Nghiên cứu tách các đồng phần quang học của atenolol bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao với một số pha tĩnh đối quang

Nghiên cứu tách đồng phẩn quang học Atenolol sắc ký iỏng hiệu cao với số pha tĩnh đối quang Tạ Mạnh Hùng', Trịnh Văn Lẩu\ Nguyễn Thị Thu Hiển^ Nguyễn Thị Kiểu Anh^ ' Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương, ^Trường Đợi học Dược Hà Nội SUMMARY This article describes the characteristics of atenolol chromatographic separation that resulted on vơriuos mo­ bile and stationary phases The chromatograms showed quite different chơmcterìstics o f the separation process Atenolol enantiomers were separated using a Chirex'^ 3022 column (250x4.6 mm, fjm) with the mobile phase of hexane- l,2dichloromethane-methanol-acid trifiuoroacetk (50:35:7.5:0.2 v/v/v/v), ultraviolet detection at 230 nm and flow rate o f 1.0 ml/min As the method has less run time (20 min), it be useful in quality control laboratories for routine analysis Từ khóa: Atenolol, phân quang học, HPLC, pha tĩnh đổi quanq Đặt vấn để ký thông thường) điện di mao quản Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu tách phân Atenolol (2-{4-[2-hydroxy-3-(propan-2-ylamino) propoxy] phenyl} acetamid) có tác dụng ức chế chọn lọc (31-adrenergic, dùng điểu trị quang học atenolol tiến hành Việt Nam công bố Bài báo trình bày kết nghiên cứu tách phân quang học atenolol tăng huyết áp số hoạt chất có đồng phân quang học có tác dụng dược lý không chế phẩm thuốc HPLC với số pha tĩnh đối giống [8], Trong hai phân quang học, (S)atenolol có tác dụng ức chế (31-adrenergic cao quang có chất khác Nguyên vật liệu p h n g pKáp nghiên cihi khoảng 50 lần tác dụng phụ so với (R)-atenolol [8], Đã có số nghiên cứu tách phân Dung môi, hoá chất quang học atenolol điện di mao quản [4], Chất chuẩn; ỈKtenoM chuẩn (racemic) -Viện Kiểm sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) [5-7,9] công nghiệm thuốc Trung líơng, hàm lượng 100,17%, độ bố Trong nghiên cứu này, đồng phân quang học ẩm 0,11 %; số kiểm soát; 0102093 (S) - Atenolol - Sig- atenolol tách dựa hai cơchế ma, hàm lượng 99,2 %, số lô: 392.716.000 sử dụng cột sắc ký chứa pha tĩnh đối quang có lực khác đồng phân sử dụng tác nhân đặc biệt phản ứng đặc hiệu với Dung môi, hóơ chát: Đạt tiêu chuẩn tinh khiết dùng cho HPLC Thiết bị dụng cụ phân tích phân quang học xác đinh tao hợp chất không đối Tất thiết bị phân tích đểu chuẩn hóa, quang, sau tiến hành tách HPLC (với cột sắc đáp ứng yêu cầu ISO/IF.C 17025 - 2005 GLP bao gồm: Máy sắc ký lỏng (Shimadzu LC-20A, Nhậl Bản); cân phân tích (Sartoriiis Cp 224S, Thụy Sỹ) dụng cụ thủy tinh, bình định mức, pipet có độ xác phù hợp Đối tượng Bốn chế phẩm viên nén chứa atenolol dạng racemic; Viên nén Tenocar 50 mg (công ty Pymepharco), SĐK:VNA-1974-04, số lô 010212; Viên nén Teginol 50 mg (công ty Dược Hậu Giang), SĐK;VD-4273-07, số lô 010112; Viên nén Atenolol Stada 50 mg (công ty Stada Việt Nam), SĐK:VN-10349-05, số lô 010112 Viên nén Tenormin 50 mg (AstraZeneca UK., Ltd), SĐK:VN-5753-01, số lô HF567 Phương pháp nghiên cứu Khảo sát điểu kiện sắc ký khác số cột phân tích chọn lọc đối quang có chất pha tĩnh khác theo qui trình phát triển phương pháp nhà sản xuất [1 -3, 6] ĐỐI với loại cột, tiến hành khảo sát điểu kiện sắc ký khác như; thành phẩn tỷ lệ thành phần pha động; ảnh hưởng yếu tố pH dung dịch đệm pha động; tốc độ dòng; thể tích tiêm mẫu; nổng độ chất phân tích, Tiến hành khảo sát thành phần tỷ lệ pha động cột Ultron ES-OVM, Ch\ra\ce\aĩ-acidglycoprotein fAGP), Chirex 3022 Astec Cyclobond 12000 theo sơ đổ sau: Sơđỗ ĩ Quytrhhkhắosátthònhphán, tỷlêphađộngừàưộtUltronES-OVM (4,6 x2S0m m ;Sịim } Sơđỗ2.0uỵtrìnhkhảosàtthùnhphổn,tỷ!ệphođọngtrỂncộtChirũcelAũP(4,0xl50mm:5ịjm) SỐ 6/2013 Nghỉên cứu dược Thông tin thuốc 219 Sơ đỗ Quỵ trình khũo sát thành phán, tỷ lệ pha động cột Chirex Ỉ022 (4 ,0 x2 m ; ịim) C H sC N /Đ ệm : 35/65 I : Có rửa giải Không rửa giải CHaCN/Đệm : 75/25 I ị Không tách Có tách 1.Thay đổi pH Thav đổi duna môi hữu Có tách w 1.Điều chỉnh ti lệ dung môi hữu T V ia v ítni đ p m Hoặc: Đ iều chỉnh pH Thay đổi dung môi hữu Không tách Không tách Chuyển sang sắc ký dùng hệ dung môi hữu phân cực C H C N /C H OH/HOAC/TEA: 95/5/0,3/0,2 Có rửa giải Có tách ị ị Không rửa giải Không tách ị l.T ối ưu tì lệ Giảm CH3OH xuống 1% HOAc/TEA l.T ă n g CH3OH lên 10% Thay đổi tì lệ giảm nồng Tăng nồng độ độ HOAc/TEA HOAc/TEA Tăng nồng độ HOAc/TEA Không tách t Có tách Có rửa giải k Sơđô4.0uyữìnhkhũosầthònhphán,tỷlệphođộngtrêncộtAstecCydobon(ll2000(4,6 x ũ m ;5 ijm ) Kết nghiên cứu Khảo sát lựa chọn điều kiện phân tích Kết khai triển sác ký mẫu dung dịch chuẩn atenolol racemic nồng độ khoảng 50 ng/ml theo điểu kiện sắc ký tương ứng với cột pha tĩnh chọn lọc đổi quang trình bày hình A Maxirttnrtv: &6.101 mâU_ R ? 1 1 & 1 ' ^ ' y ■■■ \ ■' - 10I ti I ti t ỉt ỉ N 2.5 S.0 (tì oĩ 2!s s!o r:s lỉ.o \U mìn' tí Kinh Sêc ký đổ củũ mâu áuấn ũtenolol rũcemic bước sóng 2Ì0 nm thề tích mâu 50 ịiì vởi điêu kiện: aXộtUltronES-0VM;đệmphosphũt20mM,pH7AMe0Htylệ99:l;tốcđộ0J5ml/pUt.bXộtairalAGP:đệrnphosphat20mM,pH7-MeOHtỷlệ99M5:tK cXộtAstec:đệmphosphcrt20mkpH7,0-^MeCNtỳlệ25:75;tổcđộlOml/phút,dXợtAstec:MeCN-MeOHWAc-TEA^ I2didoromethũne-methũnol-add tìầoroũcetictỷlệ 50:35:7,5:0,2; tóc độ 1,0 ml/phút Kết hình cho thấy; Với cột Ultron ES - OVM: Khi dung môi pha động chứa thành phẩn đệm, dung môi có lực rửa giải mạnh MeOH, MeCN, ateno­ MeOH thời giảm tỷ lệ dung môi hữu phân cực (MeOH) pha động tăng pH dung dịch đệm lên tới pH 7, khả phân tách phân quang học R- S-atenolol cột tăng lol rửa giải khỏi cột với thời gian lưu lên Tuy nhiên, với pha động bao gồm MeOH - đệm tương đối ngắn Tuy nhiên, khai triển sắc ký với phosphat 20 mM, pH 7,0 tỷ lệ 0,5:99,5, tốc độ dòng điểu kiện sắc ký có thành phẩn pha động đệm 0,75 ml/phút, đồng phân quang học at­ pH 7,0 - MeOH tỷ lệ 99:1, tốc độ dòng 0,75 ml/phút, enolol chưa tách khỏi (hình b) dung dịch chuẩn atenolol racemic cho 01 Với cột Astee Cyclobond 12000: Khi triển khai sắc pic sắc ký đồ, đối quang R-atenolol ký pha đảo, pha động chứa thành phần MeCN: S-atenolol chưa phân tách khỏi (hình la) đệm phosphat pH 7,0, tỷ lệ 35:65, atenolol chưa Với cột Chiralcel AGP: Khi thay isopropanot rửa giải qua cột Khi tăng tỷ lệ MeCN lên, at- enolol rửa giải khỏi cột, nhiên Qua kết khảo sát đâ lựa chọn phân quang học atenolol không tách (hình điều kiện sắc ký, phân tách phân 1c) Khi triển khai sắc ký pha đảo, pha động chứa thành phân dung môi hữu phân cực (MeCN- quang học R- S-atenolol cột Chirex 3022 sau: Cột Chirex 3022 (4,0 X 250 mm; 5|jm), nhiệt MeOH-acid acetic-triethylamin), atenoloi độ phòng, có bảo vệ c ộ t ; Pha động; n-hexan 1,2 rửa giải qua cột, song đồng phân quang học dicloromethan-methanol-acid atenolol chưa tách khỏi nhau, tỷ lệ 50:35:7,5:0,2; Tốc độ dòng: ml/phút; Thể tích tiêm MeOH pha động giảm xuống 1% mẫu: 50 Ị jl; Detector UV: 230 nm Trên sắc ký đổ, nồng độ add acetic, triethylamin pha động giảm xuống 0, % (hình Id) 2,0 ; thời gian lưu pic không dài, 20 Với cột Chirex 3022 : Khi giảm tỷ lệ dung môi trifluoroacetic = pic R- S-atenolol cân đ ố i; hệ số Rs > 1,5; hệ số T < không phân cực (n-hexan, dicloromethan) phút (hình le) Áp dụng điểu kiện sắc ký phân tích mẫu thành phẩn pha động, pic atenolol xuất sớm hơn, hệ số Rs pic R- S-atenolol giảm thuốc Chuẩn bị dung dịch sắc k ý ; ngược lại tăng tỉ lệ dung môi không phân - Mẫu chuẩn: dung dịch chuẩn atenolol race- cực thời gian lưu tăng lên hệ số Rs lớn Khi cố định tỷ lệ thành phẩn dung môi không phân mic có nồng độ atenolol xác khoảng 0,05 mg/ml, dung dịch chuẩn (S)-atenolol dung dịch cực pha động, tăng tỷ lệ MeOH pha chuẩn (R)-atenolol có nổng độ 0,025 mg/ml động pic atenolol xuất sớm hơn, hệ số methanol Rs pic R- S-atenolol giảm ngược lại Tỷ lệ acid trifluoroacetic pha động, ảnh - Các mẫu thử có nồng độ atenolol racemic 0,05 mg/ml, chuẩn bị methanol hưởng tới thời gian lưu pic R- S-atenolol, Tiến hành sắc ký dung dịch theo điểu song có ảnh hưởng đến độ phân giải hình dạng kiện lựa chọn, sắc ký đổ mẫu chuẩn R-ateno- pic lol, S-atenolol mẫu thử trình bày hình b Mâu chuẩn S-otenolol mAU, Vo c.M ẫuchm R-ũtm lol ế ' ■ío ■ ■ d.MỗuáuđnS-atenolol if A e Màu thử Atenolol Stado50 mg g.MũuthửĩenocorSOmg h.MũuthửĩeginolSOmg ì.MãuthừTemminSũmg H«ìbì Sáckỷđỗcácmẫuáuin vòthữũtenolol Trên sắc đồ mẫu thử (hình 2e, 2g, 2h i) pic đồng phân atenolol tách có hóa chất thiết bị xử lý mẫu đặc biệt So với phương pháp tác giả Santoro M.l [6] Torul rõ ràng (Rs>2), tương ứng thời gian lưu với pic H [8], phương pháp pha động chạy theo chế độ chuẩn (S)-atenolol (15,3 phút) chuẩn (R)-atenolol (17,2 phút) Như phương pháp HPLC lựa đẳng dòng thuận tiện ổn định so với chạy chế độ gradient dung môi tác giả, thời gian chọn phù hợp với việc tách phân ate­ nolol số chế phẩm thuốc phân tích (thời gian lưu chất) ngắn song độ phân giải pic đảm bảo quy định dược điển So với phương pháp phân tách điện Bàn luận di mao quản tác giả Huang J [4], phương pháp Dựa đặc điểm đồng phân đối quang có tính chất hóa lý tương tự nhau, phân tách sau phản ứng với tác nhân đối quang chọn lọc tạo hợp chất không đối quang khác nhau, HPLC dễ thực thiết bị HPLC phổ biến đơn vị kiểm tra chất lượng thuốc so với thiết bị điện di mao quản nên tính khả thi cao Kết luận khảo sát điểu kiện phân tách đối quang trực tiếp cột pha tĩnh đỗi quang có chất khác Phương pháp HPLC tách đồng phân đối quang bước đẩu lưa chọn điểu kiện sắc ký tương ứng atenolol số chế phẩm thuốc với cột pha tĩnh Chirex 3022 cho phép tách phương pháp HPLC với cột chọn lọc đối quang Chirex đồng phân đổi quang atenolol So với kết 3022 [(S)-indoline-2-carboxylic acid Ẵ (R)-l-(a-naphtyl) nghiên cứu tác giả Ribeiro [5] Sonia Mo- ethylamin] 4,0 X 250 mm; ^im xây dựng Kết rante-Zarcero [7], phương pháp phân tách đồng áp dụng số chê' phẩm thuốc cho thấy, phân đối quang trực tiếp pha tĩnh đặc hiệu có xây dựng thích hợp tách đồng phân quang học R(+) trình xử lý mẫu đơn giản hơn, không đòi hỏi phải atenolol S(-)atenolol Số 6/2013 Nghiên cứu dượcThông tin thuớc 1223 TÀI LIỆU THAM KHẢO Agilent Technologies (2010), Ultron ẼS-OVM: Method development Protocol Astec (2002), Cydobond Handbook, sixth edition, Advanced Separation Technologies, Inc Chrom Tech (2011 ), Separation of chiral compounds on Chiral-AGP, Chiral-HSA, Chiral-CBH, second edition Huang J, Sun J, Zhou X, You T (2007), "Determination of atenolol and metoprolol by capillary electrophoresis with tris(2,2'-bipyridyl) ruthenium(ii)electrochemiluminescence detection", Analytical Sciences, Vol 23(2):183-8 Ana Rita Ribeiro, Carlos Magalhães Afonso, Paula M L Castro, Maria Elizabeth Tiritan (2013), "Enantioselective HPLC analysis and bio­ dégradation of atenolol, metoprolol and fluoxetine”, Environmental Chemistry Letters ,Vo\ ^1 Issue 1, p.83 Santoro M.l, Cho H.s (2000), "Enantiomeric separation and quantitative determination of atenolol in tablets by chiral high-perfor­ mance liquid chromatography", Drug development industrial pharmacy, Vol 26(10), p 1107-1110 Sonia Morante-Zarcero, Isabel Sierra (2012), “Simultaneous Enantiomeric Determination of Propranolol, Metoprolol, Pindolol, and Atenolol in Natural Waters by HPLC on New Polysaccharide-Based Stationary Phase using a Highly Selective Molecuiarly Imprinted Polymer Extraction", Chirality, Volume 24, Issue 10, pages 860-866 Stoschitzky K., et al (1993), "Stereoselective features of (R)- and (S)-atenolol: Clinical pharmacological, pharmacokinetic, and radioli­ gand binding studies", Chirality, Vol 5(1 ), p 15-19 9.Torul H, Tamer u (2011), "Determination of enantiomers of atenolol and propranolol in pharmaceutical formulations by HPIC", Jour­ nal ofAOAC International, Vol 94(3):833-8 Xây dựng phương pháp định lượng Lansoprazol huyết tương chó Vũ Ngọc Thắng', Nguyễn Ngọc Chiếng Trẩn Nguyên Hà^ Lương Quang Anh^ ’ Trung tâm Kiểm nghiệm Nghiên cứu Dược Quân đội - Cục Quâny, ^Trường Đợi học Dược Hà Nội, ^Khoa Dược - Viện Bỏng Quốc gia SUMMARY A method was proposed to determine lansoprazole concentrations in dog plasma Following a single - step liquid - liquid extraction with tert-butyl methyl ether, lansoprazole and internal standard (pantoprazole) were separated using an isocratic mobile phase o f 0.01 M phosphate buffer (pH 8.0 adjusted with triethylamine)/acetonitrile (65:35, v/v) on reversed phase Waters symmetry column, ultraviolet detection at 285 nm Linearity range was 0.05 - 3.0 ụg/mì (r > 0.9990 o f the regression line), the lower limit o f quantitation was 50 ng/ml, mean percentage recoveries were from 97.67% to 101.02% This method was validated with inter-day and intra-day precision o f 2.27% - 5.96% and 3.79% - 4.82%, respectively; accuracy was from 97.50% to 101.68% The method was successfully applied to determine lansoprazole concentrations in dog plasma samples Từ khóa Lansoprazol, HPLC, huyết tương chó, thẩm định phương pháp Đặt Vấn đề pháp khác để định lượng LPZ huyết tương phổ biến phương pháp sác Lansoprazol (LPZ) chất ức chế tiết acid dịch ký lỏng hiệu cao [2-4, 6], Việt Nam chưa vị, dùng để điểu trị viêm loét dày tá tràng có nghiên cứu định lượng LPZ huyết tương triệu chứng trào ngược dày, thực quản [1], Các công bố Vì để góp phán nghiên cứu sinh tác dụng điểu trị LPZ phụ thuộc vào nổng độ khả dụng viên nang LPZ, tiến thuốc huyết tương (HT) Có nhiều phương hành xây dựng phương pháp định lượng LPZ ... điểu kiện sắc ký tương ứng atenolol số chế phẩm thuốc với cột pha tĩnh Chirex 3022 cho phép tách phương pháp HPLC với cột chọn lọc đối quang Chirex đồng phân đổi quang atenolol So với kết 3022... cho 01 Với cột Astee Cyclobond 12000: Khi triển khai sắc pic sắc ký đồ, đối quang R -atenolol ký pha đảo, pha động chứa thành phần MeCN: S -atenolol chưa phân tách khỏi (hình la) đệm phosphat pH... thuốc so với thiết bị điện di mao quản nên tính khả thi cao Kết luận khảo sát điểu kiện phân tách đối quang trực tiếp cột pha tĩnh đỗi quang có chất khác Phương pháp HPLC tách đồng phân đối quang