KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA HORMONE DOPAMINE HYDROCHLORIDE TRONG GIẢI PHÁP CÔNG NGHỆ CHUYỂN GIỚI TÔM CÀNG XANH Macrobrachium rosenbergii

  BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA HORMONE DOPAMINE HYDROCHLORIDE TRONG GIẢI PHÁP CÔNG NGHỆ CHUYỂN GIỚI TÔM CÀNG XANH Macrobrachium rosenbergii Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực : ĐỖ THANH TRÀ Niên khóa : 2007 - 2011 Tháng 07/2011   BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC     KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA HORMONE DOPAMINE HYDROCHLORIDE TRONG GIẢI PHÁP CÔNG NGHỆ CHUYỂN GIỚI TÔM CÀNG XANH Macrobrachium rosenbergii Hướng dẫn khoa học Sinh viên thực ThS BÙI THỊ LIÊN HÀ ĐỖ THANH TRÀ Tháng 07/2011 LỜI CẢM ƠN Xin chân thành gửi lời cám ơn đến Ban Giám Hiệu trường Đại Học Nơng Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh Q thầy Bộ Mơn Cơng Nghệ Sinh Học Ban lãnh đạo Trung Tâm Giống Quốc Gia Thủy Sản Nước Ngọt Nam Bộ Xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến ThS Bùi Thị Liên Hà, ThS Nguyễn Đức Minh tạo điều kiện thuận lợi tận tình hướng dẫn suốt tơi q trình thực đề tài Xin cám ơn anh chị Trung Tâm Giống Quốc Gia, bạn Hồi Oanh người tơi thực đề tài Cám ơn bạn lớp DH07SH gắn bó tơi suốt bốn năm học Và để có ngày hơm tơi vơ biết ơn Ba, Mẹ, chị Hai người thân thương yêu, chăm lo động viên i TĨM TẮT Việc tạo tơm giả có kiểu gene ZZ để sản xuất tơm giống tồn đực với thao tác đơn giản, chi phí thấp cung cấp cho hộ ni có ý nghĩa mặt kinh tế Sự biệt hóa giới tính tơm xanh hormone tuyến đực điều khiển Dopamine hydrochloride có tác dụng ức chế phát triển tuyến đực tăng tiết GIH (hormone ức chế tuyến sinh dục) giảm tiết GSH (hormone kích thích tuyến sinh dục) Đề tài: “Khảo sát ảnh hưởng hormone Dopamine hydrochloride giải pháp công nghệ chuyển giới tôm xanh Macrobrachium rosenbergii” với nồng độ 22,5; 30 45ppm thực với mục tiệu tìm nồng độ thích hợp bổ sung vào giai đoạn phát triển giới tính tơm xanh Ấu trùng tơm xanh ăn Artemia làm với làm giàu dopamine hydrochloride chuyển postlarvae ăn thức ăn có bổ sung dopamine hydrochloride theo giai đoạn phát triển giới tính Kết đạt cho thấy dopamine hydrochloride có tác dụng tăng tỉ lệ có xu hướng chuyển đổi giới tính tơm xanh ii SUMMARY This is title: A study of affect of dopamine hormone on sex reversal in fresh water prawn, Macrobrachium rosenbergii To make a neo-female from male with ZZ genotype for all - male production in fresh water prawn, Macrobrachium rosenbergii is a solution bringing high income for culturers This study was conducted to develop a simple and low cost method to make neo - female Androgenic gland (AG) is an organ that has role in controlling sexual differentiation in this species Recent studies have indicated that dopamine hydrochloride inhibited of release of GSH (Gonad – stimulating hormone) and stimulated of release of GIH (Gonad - inhibiting hormone), leading to inhibit development of AG Different three concentrations (22,5; 30 and 45 ppm) of dopamine hydrochloride was examined to compare its affects on sex reversal in Macrobrachium rosenbergii Napuliies have eaten enriched dopamine Artemia; postlarvaes have eaten food that were added dopamine hydrochloride in sexual differentination stage The result showed that dopamine hydrochlorid increased the percentages of individuals without external male characteristics All of female will be determined neo female for all – male production Keyword: neo - female prawn, Macrobrachium rosenbergii, reversal sex, all male production iii MỤC LỤC Trang Lời cám ơn i Tóm tắt ii Summary iii Mục lục iv Danh sách chữ viết tắt vii Danh sách bảng viii Danh sách hình ix Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích đề tài 1.3 Nội dung Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm sinh học tôm xanh 2.1.1 Vị trí phân loại 2.1.2 Phân bố 2.1.3 Hình thái 2.1.4 Vòng đời 2.2 Môi trường sống tôm xanh 2.2.1 Nhiệt độ 2.2.2 pH 2.2.3 Độ mặn 2.2.4 NH3-N NO2- N 2.3 Đặc điểm sinh sản tôm xanh 2.3.1 Phân biệt đực, 2.3.2 Thành thục, giao vĩ, đẻ trứng ấp trứng tôm xanh 2.4 Sự biệt hóa giới tính tơm xanh 2.4.1 Nhiễm sắc thể giới tính 2.4.2 Tuyến đực vai trò tuyến đực lên biệt hóa giới tính TCX iv 2.4.3 Chuyển giới tôm xanh tác dụng hormone 2.5 Đặc điểm dinh dưỡng tôm xanh 10 2.5.1 Chất đạm 10 2.5.2 Chất béo 11 2.5.3 Phospholipid 11 2.5.4 Vitamine khoáng chất 11 2.5.5 Artemia 11 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 14 3.2 Vật liệu 14 3.2.1 Mẫu thí nghiệm 14 3.2.2 Hệ thống thí nghiệm 14 3.2.3 Nguồn nước 15 3.2.4 Thức ăn 15 3.2.5 Hóa chất 15 3.2.6 Dụng cụ thiết bị 15 3.3 Phương pháp nghiên cứu 16 3.3.1 Các bước chuẩn bị ban đầu 16 3.3.1.1 Chuẩn bị ấu trùng 16 3.3.1 Khảo sát sức chịu đựng ấu trùng TCX dopamine 16 3.3.1.3 Khảo sát hàm lượng dopamine Artemia hấp thụ 16 3.3.1.4 Chuẩn bị thức ăn cho ấu trùng PL 18 3.3.1.4.1 Thức ăn cho ấu trùng 18 3.3.1.4.2 Thức ăn cho PL 19 3.3.2 Thí nghiệm ảnh hưởng dopamine lên chuyển đổi giới tính TCX 19 3.3.2.1 Thí nghiệm bổ sung dopamine từ ấu trùng đến 30 ngày tuổi 19 3.3.2.2 Thí nghiệm bổ sung dopamine từ giai đoạn PL5 đến PL35 19 3.3.2.3.Thí nghiệm bổ sung dopamine từ ấu trùng tơm đến 60 ngày tuổi 19 3.4 Thu thập số liệu 19 3.4.1 Đánh giá sức chịu đựng ấu trùng dopamine hydrochloride 19 3.4.2 Thu thập số liệu môi trường 19 3.4.3 Thời gian xuất PL 20 v 3.4.4 Tỉ lệ chuyển PL 20 3.4.5 Tỉ lệ sống PL 20 3.4.6 Tỉ lệ 20 3.5 Xử lí số liệu 20 Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 4.1 Kết 21 4.1.1 Sức chịu đựng ấu trùng dopamine hydrochloride 21 4.1.2 Khả hấp thu dopamine Artemia nồng độ khảo sát 21 4.1.3 Các yếu tố mơi trường thí nghiệm 23 4.1.4 Thời gian xuất PL, tỉ lệ chuyển PL 23 4.1.5 Các thí nghiệm ảnh hưởng dopamine lên chuyển giới TCX 25 4.1.5.1 Thí nghiệm bổ sung dopamine từ ấu trùng đến 30 ngày tuổi 25 4.1.5.2 Thí nghiệm bổ sung dopamine từ giai đoạn PL5 đến PL35 27 4.1.5.3 Thí nghiệm bổ sung dopamine từ ấu trùng đến 60 ngày tuổi 27 4.2 Thảo luận 27 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 30 5.1 Kết luận 30 5.2 Đề nghị 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO 31 PHỤ LỤC vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT AG (Androgenic gland): tuyến đực AGH (Androgenic gland hormone): hormone tuyến đực GIH (Gonad inhibiting hormone): hormone ức chế tuyến sinh dục GSH (Gonad stimulating hormone): hormone kích thích tuyến sinh dục LD 50: Liều gây chết 50% OD: độ hấp thụ quang phổ DHA: Decosahexaenoic (22:6n-3) M: Khối lượng PL: Postlarvae TCX: Tôm xanh TLC: Tỉ lệ TLS: Tỉ lệ sống vii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 4.1 Tỉ lệ sống ấu trùng tác dụng dopamine hydrochoride 21 Bảng 4.2 Mật độ quang tương ứng với nồng độ dopamine 21 Bảng 4.3 Kết phân tích hàm lượng dopamine Artemia 22 Bảng 4.4 Các yếu tố mơi trường thí nghiệm 23 Bảng 4.5 Tỉ lệ chuyển PL 24 viii Descriptives tilesong tilecai N Mean Std Deviation Std Error Lower Bound Upper Bound Lower Bound Upper Bound 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound Upper Bound 00 4361 02214 01278 3811 4911 41 45 22.50 4914 03612 02085 4017 5811 45 52 30.00 7399 19042 10994 2668 1.2129 56 94 45.00 3576 01601 00925 3178 3974 34 37 Total 12 5062 17111 04940 3975 6150 34 94 00 5318 00090 00052 5296 5340 53 53 22.50 6342 01495 00863 5971 6713 62 65 30.00 4528 01221 00705 4225 4832 44 47 45.00 5335 00381 00220 5240 5430 53 54 Total 12 5381 06773 01955 4950 5811 44 65 ANOVA Sum of Squares tilesong tilecai df Mean Square Between Groups 245 082 Within Groups 077 010 Total 322 11 Between Groups 050 017 Within Groups 001 000 Total 050 11 F Sig 8.542 007 170.763 000 Multiple Comparisons Tukey HSD Dependent Variable TLS (I) nghiemthuc 00 22.50 30.00 45.00 TLC 00 22.50 30.00 45.00 (J) nghiemthuc Mean Difference (I-J) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound Lower Bound 95% Confidence Interval Upper Bound Lower Bound 22.50 -.05532 07991 897 -.3112 2006 30.00 -.30377(*) 07991 022 -.5597 -.0479 45.00 07849 07991 763 -.1774 3344 00 05532 07991 897 -.2006 3112 30.00 -.24846 07991 057 -.5043 0074 45.00 13381 07991 395 -.1221 3897 30377(*) 07991 022 0479 5597 22.50 24846 07991 057 -.0074 5043 45.00 38226(*) 07991 006 1264 6382 00 -.07849 07991 763 -.3344 1774 22.50 -.13381 07991 395 -.3897 1221 30.00 -.38226(*) 07991 006 -.6382 -.1264 22.50 -.10239(*) 00804 000 -.1281 -.0766 30.00 07895(*) 00804 000 0532 1047 45.00 -.00169 00804 996 -.0274 0241 00 10239(*) 00804 000 0766 1281 30.00 18134(*) 00804 000 1556 2071 45.00 10070(*) 00804 000 0750 1265 00 -.07895(*) 00804 000 -.1047 -.0532 22.50 -.18134(*) 00804 000 -.2071 -.1556 45.00 -.08064(*) 00804 000 -.1064 -.0549 00169 00804 996 -.0241 0274 22.50 -.10070(*) 00804 000 -.1265 -.0750 30.00 08064(*) 00804 000 0549 1064 00 00 * The mean difference is significant at the 05 level TLS Tukey HSD N nghiemthuc Subset for alpha = 05 45.00 3576 00 4361 22.50 4914 30.00 4914 7399 Sig .395 054 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 TLC Tukey HSD N nghiemthuc Subset for alpha = 05 30.00 00 5318 45.00 5335 22.50 Sig .4528 6342 1.000 996 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 1.000  PL5 ‐ PL35 nghiệm  thức  số lượng bố  trí(con)   số lương  đực  số lượng  cái  tổng  số  tỷ lệ  sống  tỷ lệ  cái  45 900 152 187 339 37.67 55.16  45 900 156 208 364 40.44 57.14  45 900 148 195 343 38.11 56.85  30 900 247 298 545 60.56 54.68  30 900 262 313 575 63.89 54.43  30 900 228 278 506 56.22 54.94  22.5 900 223 239 462 51.33 51.73  22.5 900 207 217 424 47.11 51.18  22.5 900 232 256 488 54.22 52.46  0  900 155 163 318 35.33 51.26  0  900 188 189 377 41.89 50.13  0  900 161 177 338 37.56 52.37  Descriptives TLS TLC N Mean Std Deviation Std Error Lower Bound Upper Bound Lower Bound Upper Bound 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound 00 3928 03618 02089 3029 4827 36 43 22.50 5342 04148 02395 4312 6373 49 57 30.00 6469 04809 02777 5274 7663 60 69 45.00 3979 01621 00936 3576 4381 39 42 Total 12 4929 11466 03310 4201 5658 36 69 00 5382 01301 00751 5058 5705 53 55 22.50 5444 00751 00433 5258 5631 54 55 30.00 5786 00302 00174 5711 5861 58 58 45.00 5991 01292 00746 5670 6312 58 61 Total 12 5651 02743 00792 5476 5825 53 61 ANOVA Sum of Squares TLS TLC df Mean Square Between Groups 133 044 Within Groups 011 001 Total 145 11 Between Groups 007 002 Within Groups 001 000 Total 008 11 F Sig 31.736 000 24.812 000 Multiple Comparisons Tukey HSD Dependent Variable TLS (I) nghiemthuc 00 22.50 30.00 45.00 TLC 00 22.50 30.00 45.00 Mean Difference (I-J) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound Lower Bound 22.50 -.14145(*) 03056 007 -.2393 -.0436 30.00 -.25408(*) 03056 000 -.3520 -.1562 45.00 -.00507 03056 998 -.1029 0928 14145(*) 03056 007 0436 2393 30.00 -.11263(*) 03056 026 -.2105 -.0148 45.00 13638(*) 03056 009 0385 2343 00 25408(*) 03056 000 1562 3520 22.50 11263(*) 03056 026 0148 2105 45.00 24901(*) 03056 000 1511 3469 00507 03056 998 -.0928 1029 22.50 -.13638(*) 03056 009 -.2343 -.0385 30.00 -.24901(*) 03056 000 -.3469 -.1511 22.50 -.00625 00818 868 -.0324 0200 30.00 -.04044(*) 00818 005 -.0666 -.0142 45.00 -.06093(*) 00818 000 -.0871 -.0347 00625 00818 868 -.0200 0324 30.00 -.03419(*) 00818 013 -.0604 -.0080 45.00 -.05468(*) 00818 001 -.0809 -.0285 00 04044(*) 00818 005 0142 0666 22.50 03419(*) 00818 013 0080 0604 45.00 -.02049 00818 134 -.0467 0057 00 06093(*) 00818 000 0347 0871 22.50 05468(*) 00818 001 0285 0809 30.00 02049 00818 134 -.0057 0467 (J) nghiemthuc 00 00 00 * The mean difference is significant at the 05 level 95% Confidence Interval Upper Bound Lower Bound TLS Tukey HSD N nghiemthuc Subset for alpha = 05 00 3928 45.00 3979 22.50 30.00 5342 6469 Sig .998 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 TLC Tukey HSD N nghiemthuc Subset for alpha = 05 00 5382 22.50 5444 30.00 5786 45.00 5991 Sig .868 134 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 1.000 Ấu trùng cho ăn 60 ngày NT  bố trí  đực  cái  tỷ lệ (%)  tỷ lệ sống(%)  22.5  300  30  67  69.42  32.17  22.5  300  35  85  71.01  39.90  22.5  300  40  90  69  43.48  30  300  75  50  40.03  41.64  30  300  62  59 48.71 40.38 30  300  76  67  46.98  47.54  45  300  41  52 55.89 31.01 45  300  38  63  62.57  33.56  45  300  39  56  58.81  31.74  0  300  50  54 51.78 34.76 0  300  44  62  58.76  35.17  0  300  50  74 59.8 41.25 Descriptives TLS TLC N Mean Std Deviation Std Error 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound Lower Bound Upper Bound Lower Bound 00 3928 03618 02089 22.50 5342 04148 30.00 6469 45.00 Total Minimum Maximum Upper Bound Lower Bound Upper Bound 3029 4827 36 43 02395 4312 6373 49 57 04809 02777 5274 7663 60 69 3979 01621 00936 3576 4381 39 42 12 4929 11466 03310 4201 5658 36 69 00 5382 01301 00751 5058 5705 53 55 22.50 5444 00751 00433 5258 5631 54 55 30.00 5786 00302 00174 5711 5861 58 58 45.00 5991 01292 00746 5670 6312 58 61 Total 12 5651 02743 00792 5476 5825 53 61 Multiple Comparisons Tukey HSD Dependent Variable TLS (I) nghiemthuc 00 22.50 30.00 45.00 TLC 00 22.50 30.00 45.00 Mean Difference (I-J) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound Lower Bound Upper Bound Lower Bound 22.50 -.14145(*) 03056 007 -.2393 -.0436 30.00 -.25408(*) 03056 000 -.3520 -.1562 45.00 -.00507 03056 998 -.1029 0928 00 14145(*) 03056 007 0436 2393 30.00 -.11263(*) 03056 026 -.2105 -.0148 45.00 13638(*) 03056 009 0385 2343 00 25408(*) 03056 000 1562 3520 22.50 11263(*) 03056 026 0148 2105 45.00 24901(*) 03056 000 1511 3469 00 00507 03056 998 -.0928 1029 22.50 -.13638(*) 03056 009 -.2343 -.0385 30.00 -.24901(*) 03056 000 -.3469 -.1511 22.50 -.00625 00818 868 -.0324 0200 30.00 -.04044(*) 00818 005 -.0666 -.0142 45.00 -.06093(*) 00818 000 -.0871 -.0347 00 00625 00818 868 -.0200 0324 30.00 -.03419(*) 00818 013 -.0604 -.0080 45.00 -.05468(*) 00818 001 -.0809 -.0285 00 04044(*) 00818 005 0142 0666 22.50 03419(*) 00818 013 0080 0604 45.00 -.02049 00818 134 -.0467 0057 00 06093(*) 00818 000 0347 0871 22.50 05468(*) 00818 001 0285 0809 30.00 02049 00818 134 -.0057 0467 (J) nghiemthuc * The mean difference is significant at the 05 level 95% Confidence Interval ANOVA (ấu trùng đến 60 ngày) TLS TLC Sum of Squares df Mean Square F Sig Between Groups 133 044 31.736 000 Within Groups 011 001 Total 145 11 Between Groups 007 002 24.812 000 Within Groups 001 000 Total 008 11 Tỉ lệ sống (ấu trùng đến 60 ngày) Tukey HSD N Subset for alpha = 05 nghiemthuc 00 3928 45.00 3979 22.50 30.00 Sig 5342 6469 998 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Tỉ lệ Tukey HSD N Subset for alpha = 05 nghiemthuc 30.00 4699 00 6045 45.00 6326 22.50 Sig 7728 1.000 850 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Tỉ lệ chuyển PL Tukey HSD N Subset for alpha = 05 nghiemthuc 1 00 3086 22.50 3215 30.00 4030 45.00 4088 Sig .476 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Tỉ lệ chuyển PL trung bình Nồng độ (ppm) Tỉ lệ chuyển PL(%) 30,3 2,9a 22,5 31,49 9,1a 30 39,13 7,4a 45 39,36 8,9a Giá trị cột có chữ giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Bảng Tỉ lệ sống, tỉ lệ thí nghiệm mục 4.1.5.1 Nồng độ (ppm) Tỉ lệ sống (%) Tỉ lệ (%) 42,23±2,01b 55,72±0,1B  22,5 47,17±3,2b 67,76±1,8A  30 66,61±3,85a 46,85±1,35C  45 35±1,5b 55,92±0,44B  Giá trị cột có chữ giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Bảng Tỉ lệ sống tỉ lệ thí nghiệm mục 4.1.5.2 Nồng độ (ppm) Tỉ lệ sống (%) Tỉ lệ (%) 38,26±3,33c 51,25±1,12B  22,5 50,89±0,64b 51,79±0,64B  30 60,22±3,84a 54,68±0,25A  45 38,74±1,49c 56,38±1,07A  Giá trị cột có chữ giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Bảng Tỉ lệ sống tỉ lệ thí nghiệm mục 4.1.5.3 Nồng độ (ppm) Tỉ lệ sống (%) Tỉ lệ (%) 37,06±3,63ab 56,78±3,63B  22,5 38,52±5,78ab 69,81±1,06A  30 43,18±3,82a 45,24±4,59C  45 32,11±1,31b 59,09±1,31B  Giá trị cột có chữ giống khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê ... SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 4.1 Tỉ lệ sống ấu trùng tác dụng dopamine hydrochoride 21 Bảng 4.2 Mật độ quang tương ứng với nồng độ dopamine 21 Bảng 4.3 Kết phân tích hàm lượng dopamine Artemia... three concentrations (22,5; 30 and 45 ppm) of dopamine hydrochloride was examined to compare its affects on sex reversal in Macrobrachium rosenbergii Napuliies have eaten enriched dopamine Artemia;... 3.3.2 Thí nghiệm ảnh hưởng dopamine lên chuyển đổi giới tính TCX 19 3.3.2.1 Thí nghiệm bổ sung dopamine từ ấu trùng đến 30 ngày tuổi 19 3.3.2.2 Thí nghiệm bổ sung dopamine từ giai đoạn PL5