qui trình định lượng tổng coliform

BỘ CÔNG THƯƠNG  TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM TP HCM KHOA CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG TỔNG COLIFORMS GVHD : Phan Thị Kim Liên Môn : Phân Tích Vi Sinh Thực Phẩm Nhóm 3  DANH SÁCH NHÓM Trần Vũ Quỳnh Anh 2005140006 Thạch Nguyễn Phương Khanh 2005140239 Vũ Kim Nguyên 2005140357 Hồng Lệ Nhi 2005140369 Trần Văn Thắng 2005140501 Nội dung Tình hình ngộ độc Tổng quan Các phương pháp Coliforms định lượng PP đếm đĩa PP MPN Tình hình ngộ độc thực phẩm: • Theo thống kê Bộ Y tế, tháng đầu năm 2016, nước xảy gần 30 vụ ngộ độc thực phẩm nghiêm trọng, làm 1.386 người bị ngộ độc, có trường hợp tử vong Riêng tháng 4.2016 xảy vụ ngộ độc thực phẩm, làm 375 người bị ngộ độc •  Hầu hết bệnh nhân bị ngộ độc ăn phải thức ăn bị nhiễm vi sinh vật thời tiết nóng gây ra, với số trường hợp bị ngộ độc hấp thụ phải hóa chất tồn dư thực phẩm  Tổng quan Coliforms: • Coliforms tiêu thơng dụng dùng để đánh giá mức độ an toàn vi sinh thực phẩm • Sự diện một lượng lớn Coliforms thực phẩm điều không mong muốn, nhiên rõ ràng khơng thể loại bỏ chúng hồn tồn khỏi nhiều thực phẩm đơng lạnh tươi sống •  Vấn đề chỗ số lượng chúng đến mức nào, coi khơng an toàn thực phẩm  Tổng quan Coliforms: • Thuộc nhóm trực khuẩn gram (-) • Khơng sinh bào tử • Hiếu khí kị khí tùy tiện • Có khả sinh acid, sinh lên men lactose 37oC 24-48h • to : -2o-50oC • pH: 4,4-9,0  Tổng quan Coliforms: • Colifforms gồm nhóm chính: oEscherichia ( với lồi E.coli) oCitrobacter oKlebsiella oEntrobacter • Tính chất sinh hóa nhóm thể qua thực nghiệm Indol (I), Methyl Red (MR), VogesProskauer (VP), Citrate (iC) thuogwf gọi IMViC  Tổng quan Coliforms: • Thường sống ruột phân người động vật máu nóng • Nguồn nhiễm: nhiễm từ nước phân chứa VSV gây bệnh • Triệu chứng: • Bệnh phát đột ngột, gây đau bụng dội, nơn mửa, phân lỏng, sốt nhẹ • Có trường hợp sốt cao, chân co • Thời gian ủ bệnh 2h-20h • Khỏi sau 2-3 ngày Các phương pháp định lượng PP đếm khuẩn lạc PP MPN Phương pháp ĐẾM KHUẨN LẠC 3.1.5 Các bước tiến hành Bước •   2: Pha lỗng mẫu  Dùng pipet vô trùng lấy 1ml huyền phù ban đầu cho vào ống nghiệm chứa 9ml SPW vô trùng 1ml  Trộn kỹ máy vortex – 10 giây → dd pha loãng 1ml (đối với mẫu ngun chất dd pha lỗng )  Lặp lại thao tác để có dd pha lỗng ,… 9ml 9ml SPW SPW -1 10 -2 10 thu lượng vi khuẩn thích hợp 3.1.5 Các bước tiến hành Bước 3: Cấy ủ mẫu 1ml 10 Dùng pipet vô trùng chuyển 1ml mẫu pha -1 1.1 1.2 loãng vào đĩa petri Sử dụng nồng độ liên tiếp, nồng độ đĩa petri 5ml TSA 1ml Bổ sung thêm 5ml môi trường TSA, xoay đĩa để trộn mẫu, để yên 1-2h 10 -2 2.1 2.2 3.1.5 Các bước tiến hành Bước 3: Cấy ủ mẫu Tiếp tục bổ sung thêm khoảng 15ml môi trường VRB 1.1 1.2 Xoay tròn đĩa theo ngược chiều kim đồng hồ, chiều lần Sau môi trường đông hồn tồn rót thêm 4ml mơi VRB trường VRB tráng kín bề mặt đĩa để đơng đặc 2.1 2.2 Lật úp đĩa ủ 377̊C 24h 3.1.5 Các bước tiến hành Bước 4: Đếm chọn khuẩn lạc để khẳng định  Đếm đĩa có số khuẩn lạc