Nghiên cứu tách các đồng phân quang học của atenolol bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao với một số pha tĩnh đối quang

•r Nghiên cứu tách đông phân quang học Atenolol sắc ký lỏng hiệu cao vóri số pha tĩnh đối quang Tạ Mạnh Hùng’, Trịnh Văn Lẩu’, Nguyễn Thị Thu Hiển^ Nguyễn Thị Kiểu Anh^ ' ViệnKiểmnghiệmthuốc Trungương, ^TrườngĐại họcDượcHàNội SUMMARY This article describes the characteristics of atenolol chromatographic separation that resulted on variuos mo­ bile and stationary phases The chromatograms showed quite different characteristics of the separation process Atenolol enantiomers were separated using a Chirex®3022 column (250x4.6 mm, ụm) with the mobile phase of hexane-1,2dichloromethane-methanol-ơcid trifluoroacetic (50:35:7.5:0.2 v/v/v/v), ultraviolet detection at 230 nm and flow rate of 1.0ml/min As the method has less run time (20 min), it can be useful in quality control laboratories for routine analysis Từ khóa: Atenolol, phân quang học, HPLC, pha tĩnh đối quang Đặtvấn đề Atenolol (2-{4-[2-hydroxy-3-(propan-2-ylamino) propoxy] phenyl} acetamid) có tác dụng ức chế chọn lọc p i-adrenergic, dùng điểu trị tăng huyết áp số hoạt chất có đồng phân quang học có tác dụng dược lý không giống [8] Trong hai đồng phân quang học, (S)atenolol có tác dụng ức chê' p i-adrenergic cao khoảng 50 lẩn tác dụng phụ so với (R)-atenolol [8] Đã có số nghiên cứu tách đồng phân quang học atenolol điện di mao quản [4], sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) [5-7,9] công bố Trong nghiên cứu này, phân quang học atenolol tách dựa hai chế sử dụng cột sắc ký chứa pha tĩnh đối quang có lực khác đồng phân sử dụng tác nhân đặc biệt phản ứng đặc hiệu với đồng phân quang học xác định tạo hợp chất không đối quang, sau tiến hành tách HPLC (với cột sắc 218 Nghiên Cứu dượcThông tin thuỡc Sỗ6/2013 ký thông thường) điện di mao quản Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu vể tách phân quang học atenolol tiến hành Việt Nam công bố Bài báo trình bày kết nghiên cứu tách đồng phân quang học atenolol chế phẩm thuốc HPLC với số pha tĩnh đối quang có chất khác Nguyên vật liệu phương pháp nghiên cứu Dung môi, hoá chất Chất chuẩn: Ater\o\o\ chuẩn (racemic) - Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, hàm lượng 100,17%, độ ẩm 0,11 %; số kiểm soát: 0102093 (S) - Atenolol - Sigma, hàm lượng 99,2 %, số lô: 392.716.000 Dung môi, hóa chất: Đạt tiêu chuẩn tinh khiết dùng cho HPLC Thiết bị dụng cụ phân tích Tất thiết bị phân tích đểu chuẩn hóa, đáp ứng yêu cẩu ISO/IEC 17025 - 2005 GLP A bao gồm: Máy sắc ký lỏng (Shimadzu LC-20A, Nhật Bản); cân phân tích (Sartorius Cp 224S, Thụy Sỹ) dụng cụ thủy tinh, bình định mức, pipet có độ xác phù hợp Đối tượng Bốn chế phẩm viên nén chứa atenolol dạng racemic: Viên nén Tenocar 50 mg (công ty Pỵmepharco), SĐK:VNA-1974-04, số lô 010212; Viên nén Teginol 50 mg (công ty Dược Hậu Giang), SĐK:VD-4273-07, số lô 010112; Viên nén Atenolol Stada 50 mg (công ty Stada Việt Nam), SĐK:VN-10349-05, số lô 010112 Viên nén Tenormin 50 mg (AstraZeneca UK., Ltd), SĐK:VN-5753-01, số lô HF567 Phương pháp nghiên cứu Khảo sát điều kiện sắc ký khác số cột phân tích chọn lọc đối quang có chất pha tĩnh khác theo qui trình phát triển phương pháp nhà sản xuất [1-3,6] Đối với loại cột, tiến hành khảo sát điều kiện sắc ký khác như: thành phần tỷ lệ thành phần pha động; ảnh hưởng yếu tố pH dung dịch đệm pha động; tốc độ dòng; thể tích tiêm mẫu; nồng độ chất phân tích, Tiến hành khảo sát thành phẩn tỷ lệ pha động cột Ultron ES-OVM, Chiralcel a1-acidglycoprotein (AGP), Chirex 3022 Astec Cyclobond 12000 theo sơ đổ sau: Sữđồ Quytrình kháo sát thùnh phán, tỷlệphođộngtrêncộtUltronB-OVM (4,6 x 250mm:5ụm) Sơđố Ouyninh kháosát thành phán, tỷ lệphũ động cột Chirace!AGP(4,0xl50mm;5 ịim) Sơđồ Ouytrình khảo sát thành phân, tỷ lệpho động cột Chirex3022 {ịO X 250 mm; ịẨĩĩì) CHaCN/Đệm : 35/65 I Có rửa giải BChông rửa giái ị CHgCN/Đệm : 75/25 ị Có tách 1.Thay đổi pH 2.Thay đổi dung môi hữu Có tách 1.Điều chỉnh tỉ lệ dung môi hữu 2.Thay đổi đệm Hoặc: Điều chỉnh pH Thay đổi dung môi hữu Không tách Không tách Có rửa giải Có tách 1.Tối ưu tỉ lệ HOAc/TEA 2.Tăng nồng độ HOAc/TEA Chuyển sang sắc ký dùng hệ dung môi hữu phân cực CH3CN/CH3OH/HOAC/TEA: 95/5/0,3/0,2 ị Không rửa giải Không tách Giảm CH3OH xuống 1% Thay đổi tỉ lệ giảm nồng độ HOAc/TEA Không tách 1.Tăng CH3OH lên 10% Tăng nồng độ HOAc/TEA Có rửa giải Sơđồ Ouy trình M o sát thờnh phân, tỷ lệpho động cộtAstec Cỵdobond12000 (4,6 X 250 mm; ụm) Kết nghiên cứu Khào sát lựa chọn điều kiện phân tích Kết khai triển sắc ký mẫu dung dịch chuẩn atenolol racemic nồng độ khoảng 50 |jg/ml theo điểu kiện sắc ký tương ứng với cột pha tĩnh chọn lọc đối quang trình bày hình (c) (ữ) U«Mmaỵ:ỉr4M ifäL Mk W ị m I I» :6 « I 200- 'rets»^ 1«^ W 1,5; hệ số T < 2,0; thời gian lưu pic không dài, 20 phút (hình le) Áp dụng điều kiện sắc ký phân tích mẫu thuốc Chuẩn bị dung dịch sắc ký: - Mẫu chuẩn: dung dịch chuẩn atenolol racemic có nồng độ atenolol xác khoảng 0,05 mg/ml, dung dịch chuẩn (S)-atenolol dung dịch chuẩn (R)-atenolol có nổng độ 0,025 mg/ml methanol - Các mẫu thử có nồng độ atenolol racemic 0,05 mg/ml, chuẩn bị methanol Tiến hành sắc ký dung dịch theo điểu kiện lựa chọn, sắc ký đồ mẫu chuẩn R-atenolol, S-atenolol mẫu thử trình bày hình ũ.MỗLichuổnliS-Atenolol b Mẫu chuẩn S-ũtemlol c Mầu chuẩn R-ũtenolol d.MăuchuổnS-atenolol Qua kết khảo sát lựa chọn điều kiện sắc ký, phân tách đồng phân quang học R- S-atenolol cột Chirex 3022 sau: Cột Chirex 3022 (4,0 X 250 mm; 5^m), nhiệt độ phòng, có bảo vệ c ộ t; Pha động: n-hexan-1,2 dicloromethan-methanol-acid trifluoroacetic = 50:35:7,5:0,2; Tốc độ dòng: ml/phút; Thể tích tiêm 1*» lOO' ầ Hình Sâcký đỗ cócmẫu chuẩn rà àử atenolol Trên sắc đồ mẫu thử (hình 2e, 2g, 2h 2i) pic phân atenolol tách rõ ràng (Rs>2), tương ứng thời gian lưu với pic chuẩn (S)-atenolol (15,3 phút) chuẩn (R)-atenolol (17,2 phút) Như phương pháp HPLC lựa chọn phù hợp với việc tách đồng phân ate­ nolol số chế phẩm thuốc Bàn luận Dựa đặc điểm phân đối quang có tính chất hóa lý tương tự nhau, phân tách sau phản ứng với tác nhân đối quang chọn lọc tạo hợp chất không đối quang khác nhau, đâ khảo sát điều kiện phân tách đối quang trực tiếp cột pha tĩnh đối quang có chất khác bước đẩu lựa chọn điều kiện sắc ký tương ứng với cột pha tĩnh Chirex 3022 cho phép tách đồng phân đối quang atenolol So với kết nghiên cứu tác giả Ribeiro [5] Sonia Morante-Zarcero [7], phương pháp phân tách đồng phân đối quang trực tiếp pha tĩnh đặc hiệu có trình xứ lý mẫu đơn giản hơn, không đòi hỏi phải có hóa chất thiết bị xử lý mẫu đặc biệt So với phương pháp tác giả Santoro M.l [6] Torul H [8], phương pháp pha động chạy theo chế độ đẳng dòng thuận tiện ổn định so với chạy chế độ gradient dung môi tác giả, thời gian phân tích (thời gian lưu chất) ngắn song độ phân giải pic đảm bảo quy định dược điển So với phương pháp phân tách điện di mao quản tác giả Huang J [4], phương pháp HPLC dễ thực thiết bị HPLC phổ biến đơn vị kiểm tra chất lượng thuốc so với thiết bị điện di mao quản nên tính khả thi cao Kết luận Phương pháp HPLCtách đồng phân đối quang atenolol số chế phẩm thuốc Dằng phương pháp HPLC với cột chọn lọc đối quang Chirex 3022 [(S)-indoline-2-carboxylic acid & (R)-l-(a-naphtyl) ethylamin] 4,0 X 250 mm; |jm xây dựng Kết áp dụng số chế phẩm thuốc cho thấy, xây dựng thích hợp tách đồng phân quang học R(+) atenolol S(-)atenolol TÀI LIỆU THAM KHẢO Agilent Technologies (2010), Ultron ES-OVM: Method development Protocol Astec (2002), Cyclobond Handbook, sixth edition, Advanced Separation Technologies, Inc Chrom Tech (2011 ), Separation of chirol compounds on Chiral-AGP, Chirol-HSA, Chiral-CBH, second edition Huang J, Sun J, Zhou X, You T (2007), "Determination of atenolol and metoprolol by capillary electrophoresis with tris(2,2'-bipyridyl) ruthenium(ii)electrochemiluminescence detection", Analytical Sciences, Vol 23(2):183-8 Ana Rita Ribeiro, Carlos Magalhaes Afonso, Paula M L Castro, Maria Elizabeth Tiritan (2013), "Enantioselective HPLC analysis and bio­ dégradation of atenolol, metoprolol and fluoxetine", Environmental Chemistry Letters, Vol 11 Issue 1, p.83 Santoro M.l, Cho H.S (2000), "Enantiomeric separation and quantitative determination of atenolol in tablets by chiral high-performance liquid chromatography", Drug development industrial pharmacy, Vol 26(10), p 1107-1110 Sonia Morante-Zarcero, Isabel Sierra (2012), "Simultaneous Enantiomeric Determination of Propranolol, Metoprolol, Pindolol, and Atenolol in Natural Waters by HPLC on New Polysaccharide-Based Stationary Phase using a Highly Selective Molecularly Imprinted Polymer Extraction", Chirality, Volume 24, Issue 10, pages 860-866 Stoschitzky K., et al (1993), "Stereoselective features of (R)- and (S)-atenolol: Clinical pharmacological, pharmacokinetic, and radioli­ gand binding studies", Chirality, Vol 5(1 ), p 15-19 9.Torul H, Tanner u (2011), "Determination of enantiomers of atenolol and propranolol in pharmaceutical formulations by HPIC Jour­ nal ofAOAC International, Vol 94(3):833-8 Xây dựng phương pháp định lượng Lansoprazol huyết tương chó Vũ NgọcThắng^ Nguyễn Ngọc Chiếng Trần Nguyên Hà^ Lương Quang Anh^ ^TrungtâmKiểmnghiệmNghiên cứuDượcQuân đội - CụcQuâny, ^TrườngĐại họcDượcHàNội, ^KhoaDược- ViệnBỏng Quốcgia SUMMARY A method was proposed to determine lansoprazole concentrations in dog plasma Following a single - step liquid - liquid extraction with tert-butyl methyl ether, lansoprazole and internal standard (pantoprazoie) were separated using on isocmtic mobile phase of 0.01 M phosphate buffer (pH 8.0 adjusted with triethylamine)/acetonitrile (65:35, v/v) on reversed phase Waters symmetry c 18 column, ultraviolet detection at 285 nm Linearity range was 0.05 - 3.0 Ijg/m l (r > 0.9990 o f the regression line), the lower lim it ofquantitotion was 50 ng/ml, mean percentage recoveries were from 97.67% to 101.02% This method was validoted with inter-day and intra-day precision o f 2.27% - 5.96% and 3.79% - 4.82%, respectively; accuracy was from 97.50% to 101.68% The method was successfully applied to determine lansoprazole concentrations in dog plasma samples Từ khóa Lonsoprazol, HPLC, huyết tương chó, thẩm định phương pháp Đặt vấn đề Lansoprazol (LPZ) chất ức chế tiết acid dịch vị, dùng để điểu trị viêm loét dày tá tràng triệu chứng trào ngược dày, thực quản [ 1] Các tác dụng điểu trị LPZ phụ thuộc vào nổng độ thuốc huyết tương (HT) Có nhiều phương pháp khác để định lượng LPZ huyết tương phổ biến phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao [2-4, 6] Việt Nam chưa có nghiên cứu định lượng LPZ huyết tương công bố Vì để góp phẩn nghiên cứu sinh khả dụng viên nang LPZ, tiến hành xây dựng phương pháp định lượng LPZ ... 3022 cho phép tách đồng phân đối quang atenolol So với kết nghiên cứu tác giả Ribeiro [5] Sonia Morante-Zarcero [7], phương pháp phân tách đồng phân đối quang trực tiếp pha tĩnh đặc hiệu có trình... hợp chất không đối quang khác nhau, đâ khảo sát điều kiện phân tách đối quang trực tiếp cột pha tĩnh đối quang có chất khác bước đẩu lựa chọn điều kiện sắc ký tương ứng với cột pha tĩnh Chirex 3022... triển sắc ký với điểu kiện sắc ký có thành phẩn pha động đệm pH 7,0 - MeOH tỷ lệ 99:1, tốc độ dòng 0,75 ml/phút, dung dịch chuẩn atenolol racemic cho 01 pic sắc ký đồ, đối quang R -atenolol S-atenolol