Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và độc tính cấp của dây chìa vôi (cissus modeccoides planch )

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG SĨ HÙNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ ĐỘC TÍNH CẤP CỦA DÂY CHÌA VƠI (Cissus modeccoides Planch.) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG SĨ HÙNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ ĐỘC TÍNH CẤP CỦA DÂY CHÌA VƠI (Cissus modeccoides Planch.) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC LIỆU - DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720206 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Vũ Văn Điền HÀ NỘI 2018 LỜI CẢM ƠN Trong trình thực luận văn Trường Đại học Dược Hà Nội, nhận nhiều gúp đỡ quý báu thầy giáo, cô giáo, bạn đồng nghiệp gia đình Trước hết, tơi xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Vũ Văn Điền người thầy tận tình hướng dẫn, hết lòng giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu thực luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn thầy giáo, cô giáo Bộ môn Dược học cổ truyền, Bộ môn Dược liệu, Bộ môn Thực vật thuộc trường Đại học Dược Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới người bạn, người thân gia đình bố, mẹ kịp thời động viên, tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận văn Một lần nữa, xin trân trọng cảm ơn tất giúp đỡ quý báu đó! Tác giả Hoàng Sĩ Hùng MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ CHI CISSUS 1.1.1.Thực vật học 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Kinh nghiệm sử dụng loài chi Cissus nhân dân 1.1.4 Nghiên cứu tác dụng sinh học 1.2 TỔNG QUAN VỀ DÂY CHÌA VÔI (Cissus modeccoides Planch) 12 1.2.1 Thực vật học 12 1.2.2 Thành phần hóa học 13 1.2.3 Tác dụng sinh học công dụng 14 1.3 VẤN ĐỀ CẦN GIẢI QUYẾT 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 16 2.1.1 Nguyên liệu 16 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu 16 2.1.3 Động vật thí nghiệm 17 2.2 Phương pháp nghiên cứu 17 2.2.1 Mô tả thực vật 17 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 18 2.2.3 Phương pháp thử độc tính cấp 19 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 21 3.1 MÔ TẢ THỰC VẬT 21 3.1.1 Mơ tả đặc điểm hình thái thực vật giám định tên khoa học Dây chìa vôi21 3.1.2 Đặc điểm vi học cấu tạo giải phẫu 23 3.2 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC 29 3.2.1 Định tính nhóm chất 29 3.2.2 Chiết xuất phân lập chất 36 3.2.2.1 Chiết xuất 36 3.2.2.2 Phân lập phương pháp sắc ký cột 38 3.2.2.3 Xác định cấu trúc chất phân lập 41 3.3 THỬ ĐỘC TÍNH CẤP 48 3.3.1 Thử nghiệm thăm dò 48 3.3.2 Thử nghiệm thức 48 3.3.3 Kết luận 49 CHƯƠNG BÀN LUẬN 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Viết đầy đủ 13 Carbon 13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy C-NMR (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13) H-NMR Proton Magnetic Resonance Spectroscopy (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) BuOH Buthanol CC Columm Chromatography (Sắc ký cột) CTC Cao phần mặt đất Dây chìa vơi chiết cồn DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer EtOAc Ethyl acetat EtOH Ethanol HMBC Heteronuclear Mutiple Bond Coherence HSQC Heteronuclear Singer Quantum Coherence MeOH Methanol MS Mass Spectroscopy ( Phổ khối lượng) NMR Nuclear magnetic resonance spectrometry (phổ cộng hưởng từ hạt nhân) SKLM Sắc ký lớp mỏng TLTK Tài liệu tham khảo TT Thuốc thử DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Tóm tắt tác dụng dược lý số lồi thuộc chi Trang 11 Cissus Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất có phần 34 mặt đất Dây chìa vơi (Cissus modeccoides Planch.) Bảng 3.2 Số liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR N1R36 42 Kaemferol [125/500 MHz, δ (ppm)] Bảng 3.3 Số liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR N2R46 44 Quercetin [125/500 MHz, δ (ppm)] Bảng 3.4 Số liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR N3R47 46 afzelin [125/500 MHz, δ (ppm)] Bảng 3.5 Bố trí thí nghiệm cho thử độc tính cấp cao Dây chìa vơi 49 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang 22 Hình 3.2 Cơ quan sinh dưỡng Dây chìa vơi (Cissus modeccoides Planch.) Vi phẫu thân dây Dây chìa vơi Hình 3.3 Vi phẫu Dây chìa vơi 27 Hình 3.4 Bột thân Dây chìa vơi 28 Hình 3.5 Bột Dây chìa vơi 29 Hình 3.6 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn Dây chìa vơi 37 Hình 3.7 Sơ đồ quy trình phân lập chất từ phân đoạn ethyl 40 Hình 3.1 25 acetat Hình 3.8 Cấu trúc N1R36: Kaempferol 43 Hình 3.9 Cấu trúc N2R46: Quercetin 45 Hình 3.10 Cấu trúc hóa học hợp chất N3R47: Afzelin 48 ĐẶT VẤN ĐỀ Trên giới, thảm thực vật tự nhiên nguồn quan trọng cung cấp chất có hoạt tính sinh học dùng làm thuốc Thuốc có nguồn gốc tự nhiên thường có ưu điểm độc tính thấp dễ thể chấp nhận Do đó, việc nghiên cứu nhằm tìm hoạt chất sinh học có nguồn gốc tự nhiên ngày phát triển Việt Nam quốc gia có thảm thực vật phong phú, với nhiều loài sử dụng làm thuốc Tuy nhiên, nhiều lồi chưa nghiên cứu đầy đủ, có lồi Dây chìa vơi Dây chìa vơi biết đến với tên Bạch phấn đằng, tên khoa học Cissus modeccoides Planch Cây thuộc chi Cissus, chi có nhiều lồi sử dụng làm thuốc chữa bệnh Cây mọc hoang rải rác hầu hết tỉnh đồng trung du [16] Một số loài thuộc chi Cissus nghiên cứu giới, với tác dụng giúp ngăn ngừa béo phì, điều trị bệnh xương khớp, tiểu đường, chống viêm, chống oxi hóa…[33] Tuy nhiên, nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học lồi Dây chìa vơi Việt Nam hạn chế Người dân sử dụng Dây chìa vơi theo kinh nghiệm dân gian điều trị đau nhức xương, đau đầu, phong tê thấp, thoát vị đĩa đệm, vết thương rắn cắn [12] Để góp phần bước chứng minh kinh nghiệm sử dụng Dây chìa vơi dân gian, xác định thành phần hóa học có hoạt tính sinh học đánh giá tính an tồn việc sử dụng Dây chìa vơi Trong khuôn khổ luận văn tiến hành đề tài “Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học độc tính cấp Dây chìa vơi (Cissus modeccoides Planch).” với mục tiêu sau: Giám định tên khoa học, mô tả đặc điểm thực vật, đặc điểm vi học lồi Dây chìa vơi thu hái Bắc Giang Định tính nhóm chất hữu cơ, phân lập xác định cấu trúc chất từ Dây chìa vơi Đánh giá độc tính cấp cao chiết ethanol Dây chìa vơi Để đạt mục tiêu đề ra, luận văn tiến hành với nội dung sau: Về thực vật: - Mơ tả đặc điểm hình thái thực vật lồi Dây chìa vơi thu hái Bắc Giang - Mơ tả đặc điểm vi phẫu đặc điểm vi học bột thân, Dây chìa vơi Về hóa học: - Định tính nhóm chất hữu phần mặt đất Dây chìa vơi - Phân lập nhận dạng chất từ Dây chìa vơi Về thử độc tính - Đánh giá độc tính cấp cao chiết ethanol Dây chìa vơi ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG SĨ HÙNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ ĐỘC TÍNH CẤP CỦA DÂY CHÌA VƠI (Cissus modeccoides Planch. ) LUẬN VĂN... định thành phần hóa học có hoạt tính sinh học đánh giá tính an tồn việc sử dụng Dây chìa vơi Trong khn khổ luận văn chúng tơi tiến hành đề tài Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học độc. .. liệu, Dây chìa vơi thuốc có Việt Nam số nước giới chưa nghiên cứu đầy đủ thực vật thành phần hóa học tác dụng sinh học Vì vậy, chúng tơi đặt vấn đề nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học