Đặc điểm bệnh lý bệnh còi xương ở chó và biện pháp điều trị (tt)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM PHẠM THỊ LAN HƯƠNG ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ BỆNH CỊI XƯƠNG Ở CHĨ VÀ BIỆN PHÁP ĐIỀU TRỊ Chuyên ngành: Bệnh lý học chữa bệnh vật ni Mã số: 9.64.01.02 TĨM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2018 Cơng trình hồn thành tại: HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Văn Thanh PGS.TS Chu Đức Thắng Phản biện 1: GS.TS Nguyễn Quang Tuyên Trường Đại học Nông Lâm, Đại học Thái Nguyên Phản biện 2: PGS.TS Tô Long Thành Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung ương Phản biện 3: TS Hồ Thị Thu Hà Trung tâm Kiểm nghiệm Thuốc thú y Trung ương Luận án bảo vệ trước Hội đồng Đánh giá luận án cấp Học viện họp tại: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Vào hồi phút, ngày tháng năm 2018 Có thể tìm hiểu luận án tại: Thư viện Quốc gia Việt Nam Thư viện Lương Định Của - Học viện Nơng nghiệp Việt Nam PHẦN MỞ ĐẦU 1.1.TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Chó giống vật ni người hóa từ sớm (cách khoảng 15000 năm vào cuối Kỷ băng hà) (Brewer et al., 2002) động vật nuôi phổ biến giới Với đặc tính nhanh nhẹn, thơng minh, tình cảm, trung thành,… lồi chó chiếm vị trí quan trọng đời sống người người sử dụng vào nhiều công việc thuộc nhiều lĩnh vực khác Chúng thay người thực từ cơng việc bình thường giữ nhà, bắt chuột, chăn dắt gia súc, kéo xe,… đến công việc phức tạp như: dùng để phát ma túy, bom mìn, truy tìm tội phạm,… Ngày nay, chó ngày sử dụng với mục đích xã hội hướng dẫn cho người mù tàn tật Thậm chí chó sử dụng nhà dưỡng lão bệnh viện để giúp bệnh nhân hồi phục Vì vậy, chó coi người bạn tốt người Ở Việt Nam, việc ni chó phát triển rộng rãi thành phố vùng nông thôn Khi số lượng chó tăng lên đồng nghĩa với việc dịch bệnh chó xảy nhiều thường xuyên Trong bệnh thường xảy chó phải kể đến bệnh hệ hô hấp viêm phổi, bệnh hệ tiêu hóa viêm ruột tiêu chảy, bệnh truyền nhiễm care…Ngoài bệnh trên, bệnh còi xương bệnh thường xun xuất đàn chó Còi xương bệnh gia súc non thời kỳ phát triển nói chung chó nói riêng Bệnh có liên quan mật thiết đến rối loạn q trình chuyển hóa Ca, P vitamin D (Ettinger et al., 2000) Bệnh thường gặp chó từ - tháng tuổi, giai đoạn mà hệ xương phát triển mạnh Ngun nhân gây còi xương chó thường thiếu vitamin D chế độ ăn thiếu Ca, P Vitamin D giúp tăng cường hấp thu Ca Khi thiếu vitamin D làm cho thể không hấp thu đủ lượng Ca ruột dẫn đến thiếu Ca máu Bệnh còi xương làm cho cốt hóa đầu xương hậu làm xương bị biến dạng, từ ảnh hưởng đến phát triển chó (Đào Trọng Đạt, 2004 Phạm Ngọc Thạch cs., 2006) Bên cạnh đó, bệnh còi xương làm giảm hiệu chí làm khả làm việc chó, đặc biệt làm tính cân đối thân hình, vẻ đẹp đáng yêu làm giảm giá trị chó Ở nước ta, bệnh còi xương chó chưa quan tâm, chó mắc bệnh khơng chẩn đoán sớm ảnh hưởng đến hiệu điều trị bệnh Bên cạnh đó, cơng trình nghiên cứu bệnh còi xương chó Xuất phát từ thực tế trên, đề tài tiến hành nghiên cứu đặc điểm bệnh lý chó mắc bệnh còi xương, đồng thời tiến hành điều trị thử nghiệm bệnh còi xương chó Kết nghiên cứu có ý nghĩa quan trọng cung cấp liệu khoa học hỗ trợ việc chẩn đoán bệnh dựa vào đặc điểm bệnh lý đặc trưng bệnh lựa chọn phác đồ điều trị bệnh hiệu góp phần làm giảm thiệt hại bệnh còi xương gây cho đàn chó ni nước 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Xác định số đặc điểm bệnh lý chủ yếu chó mắc bệnh còi xương Kết nghiên cứu sở cho việc chẩn đoán phát bệnh dựa vào biểu lâm sàng Bên cạnh đó, xác định hiệu phác đồ điều trị bệnh còi xương chó, từ làm sở cho việc áp dụng phác đồ điều trị vào thực tiễn sản xuất để làm giảm thiểu tác hại bệnh gây 1.3 PHẠM VI NGHIÊN CỨU 1.3.1 Đối tượng nghiên cứu Chúng tiến hành nghiên cứu bốn giống chó (H’mơng cộc, Phú Quốc, Bergie, Rottweiler) độ tuổi từ đến tháng tuổi mắc bệnh còi xương Các giống chó nghiên cứu đề tài kiểm tra phương pháp thường quy tiên tiến để loại bỏ bệnh ký sinh trùng (giun, sán) bệnh truyền nhiễm (care, pavovirus, xoắn khuẩn) 1.3.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu Các nghiên cứu thực từ 2014-2017, địa điểm: - Phòng khám Thú y cộng đồng, Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam - Một số phòng khám Hà Nội (Phòng khám Vietvet 89 Nghi Tàm, Phòng khám 240 Âu Cơ, Phòng khám Hanvet) - Các hộ chăn ni gia đình số tỉnh miền Bắc (Hà Nội, Lạng Sơn, Hải Dương, Hưng n, Thái Bình, Hải Phòng, Quảng Ninh) - Phòng thí nghiệm mơn Nội- Chẩn- Dược- Độc chất, Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam - Bệnh viện đa khoa Medlatec, 42 Nghĩa Dũng, Ba Đình, Hà Nội 1.4 NHỮNG ĐĨNG GĨP MỚI CỦA ĐỀ TÀI Kết luận án cho thấy biểu lâm sàng (sự biến đổi xương) thay đổi tiêu huyết học (đặc biệt hàm lượng Ca, P vitamin D) giống chó H’mơng cộc, Phú Quốc, Bergie, Rottweiler (1 - tháng tuổi) mắc bệnh còi xương thu thập từ tỉnh phía Bắc Việt Nam (Hà Nội, Lạng Sơn, Hải Dương, Hưng n, Thái Bình, Hải Phòng, Quảng Ninh Bên cạnh đó, điểm nghiên cứu ứng dụng phương pháp chẩn đốn hình ảnh để thấy biến đổi khớp xương bệnh giai đoạn sớm Từ giúp cho việc chẩn đốn bệnh giai đoạn sớm, làm giảm ảnh hưởng mà bệnh gây giúp cho việc điều trị bệnh có hiệu cao 1.5 Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI 1.5.1 Ý nghĩa khoa học Kết nghiên cứu tài liệu tham khảo dùng giảng dạy nghiên cứu bệnh còi xương chó trường, viện nghiên cứu chuyên ngành thú y Đây tư liệu khoa học quý báu cần thiết cho người làm công tác thú y sở bệnh còi xương Đồng thời kết nghiên cứu đề tài phục vụ cho nghiên cứu bệnh còi xương chó, đồng thời đóng góp tư liệu tham khảo dùng giảng dạy ngành thú y 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn Kết nghiên cứu sở cho việc chẩn đoán, phát bệnh dựa vào biểu lâm sàng biến đổi tiêu huyết học Bên cạnh đó, hình ảnh biến đổi xương, khớp xương qua phương pháp chẩn đốn hình ảnh giúp cho việc chẩn đốn sớm bệnh còi xương từ tạo sở cho việc điều trị bệnh đạt hiệu cao góp phần giảm bớt thiệt hại bệnh gây PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 NGUỒN GỐC VÀ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA CHĨ Chó động vật ni người hóa cách 15.000 năm vào cuối Kỷ băng hà (Brewer, 2002) Tổ tiên chó bao gồm cáo chó sói, loại động vật có vú gần giống chồn sinh sống hốc vào khoảng 400 triệu năm trước Con người hóa chó sói qua lai giống nhiều hệ, chó sói tiến hóa thành chó nhà 2.2 VAI TRỊ VÀ SỰ RỐI LOẠN CHUYỂN HĨA CHẤT KHỐNG Có khoảng 40 chất khống tham gia vào q trình trao đổi chất thể động vật Trong tự nhiên, 22 chất khoáng mà thể động vật cần tới Khoáng chia làm nhóm vào hàm lượng thể nhu cầu động vật: nhóm khoáng đa lượng khoáng vi lượng, tùy theo hàm lượng thể Khống chất có vai trò quan trọng đời sống vật nuôi, đặc biệt điều kiện chăn ni tập trung Mặc dù chất khống khơng có giá trị lượng có vai trò quan trọng trình sinh trưởng, sinh sản sản xuất Khi thiếu hụt chất khoáng so với nhu cầu, vật nuôi bị ảnh hưởng xấu trước tiên sức khỏe, sau suất phẩm chất vật ni 2.3 CHUYỂN HĨA, HẤP THU VITAMIN D Các cơng trình nghiên cứu vitamin D năm 1916 Tới năm 1931 người ta tổng hợp thành cơng vitamin D Đây nhóm hóa chất bao gồm số dạng có cấu trúc gần vitamin D2, D3, D4, D5, D6…trong phương diện dinh dưỡng có hai chất quan trọng Ecgocanxiferon (vitamin D2) Cholecanxiferon (vitamin D3) (Holick, 2006) Sau vitamin D hấp thụ ruột tổng hợp từ da, nhanh chóng dự trữ vào mỡ chuyển hóa gan Dự trữ vitamin D mỡ sử dụng vào mùa đông Bước q trình hoạt hóa chuyển hóa vitamin D phản ứng hydroxyl hóa (hydroxylation) carbon vị trí 25 q trình xảy chủ yếu gan Ở men 25-hydroxylase tế bào gan biến thành 25 hydroxy vitamin D (25-OH-D) 25(OH)D dạng lưu hành tuần hồn vitamin D (Institute of medicine, food and nutrition board, 2010) Bước thứ q trình hoạt hóa vitamin D hình thành 1α, 25dihydroxyvitamin D (1,25[OH]2D enzym 1a-hydroxylase có chủ yếu thận Hoạt tính 1a-hydroxylase thận điều hòa mức độ cao có chức trì nồng độ Ca giới hạn bình thường Nồng độ Ca huyết tương thấp kích thích enzym điều hồ chức hormon cận giáp (PTH) 2.4 BỆNH CÒI XƯƠNG 2.4.1 Định nghĩa bệnh còi xương Còi xương bệnh loạn dưỡng xương thiếu vitamin D làm rối loạn chuyển hóa Ca P thể gây nên tổn thương xương Còi xương làm xương mềm yếu thường gặp gia súc non giai đoạn phát triển (đặc biệt sau giai đoạn cai sữa) 2.4.2 Tình hình nghiên cứu bệnh còi xương giới Việt Nam 2.4.2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh còi xương giới Đến kỉ 17, bệnh còi xương ý, đặc biệt sau cơng trình Glisson Có thể chia lịch sử nghiên cứu bệnh còi xương làm hai giai đoạn - Giai đoạn đầu trước tìm vitamin D (từ đầu kỷ 17 đến đầu kỷ 20): giai đoạn có cơng trình nghiên cứu lâm sàng Glimo (1609), Whistler (1645) mô tả biến dạng hệ xương Bệnh còi xương gọi “bệnh nước Anh” thời bệnh phổ biến trẻ em nước Anh Năm 1650, Glisson-nhà giải phẫu chỉnh hình người Anh xuất sách nhan đề “De Rachitide Sive Morbo Puerili” mô tả lâm sàng giải phẫu bệnh lý còi xương lần đưa thuật ngữ “Rachitide”, mà gọi bệnh còi xương - Giai đoạn sau tìm vitamin D: Windaus (1927 - 1937) phát vitamin D2 chiếu tia cực tím vào Ergosterol Sau đó, nhiều tác giả tìm cấu trúc hóa học loại vitamin D (Bills, 1937 có 11 loại vitamin D) Các cơng trình nghiên cứu chuyển hóa vitamin D Delucac et al (1969) phân lập tổng hợp 25 - OH - D Holick M F et al (1971) phát 1,25 - (OH)2 - D thận sau Deluca (1972) tổng hợp chúng Kodicek (1973) tổng hợp 1α - (OH)2 - D Các cơng trình nghiên cứu chuyển hóa vitamin D giúp hiểu biết sinh lí bệnh bệnh còi xương 2.4.2.2 Tình hình nghiên cứu bệnh còi xương Việt Nam Các biểu lâm sàng bệnh còi xương chó nghiên cứu tác giả: Đào Trọng Đạt (2004), Phạm Ngọc Thạch cs (2006) Các tác giả cho bệnh còi xương tiến triển qua ba thời kỳ Thời kỳ đầu bệnh, vật thường giảm ăn, tiêu hố thích nằm, có tượng đau khớp Khi bệnh tiến triển, vật hay ăn bậy (gặm tường, ăn đất đá, ăn chất độn chuồng…), mọc thay chậm Một số trường hợp có triệu chứng co giật Cuối thời kỳ bệnh, xương biến dạng, khớp sưng to, cong xương dài vùng chi, sống lưng cong lên hay vặn vẹo, lồng ngực xương chậu hẹp, xương ức lồi,…Con vật gầy yếu hay kế phát bệnh khác Nếu không kế phát bệnh khác suốt trình bệnh vật không sốt PHẦN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU - Phòng khám Thú y cộng đồng, Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam - Một số phòng khám Hà Nội (Phòng khám Vietvet 89 Nghi Tàm, Phòng khám 240 Âu Cơ, Phòng khám Hanvet) - Các hộ chăn ni chó số tỉnh miền Bắc (Hà Nội, Lạng Sơn, Hải Dương, Hưng n, Thái Bình, Hải Phòng, Quảng Ninh) - Phòng thí nghiệm mơn Nội- Chẩn- Dược- Độc chất, Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam - Bệnh viện đa khoa Medlatec, 42 Nghĩa Dũng, Ba Đình, Hà Nội - Phòng khám chăm sóc thú cưng Gaia, 38 Đường 1, F361, An Dương, Tây Hồ, Hà Nội 3.2 THỜI GIAN NGHIÊN CỨU Các nghiên cứu thực từ năm 2014-2017 3.3 ĐỐI TƯỢNG VÀ VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu Chúng tơi tiến hành nghiên cứu bốn giống chó (H’mông cộc, Phú Quốc, Bergie, Rottweiler) độ tuổi từ đến tháng tuổi mắc bệnh còi xương Các giống chó nghiên cứu đề tài kiểm tra để loại bỏ bệnh ký sinh trùng (giun, sán) bệnh truyền nhiễm (care, pavovirus) Đối với bệnh truyền nhiễm (care, pavovirus): tất chó nghiên cứu tiêm phòng vacxin Vanguards Plus 5/CV-L dùng tets thử chẩn đoán bệnh Đối với bệnh ký sinh trùng (giun, sán): tiến hành lấy mẫu phân dùng phương pháp Fullerborn để kiểm tra 3.3.2 Vật liệu nghiên cứu - Mẫu máu lấy từ chó chẩn đốn mắc bệnh còi xương qua biểu lâm sàng số tỉnh miền Bắc Việt Nam - Dụng cụ, trang thiết bị: + Dụng cụ: xilanh, kim tiêm, nhiệt kế điện tử, ống nghe, cồn, ống đựng máu, ống tách huyết thanh, găng tay, đá lạnh, bình quản bảo máu + Trang thiết bị: máy huyết học 18 tiêu (Hema Screen-18), máy xét nghiệm hóa sinh tự động AU 5800, máy chụp X- quang - Hóa chất dùng nghiên cứu: + Hóa chất sử dụng để định lượng hàm lượng Canxi huyết thanh: dung dịch chuẩn Canxi 2,5 mmol/l, dung dịch lên màu: Phosphate buffer pH 7,5: 50 mmol/l; hydroquiline-5-sulfonic acid: mmol/l ; Arsennozo III: 120 mol/l ; Detergents + Hóa chất sử dụng để định lượng hàm lượng Photpho huyết thanh: Thuốc thử 1: Sulfuric acid: 0.36 mol/L; detergent, Thuốc thử 2: Ammonium molybdate: 3.5 mmol/L; Sulfuric acid: 0.36 mol/L; Sodium chloride: 150 mmol/L, dung dịch QC (quality control) + Hóa chất sử dụng để định lượng hàm lượng vitamin D huyết thanh: đệm dung dịch hexane lỏng, methanol 50% 3.4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 3.4.1 Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý chó mắc bệnh còi xương - Xác định số biểu lâm sàng chó mắc bệnh còi xương - Xác định số tiêu lâm sàng chó mắc bệnh còi xương - Xác định thay đổi tiêu máu chó mắc bệnh còi xương - Xác định thay đổi hàm lượng Ca, P, vitamin D huyết chó mắc bệnh còi xương 3.4.2 Xác định biến đổi xương khớp xương chó mắc phương pháp chẩn đốn hình ảnh - Xác định biến đổi xương (xương dài vùng chi) chó mắc bệnh còi xương - Xác định biến đổi khớp xương chó mắc bệnh còi xương 3.4.3 Điều tra tỷ lệ chó mắc bệnh còi xương - Điều tra tỷ lệ chó mắc bệnh còi xương theo độ tuổi - Điều tra tỷ lệ chó mắc bệnh còi xương theo giống 3.4.4 Phác đồ điều trị thử nghiệm bệnh còi xương - Xây dựng 02 phác đồ điều trị thử nghiệm bệnh còi xương - Đánh giá hiệu điều trị 02 phác đồ 3.5 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.5.1 Phương pháp khám lâm sàng Biểu lâm sàng chó mắc bệnh còi xương tiến hành theo dõi, quan sát phòng khám địa bàn Hà Nội số tỉnh (Hà Nội, Lạng Sơn, Hải Dương, Hưng n, Thái Bình, Hải Phòng, Quảng Ninh) Sau ghi chép triệu chứng lâm sàng chó nghi mắc bệnh còi xương Xác định chó mắc bệnh còi xương dựa triệu chứng lâm sàng điển hình: hạ bàn chân, sưng khớp chân, xương chi có tương cong biến dạng,… (Theo Đào Trọng Đạt, 2004, Phạm Ngọc Thạch cs., 2006) Các tiêu lâm sàng bao gồm: thân nhiệt, tần số hô hấp, tần số tim mạch sử dụng phương pháp thường quy - Xác định tần số hô hấp (lần/phút): thông qua việc quan sát hoạt động thành ngực, thành bụng kết hợp với dùng ống nghe đếm trực tiếp số lần hoạt động phổi - Xác định tần số tim mạch (lần/ phút): phương pháp sử dụng ống nghe nghe trực tiếp hoạt động tim - Xác định thân nhiệt (0C): nhiệt kế điện tử hãng Omron model MC-240 đo trực tiếp trực tràng vào sáng sớm 3.5.2 Phương pháp xét nghiệm số tiêu huyết học chó mắc bệnh còi xương - Lấy máu vào buổi sáng sớm chó chưa cho ăn Lấy máu tĩnh mạch khoeo tĩnh mạch bàn - Lấy 2ml máu/con, đưa vào ống bảo quản có chứa chất chống đơng, sau phân tích tiêu máu máy đếm huyết học Hema Screen-18 3.5.3 Nghiên cứu biến đổi hàm lượng Canxi, Photpho, hàm lượng vitamin D huyết chó mắc bệnh còi xương 3.5.3.1 Phương pháp định lượng hàm lượng Canxi huyết Sử dụng máy xét nghiệm hóa sinh tự động AU 5800 - Lấy mẫu bệnh phẩm: Cho máu vào ống nghiệm chuyên dùng (nắp đỏ) đậy nắp Trộn ống nghiệm nhẹ nhàng lên xuống nhiều lần (mạng lưới fibrin tế bào nhanh chóng bao phủ hạt silica micronised tạo thành cục máu đông) Huyết tách nhanh vài phút sau lấy máu thay phải chờ tiến trình đơng máu bình thường Sau ly tâm, hạt silica micronised ngăn cách riêng biệt: huyết phía cục máu đơng phía giúp ngăn chặn trao đổi chất tế bào máu huyết thanh, giữ thành phần hóa học huyết khơng thay đổi thời gian dài - Chuẩn máy dung dịch chuẩn (một nhiều chuẩn =multical) Phân tích QC: level Khi QC đạt tiến hành phân tích mẫu - Mẫu sau ly tâm chuyển vào khay đựng bệnh phẩm - Lựa chọn test máy tự động phân tích mẫu bệnh phẩm - Đọc bước sóng 546 nm 3.5.3.2 Phương pháp định lượng Canxi ion hóa Sử dụng phương pháp điện cực chọn lọc + Các bước tiến hành: - Lấy mẫu bệnh phẩm: Cho máu vào tube tách huyết (nắp đỏ) đậy nắp Trộn ống nghiệm nhẹ nhàng lên xuống nhiều lần (mạng lưới fibrin tế bào nhanh chóng bao phủ hạt silica micronised tạo thành cục máu đông) Huyết tách nhanh vài phút sau lấy máu thay phải chờ tiến trình đơng máu bình thường Sau ly tâm, hạt silica micronised ngăn cách riêng biệt: huyết phía cục máu đơng phía giúp ngăn chặn trao đổi chất tế bào máu huyết thanh, giữ thành phần hóa học huyết không thay đổi thời gian dài - Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực phân tích mẫu: Máy chuẩn với xét nghiệm Ca++ Kết kiểm tra chất lượng với xét nghiệm Ca++ đạt yêu cầu - Nạp mẫu bệnh phẩm vào máy phân tích - Ra lệnh cho máy thực phân tích mẫu bệnh phẩm - Đợi máy phân tích mẫu theo protocol máy 3.5.3.3 Phương pháp định lượng hàm lượng Photpho huyết Sử dụng máy xét nghiệm hóa sinh tự động AU 5800 + Các bước tiến hành: - Lấy mẫu bệnh phẩm: Cho máu vào tube tách huyết (nắp đỏ) đậy nắp Trộn ống nghiệm nhẹ nhàng lên xuống nhiều lần (mạng lưới fibrin tế bào nhanh chóng bao phủ hạt silica micronised tạo thành cục máu đông) Huyết tách nhanh vài phút sau lấy máu thay phải chờ tiến trình đơng máu bình thường Sau ly tâm, hạt silica micronised ngăn cách riêng biệt: huyết phía cục máu đơng phía giúp ngăn chặn trao đổi chất tế bào máu huyết thanh, giữ thành phần hóa học huyết khơng thay đổi thời gian dài - Chuẩn máy dung dịch chuẩn (một nhiều chuẩn =multical) Phân tích QC: level Khi QC đạt tiến hành phân tích mẫu - Mẫu sau ly tâm chuyển vào khay đựng bệnh phẩm - Lựa chọn test máy tự động phân tích mẫu bệnh phẩm 3.5.3.4 Phương pháp định lượng vitamin D (dạng 25 - OH - D3 1,25 - (OH)2 - D3) Máu thu cách lấy máu từ tĩnh mạch có sử dụng chất chống đơng máu Sau đem ly tâm để lấy huyết Huyết thả lên giấy lọc để khơ, có miếng giấy lọc tròn nhỏ Từ mẫu nhỏ đó, mẫu lấy cách sử dụng đệm dung dịch hexane lỏng Sau bay hexane phục hồi methanol 50%, 20μL dung dịch mẫu đưa vào hệ thống HPLC/MS để đo vitamin D Xét nghiệm máu chỗ cách sử dụng HPLC/MS phương pháp đáng tin cậy thuận tiện để đánh giá tình trạng vitamin D Sử dụng phép đo phổ khối cho phép phân tích định lượng hai dạng Vitamin D (25 - OH - D3 1,25 - (OH)2 -D3) 3.5.4 Điều tra tỷ lệ chó mắc bệnh còi xương Chúng tơi tập hợp thống kê hồ sơ, bệnh án phòng khám với việc theo dõi trực tiếp hỏi chủ ni chó Điều tra tỷ lệ mắc bệnh theo độ tuổi giống chó Thơng tin tổng hợp dựa vào hồ sơ bệnh án (mẫu phụ lục 1) 3.5.5 Phương pháp chụp X - quang xương khớp xương vùng chi - Cho chó nằm bàn X - quang, chân cần chụp duỗi thẳng - Phim 30x40cm, đặt dọc xương cẳng chân, chỉnh cẳng chân vào trung tâm phim, khu trú chùm tia che chắn chì theo chiều dọc - Tia trung tâm: chiếu thẳng từ xuống vng góc với phim, khu trú vào điểm xương cẳng chân - Hằng số chụp: 50 kV, 20 mAs, 1m, không dùng lưới lọc 3.5.6 Phác đồ điều trị thử nghiệm bệnh còi xương Thử nghiệm điều trị bệnh còi xương 02 phác đồ khác nhau, thời gian điều trị tối đa 15 ngày Đánh giá hiệu phác đồ điều trị thông qua tỷ lệ khỏi bệnh Tiến hành điều trị thử nghiệm 36 chó mắc bệnh còi xương hai phác đồ Để đánh giá, so sánh hiệu điều trị hai phác đồ, 36 chó điều trị thực nghiệm chia làm lô lô 18 độ tuổi từ - tháng, có mức độ bệnh (chó bệnh đánh giá qua biểu lâm sàng chó có tượng hạ bàn, sưng khớp) Ngoài việc dùng thuốc điều trị theo phác đồ lô chăm sóc hộ lý Hộ lý: - Xoa dầu nóng khớp xương bị sưng - Cho chó vận động, tắm nắng, thời gian sáng từ 7h-9h, chiều từ 3h-5h, ngồi chúng tơi cho chó tập chạy để tăng khả vận động Chế độ ăn: - Cải thiện phần ăn cho chó, tăng phần giàu protein - Bổ sung Ca, P vitamin D phần thức ăn hàng ngày chế phẩm premix Phác đồ 1: - Bổ sung canxi chế phẩm calcium gluconate 10 % Tiêm bắp với liều 2-5 ml/con/ngày - Tiêm bắp với chế phẩm VIT ADE với liều 1-3 ml/con/ngày - Tiêm bắp B - complex liều 1ml/10kg, ngày lần Phác đồ 2: - Bổ sung canxi chế phẩm calcium cloride 10% Tiêm chậm vào tĩnh mạch với liều 0,1 ml/kg, ngày lần - Tiêm bắp với chế phẩm VIT ADE với liều 1-3 ml/con/ngày - Dùng thuốc tăng cường trương lực cơ, kích thích tiêu hố bồi bổ thần kinh: Bảng 4.1 Biểu lâm sàng chó mắc bệnh còi xương Giảm ăn Biểu Nằm nhiều Hay ăn bậy Cong xương dài vùng chi Hạ bàn chân Rối loạn tiêu hóa Sưng khớp vùng chi Giống chó 11 SL Tỷ lệ (%) SL Tỷ lệ (%) SL Tỷ lệ (%) SL Tỷ lệ (%) SL Tỷ lệ (%) SL Tỷ lệ (%) SL Tỷ lệ (%) H Mông cộc (n=25) 28,00 20,00 20 80,00 17 68,00 20 80,00 11 44,00 12 48,00 Bergie (n=57) 10,52 15,78 51 89,47 54 94,73 56 98,24 16 28,07 18 31,57 Phú Quốc (n=31) 25,80 25,80 23 74,19 26 83,87 29 93,54 14 45,16 10 32,25 Rottweiler (n=58) 15,51 12 20,68 52 89,65 55 94,82 57 98,27 19 32,75 17 29,31 Tổng hợp 30 17,54 34 19,88 146 85,38 152 88,88 162 94,73 60 35,08 57 33,33 11 Bảng 4.2 Thân nhiệt, tần số hô hấp tần số tim mạch giống chó nội mắc bệnh còi xương Chỉ tiêu Thân nhiệt (0C) Tần số hô hấp (lần/phút) Tần số tim mạch (lần/phút) Đối tượng Số theo dõi (con) Chó khỏe n=20 38,16±0,07a 38,20-39,20 38,90±1,69b 30-40 95,30±1,23c 90-100 Chó mắc bệnh còi xương n=56 38,80±0,15a 38,10-39,0 38,95±1,50b 31-39 97,63±0,54c 85-102 P Phạm vi dao động X  mx X  mx > 0,05 Phạm vi dao động Phạm vi dao động X  mx > 0,05 > 0,05 Chú thích: chữ a, b,c cột khác sai khác có ý nghĩa (P 0,05 33-40 96,13±0,5c 89- 121 > 0,05 > 0,05 Chú thích: chữ a, b,c cột khác sai khác có ý nghĩa (P 0,05 < 0,05 < 0,05 < 0,05 Đối tượng P Bạch cầu toan Chú thích: chữ a, b cột khác sai khác có ý nghĩa (P