Điều tra thành phần bệnh nấm hại hạt giống lạc, nghiên cứu bệnh héo rũ gốc mốc đen(aspergillus niger) hại lạc vùng hà nội và phụ cận vụ xuân 2004

Điều tra thành phần bệnh nấm hại hạt giống lạc, nghiên cứu bệnh héo rũ gốc mốc đen(aspergillus niger) hại lạc vùng hà nội và phụ cận vụ xuân 2004

lời cam đoan

Tôi xin cam đoan, số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và ch−a hề đ−ợc sử dụng để bảo vệ một học vị nào

Tôi xin cam đoan rằng, mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn này đã đ−ợc cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn

đều đã đ−ợc chỉ rõ nguồn gốc

Tác giả luận văn

Để hoàn thành đề tài này, tôi đã nhận được sự giúp đỡ quý báu của nhiều cá nhân, tập thể và trường đại học

Trước hết, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới cô giáo TS Ngô Bích Hảo đã hướng dẫn và giúp đỡ tôi hoàn thành đề tài

Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Kim Vân, TS Đỗ Tấn Dũng, Bộ môn Bệnh cây và Nông d ược, Trung tâm Bệnh cây nhiệt

đới đã tạo điều kiện giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn các thầy, cô giáo Khoa Nông học, Khoa Sau Đại học đã giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực hiện

đề tài nghiên cứu và viết luận văn tốt nghiệp

Qua đây tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới cha mẹ và những người thân đã luôn động viên, giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài

Hà Nội, ngày 20 tháng 09 năm 2004

Tác giả

Đinh Thị Ngọc

mục lục

2.1 Tình hình nghiên cứu ngoài nước 9

2.1.1 Nghiên cứu thành phần bệnh trên hạt giống lạc 9 2.1.2 Nghiên cứu về nấm Aspergillus niger gây bệnh héo rũ gốc

2.1.2.1 Tính phổ biến và tác hại của nấm A niger 10 2.1.2.2 Phân bố và phạm vi ký chủ của nấm A niger 12 2.1.2.3 Đặc điểm sinh học, sinh thái học của nấm A niger 12 2.1.2.4 Đặc điểm phát sinh phát triển của nấm A niger 14

2.1.2.5 Triệu chứng bệnh héo rũ gốc mốc đen hại lạc 162.1.2.6 Nguyên nhân gây bệnh héo rũ gốc mốc đen hại lạc 182.1.2.7 Phương pháp chẩn đoán nấm bệnh A niger 20

2.1.2.8 Phòng trừ nấm A niger gây bệnh héo rũ gốc mốc đen 21

2.2 Tình hình nghiên cứu trong nước 24

3 Đối tượng, địa điểm, nội dung và phương pháp 31

3.3.2.1 Phương pháp thu thập mẫu hạt lạc 333.3.2.2 Phương pháp nghiên cứu trong phòng 333.3.2.3 Phương pháp điều tra ngoài đồng ruộng 353.3.2.4 Phương pháp bố trí thí nghiệm và theo dõi diễn biến của

bệnh trên một số giống lạc khảo nghiệm 363.3.2.5 Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của thuốc hoá học đến sự

phát triển của nấm A.niger trên môi trường nuôi cấy 36

3.3.2.6 Phương pháp khảo sát hiệu quả của một số thuốc hoá học

dùng xử lý nấm A niger trên hạt giống lạc và ảnh hưởng

của chúng đến sức nảy mầm của hạt 373.3.2.7 Thí nghiệm khảo sát hoạt tính đối kháng của nấm

Trichoderma spp với nấm A niger trên môi trường PGA 37

4.1 Tình hình nhiễm nấm bệnh trên hạt giống lạc vụ xuân 2003 39

4.1.1 Thành phần bệnh nấm hại hại hạt giống lạc vụ xuân 2003 39 4.1.2 Tình hình nhiễm nấm Aspergillus spp trên hạt giống lạc thu

4.1.2.1 Tình hình nhiễm nấm Aspergillus spp trên hạt giống lạc

theo một số vùng sinh thái điều tra 45

4.1.2.2 Tình hìnnhiễm nấm A niger và A flavus trên hạt giống

4.2 Kết quả nghiên cứu của nấm A niger hại hạt giống lạc 50

4.2.1 Kết quả giám định các isolates nấm A niger phân lập từ các

vùng sinh thái trong điều kiện nuôi cấy invitro trên môi

4.2.2 ảnh hưởng của tỉ lệ hạt nhiễm nấm A niger đến sức nảy

4.2.4 Nghiên cứu ảnh hưởng của mức nhiễm nấm A niger trên hạt

giống lạc đến tỉ lệ nhiễm A niger trên các bộ phận của hạt 57 4.2.5 ảnh hưởng của pH đến sinh trưởng và phát triển của nấm A

4.3 ảnh hưởng của một số loại thuốc hóa học đối với nấm A niger

4.4 ảnh hưởng của thuốc Carbenzim 50WP đối với nấm A niger trên

4.4.1 ảnh hưởng của nồng độ thuốc Carbenzim 50WP đến sự phát

4.5 Tình hình phát sinh phát triển của bệnh héo rũ gốc mốc đen

4.5.1.Diễn biến bệnh HRGMĐ trên một số giống lạc mới đang khảo

nghiệm tại trường ĐH Nông nghiệpI - vụ xuân 2004 66

4.5.2 Diễn biến bệnh HRGMĐ trên một số giống lạc phổ biến trong

4.4.3 Tình hình bệnh HRGMĐ hại lạc ở một số vùng sinh thái

4.6 Nghiên cứu khả năng phòng trừ nấm A niger gây bệnh HRGMĐ lạc 72

4.6.1 Nghiên cứu khả năng phòng trừ nấm A niger bằng biện

4.6.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của một số thuốc xử lý hạt giống

4.6.1.2 ảnh hưởng của một số thuốc hoá học dùng xử lý hạt đến

mức nhiễm nấm A niger trên hạt giống lạc 74

4.6.2 Nghiên cứu hiệu quả phòng trừ nấm A niger bằng chế phẩm

Mở đầu

1.1 Đặt vấn đề

Cây lạc (Arachis hypogeae L.) thuộc cây họ đậu có nguồn gốc ở Nam

Mỹ, được trồng ở trên 100 quốc gia thuộc cả 6 châu lục Lạc là cây trồng có giá trị dinh dưỡng và kinh tế cao, là cây công nghiệp đứng thứ 2 trong các cây lấy dầu thực vật (xét cả về diện tích gieo trồng và sản lượng) Sản phẩm chế biến từ lạc rất đa dạng trong đó chủ yếu là từ hạt Hạt lạc chứa khoảng 50% lipít và 25% protein, là nguồn nguyên liệu quan trọng cho công nghiệp chế

biến dầu và khô dầu (D J Allen and J M Lenné (1998)[40])

Do cây lạc phù hợp và thích ứng nhanh với điều kiện nhiệt đới, á nhiệt

đới, các vùng có khí hậu ẩm nên hiện nay, nó được trồng chủ yếu ở các vùng

á - Phi như ấn Độ, Trung Quốc, Senegal, Indonexia, Malaysia, Nigeria, Myanma, v v Tuy nhiên, khoảng 70% tổng sản lượng lạc toàn thế giới chỉ tập

trung ở ba quốc gia là ấn Độ, Trung Quốc, Mỹ (N Kokalis-Burelle[54])

ở Việt Nam, chưa có tài liệu xác minh cụ thể cây lạc được du nhập vào

từ bao giờ nhưng theo một số tài liệu cổ thì cây lạc được du nhập vào từ Trung Quốc Ngày nay, lạc là một trong những cây đậu đỗ quan trọng, được trồng rộng khắp trong nước với diện tích xấp xỉ 250.000 ha, chiếm khoảng 39% tổng diện tích cây công nghiệp hàng năm, sản lượng trên 350.000 tấn/ha (Niên

giám thống kê 2001[24])

Cũng giống như những cây trồng khác, sản xuất lạc gặp nhiều khó khăn, một trong những nguyên nhân chính là do bệnh hại Các kết quả nghiên cứu trước đây đều khẳng định: bệnh hại là một trong những nguyên nhân

chính làm giảm năng suất và phẩm chất lạc

Theo [40][54]: bệnh hại lạc do rất nhiều loài nấm, vi khuẩn, phytoplasma, hơn 20 loài virus và ít nhất 100 loài tuyến trùng trong đó chiếm

đa số và gây thiệt hại nghiêm trọng nhất là nhóm bệnh nấm

Một trong những nguồn bệnh hại quan trọng trên lạc phải kể đến là bệnh truyền qua hạt giống Theo thống kê chung, thiệt hại do bệnh truyền qua hạt đối với sản xuất lương thực trên thế giới ước tính khoảng 12% tổng sản lượng, tương

đương với 550 triệu tấn mỗi năm (V K Agarwal and Jame B Sinclair[62])

Nấm Aspergillus niger là một trong những loài nấm gây hại quan trọng

trên hạt, thiệt hại do nấm này gây ra biến động và rất khó đánh giá Theo các kết quả nghiên cứu [54][56][59]: thiệt hại về sản lượng trên lạc do nấm

Aspergillus niger gây ra cá biệt tới 50% Trên hạt lạc, tỉ lệ nhiễm nấm Aspergillus niger có thể tới 90% Bệnh gây hại nặng ở giai đoạn mầm và giai

đoạn cây con Theo R J Hillocks [59]: khi nhiễm bệnh trong khoảng dưới 50 ngày sau gieo gây thiệt hại rất nghiêm trọng, tỉ lệ chết có thể lên tới 40% số

cây trồng

ở nước ta hiện nay, với sự gia tăng về diện tích trồng và việc áp dụng hàng loạt các biện pháp thâm canh đã làm phát sinh, phát triển nhiều loại bệnh

hại Bệnh héo rũ gốc mốc đen do nấm Aspergillus niger trên lạc là một trong

những bệnh phổ biến và đáng chú ý ở nhiều vùng trồng lạc Theo [8][10]: bệnh héo rũ gốc mốc đen là một trong những bệnh gây hại phổ biến ở hầu khắp các vùng trồng lạc ở miền Bắc như Hà Nội, Bắc Giang, Vĩnh Phúc,

Thanh Hoá, Nghệ An, Hà Tĩnh,…v.v

Tuy nhiên, những nghiên cứu về bệnh do nấm Aspergillus niger gây ra

còn ít và mới mẻ Để góp phần đánh giá về bệnh hại hạt lạc nói chung và bệnh

héo rũ gốc mốc đen do nấm Aspergillus niger gây ra trên lạc nói riêng, được

sự phân công của Bộ môn Bệnh cây khoa Nông học, chúng tôi tiến hành thực

hiện đề tài :

“Điều tra thành phần bệnh nấm hại hạt giống lạc, nghiên cứu bệnh héo rũ gốc

mốc đen (Aspergillus niger) hại lạc vùng Hà Nội và phụ cận vụ xuân 2004”

1.2 Mục đích và yêu cầu của đề tài

1.2.1 Mục đích của đề tài

- Điều tra, giám định thành phần bệnh nấm hại hạt giống lạc thu thập tại vùng

Hà Nội và phụ cận

- Điều tra mức độ gây hại, nghiên cứu đặc điểm phát sinh phát triển của nấm

Aspergillus niger (A niger) gây bệnh héo rũ mốc gốc đen hại lạc và khảo sát

biện pháp phòng trừ

1.2.2 Yêu cầu của đề tài

- Giám định, phân loại thành phần nấm gây hại chủ yếu trên mẫu hạt giống lạc vụ xuân 2003 thu thập tại vùng Hà Nội và một số vùng sinh thái ở miền Bắc Việt Nam

- Đánh giá vị trí tồn tại, mức độ ảnh hưởng đến sức nảy mầm của hạt giống

lạc và nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của nấm A niger

- Tìm hiểu khả năng hạn chế nấm A niger trên hạt bằng biện pháp dùng

thuốc hoá học xử lý hạt giống, kiểm tra khả năng ức chế của nấm đối kháng

với nấm A niger trên môi trường nuôi cấy

- Điều tra diễn biến bệnh héo rũ gốc mốc đen hại lạc trong vụ xuân 2004 ở vùng Hà Nội và phụ cận

- Tìm hiểu mức độ nhiễm bệnh héo rũ gốc mốc đen trên một số giống lạc mới khảo nghiệm và trên một số giống lạc trong sản xuất đại trà

2 Tổng quan tài liệu

2.1 Tình hình nghiên cứu ngoài nước

2.1.1 Nghiên cứu thành phần bệnh trên hạt giống lạc

Bệnh hại là một trong những nguyên nhân quan trọng làm giảm năng suất lạc Theo [40][54]: bệnh hại lạc do một số lượng lớn các loài nấm, vi khuẩn, phytoplasma, hơn 20 loài virus và ít nhất 100 loài tuyến trùng, trong

đó nhóm bệnh nấm hại lạc chiếm đa số và gây thiệt hại nguy hiểm nhất

Cũng vẫn dẫn theo [40]: có khoảng 40 loại bệnh hại lạc đáng chú ý

đóng vai trò quan trọng trên thế giới chia ra làm 5 nhóm bệnh hại Nhóm một

là nhóm bệnh hại trên hạt và trên cây mầm, nhóm này rất phổ biến và quan trọng Nhóm 2 là nhóm gây chết héo, nhóm này cũng rất phổ biến và gây thiệt hại nghiêm trọng trên toàn thế giới Nhóm 3 là nhóm gây thối thân và rễ, nhóm này thường phổ biến nhưng chỉ hại cục bộ Nhóm 4 là nhóm gây thối

củ, nhóm này thường phổ biến cục bộ ở một số vùng và là bệnh thứ yếu Nhóm 5 là nhóm gây bệnh trên lá gồm rất nhiều loài tuy nhiên chỉ một số loài gây hại phổ biến và quan trọng

Lịch sử nghiên cứu bệnh hại hạt giống phát triển sớm gắn liền với lịch

sử nghiên cứu bệnh cây Từ những năm 1755 nhà thực vật học người Pháp Tillet đã chứng minh rằng bệnh than đen lúa mì có liên quan đến lớp bột phấn

đen trên bề mặt hạt

Cùng với sự phát triển của công tác kiểm nghiệm và kiểm tra sức khoẻ hạt giống, bệnh hại hạt giống ngày càng được chú trọng ở hầu khắp các nước trên thế giới

Trong các bệnh truyền qua hạt giống, nhóm bệnh nấm chiếm đa số đặc biệt là ở những vùng khí hậu nhiệt đới và cận nhiệt đới Theo M.J.Richarson,

1990 [53]: có khoảng 29 loại bệnh hại truyền qua hạt lạc trong đó nấm bệnh

hại chiếm khoảng 17 loại Các loại nấm hại hạt đó đầu tiên phải kể đến

Aspergillus niger, Aspergillus flavus, Sclerotium rolfsii, Botrytis sp., Diplodia sp., Fusarium spp., Macrophoma phaseolina, Mycosphaerella arachidis, Mycosphaerella berkeleyi , Puccinia arachidis, Rhizoctonia spp., v.v Trong đó riêng loại Fusarium spp đã ghi nhận được 12 loài Các loại nấm gây hại trên

thường gây hại đồng thời hay cùng kết hợp gây hại trên hạt Có những loài không chỉ gây hại trên hạt giống mà còn truyền qua hạt giống gây hại cho cây con

Phần lớn các loài nấm bệnh trên hạt giống thuộc các nhóm bán ký sinh

và bán hoại sinh, một số ít trong chúng là ký sinh chuyên tính Nhiều loài nấm trong số chúng còn có khả năng sản sinh độc tố mà tiêu biểu và quan trọng

nhất trong số đó là nhóm các loại nấm Aspergillus spp., Fusarium spp và Penicillium spp ở những vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới, số lượng các loài

trong 3 nhóm trên không chỉ giới hạn xuất hiện trên lương thực dạng hạt mà còn trên cả các sản phẩm chế biến từ hạt Hiện tại đã xác định và mô tả được

khoảng 15 loài Aspergillus, 9 loài Fusarium và 18 loài Penicillium có khả

năng sản sinh độc tố và những hợp chất thứ cấp khác Khi dùng phương pháp agar plug và phương pháp HPLC người ta đã xác định được 74 loại độc tố sản sinh từ 3 nhóm loài trên (Kulwant Singh, 1991[51])

Đánh giá được mức độ nguy hiểm trên hạt nhưng điều thật sự khó khăn trong phòng trừ nấm bệnh hại hạt là rất nhiều loài trong số chúng thuộc nhóm nấm đất gây hại đặc biệt phổ biến trong điều kiện khí hậu nhiệt đới và cận

nhiệt đới Trong nhóm loài Aspergillus, một loại nấm gây hại trên hạt điển

hình nhưng lại cư trú rất phổ biến trong đất là nấm Aspergillus niger

2.1.2 Nghiên cứu về nấm Aspergillus niger gây bệnh héo rũ gốc mốc đen lạc

2.1.2.1 Tính phổ biến và tác hại của nấm A niger

Nấm A niger là loài nấm đất gây bệnh héo rũ trên lạc đồng thời là loài

nấm hại hạt điển hình (John Damicone, 1999[50]) Trên thế giới, đã có rất

nhiều những nghiên cứu vế nấm A niger, người ta đã phân lập được 37 loài gây hại trên thực vật một số tác giả [34][53] cho biết: nấm A niger không

chỉ gây hại trên cây trồng mà chúng còn được quan tâm như là một nguyên nhân gây bệnh cho người và động vật Ngoài ra, chúng còn được sử dụng như là một nguồn vi sinh vật cho sản xuất một số loại enzim của ngành công nghệ chế biến

Bệnh héo rũ gốc mốc đen hại lạc được báo cáo chính thức lần đầu tiên vào năm 1926 ở Sumatra và Java (D.J Allen and J.M Lenné, 1998[40], N.Kokalis- Burelle, 1997[54]) Thực tế tác nhân gây bệnh đã được ghi nhận

từ năm 1920, gây nên biến màu vỏ và hạt lạc ở châu á, theo [37]: bệnh được ghi nhận đầu tiên tại Andhara Pradesh năm 1980

Bệnh thối gốc mốc đen do nấm Aspergillus niger đến nay vẫn là một

bệnh quan trọng được công nhận ở hầu hết các vùng trồng lạc chính trên thế giới Theo nhận định của một số tác giả [40][50][54]: thiệt hại về năng suất và sản lượng do bệnh héo rũ gốc mốc đen thay đổi và khó đánh giá, thiệt hại về sản lượng cá biệt lên tới 50% nhưng thường dao động ở mức trên dưới 1%

Theo kết quả nghiên cứu của [55][59]: thiệt hại về năng suất lạc đã

được ghi nhận cụ thể ở Malawi, Senegal, Sudan, Niger,.v v ở ấn Độ, bệnh héo rũ gốc mốc đen là một trong những nhân tố quan trọng gây nên năng suất thấp với tỉ lệ nhiễm khoảng từ 5 - 10% Nếu nhiễm trong khoảng 50 ngày sau gieo sẽ gây thiệt hại nghiêm trọng và có thể gây chết tới 40% số cây ở Mỹ, bệnh héo rũ gốc mốc đen ngày càng trở nên quan trọng từ đầu những năm

1970 khi việc xử lý hạt bằng thuốc có chứa thuỷ ngân bị cấm và nó đã trở thành một vấn để ở Florida đầu những năm 1980

Nghiên cứu của [64] cho biết: nấm dễ dàng truyền từ hạt sang cây trong điều kiện nóng ẩm, độc tố do nó sản sinh gây ảnh hưởng tới sinh trưởng của cây như rễ quăn xoắn, biến dạng ngọn Cây bị nhiễm bệnh có thể sống sót, sinh củ nhưng khi bị nhiễm nặng có thể chết hoặc trở nên bị nặng hơn cho tới cuối vụ

và hạt của nó có thể bị nhiễm bởi một loài nấm khác, kết quả là ngay cả các axít béo tự do trong hạt cũng chứa độc tố (D.J Allen and J.M Lenné, 1998[40])

Là loài nấm cư trú phổ biến trong đất, là một tác nhân gây bệnh cơ hội, phá hoại và phát triển trên tế bào sống, gây bệnh thối gốc mốc đen ở lạc và gây bệnh trên nhiều cây trồng khác, có thể gây bệnh cho người và động vật, tên thường gọi là Aspergillus niger Tiegh

Những tên gọi phổ biến theo triệu chứng bệnh như bệnh thối vòng, thối cổ rễ, thối gốc mốc đen Nhưng để thống nhất trong toàn bộ tổng quan tài liệu nghiên cứu, chúng tôi gọi là bệnh héo rũ gốc mốc đen

2.1.2.2 Phân bố và phạm vi ký chủ của nấm A niger

Phân bố: nấm A niger bố rộng khắp trên thế giới Theo [37][59]: nó

xuất hiện ở trên 100 nước thuộc khắp các châu lục, đặc biệt là ở Australia, Iran, ấn Độ, Sudan, Nam Mỹ,…v.v

Phạm vi ký chủ: nấm A niger gây hại trên rất nhiều họ thực vật trong

đó khoảng trên 90 cây trồng và trên 11 ký chủ dại Ký chủ chính trên khoảng

10 họ thực vật trên nhiều cây trồng, trong đó đáng chú ý nhất phải kể đến lạc, ngô, hành tỏi, xoài, đậu đỗ, điều,…v.v

2.1.2.3 Đặc điểm sinh học, sinh thái học của nấm A niger

Nấm A niger hại trên lạc gây nên thối hạt, thối mầm và chết héo ở các giai

đoạn sau (D.J Allen, 1998[40]) Theo [37]: dạng tồn tại của nấm A niger (chủ yếu là bào tử) phổ biến ở trong hệ nấm đất và hệ nấm không khí của những vùng khí hậu nóng Vì vậy, giai đoạn mầm có thể bị nhiễm từ đất, từ không khí hoặc từ nguồn bệnh ban đầu trên hạt

Nghiên cứu của Gary J Griffin [44] cho biết: dễ dàng tìm được nấm A

niger trong vùng rễ của lạc và trên cánh đồng trồng lạc, mầm bệnh của nấm A niger ngay sau vụ lạc trong 1g đất dao động có từ 6 ± 1.3 bào tử

Các tác giả [42][46] nhận định: nấm A niger không phổ biến ở vùng khí hậu

ôn đới, bào tử của nó có nhiều trong không khí ở những vùng nóng như ấn

Độ Theo [37]: sự gia tăng mầm bệnh nấm A niger khi có mưa kéo dài do sự

tập trung bào tử nấm tăng trong thời kỳ khô nóng và bị rửa trôi xuống theo nước mưa, tuy nhiên sức sống của mầm bệnh sẽ giảm khi lượng mưa tăng Khi

mầm bệnh trong không khí của nấm A niger tiếp xúc được với tán cây, tế bào

cây cũng có thể bị nhiễm nếu điều kiện phù hợp xuất hiện như tế bào bị tổn thương, nhiệt độ và ẩm độ cao

Dù nước không bắt buộc cho sự nảy mầm của bào tử nấm A niger nhưng độ ẩm tới hạn là cần thiết Độ ẩm yêu cầu cho bào tử nảy mầm thay đổi theo nhiệt độ nhưng độ ẩm thích hợp cho bào tử nảy mầm là 93% và nhiệt độ dưới 400 C Nếu độ ẩm 100% thì sự nảy mầm thích hợp nhất ở 300C Khi bào

tử bắt đầu nảy mầm, chúng đặc biệt mẫm cảm với sự thay đổi điều kiện sinh thái đặc biệt là yếu tố nhiệt độ Tỷ lệ bào tử nảy mầm là rất quan trọng cho sự xâm nhiễm của bệnh lên cây sau này Trong điều kiện invitro, khoảng 90% bào tử nảy mầm trong vài giờ ở 30 - 340C Bào tử có thể duy trì được ở 470C

và nảy mầm ở RH < 70% nhưng tỉ lệ nảy mầm rất thấp Sự nảy mầm của bào

tử cũng đã được phát hiện sau 15 giờ ở độ ẩm được duy trì ở 78- 81% nhưng thường bào tử nảy mầm chỉ sau vài giờ ở điều kiện ẩm độ cao (Compendium

of Crop Protection 2001[37]) Vì vậy, theo [40][59]: ở những vùng khí hậu nóng, ẩm như vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới là thích hợp cho sự nảy mầm của bào tử hơn là những vùng khí hậu ôn đới

Tản nấm phát triển thích hợp nhất ở nhiệt độ 32.5 – 37.50C trên môi trường nuôi cấy axenic Tản nấm hầu như không phát triển ở nhiệt độ dưới

100C và trên 450C khi ủ trên môi trường agar, bào tử sẽ hình thành nhiều khi cấy trên môi trường axenic ở 20 – 350C Bào tử hình thành ít hoặc không xuất hiện cho tản nấm phát triển ở nhiệt độ 150C và 400C (Compendium of Crop Protection 2001)[37]

Rất nhiều nghiên cứu về ảnh hưởng của pH đến sự nảy mầm của bào tử

nấm A niger Theo [37]: có nghiên cứu đã xác định pH = 4 là thích hợp nhất

cho bào tử nảy mầm, nhưng có nghiên cứu lại xác định pH thích hợp nhất cho bảo tử nảy mầm là ở pH= 6.2 với giá trị pH cực đại là pH = 7 Tuy nhiên, nhiều kết quả thực nghiệm sau này của các nhà nghiên cứu Ai Cập đều đưa

đến kết luận: pH thích hợp cho sự nảy mầm của bào tử là từ pH = 4.1- 4.5 và hoàn toàn bị ức chế ở pH = 3.5

Kết quả [56] cho biết: dạng hạch nấm A niger có thể xuất hiện khi

không có mặt của hợp chất hữu cơ trong một thời gian dài và bào tử có thể bảo tồn sức sống từ 1- 2 năm

2.1.2.4 Đặc điểm phát sinh phát triển của nấm A niger

Nấm A niger phân bố rộng khắp trên thế giới Tốc độ sinh trưởng của nấm A niger nhanh, sự phát triển và hình thành bào tử của nấm thích hợp

trong điều kiện nóng ẩm do đó khi gặp điều kiện thuận lợi chỉ một lượng nhỏ nguồn lây nhiễm cũng có thể phát triển sự gây nhiễm nghiêm trọng Theo

[54][59]: mầm bệnh của A niger được tìm thấy ở đất ẩm nhiều hơn là ở đất

khô và nó có khả năng chịu được điều kiện đất có độ ẩm thấp Theo kết quả của [56]: đất ướt dễ dàng cho nấm gây thối hạt ở cuối vụ trong khi điều kiện

đất khô, khí hậu nóng tạo điều kiện thuận lợi cho thối mầm và thối sau giai

đoạn mầm

Kết quả nghiên cứu của [44][54] cho rằng: thành phần cơ giới của đất ít

liên quan đến sự tồn tại nhiều hay ít của mầm bệnh nấm A niger trong đất

nhưng nó lại dễ tìm thấy trên đất cát có hàm lượng chất hữu cơ thấp Đây là

kết quả khá bất ngờ vì A niger là nấm hoại sinh và những nghiên cứu trước đó

đều khẳng định nó có nhiều ở đất có hàm lượng chất hữu cơ cao Còn theo

R.J Hillocks, 1997[59]: nấm A niger có thể tìm thấy được ở tất cả các loại

đất vùng nhiệt đới

Nấm A niger là nấm gây hại trên hạt Theo [37]: A niger đã được tìm

thấy trên rất nhiều loại hạt cây trồng như ngô, lúa, cao lương,…v.v nhưng

được ghi nhận nhiều nhất là trên hạt lạc và họ hành tỏi Nghiên cứu của [40][59] cho biết: hạt lạc dễ bị nhiễm trong suốt giai đoạn củ già trong đất và giai đoạn thu hoạch, bóc vỏ và mua bán

Trên thế giới, đã có nhiều kết quả nghiên cứu về tỉ lệ nhiễm nấm A niger trên hạt giống lạc cũng như đánh giá mối tương quan giữa tỉ lệ nhiễm và

sự truyền bệnh qua hạt giống Những kết quả nghiên cứu từ [37]: hạt lạc thu từ

3 vùng sản xuất lạc chính ở Sudan (Gezira, Kosti and El Obeid) đều bị nhiễm

nấm A niger đặc biệt ở là củ không lành lặn Theo kết quả điều tra (Sub rahmanyam and Rao, 1976) trên hạt lạc: nấm A niger chiếm tới 60% trong

tổng số các loài nấm thu được từ hạt bằng phương pháp ly tâm Theo [40][54]:

mức nhiễm nấm A niger trên hạt lạc có thể trên 90%, mầm mọc từ những hạt

bị nhiễm nấm A niger thì có tỉ lệ cây bị nhiễm bệnh cao hơn so với mầm mọc

từ hạt khoẻ

Theo nhận định của El-Wakil (2000)[41]: có sự liên quan giữa thời

gian bảo quản và tỉ lệ nhiễm nấm A niger, tỉ lệ nhiễm nấm A niger ghi

nhận trên hạt lạc là 18.25% sau 4 tháng bảo quản và thấp nhất là 11.2% sau 6 tháng bảo quản

Sự gây hại của A niger trên hạt không chỉ là sự truyền bệnh qua hạt mà

còn là sự ảnh hưởng đến chất lượng hạt và sức nảy mầm của hạt Theo [37]:

có tới 60% số hạt nhiễm nấm bị ôi, hạt thường có tỉ lệ mọc thấp và hàm lượng

dầu giảm Nấm A niger còn gây ra sự thay đổi một số thuộc tính hoá lý của

hạt nhiễm trong suốt thời gian bảo quản như lượng axit, hàm lượng bọt, hàm lượng Iodine, lượng xà phòng hóa, chỉ số khúc xạ, màu sắc của dầu và lượng axít béo so với hạt khoẻ (El-Wakil, 2000[41])

Nghiên cứu của [54] đã chứng minh rằng nguồn bệnh trên hạt và trong

đất đều là nguồn gây nhiễm ban đầu Tuy nhiên, tỉ lệ mắc bệnh có liên quan thuận với mức nguồn bệnh cao trong đất và bệnh phổ biến hơn trên đất trồng chuyên trồng lạc Đất trồng lạc ít luân canh có tỉ lệ nguồn bệnh cao (M.J

Richardson, 1990[52]) Có nhiều kết luận khác nhau về nguồn lây lan của A niger từ vụ này sang vụ khác Theo [59]: nguồn lây lan từ vụ này sang vụ khác

thông qua tàn dư cây trồng trong đất Nhưng cả [54][59] đều cho rằng: xu hướng xuất hiện (bẩm chất) là nhân tố chính trong sự phát triển của bệnh héo

rũ gốc mốc đen và sự bùng phát của bệnh là ít gặp

Một số tác giả [40][54][59] nhận định: khô hạn và điều kiện nhiệt độ cao ngay đầu vụ tạo phù hợp cho sự bùng phát của bệnh thối gốc mốc đen Những điều kiện bất lợi khác như sự thay đổi quá mức độ ẩm đất và nhiệt độ, chất lượng hạt giống kém, cây giống bị tổn thương bởi thuốc trừ sâu, côn trùng ăn rễ và các nhân tố mà làm trở ngại đến sự phát triển của cây giống tạo

điều kiện cho bệnh biểu lộ sớm

Quá trình xâm nhiễm của nấm kéo dài khoảng 10 ngày Bệnh thể hiện triệu chứng rất sớm ở cây mầm hoặc cây con Tuy nhiên, bệnh cũng có thể phát sinh muộn vào tháng 7, tháng 8 với triệu chứng cây héo đột ngột, xuất hiện với một số lượng lớn (Amanda Huber, 2002[31])

2.1.2.5 Triệu chứng bệnh héo rũ gốc mốc đen hại lạc

Bệnh héo rũ gốc mốc đen có thể xuất hiện ở bất kỳ giai đoạn sinh trưởng nào của cây lạc và thường bị nhiễm chủ yếu ở hạt, mầm, cây con,

cổ rễ và thân

Một loạt các nghiên cứu [40][54][56] cho biết: bệnh xuất hiện phổ biến ở

đầu vụ Giai đoạn mầm và cây con là mẫm cảm nhất với sự xâm nhiễm của bệnh,

ở giai đoạn cây con khi bị nhiễm bệnh thì tỷ lệ chết cao hơn so với giai đoạn cây trưởng thành ở một vài năm, cây có thể bị chết do nấm ngay sau khi gieo

Theo [33][37][54]: khi theo dõi và quan sát trên hạt nhiễm bệnh trồng trên đất khử trùng trong điều kiện nhà lưới thấy sự nhiễm bệnh đầu tiên là ở trụ dưới lá mầm và lá mầm Sợi nấm phát triển từ lá mầm vào trong vùng cổ thắt của lá mầm Luôn quan sát thấy vết thối ướt suốt giai đoạn đầu của quá trình xâm nhiễm nhưng ở giai đoạn sau xuất hiện vết thối khô, mô bệnh nứt

nẻ Vết thối ướt có thể tiến triển nhanh xuyên từ trụ dưới lá mầm hoặc vùng cổ lá mầm gây nên sự teo quắt và chết Phần thân của trụ dưới lá mầm bị nhiễm vào khoảng 10 ngày sau mọc khi chúng đội đất lên ở nhiệt độ trên 300C, sự nhiễm bệnh của trụ dưới lá mầm và rễ của mầm gây hiện tượng thối cổ rễ hay còn gọi là thối vòng Khởi đầu, trụ dưới lá mầm trở nên mọng nước sau đó có màu nâu sáng rồi cánh bào tử phân sinh màu đen xuất hiện rõ

Theo D.J Allen and Lenné (1998)[40]: mầm bị bệnh héo rất nhanh đặc biệt trong điều kiện thời tiết khô Lá mầm và điểm sinh trưởng bị bao phủ bởi cụm các cành bảo tử phân sinh kèm theo sự xuất hiện một khối bột màu đen Trong quá trình bệnh phát triển, vùng mô bệnh đặc biệt là vùng mô cổ lá mầm

bị xé nứt ra nhiều mảnh, mất màu và mầm nhiễm bệnh bị chết héo Hạt có thể

bị tấn công ngay khi gieo trong điều kiện ẩm, đất nhiễm bệnh Triệu chứng xuất hiện trên hạt bị thối là một khối xốp lỗ rỗ các mô tế bào phân huỷ được bao phủ bởi khối các cành bào tử phân sinh màu nâu hoặc màu đen

Hiện tượng hạt bị thối hoặc chết úng sớm là biểu hiện triệu chứng điển hình ở hạt bị nhiễm bệnh khi trồng đặc biệt tỉ lệ hạt chết cao ở những củ thu từ cây bị nhiễm bệnh (Precision Agricultrure, 2004)[56]

Các kết quả nghiên cứu của [50][54][56] đều cho rằng: triệu chứng điển hình của bệnh ở giai đoạn cây con là cây héo đột ngột và thường bị chết trong khoảng 30 ngày sau trồng Sự mất màu của các mô thể hiện rõ nét ở trên ngọn

và rễ cây bị héo Bệnh héo rũ gốc mốc đen xuất hiện ít khi cây đã phát triển thân gỗ và rễ trụ Tuy nhiên, theo [31]: khi gặp điều kiện thời tiết nóng và khô,

đặc biệt trên đất khô, bệnh có thể gây nhiễm lên cả cây già

Khi nghiên cứu triệu chứng trên cây rất các nghiên cứu [40][54][59]

đều đưa ra quá trình biểu hiện như sau: bệnh không nhận thấy được cho đến khi một vài nhánh hoặc toàn bộ cây có biểu hiện héo Khi vết bệnh phát triển, toàn bộ vùng mô cổ rễ bị nứt thành nhiều mảnh nhỏ và có màu nâu tối Dấu

hiệu quan trọng để nhận biết sự có mặt của nấm A niger trên đồng ruộng là

xuất hiện đám mốc màu tối với khối bào tử màu đen trên mô bệnh (Amanda Huber, 2002[31])

Kết quả nghiên cứu của [50][59] cho biết: khi cây bị nhiễm bệnh, vùng chóp rễ phía dưới mặt đất có thể bị sưng phồng và thậm chí còn bao phủ bởi một khối sợi nấm đen như bòng hóng Sự thối rữa đôi khi còn tiếp tục ở một phần dưới của rễ chính và trong trường hợp này cây sinh ra rễ bất định phía trên vùng bệnh Tuy nhiên, những cây này thường chết khi gặp thời tiết khô hạn Khi giải phẫu rễ và thân cây bệnh thấy hệ thống mạch dẫn biến màu và

có màu xám tối

Một số cây khác có thể sống sót nhưng trọng lượng chất khô có thể giảm và tế bào vùng rễ thường bị nứt nẻ Trên giống lạc Spanish, triệu chứng

của héo rũ gốc mốc đen do nấm Aspergillus niger trên cây già biểu hiện ở

phần thân giữa mặt đất và tầng lá thấp nhất (N Kokalis-Burelle, 1997[54])

2.1.2.6 Nguyên nhân gây bệnh héo rũ gốc mốc đen hại lạc

Khi nghiên cứu nguyên nhân gây bệnh héo rũ gốc mốc đen trên lạc, các

nghiên cứu đều kết luận nấm Aspergillus niger Tiegh là nguyên nhân gây ra

bệnh Nó có mặt phổ biến trong đất trên khắp thế giới và là nấm hoại sinh rất

hiệu quả kí sinh trên lạc và rất nhiều cây trồng khác Theo [40]: nấm A niger

có sự biến đổi mang tính hình thái và sinh lý nhưng ít có sự thay đổi về sự

phát sinh bệnh Nấm Aspergillus pulverulentus (McAlpin) Thom, là một dạng

đột biến của A niger, nhiều khi cũng phân lập được trên cây bị bệnh Nấm A niger phát triển tốt ở 250C ở trên nhiều loại môi trường khác nhau tạo ra vô số cành bào tử phân sinh mang bào tử phân sinh lớn màu đen

Theo [40][54]: đặc trưng của nấm A niger có đầu của bào tử phân sinh (bào tử đính) hình cầu đến hình toả xoè dạng cột đường kính từ 700 – 800 àm Cuống bào tử phân sinh (cuống bào tử đính) thay đổi, đo được từ 1.5 – 1.3 mm

ì 15 – 20 àm Bào tử phân sinh hình cầu khi thành thục, xù xì màu nâu tối

đến đen, đường kính từ 4.0 – 5.0 àm Đầu cành phình to hình cầu, vách dầy

màu hơi nâu có khả năng sinh sản trên toàn bộ bề mặt, đường kính từ 45 - 75

àm tuy nhiên có khi nhỏ hơn hoặc đạt tới 80 àm Cuống đính bào tử có 2 loại: nguyên sinh và thứ sinh

Dạng nguyên sinh đạt kích thước từ 20 - 30 ì 5 - 6 àm khi non, đạt tới

60 – 70 ì 8 - 10 àm khi thành thục Dạng thứ sinh đồng nhất hơn, kích thước

đo được từ 7 - 10 ì 3.0 – 3.5 àm Khi nuôi cấy trên môi trường Malt agar: sinh ra tản nấm xốp màu trắng đến hơi vàng sau đó phát triển nhanh thành màu đen hay nâu tối do bào tử hình thành

IUMS (2004)[49] khi cấy nấm A niger trên môi trường CYA sau ủ 7

ngày: đường kính tản nấm là 60 – 65 mm, bào tử màu đen, không xuất hiện sắc tố hoà tan và tiết dịch Mặt dưới, tản nấm màu vàng nhạt đường kính từ

55 – 64 mm Khi cấy trên môi trường CZ 20S : đường kính tản nấm đạt

60 – 70 mm, bào tử màu đen, không có sắc tố hoà tan và tiết dịch, mặt dưới tản nấm từ không màu đến vàng nhạt Cuống cành bào tử phân sinh dài 900 - 1600 àm, vách nhẵn màu từ trong suốt đến hơi nâu

Kulwant Singh và ctv (1991)[51]: khi nuôi cấy trên môi trường CZ

agar, nấm A niger có đặc điểm bào tử phân sinh màu đen trên tản nấm có

màu trắng đến vàng nhạt, đầu của bào tử phân sinh hình cầu đường kính từ

500 - 600 am dạng xoè hoặc phân chia dạng cột Cành bào tử phân sinh trong suốt, có màu sắc hơn về phía đầu cành, đầu cành hình cầu hoặc hơi hình cầu,

đường kính khoảng 75 am, có khả năng sinh sản trên toàn bộ bề mặt Bào tử phân sinh màu tối, hình cầu xù xì hoặc có gai nhỏ đường kính khoảng 4 - 5

am Tản nấm quan sát ở mặt trên màu trắng, có sự xoắn kết vừa phải và hơi xốp lên, hầu hết bề mặt tản được bao phủ bởi các bào tử màu đen Quan sát tản nấm từ mặt dưới thấy: ban đầu tản nấm có màu trắng hoặc hơi xám sau đó

có màu vàng bẩn

Theo [37]: nấm A niger phát triển chậm trên môi trường nghèo dinh dưỡng

như CZ agar Trong điều kiện phòng 24 -260C: bán kính chỉ phát triển 2.5 – 3.5 mm/ngày nhưng nếu ở nhiệt độ cao hơn hoặc môi trường giàu dinh dưỡng hơn thì tốc độ phát triển nhanh hơn Khi cấy nấm A niger trên môi trường Malt agar ở cùng nhiệt độ trên tản nấm bán kính tới 10 mm/ngày và xuất hiện bào tử ngay với mật độ thấp Khi cấy trên môi trường PLYSE thấy tỉ lệ phát triển bán kính đạt 4 mm/ngày khi ủ ở 200C và đạt tới 16 mm/ngày ở 350C

Theo nhận định của D.J Allen [40]: sự phát sinh bào tử của nấm A niger thích hợp nhất trong điều kiện ấm áp, đất ẩm đặc biệt là điều kiện vùng

nhiệt đới, khoảng nhiệt độ phù hợp là từ 30- 400C

Bào tử nảy mầm trực tiếp từ bào tử phân sinh tách rời tản có thể được dưới điều kiện phòng thí nghiệm khi thay đổi các yếu tố sinh thái đặc biệt là trong điều kiện nhiệt độ cao Điều này có thể cung cấp một phương thức bảo

tồn của bảo tử trong điều kiện bất lợi Sắc tố đen của bào tử nấm A niger giúp

nó sống sót khi đặt nó vào ánh sáng cực tím UV Tiến hành thí nghiệm người

ta đã phát hiện ra rằng: những bào tử có nhiều sắc tố hơn có khả năng kéo dài

sự sống hơn so với bào tử ít sắc tố khi đặt trong cùng điều kiện ánh sáng mặt trời mô phỏng (Compendium of Crop Protection 2001)[37]

2.1.2.7 Phương pháp chẩn đoán nấm bệnh A niger

* Mẫu cây: ủ lá trong 5 ngày trên chất độn Cellulose ẩm ở 30 – 350C sẽ phát hiện ra sự có mặt của nguồn lây nhiễm trên mẫu bệnh Nấm có thể được xác đinh ngay sau đó khi quan sát bào tử phân sinh bằng kính hiển vi Hạt có thể đặt trên đĩa môi trường thạch (ví dụ: PLYSE) và ủ ở 300C trong 5 ngày sẽ

thấy A niger phát triển quanh hạt bị nhiễm

* Đất: đơn vị tồn tại của nấm A niger trong đất có thể được xác định

khi dùng phương pháp đĩa pha loãng chuẩn và cấy trên đĩa môi trường agar thích hợp ví dụ như PLYSE với Streptomycin và Erythromycin hoặc thạch

malt với saccarose hoặc belgal đỏ

*Không khí: để lộ đĩa Petri chứa môi trường agar (ví dụ môi trường PLYSE) trong khoảng 30 phút trên bề mặt đất sau đó ủ ở 300C cho phép phát

hiện sự có mặt của mầm bệnh nấm A niger trong các bào tử nấm trong không

khí được ghi nhận trên đĩa môi trường khi quan sát dưới kính hiển vi có độ phóng đại thấp

2.1.2.8 Phòng trừ nấm A niger gây bệnh héo rũ gốc mốc đen

Phòng trừ bệnh héo rũ gốc mốc đen lạc gặp rất nhiều khó khăn do nấm

A niger là nấm bệnh hại hạt nhưng lại là nấm đất điển hình gây hại cây trồng

Theo kết quả nghiên cứu của Dharmaputra (2001)[39]: nấm A niger có

mặt 100% số mẫu đất đem kiểm tra

Trong hệ thống các biện pháp phòng trừ bệnh héo rũ gốc mốc đen, biện pháp dùng thuốc hoá học để xử lý hạt giống là biện pháp hữu hiệu nhất Theo những kết quả của [31]: bệnh héo rũ gốc mốc đen xuất hiện nhiều hơn trên hạt không xử lý so với hạt có xử lý Các kết luận của [37][54][60] đều cho rằng: dùng thuốc trừ nấm trên hạt có thể phòng trừ bệnh héo rũ gốc mốc đen hiệu quả nếu áp dụng đúng kỹ thuật khi xử lý hạt giống

Theo kết quả nghiên cứu của [37][40]: nhóm thuốc hoá học dùng xử lý hạt giống khuyến cáo nên dùng và thực tế đang được dùng hiện nay là thuốc Thiram, Carbendazim, hợp chất chứa hoạt chất benomyl và hỗn hợp của một vài loại trong chúng Theo [37]: xử lý hạt bằng thuốcThiram thể hiện hiệu quả nhất, hỗn hợp thuốc Carbendazim trộn với thuốc Thiram sử dụng ngay hoặc trong khoảng 20 ngày trước gieo phòng trừ nấm A niger rất hiệu quả trên hạt

ở ấn Độ khi xử lý hạt giống bằng Captan + Thiram cho kết quả tốt hơn dùng thuốc Captan + Hg (M.J Richardson, 1990[53]) Tuy nhiên, theo [40]: không nên sử dụng các hợp chất có chứa thuỷ ngân cho xử lý hạt giống vì có sự ảnh hưởng nhất định đến sức nảy mầm của hạt và rất độc

Tần xuất bắt gặp nấm A niger trên cả vỏ củ và hạt giảm khi phun diniconazole cho giống lạc Florunner trồng trên đất có tưới và đất không tưới

Tuy nhiên, thuốc này lại không có hiệu quả đối với nấm A niger ở trong đất

Tỉ lệ nhiễm bệnh héo rũ gốc mốc đen trên đất nhiễm nấm A niger cũng giảm

khi xử lý hạt bằng thuốc Carboxin, Captan hoặc Benomyl và với hạt nhiễm

nấm Rhizobium lupine Trong điều kiện invivo thì hỗn hợp thuốc Carbendazim + Thiram không những hiệu quả trong phòng trừ nấm A niger mà còn làm

tăng sức nảy mầm của hạt, sự phát triển của rễ cũng như tổng trọng lượng chất khô trên cây (Compendium of Crop Protection, 2001[37])

Biện pháp sử dụng giống kháng bệnh héo rũ gốc mốc đen hầu như không đem lại hiệu quả Theo [40][50][54][56]: chưa có tài liệu cụ thể nào về giống kháng bệnh, hầu hết các giống lạc phổ biến hiện nay đều mẫm cảm với bệnh thối gốc mốc đen Tuy nhiên, qua khảo nghiệm người ta nhận thấy giống lạc dạng thân đứng mẫm cảm với bệnh hơn so với dạng thân bò D.J Allen [40] nhận định: một số giống đang nghiên cứu có khả năng kháng được sự xâm

nhiễm của độc tố aflatoxin của nấm A flavus cũng có thể kháng được nấm A niger và một số nấm đất khác Những giống này có thể dùng được ở vùng bị

bệnh héo rũ gốc mốc đen nặng hoặc những vùng hay bị tái xuất hiện

Chưa có những nghiên cứu cụ thể về sử dụng biện pháp vật lý cho nấm

đối với nấm A niger gây bệnh héo rũ gốc mốc đen lạc Tuy nhiên, theo [37]:

có thể điều khiển sự phát sinh của bệnh thông qua yếu tố nhiệt và ẩm độ Nhưng khi xử lý hạt bằng nước nóng ở nhiệt độ 600C không những không tiêu diệt được tác nhân gây bệnh mà còn ảnh hưởng đến sức nảy mầm của hạt (M.J Richardson, 1990[53])

Sử dụng biện pháp sinh học trong phòng trừ bệnh héo rũ gốc mốc đen là một hướng mới đang được nghiên cứu ở nhiều nước Theo [37]: tuy chưa có một chiến lược phòng trừ bằng sinh học được sử dụng mang tính chất thương mại nhưng có 2 hướng trong phòng trừ nấm A niger gồm: cạnh tranh và ký

sinh Những nghiên cứu về nấm A niger gây bệnh trên hành đã chỉ ra rằng

có khả năng cạnh tranh lớn giữa các loài Aspergillus spp Như vậy, đối với

nấm A niger xuất hiện sự cạnh tranh cùng loài, khác loài và khả năng ký sinh trong cùng một dòng Một số vi sinh vật đối kháng của nấm A niger

đã được ghi nhận như nấm Bacillus subtilis, Xanthomonas campestris

oryzea, Acremonium rutilum

Theo Aris Cell (2004)[32]: 2 loài nấm Trichoderma viride và Trichoderma hazianum đang được nghiên cứu trong phòng trừ sinh học đối với nấm A niger tuy nhiên chưa thu được hiệu quả cao và vẫn đang được tiếp

tục nghiên cứu Theo [44][57]: có một số nghiên cứu về khả năng sử dụng

nấm A flavus chủng không độc để tăng khả năng canh tranh với nấm A niger

vì chúng giống nhau về đặc điểm dinh dưỡng, điều kiện sinh thái học và phân lập được từ cùng môi trường sống Tuy nhiên, phương hướng này ít được ủng

hộ vì mức độ gây hại của nấm A flavus còn nguy hiểm hơn cả nấm A niger

trên mọi phương diện

Biện pháp canh tác là biện pháp truyền thống khá hữu hiệu trong phòng trừ bệnh nói chung và bệnh héo rũ gốc mốc đen nói riêng Theo các tác giả của [31][40][50][54][56]: hạt giống tốt là điều kiện cần thiết hàng đầu trong phòng chống bệnh vì khi hạt giống tốt sẽ tạo điều kiện cho mầm mọc nhanh, khoẻ ngay trong điều kiện bất lợi Đảm bảo độ ẩm đất đồng đều, thích hợp và trong quá trình trồng không nên có sự luân chuyển đất

Luân canh là một biện pháp cần thiết để phòng trừ bệnh, tỉ lệ bệnh giảm

và tỉ lệ thuận với thời gian luân canh Theo [40][44] [52]: khi luân canh lạc với cây trồng khác đặc biệt là cây ngũ cốc tỉ lệ bệnh giảm rõ rệt, kiểm tra mẫu đất

trên các cánh đồng luân canh cũng thấy mầm bệnh của nấm A niger trong đất

Qua hàng loạt các biện pháp riêng biệt nói trên, một biện pháp phòng trừ tổng hợp đã được nhiều nghiên cứu đề ra Theo [31][40][55][56]: hệ thống các biện pháp cụ thể hữu hiệu trong phòng trừ bệnh héo rũ gốc mốc đen là tạo mọi điều kiện thuận lợi cho đẩy nhanh tốc độ nảy mầm và sự phát triển của mầm bằng: sử dụng hạt giống có chất lượng tốt đã được xử lý thuốc, đất trồng cây có độ ẩm đồng đều, thích hợp, phải có biện pháp tưới khi cần, phòng trừ sâu hại quanh vùng rễ và thân, làm giảm tối thiểu ảnh hưởng của thuốc trừ dịch hại tới cây mầm, luân canh với cây ngũ cốc để giảm nguồn bệnh, dùng thuốc trừ bệnh khi cần

2.2 Tình hình nghiên cứu trong nước

ở Việt Nam, những nghiên cứu về bệnh hại lạc trong thời gian qua chủ yếu chỉ tập trung vào bệnh hại trên đồng ruộng và các biện pháp phòng trừ

chúng Một vấn đề hiện còn chưa được quan tâm nghiên cứu nhiều là bệnh hại hạt giống

Theo [16] cho biết: có sự liên quan chặt chẽ giữa nấm bệnh với những hư hại của hạt lạc trong quá trình củ già, phơi khô hoặc cất giữ Khi phơi khô trong điều kiện tự nhiên, nếu độ ẩm không khí cao hoặc gặp mưa vào thời gian

đó, củ lạc và hạt lạc bị ẩm trong thời gian dài thuận lợi cho sự phát triển của nấm bệnh Thường gặp trên củ và hạt giống là những loại nấm sau:

Aspergillus (Aspergillus niger, Aspergillus flavus, Aspergillus nidulans,…), Macrophomina phaseoline, Trichothecium, Fusarium, Coniothecium, Sclerotium, Botryodiphodia, Rhizopus, Chaetomium, Pithium, Trichoderma,…v.v Hạt lạc còn nằm trong đất hoặc đang được phơi sấy đều

có thể bị nấm xâm nhiễm vào khoảng giữa 2 lá mầm và gây ra những vết bệnh riêng ở mặt trong lá mầm Những loài nấm hại trên hạt nếu gặp điều kiện thuận lợi chúng còn làm giảm axít béo tự do trong thành phần dầu và gây mất sức nảy mầm của hạt

Những nghiên cứu về bệnh hại hạt giống và khả năng truyền lan của

chúng ở nước ta hiện nay còn rất ít Một số nghiên cứu đi sâu về bệnh nấm trên hạt giống lạc nhưng mới chỉ tập trung vào một số loài có khả năng gây nguy hiểm cả cho người, động vật

Trong số những loài nấm bệnh trên hạt lạc nói trên, những loài nấm

Aspergillus spp là những loài nguy hiểm nhất Nhiều loài trong chúng không

chỉ gây hại trên cây trồng mà còn tồn tại trên nông sản và các sản phẩm chế biến từ nông sản, sinh độc tố gây nguy hiểm đến sức khoẻ người và nhiều loài gia súc, gia cầm Theo Trần Minh Trường [25]: nhóm các loài nấm

Aspergillus spp còn là một trong những loài nấm gây viêm xoang mũi ở

người Trên lạc sau thu hoạch, trong những điều kiện nhất định một số loài nấm như Aspergillus flavus (A flavus), Aspergillus parasiticus (A

parasiticus) có khả năng sản sinh độc tố rất độc cho người và gia súc, gia cầm Đặc biệt độc tố aflatoxin do A flavus sản sinh là một trong những chất

gây ung thư ở người Những độc tố này không tan trong dầu, chúng nằm lại trong khô dầu Nếu dùng khô dầu này làm thức ăn cho gia súc thì tuỳ lượng

mà gia súc có thể ngộ độc, chậm phát triển thậm chí có thể chết (Đặng Trần Phú và ctv, 1977[16])

Kết quả của Ngô Bích Hảo [5] về bệnh hại hạt cho biết trong một số loại hạt giống như ngô, lạc, đậu đỗ thì tỉ lệ hạt giống lạc nhiễm A flavus là cao nhất với 30.12% Trong khi, tác giả Nguyễn Thị Ly(1993)[11] đã xác định có

khoảng 33% - 85% số mẫu lạc kiểm tra có khả năng sản sinh độc tố aflatoxin

Ngoài những tác hại nguy hiểm trên, sự nguy hiểm của những loài

Aspergillus spp còn được đánh giá qua mức độ phổ biến trên lạc cả ngoài

đồng ruộng và lạc trong quá trình bảo quản sau thu hoạch (Đặng Trần Phú, 1977[16])(Ngô Bích Hảo, 2004[5])

Theo [5]: kết quả giám định bệnh hại hạt giống nhập nội sau nhập khẩu

có tới 100% số mẫu hạt giống kiểm tra nhiễm Aspergillus spp Sự có mặt của

các loài nấm Aspergillus spp trên hạt làm giảm chất lượng hạt giống, gây thối

hạt khi gieo trồng và gây bệnh cho cây con Khi mức nhiễm thấp dưới 5%, tỉ

lệ nảy mầm của hạt đạt tới 91.2% Ngược lại, khi mức nhiễm lớn hơn 20% tỉ

lệ nảy mầm chỉ đạt 69.8%, tỉ lệ hạt thối, hạt cứng và tỉ lệ mầm bất bình thường tăng, tỉ lệ cây khoẻ giảm Đặc biệt quan sát trên các mẫu hạt giống trước khi ủ không thấy sự khác nhau giữa hạt giống khoẻ và hạt giống nhiễm bệnh

Ngoài ra những thiệt hại kinh tế do nhóm các loài Aspergillus spp gây

ra trên lạc ngoài đồng ruộng cũng rất lớn Chúng là một trong những nguyên nhân gây chết héo ở lạc

Theo [11]: kết quả điều tra thành phần bệnh chết héo lạc ở miền Bắc Việt Nam đã xác định được 10 loài vi sinh vật gây bệnh héo, trong đó có 2 loài nấm

gây bệnh xuất hiện phổ biến thuộc nhóm loài Aspergillus spp là A flavus và A.niger Theo Lê Lương Tề, 1977[18]: năm 1965 ở xã Kiều Thượng - Nam Đàn

- Nghệ An và một số vùng khác, lạc chết héo làm giảm mất 70% sản lượng ở vùng đồng bằng, trung du Bắc Bộ bệnh cũng thường chỉ khoảng 10%

Nấm Aspergillus niger là nấm đất phổ biến cũng là nấm hại trên hạt

điển hình Theo [18]: bệnh do nấm A niger gây ra trên lạc được gọi là bệnh

héo rũ gốc mốc đen (HRGMĐ), một số tác giả khác của [8][12][29] gọi là bệnh thối đen cổ rễ hay bệnh thối cổ rễ

Kết quả điều tra của [8][10][23] đã xác định bệnh HRGMĐ là một trong những bệnh gây hại phổ biến ở hầu khắp các vùng trồng lạc ở miền Bắc Việt Nam như Hà Nội, Bắc Giang, Vĩnh Phúc, Thanh Hoá, Nghệ An, Hà Tĩnh,…v.v

Là nấm hoại sinh, nấm A niger ngoài tồn tại trên củ, hạt, trong đất, trên

tàn dư cây trồng và còn tồn tại cả trong điều kiện không khí nhiều bụi bặm

Theo [5]: giám định nấm A niger trên hạt giống lạc sau ủ 7 ngày thấy

nấm phát triển ở từng phần hoặc trên toàn bộ hạt Cành bào tử phân sinh không màu, mọc đơn hoặc tập trung thành từng nhóm nhỏ, trên đỉnh cành phình to hình tròn mang cụm bào tử đâm tia đâm tia tròn, xốp màu nâu hoặc màu đen Bào tử phân sinh có đường kính 4 - 5 àm, hình cầu, bề mặt sần sùi màu nâu tối

Theo [16]: triệu chứng bệnh điển hình trên cây mầm là một vết bệnh màu nâu vàng ở vùng trụ dưới lá mầm, vùng bị bệnh lan sâu vào mô tế bào, xuất hiện một lớp phấn đen trên vùng mô tế bào bệnh Sau đó, toàn bộ trụ dưới lá mầm bị đen lại và bị thối, cả cây bị héo và chết

Triệu chứng bệnh theo [8][12][18][27]: bệnh xuất hiện trong suốt quá trình sinh trưởng của cây và chiếm ưu thế vào giai đoạn cây con phân cành Cây con bị bệnh thường biểu hiện ở phần thân dưới 2 lá mầm Bệnh phát triển nhanh và phần lớn những cây bị bệnh bị phân huỷ và bị bao phủ một đám nấm màu đen ở giai đoạn cây trưởng thành: cổ rễ và thân ngầm sát mặt đất có vết bệnh màu nâu, biểu bì và vỏ vỡ nứt, thối mục, lúc đó cành lá héo cong mất sắc bóng, màu hơi vàng xanh Cổ rễ, gốc thân thâm mục nát, phủ một lớp nấm màu đen Khi nhổ cây bệnh lên rất dễ bị đứt gốc, bộ phận bó mạch cũng hoá nâu Cây bệnh thường héo và chết Khi cắt đoạn gốc thân cây bệnh để ẩm sau

24 - 48h sẽ xuất hiện lớp nấm màu đen

Theo [14, 72-73]: khi nuôi cấy nấm A niger trên môi trường PGA cho

tốc độ phát triển nhanh, đường kính tản nấm sau cấy 72 h là 25 - 30 mm, bào

tử phân sinh hình tròn không màu đến màu đen nâu, bề mặt ghồ ghề

Bệnh HRGMĐ có thể xuất hiện ở các giai đoạn sinh trưởng của cây nhưng bệnh gây tổn thất rất nghiêm trọng vào đầu vụ Theo [3][4][6]: bệnh héo rũ gốc mốc đen phát triển sớm (15 - 20 ngày sau gieo) và gây hại cho tới lúc chín, mạnh nhất vào giai đoạn tạo quả Bệnh phát sinh từ giai đoạn cây con

đến khi quả vào chắc nhưng cao điểm của bệnh tập trung vào giai đoạn cây 3 – 4

lá đến giai đoạn chớm ra hoa Khi điều kiện nhiệt độ đầu vụ xuống thấp dưới

170C, cây lạc sinh trưởng chậm, bệnh cũng phát sinh muộn và cao điểm vào

40 – 60 ngày sau gieo (Nguyễn Thị Ly, 1996[12])

Dẫn theo [8][18]: bệnh phát triển mạnh trong điều kiện ấm, nhiệt độ tương đối cao, ẩm ướt hay khi cây sinh trưởng kém, trên đất độc canh, đất cát thô và trên những chân đất chứa nhiều chất hữu cơ và tàn dư cây bệnh chưa hoai mục Kết quả thu được của [7][14] trên giống Sen Nghệ An tại các vùng trồng lạc ở Thanh Hoá cho thấy bệnh hại nghiêm trọng nhất ở vùng đồi, vùng

đất chuyên màu trồng 2 vụ lạc liên tiếp trong năm Vẫn theo đánh giá của [7]14]: vùng đồng bằng ven biển bệnh có xu hướng gây hại nặng hơn vùng trung du và miền núi

Nhìn chung, các yếu tố ảnh hưởng đến sự nảy mầm của hạt đều ảnh hưởng đến khả năng phát sinh và gây hại của bệnh héo rũ gốc mốc đen Bệnh phát sinh và gây hại nặng trong điều kiện thời tiết bất lợi như hạn hán và nắng gắt kéo dài ít lâu sau khi hạt mọc mầm, độ ẩm đất biến động lớn, đất nặng và kém thoát nước, chất lượng hạt giống kém, gieo hạt quá sâu hoặc quá nông, nhiệt độ quá thấp kết hợp với sự phá hoại của côn trùng gây hại (Nguyễn Xuân Hồng, 1995[8])

Theo [6][16]: cùng với việc dùng hạt giống tốt, điều khiển thời vụ, gieo trồng đúng kỹ thuật thì biện pháp xử lý hạt giống bằng thuốc hoá học là biện pháp hiệu quả nhất trong phòng trừ bệnh héo rũ gốc mốc đen

Thực tế sản xuất, nông dân Việt Nam chưa có tập quán xử lý hạt giống bằng thuốc hoá học trước khi gieo Tuy nhiên, theo kinh nghiệm của các nước trồng lạc trên thế giới, xử lý hạt giống lạc trước khi gieo là tối cần thiết để

đảm bảo mật độ cây trên đồng ruộng Theo [16]: phần lớn những thuốc trừ nấm dùng để khử trùng hạt giống đều có hiệu quả, thuốc dùng phổ biến là thuốc Thiram, Captan và hỗn hợp thuốc Captan + Seregan Kỹ thuật xử lý

thuốc khử trùng có hiệu quả nhất là hạt giống sau khi bóc vỏ phải bao thuốc ngay, thuốc bột trộn từ từ và đều sẽ làm thuốc bao đều hạt Tuỳ theo tính chất

đất và điều kiện mà liều lượng thuốc trừ nấm sẽ thay đổi Với thuốc Thiram thì nên dùng ở lượng 0.5 – 1% (tính theo trọng lượng của hoạt chất trên trọng lượng hạt giống), với hỗn hợp 75% Captan + 25% Seregan2% là 200 - 300g thuốc thương phẩm cho 100kg hạt giống

Các nghiên cứu [8][10][14][27] cho rằng: xử lý hạt giống bằng thuốc TMTD, thuốc Bavisitin hoặc xử lý hạt giống bằng Rovral 50WP với liều lượng 3g/10kg hạt hay phun Rovral 50WP ở nồng độ 0.2 % có thể tiêu diệt nguồn bệnh trên hạt giống và cho hiệu quả phòng trừ cao Tuy nhiên, theo [16]: xử lý hạt giống cũng có ảnh hưởng đến sức sống của cây con

Theo các nghiên cứu [18][20][27]: kết hợp một loạt các biện pháp như luân canh với cây ngũ cốc, mía, …v.v, chọn giống từ củ lành lặn, chọn hạt giống khoẻ kết hợp với các biện pháp trồng đúng kỹ thuật, bón phân hợp lý, tăng cường bón lót vôi cho hiệu quả phòng trừ bệnh cao

Hiện tại ở nước ta, nghiên cứu về khả năng kháng bệnh héo rũ gốc mốc

đen và việc dùng giống kháng vẫn chưa có những kết quả cụ thể Những nghiên cứu ban đầu mới chỉ ở mức đánh giá về mức nhiễm nhẹ hay nhiễm nặng trên các giống trong sản xuất ở từng vùng sinh thái Theo [3][11]: mức nhiễm bệnh của các giống nghiên cứu không có sự khác nhau rõ rệt Tuy nhiên, trong số các giống nghiên cứu thì giống LO3, LO5, MD7 có mức nhiễm bệnh thấp nhất, giống 75/23 là giống đang được trồng phổ biến tuy bị nhiễm nặng nhưng vẫn đạt năng suất khá

Trong những năm gần đây, phòng trừ sinh học được coi là hướng mới

đầy triền vọng trong nhiều lĩnh vực khoa học Phòng trừ sinh học ở Việt Nam hiện nay chủ yếu là khai thác và sử dụng vi sinh vật đối kháng Đã có một số nghiên cứu về sử dụng biện pháp sinh học đối với nhóm bệnh héo rũ, nhóm

nấm đất gây bệnh trên lạc trong đó có nấm A niger gây bệnh héo rũ gốc mốc

đen Những chế phẩm sinh học đã bước đầu đạt được kết quả khả quan là chế phẩm sinh học như Bacillus, Trichoderma, Hadawil

Khi nghiên cứu về nấm đối kháng, theo [3][12][22][26]: nấm

Trichoderma có hoạt tính đối kháng (ức chế hoặc tiêu huỷ) đối với nấm Aspergillus phân lập từ các mẫu cây bệnh từ 58 – 79% trên môi trường nuôi

cấy nhân tạo

Theo [3]: “ Sử dụng chế phẩm Trichoderma phòng trừ bệnh héo rũ lạc

với các phương pháp khác nhau cho hiệu quả khá cao Hiệu quả đạt cao nhất khi kết hợp ủ chế phẩm với phân chuồng rồi đem bón và trộn với hạt giống”

Theo kết quả đạt được của [14, 76-79]: sử dụng chế phẩm Bacillus

subtilis đạt hiệu quả kỹ thuật cao hơn nhiều so với chế phẩm Trichoderma viride và sử dụng hỗn hợp Bacillus subtilis + Trichoderma có khả năng nâng

cao hiệu quả phòng trừ bệnh héo rũ gốc mốc đen hơn là sử dụng đơn lẻ từng

chế phẩm Dẫn theo [3]: sử dụng chế phẩm Hadawil là chế phẩm sinh học sản xuất từ nhiều loài vi sinh vật có ích khác nhau bao gồm Mycorhium (7 loại), Bacillus (8 loại), nấm mốc hữu ích (6 loại) với liều lượng 0.6 kg/ha đạt hiệu

quả phòng trừ bệnh héo rũ lạc trong đó bệnh héo rũ gốc mốc đen cho hiệu quả cao nhất khi dùng chế phẩm tưới vào đất trước khi gieo hạt 7 ngày và sau gieo hạt 3 ngày

3 Đối tượng, địa điểm, nội dung và phương pháp

nghiên cứu

3.1 Đối tượng nghiên cứu

3.1.1 Vật liệu nghiên cứu

- Các mẫu hạt giống lạc thu thập ở vùng Hà Nội và phụ cận Mỗi mẫu

500 gam hạt quả hoặc 300 gam hạt nhân

- Tập đoàn giống lạc khảo nghiệm do bộ môn Cây công nghiệp cung cấp

- Giống trong sản xuất đại trà: VL10, VL7, Trạm Xuyên, Chay, L14

- Nguồn nấm đối kháng: Trichoderma viride, Trichoderma hazianum

do Viện Bảo vệ thực vật và Trung tâm Bệnh cây nhiệt đới cung cấp

- Thiram 50WP, Carbenzim 50WP, Topsin 70WP, Rovral 50 WP, DithaneM- 45 80WP

- Các hoá chất dùng trong nghiên cứu: cồn 700, CaOCl, NaOH 1N, HCl 1N và một số hoá chất thiết yếu khác

- Dụng cụ thí nghiệm, phương tiện kỹ thuật, phòng thí nghiệm, nhà lưới phục vụ thí nghiệm phân lập, nuôi cấy vi sinh vật gây bệnh, vi sinh vật đối kháng

- Môi trường nuôi cấy: sử dụng môi trường PGA (Potato – Glucose – Agar) để phân lập, nuôi cấy vi sinh vật gây bệnh, thử thuốc và thử khả năng ức chế của nấm đối kháng

3.2 Địa điểm và thời gian nghiên cứu

- Đề tài được thực hiện tại Phòng thực tập và nhà lưới - Bộ môn Bệnh cây, Trung tâm bệnh cây nhiệt đới - Trường ĐHNN I Hà Nội

- Điều tra thu thập mẫu hạt lạc giống tại Hà Nội và các vùng phụ cận

- Điều tra diễn biến tình hình bệnh hại trên đồng ruộng được tiến hành ở vùng Hà Nội và phụ cận

- Thời gian thực hiện: từ tháng 1 đến tháng 6 năm 2004

3.3 Nội dung và phương pháp nghiên cứu

3.3.1 Nội dung nghiên cứu

- Điều tra giám định thành phần nấm bệnh trên hạt giống lạc từ các mẫu thu thập vùng Hà Nội và phụ cận

- Điều tra xác định tình hình nhiễm nấm Aspergillus spp trên các mẫu

giống lạc

- Đánh giá ảnh hưởng của nấm A niger đến sức nảy mầm của hạt giống

lạc, xác định tỷ lệ nhiễm nấm A niger trên hạt và các vị trí trên hạt giống lạc

theo mức độ nhiễm nấm của mẫu hạt

- Phân lập nấm A niger và nghiên cứu ảnh hưởng của pH đến sự phát triển của nấm A niger trên môi trường nhân tạo PGA

- Điều tra theo dõi tình hình nhiễm nấm A niger trên một số giống lạc

khảo nghiệm trên đồng ruộng và sau thu hoạch

- Nghiên cứu ảnh hưởng của một số thuốc trừ nấm đối với sự phát triển

của nấm A niger trên môi trường PGA

- Điều tra tình hình bệnh héo rũ gốc mốc đen hại lạc ở vùng Hà Nội và phụ cận vụ xuân 2004

- Đánh giá ảnh hưởng của một số thuốc hoá học dùng xử lý hạt đến sức nảy

mầm của hạt giống lạc và khả năng phòng trừ nấm A niger trên hạt của chúng

- Khảo sát hoạt tính đối kháng của nấm đối kháng Trichoderma spp

đối với nấm A niger trên môi trường PGA

+ Vùng Trung du Bắc Bộ: thu mẫu ở Vĩnh Phúc (huyện Yên Lạc)

+ Vùng Đông bắc: thu mẫu ở Bắc Giang (huyện Hiệp Hoà, Yên Dũng, Thị xã Bắc Giang)

+ Vùng Tây Bắc: thu mẫu ở Hoà Bình (huyện Kim Bôi, Lạc Thuỷ) + Vùng Bắc trung bộ: thu mẫu ở Nghệ An (huyện Diễn Châu, Nghi Lộc) Mỗi huyện thu mẫu ở 1- 3 xã đại diện, mỗi xã thu thập mẫu từ 3 - 5 nông hộ Mẫu thu được trộn theo xã, trộn tiếp theo huyện thành mẫu tổng hợp, lấy mẫu phân tích từ mẫu tổng hợp, mỗi mẫu phân tích là 500 g củ giống hoặc

300 g hạt giống

3.3.2.2 Phương pháp nghiên cứu trong phòng

*Phương pháp giám định nấm bệnh trên hạt giống

Dựa theo tài liệu giám định bệnh hại hạt giống của Viện nghiên cứu bệnh hạt giống Đan Mạch (Mathus S.B & Olga K., 1999[62]), kiểm tra nấm bệnh tồn tại trên hạt giống bằng phương pháp giấy thấm

Mỗi mẫu giống kiểm tra 200 hạt, đặt hạt trên giấy đã thấm nước và ủ ở

200C trong 7 ngày trong điều kiện 12 giờ sáng, 12 giờ tối xen kẽ Kiểm tra dưới kính hiển vi quang học và soi nổi để xác định loại nấm có mặt trên hạt Nhận xét sự phát triển của tản nấm, xác định hình thái nấm gây bệnh và giám

định bệnh

*Phương pháp xác định nấm bệnh trên vỏ củ lạc

Vỏ củ từ các mẫu củ giống sau khi đã tách hạt làm thí nghiệm, tiến hành kiểm tra nấm bệnh tồn tại trên vỏ củ bằng phương pháp giấy thấm Mỗi mẫu giống kiểm tra 150 – 200 vỏ, 50 vỏ/lần nhắc lại

*Phương pháp xác định nấm bệnh trên các bộ phận của hạt lạc

Hạt lạc lấy từ các mẫu giống có mức độ nhiễm nấm khác nhau, tiến hành tách theo phương pháp S B Mathur (1976)[61]: ngâm hạt giống trong nước cất sau 6 - 12 giờ (ngâm riêng từng hạt), tách từng bộ phận của hạt gồm vỏ lụa, nội nhũ, phôi, nhúng từng bộ phận đã tách vào trong dung dịch natri hypochloride 1% sau đó đặt riêng theo từng hạt để kiểm tra nấm bệnh tồn tại trên chúng bằng phương pháp giấy thấm Tiến hành tách 150 hạt/một mức nhiễm, 50 hạt/lần nhắc Giống lựa chọn thực hiện thí nghiệm tách là giống 75/23

*Phương pháp kiểm tra sức nảy mầm của hạt giống

Theo phương pháp của Hội kiểm nghiệm hạt giống quốc tế (ISTA, 2003) và tiêu chuẩn ngành kiểm nghiệm hạt giống

Phương pháp giấy thấm TP (Top of paper ): đặt hạt được kiểm tra sức nảy mầm lên trên lớp giấy thấm đã no nước trong các dụng cụ Jacobsen (có thể thay thế dụng cụ Jacobsen bằng hộp nhựa, đĩa petri) Đậy nắp hộp hoặc cho vào túi nilon để giảm tối thiểu sự bay hơi nước và để giữ ẩm cho giấy thấm Đặt hộp trong tủ nảy mầm hoặc trong buồng nảy mầm ủ ở điều kiện nhiệt độ 20 – 250C, kiểm tra sức nảy mầm của mẫu hạt qua 2 lần đếm dựa vào

số mầm bình thường Lần đếm thứ nhất sau 5 hoặc 7 ngày, đếm số mầm bình thường, ghi số lượng vào bảng điều tra, bỏ đi những mầm bình thường đã đếm

và tiếp tục ủ toàn bộ số hạt, mầm còn lại Lần đếm thứ hai được thực hiện sau

đặt hạt 10 hoặc 14 ngày, đếm số mầm bình thường, mầm bất bình thường, hạt cứng, hạt tươi, ghi số liệu vào bảng (dựa theo tiêu chuẩn đã qui định để xác

định mầm bình thường, mầm bất bình thường, hạt thối, hạt tươi) Tính số mầm bình thường cho cả 2 lần đếm để xác định tỉ lệ nảy mầm của hạt

Phương pháp cát ẩm S (Sand): đặt hạt trên cát vô trùng đã được tra

đủ ẩm và cũng tiến hành kiểm tra sức nảy mầm của hạt như phương pháp giấy thấm

Tiến hành kiểm tra 400 hạt/mẫu, 50 hạt hoặc 100 hạt cho 1 lần nhắc lại tuỳ vào kích thước của hạt

Theo dõi đặc điểm hình thái, kích thước, màu sắc của tản nấm trên môi trường nhân tạo Mỗi mẫu phân lập của mỗi vùng sinh thái được cấy trên môi trường PGA trong hộp petri Thời gian theo dõi là 1, 3, 5, 7 ngày sau cấy

3.3.2.3 Phương pháp điều tra ngoài đồng ruộng

Điều tra bệnh héo rũ gốc mốc đen hại lạc tiến hành theo phương pháp của Viện Bảo vệ thực vật 1997[28]

Vùng điều tra: vùng đồng bằng sông Hồng, vùng trung du Bắc bộ, vùng

Đông bắc, vùng Tây bắc, vùng Bắc trung bộ đại diện gồm các tỉnh Hà Nội, Bắc Ninh, Nghệ An, Bắc Giang Điều tra trên giống Trạm Xuyên Trên mỗi ruộng

điều tra theo phương pháp 5 điểm chéo góc, mỗi điểm điều tra 100 cây ngẫu nhiên qua các lần điều tra Đếm số thân bị bệnh, tính tỷ lệ bệnh (TLB %)

Điều tra định kỳ theo giai đoạn sinh trưởng của cây lạc Điều tra 4 kỳ: thời kỳ cây con (từ mọc cho đến 7- 8 lá thật), thời kỳ ra hoa, thời kỳ hình thành củ, thời kỳ quả vào chắc đến thu hoạch

Chỉ tiêu điều tra: đếm số bị bệnh héo rũ gốc mốc đen, tính TLB(%)

3.3.2.4 Phương pháp bố trí thí nghiệm và theo dõi diễn biến của bệnh trên một số giống lạc khảo nghiệm

Thí nghiệm được bố trí theo kiểu khối ngẫu nhiên đầy đủ (RCB), 3 lần nhắc lại, 10m2/ô, mật độ 35 cây/m2

Các dòng, giống lạc thí nghiệm: 75/23, D40, L12, D35A., D43, S12, D50, L14

Định kỳ theo dõi 7 ngày/1lần trên toàn bộ ô thí nghiệm Theo dõi số

cây héo, chết do nấm A niger và tính TLB(%)

Năng suất thực thu: thu hoạch và tính năng suất quả khô theo từng công thức

3.3.2.5 Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của thuốc hoá học đến sự phát triển của nấm A.niger trên môi trường nuôi cấy

Khảo sát ảnh hưởng của một số thuốc hoá học đến sự phát triển nấm trên môi trường nuôi cấy PGA: thí nghiệm gồm 4 công thức, mỗi công thức 3 lần nhắc lại

đổ vào môi trường để tránh bị vón thuốc

Dùng que đột đường kính 5 mm, đột nấm từ các đĩa A niger nguồn cấy nên bề mặt đĩa môi trường, theo dõi sự phát triển và sự sinh bào tử của tản nấm trên môi trường 1, 3, 5, 7, 10 ngày sau cấy Lựa chọn được thuốc có khả năng ức chế hiệu quả và tốt nhất trong các thuốc đã khảo sát trên để tiến hành các thí nghiệm tiếp theo

3.3.2.6 Phương pháp khảo sát hiệu quả của một số thuốc hoá học dùng xử lý nấm

A niger trên hạt giống lạc và ảnh hưởng của chúng đến sức nảy mầm của hạt

Hạt giống thí nghiệm : giống 75/23 vụ xuân 2004

Thí nghiệm gồm 5 công thức, mỗi công thức kiểm tra 400 hạt, 100 hạt cho 1 lần nhắc lại

* Công thức 1: Đối chứng (không xử lý hạt giống)

* Công thức 2: Xử lý hạt giống bằng Thizam 50 WP liều lượng 5.0 g/kg hạt

* Công thức 3: Xử lý hạt giống bằng Carbenzim 50WP liều lượng 1.9 g/kg hạt

* Công thức 4: Xử lý hạt giống bằng hỗn hợp 1/2Thizam 50WP + 1/2Carbenzim 50WP liều lượng 2.5 g + 0.95 g/kg

* Công thức 5: Xử lý hạt giống bằng Rovral 50 WP liều lượng 2.5 g/kg hạt

Các công thức xử lý hạt theo kiểu bán thô Cân thuốc dạng thương phẩm theo liều lượng khuyến cáo, hạt lạc vừa bóc nhúng nước cho ướt đều sau

đó trộn với lượng thuốc vừa cân có cho thêm một chút nước (để thuốc thấm

đều và không bị bay) ủ trong 30 phút, rửa sạch trước khi đem ra gieo

Tiến hành kiểm tra sức nảy mầm ở các công thức này theo phương pháp giấy thấm của ISTA như đã nêu ở mục 2.3.2.2

Tính tỉ lệ hạt bệnh (%), tỉ lệ hạt không nảy mầm (%), tỉ lệ hạt nảy mầm (%), tỉ lệ mầm bệnh (%) ở mỗi công thức

Tính tỉ lệ hạt nhiễm nấm A niger (%), tỉ lệ hạt không nảy mầm nhiễm nấm A niger (%), tỉ lệ hạt nảy mầm nhiễm nấm A niger (%) ở mỗi công thức 3.3.2.7 Thí nghiệm khảo sát hoạt tính đối kháng của nấm Trichoderma spp với nấm A niger trên môi trường PGA

Thí nghiệm thử hoạt tính đối kháng: tiến hành cấy đối xứng nấm Trichoderma spp và A niger trên bề mặt đĩa môi trường (tâm đột cách nhau 35mm), theo dõi tốc độ phát triển của 2 loài nấm và khả năng lấn át nhau của chúng ở 1, 2, 3, 4, 5 ngày sau cấy

Thí nghiệm gồm 3 công thức, mỗi công thức 3 lần nhắc lại Nguồn A niger

phân lập từ hạt giống vùng đồng bằng sông Hồng

* Công thức 1: Đối chứng (cấy A niger thuần trên đĩa môi trường)

* Công thức 2: A niger + Trichoderma viride

* Công thức 3: A niger + Trichoderma hazianum

Tính hiệu quả ức chế của nấm đối kháng đối với nấm bệnh bằng công thức Abbot

4 kết quả nghiên cứu và thảo luận

4.1 Tình hình nhiễm nấm bệnh trên hạt giống lạc vụ xuân 2003

4.1.1 Thành phần bệnh nấm hại hại hạt giống lạc vụ xuân 2003

Để đánh giá tình hình nhiễm nấm trên hạt giống lạc vụ xuân 2003 ở một số vùng sinh thái thuộc miền Bắc Việt Nam, chúng tôi đã tiến hành thu thập mẫu hạt giống lạc từ 9 tỉnh thành thuộc các vùng sinh thái điều tra, trong đó tập trung chủ yếu vào các tỉnh thuộc vùng đồng bằng sông Hồng Kết quả kiểm tra, giám định nấm bệnh qua 67 mẫu hạt đã thu thập

Xuất hiện phổ biến trong số các loài nấm hại hạt trên là nhóm các

loài nấm Aspergillus spp., Fusarium spp., Penicillium spp., phổ biến là các loài nấm A niger, A flavus, Penicillium spp., Fusarium oxysporum

Một số loài nấm ít phổ biến trên hạt hơn nh− A parasiticus, Fusarium

solani, Fusarium moniliforme, Diplodia sp., Macrophoma phaseoline, Botrytis cinerea, …v.v

Các nấm hại hạt phần lớn thuộc lớp nấm bất toàn, bộ Moniliales trong đó họ Moniliaceae chiếm đa số Lớp nấm trơ Mycelia Sterilia chỉ

gồm 2 loài nấm hại rất ít phổ biến là Rhizoctonia solani, Sclerotium

rolfsii

B¶ng 4.1 Thµnh phÇn nÊm bÖnh trªn c¸c mÉu h¹t gièng l¹c - vô xu©n 2003

biÕn

10 Fusarium oxysporum Schlecht emend.

11 Fusarium solani (Mart.) Saccardo Tuberculeriacea Moniliales +

Ghi chó: ± rÊt Ýt phæ biÕn ( tØ lÖ h¹t nhiÔm < 5% )

+ Ýt phæ biÕn ( tØ lÖ h¹t nhiÔm < 5 - 15 % )

++ phæ biÕn (tØ lÖ h¹t nhiÔm < 15 - 30 % )

+++ rÊt phæ biÕn (tØ lÖ h¹t nhiÔm > 30 % )

Ngoµi ra, mét sè nÊm bÖnh kh«ng thuéc nhãm nÊm h¹i h¹t còng t×m thÊy trªn h¹t nh− Bipolaris sp., Alternaria alternata, Cecospora sp., sù xuÊt hiÖn trªn h¹t cña nã cã thÓ do nhiÒu nguyªn nh©n mµ nguyªn nh©n chñ yÕu lµ

do nhiÔm c¬ giíi