

- Nhóm dẫn xuất của acid phenylacetic: Diclofenac (Voltaren)

- Nhóm dẫn xuất acid heteroarylacetic: Tolmetin, Ketorolac

* Nhóm thuốc chống viêm steroid:

Đó là các glucocorticoid có nguồn gốc từ vỏ thượng thận hoặc tổng hợp Năm 1948, Hench là người đầu tiên sử dụng cortison để điều trị viêm khớp dạng thấp

Các thuốc thuộc nhóm này đều có tác dụng chống viêm, chống dị ứng

và ức chế miễn dịch Về mặt chống viêm, glucocorticoid có tác dụng trên nhiều giai đoạn của quá trình viêm và không phụ thuộc vào nguyên nhân gây

viêm [6]

* Các nhóm thuốc chống viêm khác

Thuốc ức chế miễn dịch không steroid Đây là những thuốc có tác dụng làm giảm các phản ứng miễn dịch trong cơ thể Nhóm này thường được dùng

để điều trị các bệnh có cơ chế miễn dịch và các bệnh tự miễn như luput ban

đỏ hệ thống, xơ cứng bì hệ thống tiến triển, hội chứng thận hư, bệnh ung thư Ngoài ra thuốc ức chế miễn dịch cũng có tác dụng chống viêm do ngăn ngừa

Trang 19

các phản ứng kháng nguyên - kháng thể, ức chế khả năng thực bào và quá trình tổng hợp acid nhân Tuy nhiên thuốc ức chế miễn dịch không steroid rất

ít khi được sử dụng để chống viêm đơn thuần, vì tác dụng của chúng trên hệ thống miễn dịch và các tổ chức khác trong cơ thể rất mạnh [31]

Thuốc chống sốt rét (nhóm 4-aminoquinolein) Đây là nhóm thuốc có tác dụng chủ yếu trên ký sinh trùng sốt rét Tuy vậy, thuốc cũng có tác dụng chống viêm do làm bền vững màng lysosom, ngăn cản quá trình giải phóng các enzym phân giải, ức chế quá trình viêm Do đó, thuốc được dùng để điều trị luput ban đỏ, viêm đa khớp dạng thấp [6]

1.2 TỔNG QUAN VIÊM VÀ ĐAU THEO Y HỌC CỔ TRUYỀN 1.2.1 Sơ lược quan niệm viêm và đau theo y học cổ truyền

Viêm không phải một bệnh cụ thể mà là một quá trình bệnh lý chung Viêm không có tên trong y văn của YHCT; nhưng viêm có biểu hiện sưng nóng đỏ nếu thuộc nhiệt, sưng không nóng đỏ thuộc về hàn, có thể do nguyên nhân nội nhân hoặc ngoại nhân

Đau thường đi kèm với viêm Theo y học cổ truyền đau nghĩa là

"thống'', trong y học cổ truyền là do “bất thông” của khí huyết trong kinh mạch; muốn chữa được chứng đau (chỉ thống) thì phải làm cho khí và huyết lưu thông, còn muốn huyết thông (hành huyết) thì phải hành khí (khí hành thì huyết hành, khí không hành thì huyết tắc, huyết tắc thì gây đau), thống tức bất thông, thông tức bất thống Chính vì vậy, khi chữa thống, y học cổ truyền thường dùng kèm thuốc hành khí và hành huyết, còn châm cứu, bấm huyệt, khí công chủ yếu làm thông kinh hoạt lạc, điều hòa âm dương, khí huyết [34]

Đau và viêm là triệu chứng gặp trong nhiều bệnh như bệnh lý viêm khớp trong đó bao gồm bệnh gút Y học cổ truyền xếp bệnh lý về khớp thuộc chứng tý và gút là chứng thống phong Bài thuốc GT1 được nghiên cứu trong

đề tài này xuất phát từ kinh nghiệm điều trị hiệu quả bệnh lý gút và cũng được

Trang 20

định hướng nghiên cứu tiếp để có thể ứng dụng trong điều trị bệnh lý gút - chứng thống phong của y học cổ truyền Vì vậy, trong phần tổng quan theo y học cổ truyền chúng tôi nói kỹ thêm về viêm và đau trong bệnh lý gút

1.2.2 Chứng thống phong theo quan niệm của y học cổ truyền

* Bệnh danh: y học cổ truyền gọi bệnh gút là "thống phong" nghĩa là

chỉ chứng thống tý lâu ngày khó khỏi, cho nên bệnh thống phong có thể quy thuộc phạm trù chứng tý trong đông y

Ngoài ra có nhiều bệnh danh khác để gọi "lịch tiết phong", "bạch hổ phong", "bạch hổ lịch tiết", “thống tý”

* Nguyên nhân:

Đông y cho rằng nguyên nhân gây ra chứng tý chủ yếu là bên trong (nội nhân), ngũ tạng hư tổn, công năng suy giảm, chính khí hư, quá trình chuyển hoá rối loạn, đàm ẩm sinh ra lâu ngày bị ngưng lại, khi cơ thể suy yếu thì tà khí (ngoại nhân) (nguyên nhân chủ yếu) nhân đó xâm lấn vào phối hợp cùng gây bệnh

* Biện chứng luận trị:

Thống phong do ngoại tà xâm nhập vào cơ thể, nội nhân và ngoại nhân tương kết với nhau làm tắc nghẽn kinh mạch, cản trở khí huyết vận hành, bắt đầu bệnh còn ở cơ biểu kinh lạc, lúc này chứng tý bắt đầu xuất hiện, đau là do khí huyết không thông (bất thông tắc thống) tuỳ theo mức độ của ba khí: phong, hàn, thấp mà xuất hiện đau khác nhau

Hải Thượng Lãn Ông có viết "phong thắng là chứng bệnh tý, đau chạy lung tung, hàn thắng là chứng thống tý đau nhức khó chịu, thấp thắng là chứng trước tý đau một chỗ, không thay đổi"

Lâu ngày vào cân cốt gây tổn thương tạng phủ, chức năng khí huyết bị rối loạn làm dịch ứ trệ, huyết ứ ngưng trệ thành ứ

Đàm ứ kết hình thành u cục dưới da, lâu ngày gây tổn thương can, thận, tỳ

Trang 21

Như vậy, thống phong là bệnh có đặc điểm "bản hư, tiêu thực", "bản" là

ba tạng can, thận, tỳ suy giảm, "tiêu" là đàm trọc, huyết ứ [15], [16], [23]

Vì vậy theo nguyên tắc điều trị của y học cổ truyền là "Trị bệnh tất cầu

kỳ bản, cấp tắc kỳ trị tiêu, hoãn tắc kỳ trị bản" (chữa bệnh cần trị căn nguyên bệnh, lúc cấp chữa triệu chứng, khi mạn tính phải chữa nguyên nhân)

Trong thống phong, bản bệnh thì hư, tiêu thì thực, vì vậy khi chữa phải dùng phép bổ làm cho công năng tạng phủ kiện toàn, đó là bổ can, bổ tỳ, bổ thận

Tiêu thực thì dùng tả pháp để loại tác nhân gây bệnh

Trên cơ sở của biện chứng luận trị, trên lâm sàng thường gặp các thể:

- Thể phong thấp nhiệt (đợt cấp)

+ Triệu chứng: Đột ngột khớp bàn ngón chân sưng, nóng đỏ, đau, không dám sờ đụng vào, đau đầu, sốt, khát nước, miệng khô, sợ lạnh, tiểu tiện vàng, chất lưỡi đỏ, rêu lưỡi vang, mạch phù sác

+ Phương pháp chữa: Khu phong thanh nhiệt trừ thấp, hoạt huyết, chỉ thống

Bài thuốc cổ phương:

Bài 1: Tam diệu thang gia vị: Thương truật 15g, Hoàng bá 12g, Ý dĩ nhân 30g, Ngưu tất 12g, Mộc qua 12g, Thanh đại 6g, Hoạt thạch 15g, Tri mẫu 9g, Kê huyết đằng 30g, Đương quy 15g, Xích thược 15g, Tỳ giải 12g

Bài 2: Bạch hổ gia quế chi thang gia giảm: Thạch cao sống 40g (sắc trước), Tri mẫu 12g, Quế chi 06g, Bạch thược 12g, Xích thược 12g, Kim ngân cuộng 20g, Phòng kỷ 10g, Mộc thông 10g, Hải đồng bì (Vỏ cây vông nem) 10g, Cam thảo 8g

- Thể đàm thấp uất trệ (mạn tính)

Trang 22

Gút (thống phong) mạn tính có thể tiếp theo gút cấp tính, nhưng phần lớn là bắt đầu từ từ tăng dần không qua các đợt cấp

+ Triệu chứng: nhiều khớp sưng to, đau kéo dài, co duỗi khó, tại khớp không nóng đỏ nhưng đau nhiều, biến dạng kèm theo da tím sạm đen, chườm nóng dễ chịu, chất lưỡi nhợt, rêu lưỡi trắng, xuất hiện u, cục quanh khớp, dưới

da, vành tai sờ mềm, không đau, mạch trầm huyền hoặc khẩn là biểu hiện của hàn thấp ứ trệ

+ Phương pháp chữa: Khu hàn, thông lạc, trừ thấp, chỉ thống

Bài thuốc nghiệm phương: Chế ô đầu 4g, Tế tân 4g (hai vị này sắc trước), Toàn đương quy 12g, Xích thược 12g, Uy linh tiên 10g, Thổ phục linh 16g, Tỳ giải 12g, Ý dĩ nhân 20g, Mộc thông 10g, Quế chi 6g

1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU CÁC THUỐC Y HỌC CỔ TRUYỀN CÓ TÁC DỤNG GIẢM ĐAU, CHỐNG VIÊM TRÊN THẾ GIỚI

VÀ TRONG NƯỚC

1.3.1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới

Ở Nhật Bản và Trung Quốc có nhiều nghiên cứu về các bài thuốc cổ phương có tác dụng giảm đau, chống viêm

Năm 1993, Trần Kỳ Sinh và cộng sự ở Trung Quốc [63] đã công bố

dịch chiết cây xú linh thái (Abies rephrolepis “trautv”, Maxim) có tác dụng

chống viêm cấp tính Qua thực nghiệm gây viêm cấp bằng histamin và tiêm tĩnh mạch chất xanh evans đã kết luận: tác dụng chống viêm của thuốc là do giảm tính thấm thành mạch

Trang 23

Cùng năm đó, Trần Kỳ Sinh và cộng sự [63] cũng công bố dịch chiết

cây tần cửu 1:1 (Justicia gendarussa L) có tác dụng ức chế phản ứng viêm

cấp trên chuột cống trắng, khi gây viêm bằng dextrant Kết quả thực nghiệm còn cho thấy tác dụng chống viêm của cây tần cửu tương đương với kháng sinh amoxycillin

Trường Đại học Trung y Hồ Nam nghiên cứu đánh giá tác dụng của nước sắc Thương nhĩ tử, Hy thiêm thấy có tác dụng điều trị thấp khớp, giảm sưng đau thiên về thấp tà [37]

Sở Y tế Bắc Kinh nghiên cứu đánh giá bài thuốc gồm các vị thuốc Hy thiêm thảo, Đan sâm, Xuyên sơn giáp trên bệnh nhân viêm khớp, thuốc có tác dụng tốt [44]

1.3.2 Tình hình nghiên cứu trong nước

Năm 1976, tác giả Băng Tuyết đã nghiên cứu bài thuốc Solamin (Cà gai, Thổ phục linh, Cỏ xước) Qua nghiên cứu tác giả thấy thuốc có tác dụng chống viêm rõ với giai đoạn cấp tính cũng như mãn tính Trên thực nghiệm bài thuốc gây teo tuyến ức chuột cống trắng Tác giả kết luận, thuốc có tác dụng chống viêm kiểu steroid [40]

Năm 1978, Đào Văn Phan và Nguyễn Gia Chấn qua nghiên cứu đã xác định tomatin là một alcaloid-glycosid được chiết xuất từ cây cà chua ở Việt Nam có tác dụng chống viêm [29]

Năm 1981, Viện dược liệu trung ương nghiên cứu tác dụng của bài thuốc chữa thấp khớp gồm (Hà thủ ô, Thổ phục linh, Thiên niên kiện, Hương phụ, Quế chi, Cỏ xước, Ngải cứu, Cà gai, Lá lốt, Vòi voi, Bạc thau) bằng thực nghiệm Kết quả cho thấy [39]:

+ Bài thuốc có tác dụng chống viêm cấp tính

+ Bài thuốc có tác dụng trên quá trình viêm mãn tính

Trang 24

+ Bài thuốc làm teo tuyến ức chuột cống non, biểu hiện tác dụng của thuốc chống viêm có cấu trúc steroid

Năm 1981, Tống Trần Luân và cộng sự đã nghiên cứu đánh giá tác dụng điều trị bằng bài thấp khớp II (Cây xấu hổ, Thổ phục linh, Hy thiêm, Dây đau xương, Ké đầu ngựa, Kê huyết đằng, Dây gắm, Tục đoạn, Tầm sọng) trên 44 trường hợp VKDT Kết quả tốt là 75% Thuốc có tác dụng tiêu viêm, tác dụng tốt ở giai đoạn I và II và tốt với thể phong hàn thấp tý [26]

Năm 1992, Hoàng Bảo Châu và cộng sự nghiên cứu tác dụng chống viêm, giảm đau của bài “Độc hoạt II” gồm: Độc hoạt, Tang ký sinh, Hy thiêm, Thổ phục linh, Hà thủ ô, Kê huyết đằng, Cốt toái, Can khương, Kim ngân Tác giả cho thấy thuốc có khả năng chống viêm giảm đau với các bệnh khớp do viêm [15]

Năm 1996, Đỗ Trung Đàm đã nghiên cứu tác dụng của bài thuốc chữa thấp khớp SASP - 5221 (Hy thiêm, Ngưu tất, Thổ phục, Lá lốt) trên thực nghiệm và chứng minh thuốc có tác dụng chống rỉ dịch mạnh, chống tăng sinh khá, tác dụng hạ sốt vừa phải, làm giảm lượng serotonin và tăng hàm lượng dopamin- một chất có tác dụng điều hoà viêm [21]

Năm 1996, Nguyễn Thị Bay, Trường đại học Y dược thành phố Hồ Chí Minh đã nghiên cứu dược lý thực nghiệm và lâm sàng của thuốc PT5 trên các bệnh nhân thấp khớp, tác giả thấy thuốc có tác dụng giảm đau và chống viêm trên các loại bệnh khớp như VKDT, bệnh thấp ngoài khớp và đau thấp ngoài

cơ [2]

Năm 1997, Phạm Văn Trịnh, Nguyễn Thị Hằng nghiên cứu bài: Độc hoạt Tang ký sinh điều trị viêm khớp dạng thấp, có tác dụng tốt Tỷ lệ tốt và khá là 76,7% Thuốc có tác dụng giảm đau rõ, giảm sợi huyết, giảm máu lắng [38]

Trang 25

Năm 1998, Phan Văn Các và cộng sự [18] đã công bố cao lỏng 1:1 cây Sảng pác (Misodesmi SP), có tác dụng ức chế phản ứng phù viêm cấp trên thực nghiệm khi được gây viêm bằng Dextrant Tỷ lệ ức chế phản ứng viêm phụ thuộc vào liều lượng thuốc thử

Hòe hoa tán là một bài thuốc cổ phương đã được dùng để điều trị cấp tính Năm 1998, Lương Trần Khuê và Đào Văn Phan [24] qua thực nghiệm đã xác định Hòe hoa tán có tác dụng giảm đau theo cơ chế trung ương và ngoại biên, đồng thời với liều 4g/kg hòe hoa tán có tác dụng chống viêm cấp, tương đương với Aspirin liều 0,05g/kg

Năm 1999, Đàm Trung Bảo, Nguyễn Quang Thường đã nghiên cứu xác định hoạt tính chống oxy hoá trên mô hình gây viêm cho chuột cống trắng bằng Dextrant 6% của Bồ công anh thấy có sự giảm độ sưng phù chân chuột

và lượng MDA trong huyết thanh xuống gần như bình thường so với lô đối chứng [1]

Năm 1999, Nguyễn Quang Vinh, Đỗ Trung Đàm, Nguyễn Thị Dung đã nghiên cứu tác dụng giảm đau của Cao thấp khớp II trên mô hình gây đau thực nghiệm bằng acid acetic [42]

Năm 2000, Nguyễn Tiến Phượng đã nghiên cứu tác dụng chống viêm, giảm đau của cốt khí củ trên thực nghiệm Kết quả nghiên cứu cho thấy: Cốt khí củ có tác dụng giảm đau, an thần rõ rệt; tác dụng chống viêm cấp của cốt khí củ được thể hiện qua việc làm giảm lượng dịch rỉ viêm và bạch cầu đa nhân trong dịch rỉ viêm, làm giảm trọng lượng u hạt [27]

Năm 2003, Trần Thanh Tùng đã nghiên cứu tác dụng chống viêm, giảm đau và độc tính cấp của Cốt toái bổ trên động vật thực nghiệm cho thấy Cốt toái bổ có tác dụng giảm đau, chống viêm cấp và mạn tính [36]

Năm 2003, Bùi Thùy Dương đã nghiên cứu một số tác dụng dược lý và độc tính cấp của hoa Kim ngân Kết quả nghiên cứu cho thấy Flavonoid là

Trang 26

thành phần có hoạt tính chống viêm, giảm đau và chống oxy hóa trong hoa Kim ngân [18]

Năm 2005, Đào Diệu Thúy đã nghiên cứu tác dụng chống viêm, chống

oxy hóa của cây thuốc Dây đau xương (Tinospora tomentosa) Kết quả nghiên

cứu cho thấy: có sự liên quan thuận giữa hoạt tính chống oxy hoá invivo và tác dụng giảm viêm của các dịch chiết Dây đau xương trên chuột được gây viêm bằng Carragenin [32]

Năm 2006, Nguyễn Thế Siển đã nghiên cứu tác dụng chống viêm, giảm đau và bảo vệ tế bào máu tia xạ của quả nhàu trên thực nghiệm cho thấy Cao quả nhàu làm giảm thể tích viêm chân chuột do carrageenin gây nên, giảm trọng lượng u hạt; Cao quả nhàu có tác dụng giảm đau trên mô hình mâm nóng và mô hình gây quặn đau bằng acid acetic bắt đầu từ liều 24g/kg thể trọng tương đương Aspirin 100mg/kg [43]

Năm 2010, Đặng Thị Như Hoa đã nghiên cứu tính an toàn và tác dụng điều trị bệnh gút của Cao vương tôn Kết quả nghiên cứu cho thấy Cao vương tôn có tác dụng giảm đau ở cả hai nhóm bệnh nhân gút cấp và bệnh nhân gút mạn có đợt cấp [23]

1.4 TỔNG QUAN VỀ BÀI THUỐC NGHIÊN CỨU

Bài thuốc nghiên cứu GT1 xuất sứ từ bài Tam diệu thang trong sách Y học chính truyền gồm các vị: Thương truật, Hoàng bá, Ngưu tất Bài thuốc thường được dùng chữa chứng gối cẳng chân, bàn chân sưng đau nóng đỏ Dựa trên các kết quả nghiên cứu về dược lý của y học hiện đại về tác dụng của các vị thuốc kết hợp lý luận của y học cổ truyền và kinh nghiệm thực tế điều trị trên lâm sàng, nhóm nghiên cứu đã gia thêm một số vị để tăng hiệu quả điều trị của bài thuốc như sau:

Gia thêm Kim ngân hoa, Uy linh tiên, để tăng tác dụng chống viêm tại các khớp sưng, đau trong bệnh gút

Trang 27

Gia Tri mẫu, Hoạt thạch để làm tăng tác dụng thải nhiệt, giảm sưng nóng làm giảm viêm tại các khớp

Gia thêm Kê huyết đằng, Xích thược hoạt huyết, hóa ứ, lương huyết làm giảm triệu chứng sưng khớp, giảm tình trạng đau các khớp viêm

Phối hợp thêm Tỳ giải, Xa tiền tử, Ý dĩ có tác dụng lợi niệu làm giảm nhiệt, giảm sưng nóng đỏ đau tại các khớp, hỗ trợ chống viêm

Bài thuốc gồm các vị thuốc:

Thương truật 12g Kê huyết đằng 30g

Ngưu tất 12g Xa tiền tử 10g

Hoạt thạch 10g Uy linh tiên 10gSau đây, chúng tôi xin trình bày tác dụng của từng vị thuốc theo tác dụng dược lý của y học hiện đại và lý luận của y học cổ truyền

* Thương truật

- Tên khoa học: Rhizoma Atractylodes lancea, thuộc họ cúc (Asteraceae)

- Bộ phận dùng: rễ

- Tính vi quy kinh: cay, đắng, ấm, vào tỳ, thận , can kinh

- Công dụng: có tác dụng táo thấp kiện tỳ, khu phong tán hàn Chủ yếu dùng cho bụng đầy chướng, tiết tả, không muốn ăn, thủy thũng, cước khí, cảm mạo phong hàn, quáng gà…

- Thành phần hoá học: Tinh dầu, thành phần chủ yếu của tinh dầu là : atractylon, hinesol, inulin, vitamin A, B và rất nhiều các yếu tố vi lượng

- Tác dụng dược lý: Ngoài ra còn có tác dụng bảo vệ gan, kháng khuẩn, kháng virus, giảm đường huyết [12], [14]

Trang 28

* Hoàng bá

- Tên khoa học: Cortex Phellodendron amurense thuộc họ cam quýt Rutaceae

- Bộ phận dùng: vỏ

- Tính vị quy kinh: đắng lạnh vào kinh thận, bang quang, đại trường

- Công dụng: thanh nhiệt táo thấp giải độc chữa hoàng đản, nhiễm trùng, chữa viêm khớp có sốt Giải độc: chữa mụn nhọt, viêm tuyến vú Giải

dị ứng: ngứa, ban chẩn, lợi niệu…

- Thành phần hóa học: có chứa 1,6% becberin C20H19O5N, một ít palmatin C21H23O5N, những chất có tinh thể, không chứa nitơ như Obakunon

C26H30O7 và Obakulacton C26H30O8, chất béo, hợp chất sterolic

- Tác dụng dược lý: tác dụng kháng sinh, dịch chiết bằng cồn ức chế các vi khuẩn Staphyllococus, lỵ, thổ tả Salmonella [12], [14], [17]

* Ngưu tất

- Tên khoa học: Radix Achyranthes bidentata thuộc họ Dền Amaranthaceae

- Bộ phận dùng: rễ

- Tính vị quy kinh: đắng chua, bình vào kinh can thận

- Công dụng: có tác dụng hoạt huyết, hành ứ, bổ can thận, mạnh gân cốt dùng trong bệnh viêm khớp, đau bụng, kinh nguyệt khó khăn

- Thành phần hóa học: có chất saponin, ecdysteron, inokosteron và muối kali

- Tác dụng dược lý: có tác dụng co bóp tử cung, lợi niệu, hạ cholesterol trong máu và hạ huyết áp [12], [14], [25]

* Kim ngân hoa:

- Tên khoa học: Flos Lonicerae thuộc họ cơm cháy (Caprifoliaceae)

- Bộ phận dùng: hoa

Trang 29

- Tính vị quy kinh: vị ngọt tính hàn không độc vào 4 kinh phế, vị, tâm, tỳ

- Công dụng: thanh nhiệt giải độc dùng chữa sốt, mụn nhọt, tả lỵ, giang mai

- Thành phần hoá học: có Inozit 1%, hoa kim ngân có 1 glucozit gọi là lonixerin có cấu tạo Luteolin - 7 rhamnoza, có tinh dầu

- Tác dụng dược lý: tác dụng kháng khuẩn đối với tụ cầu, trực khuẩn thương hàn, trực khuẩn lỵ, liên cầu khuẩn, tăng cường đồng hoá chất béo, chống sốc phản vệ [12], [14], [17], [25]

* Tri mẫu

- Tên khoa học: Rhizoma Anemarrhenae thuộc họ Hành tỏi Liliaceae

- Bộ phận dùng: thân, rễ

- Tính vị quy kinh: đắng lạnh vào kinh tỳ, vị thận

- Công dụng: có tác dụng tư thận, bổ thủy, tả hỏa chữa bệnh tiêu khát,

hạ thủy ích khí, chữa ho, tiêu đờm, chữa sốt, sốt do viêm phổi

- Thành phần hóa học: có chất saponin Ngoài ra còn một chất có tinh thể chưa xác định [12], [14], [25]

* Hoạt thạch

- Tên khoa học: Talcum là một chất bộn trắng mịn, sờ trơn mát, không

tan trong nước

- Tính vị quy kinh: ngọt, đạm, lạnh vào tỳ, phế

- Công dụng: có tác dụng chữa bệnh sốt, tả, lỵ, lợi niệu, sốt khát nước, viêm ruột, lỵ, da vàng, hoạt thai, trợ sản, làm xuống sữa

- Thành phần hóa học: có magiê silicat 3MgO.4SiO2.H2O [12], [25]

* Kê huyết đằng

- Tên khác: dây máu người, máu gà, máu chó, hồng đằng

- Tên khoa học: Sargentodoxa cuneata (oliv), thuộc họ Huyết đằng (Sargentodoxceae)

- Bộ phận dùng: thân gỗ

Trang 30

- Tính vị quy kinh: vị đắng tính bình vào kinh tâm can

- Công dụng: khứ ứ thông kinh lạc, bổ huyết hành huyết, khoẻ gân cốt, thanh nhiệt giải độc

Tác dụng dược lý: ức chế viêm khớp và giảm sức co bóp cơ tim trên thí nghiệm, thúc đẩy sự chuyển hoá năng lượng ở thận và tử cung [12], [14], [17], [25]

- Tính vị quy kinh: đắng, bình vào can, vị

- Công dụng: chữa sưng đau khớp, mụn nhọt, trĩ chứng đái đục photphat, dưỡng chấp [12], [25]

* Uy linh tiên

- Tên khoa học: Radix et Rhizoma clematidis, thuộc họ Hoàng liên

anunculaceae

- Bộ phận dùng: rễ, thân rễ

- Tính vị qui kinh: cay mặn ấm, tính bình vào kinh bàng quang

- Tác dụng: khứ phong thấp, thông kinh lạc, chỉ thống, điều trị các chứng phong hàn thấp ngưng trệ, các khớp co duỗi khó khăn

Dùng ngoài chữa hắc lào, lở ngứa, eczema mạn tính Dùng trong chữa

ho, lao phổi, viêm phế quản cấp và mạn, phong thấp tê bại, huyết áp cao

Trang 31

- Thành phần hóa học: trong rễ cây có 1,87% chất gần giống axít cryzophanic và acid trangulic, đó là hoạt chất của cây và gọi là rinacantin

C14H18O4

-Tác dụng dược lý: tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm, có tác dụng chống alkyl hóa, hạ huyết áp, hạ AU, ức chế sự kết tập tiểu cầu [12], [25]

* Xa tiền tử

- Tên khoa học: Semen Plantaginis thuộc họ mã đề

- Bộ phận dùng: hạt phơi hay sấy khô

- Tính vị qui kinh: ngọt, lạnh vào kinh can thận, tiểu trường

- Tác dụng: lợi niệu, thanh nhiệt, thanh can, hoạt thai, chữa viêm bàng quang đái buốt, đái rắt, chữa phù do viêm thận, cầm ỉa chảy, đái đỏ, ít

- Thành phần hóa học: trong hạt chứa nhiều chất nhầy, acid plantenolic, adenin và cholin

- Tác dụng dược lý: tác dụng lợi tiểu, tác dụng kháng sinh, tác dụng chữa ho [12], [14], [17], [25]

* Ý dĩ

- Tên khoa học: Semen coicis, thuộc họ lúa Poaceae (Gramineae)

- Tính vị quy kinh: ngọt, đạm, lạnh vào tỳ phế

- Tác dụng: kiện tỳ trừ thấp, chữa đau khớp, phù do thiếu dinh dưỡng, trừ mủ, tiêu viêm

- Thành phần hóa học: trong ý dĩ nhân có khoảng 65% chất hydratcarbon, 5,4% chất béo, 13,7% chất protit và các acid amin như leucin, lysin, arginin, tysosin, histidin, chất coixin hay coixol là một chất protit đặc biệt của ý dĩ và axit glutamic.Tro có khoảng 2,3%

- Tác dụng dược lý: hạ huyết áp, tác dụng đối với cơ xương và cuối dây thần kinh vận động của động vật thực nghiệm lúc đầu có hiện tượng hưng

phấn, sau thì ức chế

Trang 32

CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

2.1.1 Thuốc và các hoá chất và các máy móc dùng trong nghiên cứu

2.1.1.1 Thuốc nghiên cứu: Cao nước chiết xuất từ bài thuốc GT1

Thành phần 1 thang thuốc GT1 gồm:

Thương truật 12g Kê huyết đằng 30g

Ngưu tất 12g Xa tiền tử 10g

Hoạt thạch 10g Uy linh tiên 10g

Tất cả các dược liệu trên đạt tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam IV được bào chế và chiết xuất dưới dạng cao nước có tỷ lệ 5:1 (5g dược liệu/1ml cao), được đựng trong các chai nhựa nút kín Quá trình chiết xuất được thực hiện bằng máy tự động tại khoa Dược -Bệnh viện YHCT Bộ Công an

Trong các thí nghiệm, pha loãng cao thuốc với nước thành các nồng độ

khác nhau để cho súc vật uống

2.1.1.2.Hoá chất

- Kit định lượng các enzym và chất chuyển hoá trong máu: ALT (alanin aminotransferase), AST (aspartat aminotransferase), bilirubin toàn phần, albumin, cholesterol và creatinin của hãng Hospitex Diagnostics (Italy) và hãng DIALAB GmbH (Áo), định lượng trên máy Screen master của hãng Hospitex Diagnostics (Italy)

- Dung dịch xét nghiệm máu ABX Minidil LMG của hãng ABX – Diagnostics, định lượng trên máy Vet abcTM Animal Blood Counter

Trang 33

- Các hoá chất xét nghiệm và làm tiêu bản mô bệnh học

- Codein phosphat của Viện kiểm nghiệm Trung ương

- Aspegic (DL-lysine acetylsalicylate) gói bột 100mg của hãng Sanofi- Aventis (Pháp)

- Prednisolon viên nén hàm lượng 5mg (Hà Nội Pharma JSC)

- Kit định lượng protein của hãng Hospitex Diagnostics (Italy)

- Các hoá chất đạt tiêu chuẩn phòng thí nghiệm: acid acetic, carragenin, formaldehyd

2.1.1.3.Máy móc dùng trong nghiên cứu

- Máy Hot plate model - DS37 của hãng Ugo-Basile (Italy)

- Máy đo viêm cấp Plethysmometer No 7140 của hãng Ugo-Basile (Italy)

- Máy Screen master của hãng Hospitex Diagnostics (Italy)

- Máy Vet abcTM Animal Blood Counter của hãng Ugo-Basile (Italy)

2.1.2 Động vật thực nghiệm

- Chuột nhắt trắng chủng Swiss, trọng lượng 18-22g do Viện Vệ sinh

dịch tễ TW cung cấp

- Thỏ chủng Oryctolagus cuniculus cả hai giống, khoẻ mạnh, lông trắng,

trọng lượng 1,8-2,5 kg do Trung tâm dê-thỏ Sơn Tây (Viện chăn nuôi) cung cấp

- Chuột cống trắng cả hai giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 150 - 180g, do Trung tâm chăn nuôi, Học viện Quân y cung cấp

Súc vật được nuôi trong phòng thí nghiệm 3 ngày trước khi nghiên cứu

và trong suốt thời gian nghiên cứu bằng thức ăn chuẩn dành riêng cho súc vật (do Viện Vệ sinh dịch tễ trung ương và Công ty liên doanh Guyomarc’h-VCN sản xuất), uống nước tự do

Trang 34

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Trước khi tiến hành thí nghiệm, cho chuột nhịn ăn qua đêm

Bảy lô chuột nhắt trắng, mỗi lô 10 con, được uống thuốc thử theo liều tăng dần từ 225g dược liệu/kg đến 375g dược liệu/kg với lượng thuốc uống hằng định mỗi lần 0,25ml/10g cân nặng, uống 3 lần/24 giờ, các lần uống cách nhau 2 giờ

Theo dõi số chuột chết trong 72 giờ đầu và tình trạng chung của chuột trong suốt 7 ngày sau uống thuốc thử (ăn uống, hoạt động, bài tiết ) Những chuột chết trong 2 giờ đầu được mổ để quan sát đại thể

Xác định LD50 theo tỷ lệ chuột chết trong 72 giờ đầu sau uống mẫu thử theo phương pháp Litchfield - Wilcoxon

2.2.2 Nghiên cứu độc tính bán trường diễn trên thỏ theo đường uống

Thỏ được chia làm 3 lô, mỗi lô 10 con, mỗi con nhốt riêng một chuồng

- Lô chứng: uống nước cất

- Lô trị 1: uống cao GT1 liều 5,6g dược liệu/ kg /ngày

(liều có tác dụng tương đương trên người, tính theo hệ số 3)

- Lô trị 2: uống cao GT1 liều 16,8g dược liệu /kg/ngày

(liều gấp 3 lần lô trị 1)

Thỏ được uống nước hoặc thuốc thử với thể tích đồng nhất là 4ml/kg trong 4 tuần liền, mỗi ngày một lần vào buổi sáng Sau 4 tuần uống thuốc, thỏ được ngừng uống thuốc và nuôi trong 2 tuần để theo dõi, đánh giá sự phục hồi

Trang 35

Các chỉ tiêu theo dõi trước và trong quá trình nghiên cứu:

- Tình trạng chung, thể trọng của thỏ

- Đánh giá chức phận tạo máu thông qua số lượng hồng cầu, thể tích trung bình hồng cầu, hàm lượng hemoglobin, hematocrit, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu và số lượng tiểu cầu

- Đánh giá chức năng gan thông qua định lượng hoạt độ một số enzym

và chất chuyển hoá trong máu: ALT, AST, bilirubin toàn phần, albumin và cholesterol

- Đánh giá chức năng thận thông qua định lượng nồng độ creatinin huyết thanh Các thông số theo dõi được kiểm tra vào trước lúc uống thuốc, sau 2 tuần uống thuốc, sau 4 tuần uống thuốc và sau 2 tuần ngừng thuốc

- Mô bệnh học:

Sau 4 tuần uống thuốc, 30% số thỏ ở mỗi lô bị giết để kiểm tra mô bệnh học (đại thể, vi thể) Số còn lại được nuôi thêm 2 tuần nữa (ngừng uống thuốc), sau đó kiểm tra lại mô bệnh học như trên

Các xét nghiệm vi thể được thực hiện tại Trung tâm nghiên cứu và phát hiện sớm ung thư - Liên hiệp các hội khoa học và kỹ thuật Việt Nam (do PGS.TS Lê Đình Roanh đọc kết quả vi thể)

2.2.3 Nghiên cứu tác dụng giảm đau

2.2.3.1 Tác dụng giảm đau theo phương pháp “mâm nóng”

Chuột nhắt trắng được chia ngẫu nhiên thành 4 lô, mỗi lô 10 con:

- Lô 1: uống nước cất

- Lô 2: uống Codein liều 10mg/kg/ngày

- Lô 3: uống cao GT1 liều 22,3g dược liệu/kg/ngày

(gấp 2 lần liều lô 3)

Trang 36

Chuột được uống nước hoặc thuốc mỗi ngày 1 lần vào buổi sáng, với thể tích 0,1ml/10g/ngày trong 5 ngày liên tục

Đo thời gian phản ứng với nhiệt độ của chuột trước khi uống thuốc và sau khi uống thuốc lần cuối cùng 1 giờ Đặt chuột lên mâm nóng (Hot plate), luôn duy trì ở nhiệt độ 56oC bằng hệ thống ổn nhiệt Tính thời gian từ lúc đặt chuột lên mâm nóng đến khi chuột liếm chân sau Loại bỏ những chuột phản ứng quá nhanh (trước 8 giây) hoặc quá chậm (sau 30 giây) So sánh thời gian phản ứng với kích thích nhiệt trước và sau khi uống thuốc thử

2.2.3.2 Tác dụng giảm đau theo phương pháp gây quặn đau bằng acid acetic

Chuột nhắt trắng được chia ngẫu nhiên thành 4 lô, mỗi lô 10 con:

- Lô 1: uống nước cất

- Lô 2: uống Aspegic liều 100mg/kg/ngày

- Lô 3: uống cao GT1 liều 22,3 g dược liệu/kg/ngày

2.2.4 Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp

2.2.4.1 Tác dụng chống viêm cấp trên mô hình gây phù chân chuột bằng carrageenin

Chuột cống trắng được chia ngẫu nhiên thành 4 lô, mỗi lô 10 con

- Lô 1: uống nước cất 1,0ml/100g/ ngày

Trang 37

- Lô 2: uống Aspegic 150 mg/kg/ngày

( Liều có tác dụng tương đương trên người, tính theo hệ số 7)

(gÊp 2 lÇn liÒu l« 3)

Các thuốc chuẩn hoặc thuốc thử được pha trong nước cất, cho chuột

uống với thể tích 1,0ml/100g/ngày

Chuột được uống nước hoặc thuốc trong 5 ngày liền trước khi gây viêm Ngày thứ 5, sau khi uống thuốc thử 1 giờ, gây viêm bằng cách tiêm carrageenin 1% (pha trong nước muối sinh lý) 0,05ml/chuột vào gan bàn chân sau, bên phải của chuột

Đo thể tích chân chuột (đến khớp cổ chân) bằng dụng cụ chuyên biệt (Plethysmometer) vào các thời điểm: trước khi gây viêm, sau khi gây viêm 2 giờ, 4 giờ, 6 giờ và 24 giờ

Kết quả được tính theo công thức của Fontaine

- Độ tăng thể tích chân của từng chuột được tính theo công thức:

ΔV% =

0

0 t

V

V −

x 100

Trong đó: V0: thể tích chân chuột trước khi gây viêm

Vt: thể tích chân chuột sau khi gây viêm

- Tác dụng chống viêm của thuốc được đánh giá bằng khả năng ức chế phản ứng phù (I%)

I% =

%V

C

t C

Δ

−Δ

x 100 Trong đó:

Trang 38

2.2.4.2 Tác dụng chống viêm cấp trên mô hình gây viêm màng bụng chuột

Chuột cống trắng được chia ngẫu nhiên thành 4 lô, mỗi lô 10 con Các lô

chuột được uống nước, thuốc chuẩn hoặc thuốc thử tương tự như trong thí nghiệm đánh giá tác dụng chống viêm cấp trên mô hình gây phù chân chuột

bằng carrageenin

Chuột được uống nước hoặc thuốc 5 ngày liền trước khi gây viêm Ngày thứ 5, sau khi uống thuốc thử 1 giờ, gây viêm màng bụng chuột bằng dung dịch carrageenin 0,05g + formaldehyd 1,4 ml, pha vừa đủ trong 100ml nước muối sinh lý, với thể tích tiêm 1 ml/100g vào ổ bụng mỗi chuột

Sau gây viêm 24 giờ, mở ổ bụng chuột hút dịch rỉ viêm, đo thể tích, đếm số lượng bạch cầu/ml dịch rỉ viêm và định lượng protein trong dịch rỉ viêm

2.2.5 Phương pháp gây viêm mạn (gây u hạt)

Chuột nhắt trắng, được chia ngẫu nhiên thành 4 lô, mỗi lô 10 con

- Lô 1 (đối chứng): uống nước cất, thể tích 0,2 ml/10g

- Lô 2: uống prednisolon liều 5 mg/kg

- Lô 3: uống thuốc thử GT1 liều 22,3 g dược liệu/kg

- Lô 4: uống thuốc thử GT1 liều 44,6 g dược liệu/kg

Gây viêm mạn tính bằng cách cấy sợi amiant trọng lượng 6 mg tiệt trùng (sấy 120oC trong 1 giờ) đã được tẩm carrageenin 1%, ở da gáy của mỗi chuột Sau khi cấy u hạt, các chuột được uống nước cất hoặc thuốc thử liên tục trong 7 ngày Ngày thứ 7 sau khi uống thuốc thử lần cuối 1 giờ tiến hành giết chuột bằng clorofoc, bóc tách khối u hạt, sấy khô ở nhiệt độ 560C trong 18 giờ Cân trọng lượng u hạt sau khi đã được sấy khô

So sánh trọng lượng trung bình của khối u hạt (đã trừ trọng lượng amiant) So sánh trọng lượng trung bình của khối u hạt (đã trừ trọng lượng

Trang 39

amiant) giữa các lô uống thuốc và lô chứng Tác dụng chống viêm được biểu thị bằng tỷ lệ % giảm trọng lượng khối u

2.3 ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU

- Địa điểm nghiên cứu: Bộ môn Dược lý trường Đại học Y Hà Nội

- Thời gian nghiên cứu: từ tháng 4 /2011 đến tháng 9/2011

2.4 XỬ LÝ SỐ LIỆU

Các số liệu nghiên cứu được xử lý thống kê theo phương pháp t-test

Student và test “trước- sau”

Số liệu được biểu diễn dưới dạng : X ± SD

Sự khác biệt có ý nghĩa khi p < 0,05

Trang 40

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP CỦA GT1

động bình thường Không có biểu hiện bất thường và không có chuột nào chết trong vòng 72 giờ sau uống thuốc, không quan sát thấy dấu hiệu ngộ độc nào

ở chuột trong 7 ngày theo dõi Như vậy, liều dung nạp tối đa theo đường uống của GT1 là 375g dược liệu/kg thể trọng chuột nhắt

3.2 NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA CAO GT1 3.2.1 Tình trạng chung và sự thay đổi thể trọng của thỏ

3.2.1.1 Tình trạng chung

Trong thời gian thí nghiệm, thỏ ở cả 3 lô hoạt động bình thường, nhanh nhẹn, mắt sáng, lông mượt, ăn uống tốt, phân khô Không thấy biểu hiện gì đặc biệt ở cả 3 lô thỏ trong suốt thời gian nghiên cứu

3.2.1.2 Sự thay đổi thể trọng thỏ

Bảng 3.1 Ảnh hưởng của GT1 đến thể trọng thỏ

Lô chứng Lô trị 1 Lô trị 2

Thời gian Trọng lượng

(kg)

SD

% tăng trọng lượng

SD

Trọng lượng (kg)

SD

Trọng lượng (kg)

SD