slide kiểm nghiệm thuốc 41

Kiểm nghiệm thuốc phương pháp sinh học Mục tiêu học Nêu vai trò PP sinh học KN chất kháng sinh, TB thử nghiệm ĐL chất KS PP khuếch tán TB mục đích, ngun tắc, PP thử vơ khuẩn đếm SL VSV g(1ml) DP Biết KT làm môi trường nuôi cấy VSV nêu PP tiệt trùng Nắm đđ hình thái, tính chất ni cấy VK, vi nấm để áp dụng thử nghiệm VSV Nội dung học I Mở đầu II Kiểm nghiệm thuốc phương pháp thử động vật III Kiểm nghiệm thuốc phương pháp thử vi sinh vật Đại cương vi sinh vật Môi trường nuôi cấy vi sinh vật Thử vô khuẩn Thử giới hạn vi sinh vật Xác định hoạt lực kháng sinh phương pháp thử vi sinh vật I Mở đầu Nguyên tắc phương pháp sinh học: - So sánh hiệu lực tác dụng đặc tính riêng chất thử với chất chuẩn tương ứng điều kiện thời gian thí nghiệm - Trong KN thuốc: + KN thuốc phương pháp thử động vật + KN thuốc thử nghiệm vi sinh vật I Mở đầu Chất chuẩn: -Chất chuẩn gốc -Chất chuẩn thứ cấp Đánh giá kết quả: - Đánh giá toán thống kê - Độ xác phép thử thể giới hạn tin cậy II Kiểm nghiệm thuốc phương pháp thử động vật Nguyên tắc: - Dựa đáp ứng động vật thí nghiệm chế phẩm đưa vào thể (liều lượng theo quy định thí nghiệm) để đánh giá chất lượng chế phẩm cần thử Động vật thí nghiệm: - Phải đồng đều, khiết nòi giống - Khoẻ mạnh, khơng nhiễm bệnh - Khơng có thai - Được ni dưỡng đầy đủ II Kiểm nghiệm thuốc phương pháp thử động vật Thử in vivo in vitro: - Thử in vitro: tiến hành quan cô lập động vật, tim, tử cung, ruột, máu… - Thử in vivo: thực thể động vật sống, dựa vào kết thông số để đánh giá tác dụng chất lượng thuốc Liều: - Là lượng chế phẩm thử đưa vào thể động vật lần cho mục đích thí nghiệm II Kiểm nghiệm thuốc phương pháp thử động vật Các thử nghiệm ĐV áp dụng KNT: - Thử độc tính bất thường - Thử chất hạ huyết áp - Thử chất gây sốt - Định lượng hormon: gonadorelin, corticotrophin,insulin, oxytocin, menotrophin - Kiểm tra tính an tồn vaccin sinh phẩm - Xác định hiệu lực vaccin antitoxin   III Kiểm nghiệm thuốc phương pháp thử vi sinh vật Đại cương vi sinh vật Vi sinh vật 10 5.Xác định hoạt lực kháng sinh phương pháp thử VSV  Nguyên tắc: - Hoạt lực chất kháng sinh xác định cách so sánh khả ức chế chủng thị, nồng độ biết kháng sinh thử (chưa biết hoạt lực) nồng độ biết kháng sinh chuẩn (đã biết rõ hoạt lực) 47 III.5.Xác định hoạt lực kháng sinh phương pháp thử VSV  Chủng thị: - Chủng VSV khiết, nhạy cảm với chất kháng sinh - Phân lập từ bảo tàng giống Quốc gia - Bảo quản ống đông khô mơi trường thích hợp - 10oC  Chất chuẩn: - Độ tinh khiết cao - Đóng ống thủy tinh hàn kín, tránh ánh sáng, 0oC  Đơn vị hoạt lực: U / UI / IU  Môi trường dung môi thử: tùy kháng sinh VSV thị 48 5.Xác định hoạt lực kháng sinh phương pháp thử VSV Phương pháp thử Phương pháp đo độ đục Phương pháp khuếch tán 49 5.Xác định hoạt lực kháng sinh phương pháp thử VSV Phương pháp khuếch tán - Cho môi trường cấy chủng thị vào đĩa petri (dày 2-5mm) - Đặt ống trụ (hoặc giấy tẩm kháng sinh) chứa chất chuẩn chất thử hình vẽ - Để nhiệt độ phòng - Ủ nhiệt độ thích hợp 16 – 18 - Đo đường kính vùng ức chế tạo nồng độ chuẩn thử - Tiến hành với 10 đĩa thử song song Vị trí đặt chất thử chất chuẩn với thử nghiệm liều 50 5.Xác định hoạt lực kháng sinh phương pháp thử VSV Phương pháp khuếch tán - Tính kết Với Trong đó:  T1, T2, T3, S1, S2, S3 tổng giá trị đường kính vòng vơ khuẩn tính mm nồng độ t1, t2, t3, s1, s2, s3  I tỷ số hai nồng độ pha loãng nhau, I = 51 Tóm tắt Sự phát triển VSV Đại cương Kĩ thuật pha chế MT bước Tiệt trùng phương pháp MT nuôi cấy VSV Thử vô khuẩn Lọc qua màng lọc Nuôi cấy trực tiếp Thử giới hạn nhiễm khuẩn Xác định hoạt lực kháng sinh pp thử VSV Dụng cụ, thiết bị, kĩ thuật thử, đánh giá, áp dụng Mục đích, nguyên tắc, phương pháp thử, đánh giá kết Mục đích, nguyên tắc, phương pháp khuếch tán, đánh giá kết 52 Tài liệu tham khảo  Bộ Y tế, Dược điển Việt Nam IV, NXB Y học, 2009  Ngoài • Trần Tử An, Kiểm nghiệm dược phẩm, NXB Y học, 2011 • Đặng Văn Hòa, Kiểm nghiệm thuốc, NXBGDVN, 2011 • Nguyễn Lân Dũng, Vi sinh vật học, NXB Giáo dục, 2009 • Và số tài liệu tham khảo khác… 53 Câu hỏi tự lượng giá Điều không yêu cầu môi trường nuôi cấy vi sinh vật: A Đầy đủ chất dinh dưỡng B pH nằm khoảng quy định C Đảm bảo độ tinh khiết D Đảm bảo vô trùng 54 Câu hỏi tự lượng giá Trong loại xạ đây, xạ ứng dụng nhiều để tiệt trùng: A Tia Rơnghen B Tia gamma C Tia hồng ngoại D Tia tử ngoại 55 Câu hỏi tự lượng giá Q trình đóng ống tiệt trùng môi trường nuôi cấy VSV thường tiến hành điều kiện nào: A 180oC/ 30 phút, 170oC/ giờ, 160oC/2 B 110oC/ 30 phút,120oC/ 20 phút C 60oC/ 30 phút, 73oC/ 15 phút D 110oC/ 40 phút,120oC/ 30 phút 56 Câu hỏi tự lượng giá Chọn câu sai: A MT Sabouraud lỏng dùng để phát vi nấm B MT canh thang cao thịt - pepton phát vi khuẩn hiếu khí C Mơi trường Soybean - casein phát VK hiếu khí kỵ khí D MT Wilson - Blair phát vi khuẩn kị khí 57 Câu hỏi tự lượng giá Trình bày đặc điểm hình thái tính chất ni cấy vi khuẩn, nấm mốc, nấm men? Nêu cách phân loại vi khuẩn theo hình thể đặc tính hơ hấp? Phân tích yếu tố ngoại cảnh ảnh hưởng đến phát triển vi sinh vật? Trình bày phương pháp làm môi trường nuôi cấy vi sinh vật? Mô tả phương pháp tiệt trùng? 10 Trình bày thử nghiệm thử vô khuẩn phương pháp nuôi cấy trực tiếp? 11 Nêu mục đích, nguyên tắc thử nghiệm thử vô khuẩn 58 Câu hỏi tự lượng giá 12 Viết tên chủng thị sử dụng để thử chất ức chế thử nghiệm thử vô khuẩn thử giới hạn nhiễm khuẩn Nêu khác chủng thị hai phép thử giải thích? 13 Vai trò phương pháp sinh học kiểm nghiệm chất kháng sinh? 14 Trình bày phương pháp chuẩn bị nhũ dịch vi sinh vật định lượng kháng sinh.Tại chủng thị khơng có bào tử trước sử dụng cần phải cấy truyền vào mơi trường thích hợp? 15 Cách pha dung dịch chuẩn dung dịch thử định lượng kháng sinh phương pháp khuyếch tán Nêu điểm cần ý trình pha dung dịch này? 59 Câu hỏi tự lượng giá 16 Mô tả cách tiến hành định lượng chất kháng sinh phương pháp khuyếch tán? 17 Viết cơng thức tính kết định lượng kháng sinh với thử nghiệm ba liều công thức xác định giới hạn tin cậy? 18 Trình bày phương pháp định lượng bột Gentamicin sulphat thử nghiệm vi sinh vật( phương pháp khuyếch tán), với thị Bacillus pumilus NCTC 8241 Cho biết: Gentamicin sulphat chuẩn có 680 U/ ml, dung mơi pha lỗng nước Ba nồng độ là: S1= U/ ml; S2=8 U/ ml; S3=16 U/ ml 60 ... thái, tính chất ni cấy VK, vi nấm để áp dụng thử nghiệm VSV Nội dung học I Mở đầu II Kiểm nghiệm thuốc phương pháp thử động vật III Kiểm nghiệm thuốc phương pháp thử vi sinh vật Đại cương vi sinh... đánh giá tác dụng chất lượng thuốc Liều: - Là lượng chế phẩm thử đưa vào thể động vật lần cho mục đích thí nghiệm II Kiểm nghiệm thuốc phương pháp thử động vật Các thử nghiệm ĐV áp dụng KNT: - Thử... thử thể giới hạn tin cậy II Kiểm nghiệm thuốc phương pháp thử động vật Nguyên tắc: - Dựa đáp ứng động vật thí nghiệm chế phẩm đưa vào thể (liều lượng theo quy định thí nghiệm) để đánh giá chất lượng