Nghiên cứu định lượng saponin triterpenoid trong cao rau má bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI BÙI THỊ THẢO NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƢỢNG SAPONIN TRITERPENOID TRONG CAO RAU MÁ BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI BÙI THỊ THẢO NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƢỢNG SAPONIN TRITERPENOID TRONG CAO RAU MÁ BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƢỢC LIỆU-DƢỢC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720206 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Đỗ Quyên TS Hà Vân Oanh HÀ NỘI - 2018 LỜI CẢM ƠN Trong trình nghiên cứu hồn thành luận văn này, tơi nhận đƣợc nhiều giúp đỡ quý báu từ thầy cô giáo đồng nghiệp, quan, gia đình bạn bè Trƣớc hết, tơi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Đỗ Quyên, TS Hà Vân Oanh, Ths Phạm Tuấn Anh ngƣời thầy trực tiếp hƣớng dẫn, hết lòng bảo tận tình động viên tơi suốt q trình học tập nghiên cứu khoa học Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban giám hiệu, Phòng sau đại học, thầy giáo mơn Thực vật - Dƣợc liệu – Dƣợc cổ truyền – Đại học Dƣợc Hà Nội giúp đỡ, tạo điều kiện đóng góp ý kiến cho tơi q trình thực nghiên cứu Lời cuối cùng, tơi xin đƣợc bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè ln bên cạnh động viên, ủng hộ tơi suốt q trình học tập đạt đƣợc kết nhƣ ngày hôm Hà Nội, ngày 03 tháng năm 2018 Học viên Bùi Thị Thảo MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ DANH MỤC CÁC BẢNG ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Rau má (Centella asiatica (L.) Urb) 1.1.1 Phân loại đặc điểm hình thái Rau má 1.1.2 Thành phần hóa học 1.1.3 Tác dụng dược lý cơng dụng Rau má 1.2 Tổng quan phƣơng pháp định lƣợng saponin triterpenoid 10 Rau má 1.2.1 Chuyên luận Rau má phương pháp định lượng saponin 10 triterpenoid số chuyên luận Dược điển 1.2.2 Các nghiên cứu khác 12 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 17 2.2 Chất chuẩn, hóa chất thiết bị 17 2.2.1 Chất chuẩn 17 2.2.2 Hóa chất 17 2.2.3 Thiết bị 17 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Xây dựng phương pháp định lượng saponin triterpenoid cao 18 Rau má HPLC 2.3.2 Thẩm định phương pháp định lượng saponin triterpenoid 19 cao Rau má HPLC 2.3.3 Định lượng saponin triterpen số mẫu cao Rau má 21 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 22 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 23 3.1 Xây dựng thẩm định phƣơng pháp định lƣợng saponin 23 triterpenoid cao Rau má HPLC 3.1.1 Kết điều chế cao khô Rau má 23 3.1.2 Triển khai phương pháp định lượng saponin triterpenoid 24 cao Rau má HPLC 3.1.3 Chương trình sắc ký định lượng saponin triterpenoid cao Rau 33 má HPLC 3.1.4 Thẩm định phương pháp định lượng saponin triterpenoid 34 cao Rau má HPLC 3.2 Kết định lƣợng saponin triterpen số mẫu cao Rau má 41 CHƢƠNG BÀN LUẬN 46 4.1 Về xây dựng chƣơng trình sắc ký 46 4.2 Về thẩm định phƣơng pháp 47 4.3 Về kết định lƣợng saponin triterpen số mẫu cao Rau 48 má KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 49 A KẾT LUẬN 49 B ĐỀ XUẤT 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC STT DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, Tên đầy đủ chữ viết tắt ACN As AOAC DAD DĐVN EP EtOH HPLC HPTLC Acetonitril Asymmetry factor: Hệ số đối xứng pic Association of Official Analytical Chemists: Hiệp hội nhà hóa phân tích thức Diode array detector: Detector mảng diod Dƣợc điển Việt Nam European Pharmacopoeia: Dƣợc điển Châu Âu Ethanol High performance liquid chromatography: Sắc ký lỏng hiệu cao High performance thin layer chromatography: Sắc ký lớp mỏng hiệu cao MeOH 10 NXB 11 R Correlation coefficient: Hệ số tƣơng quan 12 Rs Resolution: Độ phân giải 13 RP-HPLC 14 % RSD 15 SD 16 SKĐ 17 tr Retention time: Thời gian lƣu 18 x Giá trị trung bình 19 USP 20 UV-VIS Methanol Nhà xuất Reverse phase-HPLC: Sắc ký lỏng pha đảo % Relative standard deviation: % Độ lệch chuẩn tƣơng đối Standard deviation: Độ lệch chuẩn Sắc ký đồ United States Pharmacopoeia: Dƣợc điển Mỹ Ultraviolet-Visible: Tử ngoại khả kiến DANH MỤC CÁC BẢNG STT Bảng 1.1 Tên bảng Các điều kiện định lƣợng saponin triterpenoid Rau má HPLC Bảng 3.1 Khối lƣợng cao Rau má Bảng 3.2 Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng 3.5 Bảng 3.6 Trang 13, 14, 15 24 Thời gian lƣu diên tích pic mẫu chuẩn asiaticosid tiêm lần lặp lại nồng độ 300µg/ml 35 Thời gian lƣu chất mẫu cao Rau má chuẩn tiêm lần lặp lại nồng độ mg/ml 35 Diện tích pic cao Rau má chuẩn chất mẫu cao Rau má chuẩn tiêm lần lặp lại nồng độ mg/ml 36 Tổng diện tích pic saponin triterpenoid hàm lƣợng saponin triterpenoid tính theo asiaticosid mẫu thử CRM-96 38 Tổng diện tích pic saponin triterpenoid hàm lƣợng saponin triterpenoid tính theo asiaticosid 12 mẫu thử CRM-96 Bảng 3.7 Nồng độ mẫu thử thêm chuẩn 40 41 Hàm lƣợng saponin triterpenoid toàn phần, hàm lƣợng saponin Bảng 3.8 glycosid hàm lƣợng saponin aglycon mẫu cao Rau má 42, 43 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ STT Tên hình Trang Hình 1.1 Đặc điểm thực vật Rau má Hình 1.2 Cấu trúc saponin triterpenoid khung ursan Rau má Hình 1.3 Cấu trúc saponin triterpenoid khung oleanan Rau má Hình 3.1 Sắc ký đồ mẫu chuẩn asiaticosid theo chƣơng trình 25 Hình 3.2 Sắc ký đồ mẫu cao Rau má chuẩn theo chƣơng trình 25 Hình 3.3 Sắc ký đồ mẫu chuẩn asiaticosid theo chƣơng trình 27 Hình 3.4 Sắc ký đồ mẫu cao Rau má chuẩn theo chƣơng trình 27 Hình 3.5 Sắc ký đồ mẫu chuẩn asiaticosid theo chƣơng trình 29 Hình 3.6 Sắc ký đồ mẫu cao Rau má chuẩn theo chƣơng trình 29 Hình 3.7 Sắc ký đồ mẫu chuẩn asiaticosid theo chƣơng trình 30 Hình 3.8 Sắc ký đồ mẫu cao Rau má chuẩn theo chƣơng trình 30 Sắc ký đồ mẫu cao: CRM-30; CRM-70; cao Rau má Hình 3.9 chuẩn; CRM-96 theo chƣơng trình 32 Sắc ký đồ mẫu cao Rau má chuẩn; mẫu CRM-96; mẫu Hình 3.10 chuẩn asiaticosid; mẫu trắng 37 Hình 3.11 Đồ thị biểu diễn mối tƣơng quan nồng độ diện tích pic 38 Hình 3.12 Sắc ký đồ mẫu thử CRM-96 38 ĐẶT VẤN ĐỀ Cây Rau má (Centella asiatica (L.) Urban) loại mọc nhiều nƣớc ta, đƣợc ngƣời dân sử dụng làm rau để ăn dùng tƣơi, xay lấy nƣớc uống để giải nhiệt, giải độc [4] ngồi Rau má đƣợc giã nát, đắp ngồi làm tan vết bầm tím ngã, làm tan ung nhọt [1] Thành phần hóa học Rau má đƣợc nghiên cứu gồm nhóm chất nhƣ: saponin, flavonoid, tinh dầu …[29] Trong đó, saponin triterpenoid thành phần chính, nhóm chất có hoạt tính sinh học Rau má nhƣ làm lành vết thƣơng, vết bỏng [13] ; chống oxi hóa [28], chống trầm cảm thực nghiệm [66], [67]… Hiện nay, số sản phẩm nhƣ kem bôi liền sẹo Madecassol®, Vicenla®, hay viên nang Helaf® hỗ trợ điều trị trĩ, táo bón kiết lỵ đƣợc lƣu hành thị trƣờng có thành phần cao Rau má Tuy nhiên, Dƣợc điển Việt Nam V [2] chuyên luận Rau má chƣa có tiêu định lƣợng nhóm chất saponin triterpenoid Để góp phần đảm bảo chất lƣợng chế phẩm thuốc từ dƣợc liệu nói chung cao Rau má nói riêng, chúng tơi tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu định lƣợng saponin triterpenoid cao Rau má sắc ký lỏng hiệu cao” với hai mục tiêu chính: - Xây dựng thẩm định phƣơng pháp định lƣợng saponin triterpenoid cao Rau má HPLC; - Ứng dụng phƣơng pháp HPLC xây dựng để định lƣợng saponin triterpenoid số mẫu cao Rau má Chƣơng 1.TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Rau má (Centella asiatica (L.) Urb) 1.1.1 Phân loại đặc điểm hình thái Rau má Vị trí Rau má hệ thống phân loại thực vật Theo hệ thống phân loại Takhtajan [58], Rau má thuộc chi Centella (L.) Urban, chi nằm họ Hoa tán (Apiaceae) Vị trí phân loại lồi Centella asiatica (L.) Urb hệ thống phân loại thực vật tóm tắt nhƣ sau: Ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc lan (Magnoliopsida) Phân lớp Thù du (Cornidae) Bộ Nhân sâm (Hoa tán) (Apiales) Họ Hoa tán (Apiaceae) Chi Centella (L.) Urban Theo Cây cỏ Việt Nam Phạm Hoàng Hộ [3], chi Centella (L.) Urban Việt Nam có lồi, C asiatica, chi Centella (L.) Urban giới có 50 lồi theo The plant list đƣợc công nhận [60] Đặc điểm thực vật Cây thảo nhỏ, cao – 10 cm Thân mảnh, mọc bò, có lơng non, bén rễ mấu Lá mọc so le, nhƣng thƣờng tụ họp – mấu, phiến nhẵn, hình thận gần tròn, mép khía tai bèo; cuống mảnh, dài – cm, có đến – cm [1], [4] Cụm hoa gồm tán đơn mọc riêng lẻ – kẽ lá, tán mang – hoa (thƣờng 3) màu trắng phớt đỏ, hoa khơng có cuống; tổng bao có – mảnh hình trái xoan, lõm, dạng màng; cánh hoa hình tam giác trái xoan; nhị có nhị ngắn, bao phấn hình mắt chim; bầu hình cầu [1], [4] 24/03/2018 2:50:53 CH Page / PHỤ LỤC 10 SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ CHÍNH XÁC TRUNG GIAN Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Injection Volume Date Acquired Date Processed : cao4 : cao4 : cao4.lcd : rauma.lcm : rauma.lcb : 1-4 : 10 uL : 02/03/2018 10:56:31 CH : 03/03/2018 3:57:33 CH Sample Type : Unknown Acquired by Processed by : System Administrator : System Administrator 15.911 30 PDA Multi 200nm,4nm 21.127 16.298 mAU 53.710 43.699 44.332 20 10 0 10 20 30 40 50 60 PDA Ch1 200nm Peak# Name asiaticosid B madecassosid asiaticosid acid madecassic acid terminolic acid asiatic Ret Time 15.911 16.298 21.127 43.699 44.332 53.710 Area 194366 330108 325665 121438 82343 142849 C:\LabSolutions\Data\Rau ma\Cao rau ma\26-2\tham dinh\do chinh xac trung gian\cao4.lcd 24/03/2018 2:54:00 CH Page / PHỤ LỤC 10 SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ CHÍNH XÁC TRUNG GIAN Analysis Report Sample Name : cao5 Sample ID : cao5 Data Filename : cao5.lcd Method Filename : rauma.lcm Batch Filename : rauma.lcb Vial # : 1-5 Injection Volume : 10 uL Date Acquired : 03/03/2018 1:43:05 SA Date Processed : 03/03/2018 4:11:52 CH Sample Type : Unknown Acquired by Processed by : System Administrator : System Administrator 43.691 44.324 20 53.671 15.884 30 PDA Multi 200nm,4nm 21.108 16.269 mAU 10 0 10 20 30 40 50 60 PDA Ch1 200nm Peak# Name asiaticosid B madecassosid asiaticosid acid madecassic acid terminolic acid asiatic Ret Time 15.884 16.269 21.108 43.691 44.324 53.671 Area 198853 333980 326083 121341 82366 143957 C:\LabSolutions\Data\Rau ma\Cao rau ma\26-2\tham dinh\do chinh xac trung gian\cao5.lcd 24/03/2018 2:55:13 CH Page / PHỤ LỤC 10 SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ CHÍNH XÁC TRUNG GIAN Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Injection Volume Date Acquired Date Processed : cao6 : cao6 : cao6.lcd : rauma.lcm : rauma.lcb : 1-6 : 10 uL : 03/03/2018 5:03:05 SA : 03/03/2018 6:40:13 CH Sample Type : Unknown Acquired by Processed by : System Administrator : System Administrator 43.431 44.063 20 53.430 15.719 30 PDA Multi 200nm,4nm 21.956 16.111 mAU 10 0 10 20 30 40 50 60 PDA Ch1 200nm Peak# Name asiaticosid B madecassosid asiaticosid acid madecassic acid terminolic acid asiatic Ret Time 15.719 16.111 20.956 43.431 44.063 53.430 Area 184168 293095 294220 119421 76352 133031 C:\LabSolutions\Data\Rau ma\Cao rau ma\26-2\tham dinh\do chinh xac trung gian\cao6.lcd 25/03/2018 3:36:26 CH Page / PHỤ LỤC 11 SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ ĐÚNG Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Injection Volume Date Acquired Date Processed : themchuan1 : themchuan1 : themchuan1.lcd : rauma.lcm : batch 030318.lcb : 1-1 : 10 uL : 04/3/2018 7:40:03 SA : 04/3/2018 11:20:23 SA Sample Type Level Acquired by Processed by : Standard : System Administrator : System Administrator mAU PDA Multi 200nm,4nm 21.006 50 40 53.450 20 43.453 44.086 15.771 16.165 30 10 0 10 20 30 40 50 60 PDA Ch1 200nm Peak# Name asiaticosid B madecassosid asiaticosid acid madecassic acid terminolic acid asiatic Ret Time 15.771 16.165 21.006 43.453 44.086 53.450 Area 111869 212587 611991 78186 49519 87353 C:\LabSolutions\Data\Rau ma\Cao rau ma\26-2\tham dinh\dodung\batch\themchuan1.lcd 25/03/2018 3:40:50 CH Page / PHỤ LỤC 11 SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ ĐÚNG Analysis Report Sample Name : them chuan Sample ID : themchuan2 Data Filename : them chuan 2.lcd Method Filename : rauma.lcm Batch Filename : batch 03032018.lcb Vial # : 1-2 Injection Volume : 10 uL Date Acquired : 04/03/2018 9:02:34 SA Date Processed : 04/03/2018 1:01:08 CH Sample Type Level Acquired by Processed by : Standard : System Administrator : System Administrator mAU PDA Multi 200nm,4nm 20.985 50 40 53.448 20 43.458 44.089 15.747 16.140 30 10 0 10 20 30 40 50 60 PDA Ch1 200nm Peak# Name asiaticosid B madecassosid asiaticosid acid madecassic acid terminolic acid asiatic Ret Time 15.747 16.140 20.985 43.458 44.089 53.448 Area 118403 212851 613525 78539 50218 86577 C:\LabSolutions\Data\Rau ma\Cao rau ma\26-2\tham dinh\dodung\batch\them chuan 2.lcd 25/03/2018 3:41:58 CH Page / PHỤ LỤC 11 SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ ĐÚNG Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Injection Volume Date Acquired Date Processed : themchuan3 : themchuan3 : themchuan 3.lcd : rauma.lcm : batchrauma.lcb : 1-3 : 10 uL : 04/03/2018 11:40:00 SA : 04/03/2018 5:02:05 CH Sample Type : Unknown Acquired by Processed by : System Administrator : System Administrator mAU 20.976 PDA Multi 200nm,4nm 50 40 53.402 20 43.408 44.034 15.739 16.131 30 10 0 10 20 30 40 50 60 PDA Ch1 200nm Peak# Name asiaticosid B madecassosid asiaticosid acid madecassic acid terminolic acid asiatic Total Ret Time 15.739 16.131 20.976 43.408 44.034 53.402 Area 118131 215602 614502 80746 49428 88063 1166472 C:\LabSolutions\Data\Rau ma\Cao rau ma\26-2\tham dinh\dodung\batch\themchuan 3.lcd 25/03/2018 3:47:34 CH Page / PHỤ LỤC 11 SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ ĐÚNG Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Injection Volume Date Acquired Date Processed : themchuan4 : themchuan4 : themchuan 4.lcd : rauma.lcm : batchrauma.lcb : 1-4 : 10 uL : 04/03/2018 1:10:00 CH : 04/03/2018 6:38:10 CH Sample Type : Unknown Acquired by Processed by : System Administrator : System Administrator mAU 20.924 PDA Multi 200nm,4nm 50 40 53.387 20 43.395 44.025 15.692 16.090 30 10 0 10 20 30 40 50 60 PDA Ch1 200nm Peak# Name asiaticosid B madecassosid asiaticosid acid madecassic acid terminolic acid asiatic Ret Time 15.692 16.090 20.924 43.395 44.025 53.387 Area 116688 215354 612590 78673 47027 86708 C:\LabSolutions\Data\Rau ma\Cao rau ma\26-2\tham dinh\dodung\batch\themchuan 4.lcd 25/03/2018 3:49:04 CH Page / PHỤ LỤC 11 SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ ĐÚNG Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Injection Volume Date Acquired Date Processed : themchuan5 : themchuan5 : themchuan5.lcd : rauma.lcm : batchrauma.lcb : 1-5 : 10 uL : 04/03/2018 2:40:03 CH : 04/03/2018 8:10:00 CH Sample Type : Unknown Acquired by Processed by : System Administrator : System Administrator mAU 20.990 PDA Multi 200nm,4nm 50 40 53.430 20 43.442 44.072 15.770 16.162 30 10 0 10 20 30 40 50 60 PDA Ch1 200nm Peak# Name asiaticosid B madecassosid asiaticosid acid madecassic acid terminolic acid asiatic Ret Time 15.770 16.162 20.990 43.442 44.072 53.430 Area 120613 213185 613502 79683 47804 87150 C:\LabSolutions\Data\Rau ma\Cao rau ma\26-2\tham dinh\dodung\batch\themchuan5.lcd 25/03/2018 3:50:28 CH Page / PHỤ LỤC 11 SẮC KÝ ĐỒ ĐỘ ĐÚNG Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Injection Volume Date Acquired Date Processed : themchuan6 : themchuan6 : themchuan6.lcd : rauma.lcm : batchrauma.lcb : 1-6 : 10 uL : 04/03/2018 4:10:06 CH : 04/03/2018 10:40:13 CH Sample Type : Unknown Acquired by Processed by : System Administrator : System Administrator mAU 21.002 PDA Multi 200nm,4nm 50 40 53.458 20 43.467 44.102 15.769 16.163 30 10 0 10 20 30 40 50 60 PDA Ch1 200nm Peak# Name asiaticosid B madecassosid asiaticosid acid madecassic acid terminolic acid asiatic Ret Time 15.769 16.163 21.002 43.467 44.102 53.458 Area 115866 207555 614162 79341 47266 86431 C:\LabSolutions\Data\Rau ma\Cao rau ma\26-2\tham dinh\dodung\batch\themchuan6.lcd 26/03/2018 6:28:02 CH Page / PHỤ LỤC 12 SẮC KÝ ĐỒ CÁC MẪU CAO Analysis Report Sample Name : cao96 Sample ID : cao1 Data Filename : cao1.lcd Method Filename : rauma.lcm Batch Filename : batchrauma.lcb Vial # : 1-1 Injection Volume : 10 uL Date Acquired : 19/03/2018 6:15:37 CH Date Processed : 19/03/2018 9:53:50 SA Sample Type : Unknown Acquired by Processed by : System Administrator : System Administrator PDA Multi 200nm,4nm 10 53.726 20 43.702 44.335 15.846 30 21.135 16.243 mAU 0 10 20 30 40 50 60 PDA Ch1 200nm Peak# Name asiaticosid B madecassosid asiaticosid acid madecassic acid terminolic acid asiatic Total Ret Time 15.846 16.243 21.135 43.702 44.335 53.726 Area 193760 324456 323597 124587 82163 145807 1194369 Resolution (USP) -1.052 13.288 58.249 1.484 20.778 Tailing Factor 1.098 1.058 1.076 1.046 C:\LabSolutions\Data\Rau ma\Cao rau ma\26-2\tham dinh\do lap lai\cao96 lcd 26/03/2018 4:55:22 CH Page / PHỤ LỤC 12 SẮC KÝ ĐỒ CÁC MẪU CAO Analysis Report Sample Name : cao70 Sample ID : cao70 Data Filename : cao70(1).lcd Method Filename : rauma.lcm Batch Filename : rauma.lcb Vial # : 1-1 Injection Volume : 10 uL Date Acquired : 21/03/2108 12:32:03 SA Date Processed : 21/03/2018 6:23:15 CH Sample Type : Unknown Acquired by Processed by : System Administrator : System Administrator mAU 16.279 21.114 PDA Multi 200nm,4nm 43.675 44.311 20 53.703 15.892 30 10 0 10 20 30 40 50 60 PDA Ch1 200nm Peak# Name asiaticosid B madecasossid asiaticosid acid madecassic acid terminolic acid asiatic Total Ret Time 15.892 16.279 21.114 43.675 44.311 53.703 Area 170855 282714 281611 102427 72037 126565 Tailing factor 1.037 1.031 1.009 1.028 Resolution -1.047 13.527 59.071 1.487 20.843 C:\LabSolutions\Data\Rau ma\Cao rau ma\26-2\ung dung\cao 70_ khong\cao70(1).lcd 26/03/2018 4:37:57 CH Page / PHỤ LỤC 12 SẮC KÝ ĐỒ CÁC MẪU CAO Analysis Report Sample Name : cao30 Sample ID : cao30 Data Filename : cao30(1).lcd Method Filename : rauma2602.lcm Batch Filename : rauma.lcb Vial # : 1-3 Injection Volume : 10 uL Date Acquired : 20/03/2018 2:07:34 SA Date Processed : 20/03/2018 6:44:00 CH Sample Type : Unknown Acquired by Processed by : System Administrator : System Administrator mAU 43.667 44.309 15.902 16.286 7.5 53.700 PDA Multi 200nm,4nm 21.122 10.0 5.0 2.5 0.0 10 20 30 40 50 60 Tailing factor 1.030 1.079 1.023 1.031 Resolution PDA Ch1 200nm Peak# Name asiaticosid B madecasossid asiaticosid acid madecassic acid terminolic acid asiatic Total Ret Time 15.902 16.286 21.122 43.667 44.309 53.700 Area 31536 35129 75274 19638 24609 63836 -1.069 13.765 61.232 1.561 20.584 C:\LabSolutions\Data\Rau ma\Cao rau ma\26-2\ung dung\cao 30_khong\cao30(1).lcd 26/03/2018 4:33:57 CH Page / PHỤ LỤC 12 SẮC KÝ ĐỒ CÁC MẪU CAO Analysis Report Sample Name Sample ID Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Injection Volume Date Acquired Date Processed : caonuoc : caonuoc1 : caonuoc(1).lcd : rauma.lcm : batchrauma.lcb : 1-9 : 10 uL : 22/03/2018 3:48:44 SA : 22/03/2018 8:30:04 SA Sample Type : Unknown Acquired by Processed by : System Administrator : System Administrator mAU PDA Multi 200nm,4nm 21.135 15.904 16.293 15 43.598 44.298 53.704 10 0 10 20 30 40 50 60 PDA Ch1 200nm Peak# Name asiaticosid B madecassosid asiaticosid acid madecassic acid terminolic acid asiatic Total Ret Time 15.904 16.293 21.135 43.598 44.298 53.704 Area 84060 141136 135016 2006 4320 4241 Tailing factor -1.044 1.044 3.122 1.153 0.926 Resolution -1.064 13.536 69.864 1.973 21.526 C:\LabSolutions\Data\Rau ma\Cao rau ma\26-2\ung dung\cao nc\caonuoc(1).lcd 26/03/2018 12:52:55 CH Page / PHỤ LỤC 12 SẮC KÝ ĐỒ CÁC MẪU CAO Analysis Report Sample Name: CRMA Sample ID : CRMA Data Filename: CRMA.lcd Method Filename : rauma.lcm Batch Filename : rauma.lcb Vial # : 1-8 Injection Volume : 10 uL Date Acquired : 18/03/2018 5:45:16 SA Date Processed : 18/03/2018 11:25:09 SA Sample Type : Unknown Acquired by Processed by : System Administrator : System Administrator mAU 43.494 44.158 15.829 16.193 5.0 53.566 PDA Multi 200nm,4nm 22.157 7.5 2.5 0.0 10 20 30 40 50 60 PDA Ch1 200nm Peak# Name asiaticosid B madecasossid asiaticosid acid madecassic acid terminolic acid asiatic Total Ret Time 15.829 16.193 22.157 43.494 44.158 53.566 Area 14060 20443 78983 2028 2070 3291 Tailing factor 0.958 1.373 1.41 0.938 Resolution -0.931 13.476 48.234 1.721 22.259 26/03/2018 6:29:46 CH Page / PHỤ LỤC 12 SẮC KÝ ĐỒ CÁC MẪU CAO Analysis Report Sample Name : CRMB Sample ID : CRMB Data Filename Method Filename Batch Filename Vial # Injection Volume Date Acquired Date Processed : CRMB.lcd : rauma.lcm : rauma.lcb : 1-9 : 10 uL : 17/03/2018 7:20:47 SA : 17/03/2018 10:48:12 SA Sample Type :Unknown Acquired by Processed by : SystemAdministrator : SystemAdministrator mAU PDA Ch1 200nm Peak# Name asiaticosid B madecasossid asiaticosid acid madecassic acid terminolic acid asiatic Total Ret Time 15.808 16.196 21.029 43.523 44.159 53.559 Area 47179 66758 62511 2420 2113 3001 Tailing factor 0.966 0.895 1.082 22.883 1.397 0.955 Resolution -1.319 15.331 68.860 2.083 21.902 ... pháp định lượng saponin triterpenoid cao 18 Rau má HPLC 2.3.2 Thẩm định phương pháp định lượng saponin triterpenoid 19 cao Rau má HPLC 2.3.3 Định lượng saponin triterpen số mẫu cao Rau má 21... triterpenoid 24 cao Rau má HPLC 3.1.3 Chương trình sắc ký định lượng saponin triterpenoid cao Rau 33 má HPLC 3.1.4 Thẩm định phương pháp định lượng saponin triterpenoid 34 cao Rau má HPLC 3.2 Kết định lƣợng... cao Rau má nói riêng, chúng tơi tiến hành thực đề tài Nghiên cứu định lƣợng saponin triterpenoid cao Rau má sắc ký lỏng hiệu cao với hai mục tiêu chính: - Xây dựng thẩm định phƣơng pháp định