Đề tài: Nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý của dịch tiêu chảy cấp trên lợn (Porcine Epidemic Diarrhoea – PED) tại tỉnh Thanh Hóa và giải pháp phòng trị

Đề tài Nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý của dịch tiêu chảy cấp trên lợn (Porcine Epidemic Diarrhoea – PED) tại tỉnh Thanh Hóa và giải pháp phòng trị với mục tiêu chính như: Chẩn đoán xác định virus gây bệnh và xác định một số vi khuẩn kế phát bằng PCR và Hóa mô miễn dịch, xác định rõ các đặc điểm bệnh lý chủ yếu của lợn mắc bệnh, thử nghiệm một số phác đồ và quy trình phòng, trị bệnh.

1 ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Tính cấp thiết đề tài nghiên cứu Dịch tiêu chảy cấp lợn hay gọi PED (Porcine Epidemic Diarrhoea) thuộc nhóm Coronavirus gây Hiện vấn đề quan tâm lợn kháng thể với bệnh Trên đàn lợn tuần tuổi có triệu chứng tiêu chảy gây chết nhanh khó hồi phục, thiệt hại đến 100% đàn Bệnh gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi nhiều quốc gia giới Về lịch sử, bệnh phát lần đầu Anh Năm 1976, số nước Châu Âu khác ghi nhận ca bệnh đặt tên “Epidemic viral diarrhea” (EVD) Năm 1978 đổi tên thành PED (Porcine Epidemic Diarrhoea) thức công nhận Bệnh ghi nhận nhiều nước Anh, Bỉ, Nhật, Trung Quốc nhiều nước Châu Âu Hiện bệnh phân bố khắp nơi giới (Andreas Pospischil, Angela Stuedli, Matti Kiupel)[12] Trong năm 2008 - 2009, hầu hết trại chăn nuôi lợn Việt Nam bị thiệt hại nặng nề dịch tiêu chảy cấp Bệnh xảy nhanh, toàn đàn lợn gây chết gần 100% lợn theo mẹ Năm 2010 bệnh tiếp tục xảy số trại, chí tái phát trại xảy dịch năm 2009 (Nguyễn Ngọc Hải, 2011)[4] Hiện nay, tình hình dịch bệnh lợn trở nên phức tạp nguy hiểm nhiều so với năm trước Mặc dù chương trình phòng bệnh biện pháp hỗ trợ, trộn kháng sinh vào thức ăn… áp dụng hầu hết trại bệnh xảy liên tục gây thiệt hại to lớn cho người chăn nuôi lợn Do vậy, việc cần thiết phải nghiên cứu, ứng dụng phương pháp điều trị có hiệu cao Trước thực trạng đó, nhằm hiểu rõ số đặc điểm biến đổi bệnh lý bệnh PED gây cho lợn con, đồng thời có thêm sở khoa học cho việc xây dựng biện pháp xử lý, giảm bớt thiệt hại dịch bệnh gây đàn lợn Việt Nam nói chung Thanh Hóa nói riêng, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu số đặc điểm bệnh lý dịch tiêu chảy cấp lợn (Porcine Epidemic Diarrhoea – PED) tỉnh Thanh Hóa giải pháp phòng trị” 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu tổng quát Nghiên cứu đưa hiểu biết đầy đủ đặc điểm bệnh lý làm sở cho việc chẩn đoán phòng trị bệnh có hiệu 1.2.2 Mục tiêu cụ thể - Chẩn đoán xác định virus gây bệnh xác định số vi khuẩn kế phát PCR Hóa mô miễn dịch - Xác định rõ đặc điểm bệnh lý chủ yếu lợn mắc bệnh - Thử nghiệm số phác đồ quy trình phòng, trị bệnh 1.3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu Lợn nuôi tỉnh Thanh Hoá Thời gian tiến hành đề tài từ năm 2013 - 2017 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Sinh lý tiêu hoá hấp thu lợn Tiêu hoá hấp thu giai đoạn đầu trình trao đỏi chất Nó thực chức phân giải thành phần chất có thức ăn thành chất đơn giản mà thể hấp thu lợi dụng được; chất thu nhận vào máu bạch huyết qua màng nhầy ống tiêu hoá Nhờ có trình mà thể nhận toàn chất dinh dưỡng cần thiết cho trình sinh trưởng hoạt động khác thể Trong thức ăn lợn có chứa chất dinh dưỡng cần thiết gluxit, protein, lipid, khóng, vitamin, - Tiêu hoá gluxit Gluxit chiếm tỷ lệ lớn phần thức ăn lợn, có vai trò cung cấp lượng cho hoạt động sống thể tham gia phần vào cấu trúc hoá học thể Gluxit thức ăn lợn gồm dạng: tinh bột, đường, chất xơ Quá trình tiêu hoá gluxit chủ yếu nhờ enzym có dịch tiêu hoá enzym VSV α -amilaza Tinh bột -> mantoza, mantotrioza, loại dextrin (Enzym α -amilaza hoạt động môi trường có độ axit biến động rộng từ 3,8-9,4 có mặt ion Clo) Enzym lactaza Lactoza > galactoza + glucoza (Enzym lactaza tuyến ruột tiết phân giải đường lactoza sữa Enzym có mức hoạt động cao lợn tuần tuổi thứ và3 Sau có hướng giảm đần) Mantaza Mantoza -> α glucoza Sacaraza Đường sacaroza -> glucoza + fructoza Men VSV Chất xơ > glucoza, axit béo bay Quá trình phân giải chất xơ xảy túi mù dày ruột già (chủ yếu manh tràng) nơi có tồn VSV thông qua lên men - Sự lên men đường tiêu hoá lợn: Sự lên men đường tiêu hóa lợn có ý nghĩa quan trọng trình tiêu hoá gluxit Sự lên men thực nhờ hệ VSV Qua trình nghiên cứu hệ VSV đường tiêu hoá lợn người ta thấy túi mù dày lợn có chứa lượng lớn loài VSV Lactobaccilus, Bifidobacterium lượng thấp loài VSV khác Trong ruột già chứa hỗn hợp VSV đa dạng Trong điều kiện bình thường 1g chất chứa manh tràng có từ 1-10 tỉ VSV Trong có VK (cầu khuẩn háo iod) phân giải xenluloza VSV phân giải tinh bột đường ruột già chu yếu Clostridium butyrium, trực khuẩn gram (+) háo iod yếm khí Ngoài có VK lactic Enterococus Ruột già lợn có hệ VSV phong phú nhiệt độ môi trường ổn định thích hợp (38,5-39 0C), môi trường yếm khí gần trung tính, pH = 5,8-7,5 Điều giải thích vấn đề lợn có khả tiêu hoá thức ăn thô xanh tốt Quá trình lên men tiêu hoá chất xơ VSV ruột già tạo axit béo bay Số lượng axit béo cung cấp khoảng 525% nhu cầu lượng trì theo lượng chất xơ phần - Tiêu hoá protein Protein tiêu hoá nhờ enzym đường tiêu hoá Tại dày tiêu hoá protein chủ yếu nhờ có enzym pepsin số enzym khác catepsin Pepsin dày hoạt động cần có mặt HCl dạng tự Do lợn sinh enzym pepsin chưa hoạt động dạng pepsinogen Protein dày phân cắt thành đoạn peptid Khi xuống ruột non trình phân giải tiếp tục triệt để tạo sản phẩm cuối axit amin Sự phân giải protein ruột non thực nhờ enzym tuyến tuỵ, tuyến ruột trypsin, kimozin, elastaza, cacboxypeptidaza, dipeptidaza, nucleaza, Chỉ có protein chuyển xuống ruột già phân giải VSV - Tiêu hoá Lipid Chất béo thức ăn lợn thành phần triglyxerit có phospholipid, sterol, esterol Các thành phần tiêu hoá enzym dịch tuỵ, dịch ruột tiết Lipaza, phospholipaza, colesterolesteaza Sản phẩm trình tiêu hoá lipid glyxerin axit béo, cholesterol Quá trình tiêu hoá lipid thực nhờ tác động dịch mật - Sự hấp thu chất dinh dưỡng Quá trình hấp thu xảy khác vị trí đường tiêu hoá + Tại xoang miệng hấp thu thức ăn lưu lại thời gian ngắn chưa phân giải đến dạng dễ hấp thu + Tại dày có hấp thu nước, glucoza, axit amin, chất khoáng nhiên hấp thu lượng nhỏ + Tại ruột non nơi xảy trình hấp thu mạnh niêm cạc ruột non có vi nhung mao (200triệu/mm bề mặt niêm mạc) làm tăng diện tích bề mặt niêm mạc lên hàng trăm lần Lượng đường protein tiêu hoá hấp thu ruột non tới 85 87% tương ứng Ruột non nơi hấp thu nước (75-85% tổng số) muối khoáng chủ yếu + Tại ruột già trình hấp thu tiếp tục 2.2 Đặc điểm sinh lý lợn bú sữa Lợn từ lúc sơ sinh đến lúc cai sữa (tách mẹ) có nhiều đặc điểm sinh lý đặc trưng đòi hỏi phải có chăm sóc nuôi dưỡng tốt Nếu chăn nuôi, người chăn nuôi không nắm vững đặc điểm sinh lý lợn không nuôi dưỡng chăm sóc hợp lý chúng, dẫn đến sinh trưởng chậm, lợn không khỏe chất lượng giống kém, bệnh tật dễ dàng xảy 2.2.1 Lợn có tốc độ sinh trưởng phát triển nhanh Trong giai đoạn lợn sinh trưởng nhanh, tầm vóc thể trọng tăng dần theo tuổi Từ lúc sơ sinh đến lúc cai sữa, trọng lượng lợn tăng từ 10 đến 12 lần So với gia súc khác tốc độ sinh trưởng lợn tăng nhanh gấp nhiều lần Các quan thể lợn thay đổi tăng lên nhanh chóng Hàm lượng nước giảm dần theo tuổi, vật chất khô tăng dần, thành phần hóa học thể lợn thay đổi nhanh chóng Hàm hàm lượng sắt thể lợn sinh 187 g % đến ngày thứ 20 giảm xuống 40,58 g % sau tăng dần lên 60 ngày lúc đẻ Một đặc điểm quan trọng lợn theo mẹ là: Sản lượng sữa mẹ tăng dần từ đẻ tới ngày thứ 15 Tại thời điểm sản lượng sữa cao ổn định ngày thứ 20 sau giảm dần ngày thứ 60 mức thấp Nhu cầu dinh dưỡng lợn ngày tăng, sữa mẹ sau tuần tuổi giảm rõ rệt, dẫn tới lợn thiếu dinh dưỡng thức ăn bổ sung thêm Khả miễn dịch lợn giai đoạn có đặc điểm đặc biệt Lợn đẻ máu gama - Globulin sau bú sữa có chứa hàm lượng gama - Globulin cao, hàm lượng kháng thể máu tăng lên cách nhanh chóng Sau đến tuần tuổi hàm lượng gama Globulin giảm xuống, đến tháng tăng lên, 100 ml máu có 65 mg globulin Ngoài ra, hệ vi sinh vật đường ruột lợn (microflora) hệ thống ngăn ngừa nhân tố gây bệnh xâm nhập vào đường ruột 2.2.2 Bộ máy tiêu hóa lợn phát triển nhanh chưa hoàn thiện chức Trong thời gian bú sữa trọng lượng máy tiêu hóa lợn tăng lên từ 10 lần, chiều dài ruột non tăng lên gấp lần, dung tích máy tiêu hóa tăng lên 40 50 lần, chiều dài ruột già tăng lên 40 - 50 lần Tuyến tụy 30 ngày tuổi tăng lên gấp lần, trọng lượng gan gấp lần so với sơ sinh Lúc đầu dày nặng gam chứa 35 - 50 gam sữa, sau tuần tăng gấp lần 60 ngày tuổi nặng 150 gam chứa 700 - 1000 gam sữa Khả tiêu hóa lợn hạn chế Theo A.V Kavasnhixki dịch vị lợn tháng tuổi hoàn toàn a xít HCl dạng tự do, lượng a-xít tiết nhanh chóng liên kết với niêm dịch Ngoài thiếu HCl tự có giảm axít dịch vị thức ăn liền với HCl làm cho hàm lượng HCl tự hoàn toàn dày lợn bú sữa Vì thiếu HCl tự dày nên hệ vi sinh vật dễ lên men gây nên tượng ỉa chảy lợn Trong dịch tụy lợn lớn có tới 15 men để tiêu hóa chất song lợn có men Kimozin Lipaza sau tuần tuổi lợn có thêm số men Tripxin Amilase, hoạt tính men tăng dần theo tuổi, từ 28 ngày men Tripxin tăng gấp 20 lần, Amilasa gấp 30 lần, men Protease, Amilase, Elastase, Carbuaxipolypeptidasa, Kimotipxin tăng dần theo tuổi lợn Hàm lượng vật chất khô dịch tụy tăng dần lên theo tuổi lợn Dịch ruột tuyến Bruner Liberkun tiết chứa đầy đủ men tiêu hóa lợn chưa có men Lactose, men tiêu hóa khác có hàm lượng thấp không đủ khả để tiêu hóa thức ăn nhân tạo Dịch mật lợn tuần tuổi đầu hạn chế, khả nhũ tương hóa mỡ lợn chưa có Khả tiêu hóa chất dinh dưỡng lợn con: Lợn tuần tuổi đầu có khả tiêu hóa cazein, đường, lipid sữa, chất khác từ thức ăn nhân tạo chưa có Qua nghiên cứu thấy khả tiêu hóa lợn ngày tăng rõ rệt Khi có khả hoạt động men dịch tụy mà điều định HCL tự hóa men Pepsinogen để tiêu hóa Protít 2.2.3 Khả điều hòa thân nhiệt Cơ thể lợn thường sinh nhiệt năng, nhiệt thải môi trường xung quanh, ngược lại thay đổi nhiệt độ môi trường lại ảnh hưởng trực tiếp gián tiếp tới sinh nhiệt tỏa nhiệt thể, tượng gọi trao đổi nhiệt thể lợn với môi trường Lợn lúc sinh có khả điều hòa thân nhiệt kém, nhiệt độ ngoại cảnh 55 - 75° F thân nhiệt lợn bị giảm từ 3-12 0F sau sau thân nhiệt chúng trở lại bình thường Nếu nhiệt độ môi trường < 55°F sau ngày lợn điều hòa thân nhiệt chúng trở lại bình thường, nhiệt độ môi trường giảm xuống 25°F sau 10 ngày thân nhiệt lợn trở lại bình thường Qua thí nghiệm Newland (1969) cho thấy nhiệt độ khác sinh trưởng lợn khác Khi ông tiến hành nuôi lợn nhiệt độ khác (11,18 28°C), nhiệt độ 28°C lợn có khả sinh trưởng nhanh nhiệt độ 11°C lợn có khả sinh trưởng chậm Nhiệt độ cao hay thấp ảnh hưởng tới trình điều tiết thân nhiệt lợn Nhiệt độ bên có ảnh hưởng trực tiếp đến tỏa nhiệt tốc độ sinh trưởng lợn Nhiệt độ coi tiêu ảnh hưởng lớn đến đặc điểm, chức quan điều tiết nhiệt lợn Nếu nhiệt độ thấp lợn nhiều nhiệt dẫn tới chết Vậy, tuần lễ đầu thân nhiệt lợn hoàn toàn phụ thuộc vào nhiệt độ môi trường Ở hai ngày đầu nhiệt độ từ - 6°C lợn chết lạnh nhiệt Sau tuần tuổi, khả điều hòa thân nhiệt lợn ổn định để đáp ứng với môi trường bình thường bên Do lợn có khả điều hòa thân nhiệt nên thể dễ bị lạnh phát sinh bệnh tật, bệnh ỉa phân trắng Thân nhiệt lợn sau đẻ khoảng 38°C, sau 10 tăng lên 39,5 đến 39,7°C va giữ mức Trong thời gian thân nhiệt lợn biến động 1°C Độ ẩm yếu tố có ảnh hưởng trực tiếp tới khả điều hòa thân nhiệt lợn Nếu độ ẩm cao lợn dễ bị nhiệt bị cảm lạnh Độ ẩm thích hợp cho lợn nước ta 65 - 70% (Theo Tomer 69,8%) Các kết nghiên cứu nước nước cho thấy khả chịu đựng va thích nghi lợn môi trường bên thấp, làm cho khả sinh trưởng phát triển lợn bị hạn chế dễ nhiễm bệnh dẫn đến tỷ lệ nuôi sống thấp Trong chăn nuôi, thường sử dụng số biện pháp kỹ thuật để hạn chế tác động yếu tố nói lợn con, nhằm nâng cao hiệu chăn nuôi điều hòa nhiệt độ ẩm độ tiểu khí hậu chuồng nuôi cho thích hợp với lợn 2.3 Vài nét giải phẫu dày ruột lợn 2.3.1 Giải phẫu dày lợn Dạ dày lợn nằm phái bên trái xoang bụng Đường cong lớn tựa lên mõm kiếm xương ức, thượng vị hướng bên trái vòng cung sườn, hạ vị hướng bên phải vùng cung sườn Dạ dày lợn thuộc loại dày đơn hỗn hợp Khu vực không tuyến bao quanh lỗ thượng vị, có manh nang hay gọi túi mù gần thượng vị dày Niêm mạc vùng có tuyến chia làm vùng: Vùng tuyến thượng vị gồm có túi mù gần ½ dày tuyến thượng vị Vùng niêm mạc mỏng; Vùng tuyến thân vị (tuyến đáy) chiếm đại phận đường cong lớn, niêm mạc tương đối dày có màu đỏ Vùng tuyến hạ vị niêm mạc có màu vàng xám 2.3.2 Giải phẫu ruột lợn * Ruột non Phần đầu ruột non gọi tá tràng, phần ruột xoang bụng trạng thái cố định, có dây chằng giữ chặt nối với gan dày với thành sau xoang thể Phần lại ruột non gắn vào thành sau xoang thể nhờ màng treo thể chuyển động tự Thần kinh mạch máu từ thành thể vào ruột theo mảng treo ruột Trong tá tràng có hai chất dịch quan trọng để tiêu hóa thức ăn: mặt từ gan dịch tụy từ tuyến tụy Ngoài thành ruột có tuyến ruột nhỏ tiết dịch tràng chứa nhiều men Ba thứ dịch ruột non hòa lẫn vào thực trình tiêu hóa miệng dày Cấu tạo: - Niêm mạc ruột non có nhiều nếp gấp, vòng hướng theo nhiều chiều, nếp gấp làm diện tích niêm mạc tăng gấp 2-3 lần Niêm mạc có phần kéo dài lồi lên lông gọi lông nhung Biểu mô phủ lên niêm mạc biểu mô đơn trụ, có nhiều riềm hút Mỗi tế bào có khoảng 3000 vi nhung để tăng diện tích hấp thu lên Ở niêm mạc ruột non có lỗ đổ tuyến ruột (thường gọi tuyến lieberkuhn) Riêng tá tràng tuyến ruột có tuyến tá tràng (thường gọi tuyến brunner) - Cơ: Gồm hai lớp trơn, vòng dọc - Tương mạc lớp áo tạng phúc mạc phủ lên * Ruột già Ruột già hình thành từ đoạn saucuar ống tiêu hóa So với động vật có xương sống khác động vật có vú ruột già phát triển đặc biệt đường kính độ dài Tiêu hóa ruột già chủ yếu hấp thu nước, phần lại thành phân Ngoài ruột già lên sinh axits béo thấp hấp thụ khí CO 2, CH4, H2S… ruột già nhiều loại vi khuẩn tổng hợp vitamin B, K… Cấu tạo: So sánh với ruột non ruột già có đặc điểm cấu tạo tổ chức học sau: - Tuyến ruột tế bào tiết dịch (paneth) - Lông nhung có thời kỳ phôi thai, thời kỳ trưởng thành - Có nhiều nang kín lâm ba không tập trung thành mảng paye (Payer) - Áo cơ: hai lớp vòng trong, dọc lớp dọc tập trung thành băng trơn chạy theo chiều dọc, tương đối dày, chỗ khác lại số sợi rải rác Lớp vòng thường thắt lại đoạn - Các mạch quản thần kinh đơn giản, ruột già lông nhung, tuyến ruột thẳng 2.4 Một số nguyên nhân gây tiêu chảy gia súc Hội chứng tiêu chảy thường gặp gia súc, gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi (80-90%) Về bệnh nguyên ỉa chảy phức tạp Trong lịch sử nghiên cứu bệnh tiêu chảy, nhiều tác giả dày công tìm hiểu nguyên nhân gây bệnh tiêu chảy Tuy nhiên, tiêu chảy tượng bệnh lý, có liên quan đến nhiều yếu tố, có yếu tố nguyên nhân nguyên phát, có yếu tố nguyên nhân thứ phát Vì vậy, phân biệt thật rạch ròi nguyên nhân gây tiêu chảy không đơn giản Ngày nay, người ta thống rằng, phân loại có nghĩa tương đối, nêu lên yếu tố chính, xuất đầu tiên; yếu tố phụ xuất sau, từ vạch phác đồ phòng bệnh trị bệnh cho có hiệu mà Nhìn chung, hội chứng ỉa chảy gia súc thường xảy nguyên nhân chủ yếu sau: 2.4.1 Điều kiện bất lợi ngoại cảnh Điều kiện khí hậu thay đổi đột ngột, nóng, lạnh, mưa gió, ẩm ướt, kết hợp với chuồng trại không hợp vệ sinh, điều kiện nuôi nhốt, vận chuyển gia súc chật trộị,… yếu tố Stress ảnh hưởng trực tiếp tới thể gia Hồ Văn Nam, Nguyễn Thị Đào Nguyên, Phạm Ngọc Thạch (1997)[7] cho biết: Khi gia súc bị nhiễm lạnh, ẩm kéo dài làm giảm phản ứng miễn dịch, giảm tác dụng thực bào, gia súc dễ bị nhiễm khuẩn gây bệnh 2.4.2 Chế độ nuôi dưỡng không kỹ thuật Thức ăn chất lượng, ôi thiu, khó tiêu,…là nguyên nhân gây ỉa chảy gia súc Thức ăn thiếu chất khoáng, vitamin cần thiết cho thể, đồng thời phương thức chăn nuôi không phù hợp làm giảm sức đề kháng thể gia súc tạo hội cho vi khuẩn đường tiêu hóa phát triển gây bệnh Hồ Văn Nam, Nguyễn Thị Đào Nguyên, Phạm Ngọc Thạch (1997)[7] 2.4.3 Nguyên nhân ký sinh trùng Ký sinh trùng đường tiêu hoá nguyên nhân gây ỉa chảy gia súc Tác hại chúng không cướp chất dinh dưỡng vật chủ mà tác 10 mửa, sữa, gầy sút Lợn nái khô triệu chứng rõ nét Theo Đoàn Anh Tuấn (2012)[10], dấu hiệu lâm sàng PED gồm: Bệnh phát trại cách nhanh chóng, từ xâm nhập đến Khi có triệu chứng xuất khoảng 18 – 24 Bệnh lây lan nhanh chóng đến tất đàn lợn trại với triệu chứng điển hình tiêu chảy Lây lan chủ yếu từ phương tiện vận chuyển, đặc biệt xe người vào bắt lợn, mua lợn Đối với lợn theo mẹ bệnh nặng lợn tuần tuổi Tỷ lệ mắc 100% Lợn bị tiêu chảy nặng, lười bú, lợn gầy nước Lợn nôn sữa Lợn nằm thành đống chồng nên thích nằm nên bụng mẹ (triệu chứng điển hình) Ruột xuất huyết nặng Ói, phân lỏng vàng trắng xanh, nước nhanh Đối với nhóm lợn khác tỷ lệ bệnh thấp hơn, lợn có biểu lờ đờ, bỏ ăn, tiêu chảy phân nước 2.6.9 Bệnh tích - Lợn chết nước, dày chứa cục sữa chưa tiêu, ruột non chứa đầy dịch màu vàng lẫn bọt thành ruột mỏng, suốt, lông nhung mao bị ăn mòn toàn - Thành ruột non mỏng nhạt màu, tổn thương cấu trúc hấp thu (nhung mao ruột) - Bệnh tích vi thể Tổn thương đặc trưng vi nhung không tràng hồi tràng bị thoái hóa nên độ dài giảm rõ rệt Ở lợn tuần tuổi gây bệnh thực nghiệm thấy tượng loét nhỏ vòm biểu mô khắp màng payer, đặc biệt phần ruột non 2.6.10 Chẩn đoán Cần chẩn đoán xác để xác định việc điều chỉnh chăm sóc đàn bị nhiễm bệnh Lâm sàng dịch tễ có giá trị chẩn đoán định hướng bệnh Thu thập bảo quản tốt bệnh phẩm để xét nghiệm vi thể cần thiết cho chẩn đoán Dựa vào triệu chứng điển hình bệnh Tiêu chảy lây nhanh đàn giống, lợn choai lợn sơ sinh đặc trưng bệnh PED Đặc biệt tiêu chảy nặng lợn từ 1-2 tuần tuổi tỷ lệ chết cao tuổi Hoại tử bất dưỡng nhung mao ruột đặc biệt vùng ruột non kết tràng 22 Chẩn đoán phân biệt: Dựa vào triệu chứng: Lợn tiêu chảy với tỷ lệ chết cao, lợn thích nằm bụng mẹ, điều trị loại kháng sinh kết quả, tỷ lệ chết lợn ngày tuổi lên đến 100% Mổ khám thấy ruột xuất huyết nặng Mổ khám thấy dày lợn có sữa bị đóng vón Không tràng hồi tràng mỏng, nhìn thấy chất chứa bên ruột Chẩn đoán phòng thí nghiệm: - Chẩn đoán virus học + Phân lập virus môi trường tế bào thận lợn tế bào tuyến ức, xác định virus miễn dịch huỳnh quang, phản ứng trung hòa với kháng thể đặc hiệu + Phát virus từ tế bào biểu mô ruột non lợn mắc bệnh phương pháp nhuộm kháng thể huỳnh quang, nhuộm kháng thể peroxidase, ELISA, RT-PCR - Chẩn đoán huyết học + ELISA + Phản ứng trung hòa virus + Phản ứng kết hợp bổ thể +Phản ứng miễn dịch peroxidase gián tiếp Có thể dùng kỹ thuật phòng thí nghiệm để: - Phân lập xác định virus Phân lập virus tế bào nuôi: với mục đích này, dùng biểu mô ruột non lợn mắc bệnh - Sử dụng phương pháp ELISA phát kháng nguyên Virus mẫu phân, phương pháp RT-PCR từ mẫu phân tế bào nhiễm - Phát kháng thể kháng virus - Phát kháng nguyên virus (IF, ELISA kính hiển vi điện tử) Tiêu cắt lạnh nạo niêm mạc ruột ruột hồi - Sử dụng kiểm tra nhanh để phát có mặt vi rút phân lợn tiêu chảy lấy mẫu ruột có bệnh tích kiểm tra mô bệnh học 2.6.11 Miễn dịch PED Một phương pháp dùng hiệu rộng rãi để chống lại bệnh virus miễn dịch, cố gắng đáng kể nhà nghiên cứu, trường Đại học Công nghiệp thuốc đến 23 chưa có vaccine an toàn hiệu lực hoàn toàn với bệnh PED Miễn dịch PED bệnh đường ruột khác vấn đề phức tạp chưa hiểu biết rõ ràng Vấn đề miễn dịch PED tóm tắt sau: Lợn cần có miễn dịch ngày đầu sinh Một mẹ bị nhiễm bệnh tự nhiên, cung cấp miễn dịch cho đàn qua sữa đầu sữa mẹ Đàn bú miễn dịch Nếu chúng ngừng bú lý chúng trở nên mẫn cảm vài sức miễn dịch chúng phụ thuộc vào có mặt kháng thể có sữa ruột Theo Center for Food Security & Public Health (2012)[15] có vaccine PED phép lưu hành để dùng cho lợn nái chửa tạo bảo hộ cho đàn bú Trong số vaccine có loại vaccine vô hoạt loại vaccine nhược độc vaccine P-5V Nisseiken PED Live Vaccine Nhật Bản sử dụng lần vào lúc tuần tuần trước đẻ Có thể cho uống, tiêm bắp, tiêm vào tuyến vú kết hợp cách Các vaccin tạo bảo hộ có giới hạn chống bệnh tiêu chảy, song vài tình có khuynh hướng làm giảm số chết, đặc biệt đàn bị dịch PED Giải pháp thực tế phát triển loại vaccine an toàn, kích thích kháng thể sữa lợn mẹ nhiễm bệnh tự nhiên Các vaccine tạo mức độ kháng thể cao sữa đầu, 1-3 ngày sau đẻ sau sữa có mức kháng thể thấp Các lợn lợn nái tiêm vaccine truyền bảo hộ chống PED bú sữa đầu, song vài ngày sau sinh chúng trở nên mẫn cảm hết sữa đầu Có thể tạo miễn dịch chắn cách cấy bệnh cho lợn nái với chủng virus PED độc tính địa Bằng cách cho lợn nái ăn lượng ruột non lợn nhiễm bệnh cấp tính Con mẹ có khả bảo hộ phần lớn đàn bú chống lại PED virus Tuy nhiên, phương pháp mạo hiểm, lan truyền sang đàn khác vùng bắt đầu dịch bệnh PED đàn 2.6.12 Phòng bệnh * Phòng bệnh PED nên tập trung vào số vấn đề sau: Vệ sinh phòng bệnh: việc vệ sinh khu vực chăn nuôi yếu tố quan trọng việc ngăn ngừa diệt trừ mầm bệnh Khi có triệu chứng nghi ngờ phải cách cách ly triệt để lợn bệnh Sát trùng liên tục 24 khu vực nuôi thuốc sát trùng Navetkon-S, dung dịch Benkocid chuồng trại, BKA chuồng trại Hạn chế khách tham quan, riêng người bắt buột vào trại phải sử dụng đồ bảo hộ Bằng cách nhằm hạn chế mầm bệnh lây lan khu vực nuôi, đặc biệt áp dụng biện pháp an toàn sinh học Tăng cường công tác vệ sinh, giữ cho mầm bệnh gia súc không tiếp xúc với - Lợn nái đẻ 10 ngày hay tuần sau bắt đầu ổ dịch cần chuyển sang khu vực khác để làm giảm khả lợn bị nhiễm bệnh - Hiện người ta gây nhiễm cho lợn mang thai virus sống có trại Để làm việc ta dùng lợn tuần tuổi nhỏ mắc bệnh: mổ lấy toàn ruột dùng làm chế phẩm ruột cho lợn nái mang thai tới 14 tuần ăn để tạo miễn dịch chủ động cho lợn nái, phần dư cho vào hộp kín bảo quản tủ đông (tốt -200C) Cho toàn đàn nái trại ăn chế phẩm Cụ thể sau: - Lấy ruột (toàn ruột non ruột già) lợn bị bệnh PED xay băm nhuyễn - Cho vào 200ml dung dịch nước muối sinh lý 0,85% Dung dịch phải để môi trường 2-80C - Dùng Amoxicillin - Colistin 10% liều 300 ppm (tương đương 0,6g/200ml dung dịch nước muối sinh lý 0.85%) Trộn lại với lắc Cách cho ăn chế phẩm ruột non: cho lợn nái hậu bị, nái cai sữa nái mang thai tới 14 tuần ăn chế phẩm ruột non Lưu ý: Không cho lợn nái mang thai 15 tuần nái nuôi ăn lợn nái truyền bệnh cho lợn Một ruột chia cho 20 nái ăn, sau lợn nái ăn có biểu tiêu chảy nhẹ Nếu lợn nái ăn chế phẩm ruột chưa có biểu tiêu chảy cho lợn ăn tiếp với liều lượng tăng dần nái tiêu chảy Khi cho lợn nái ăn chế phẩm ruột, nên tiêm kháng sinh Dynamutilin 20% Ampisur cho nái phòng vi khuẩn kế phát như: Clostridium, Salmonella, Ileitis, hồng lỵ Miễn dịch có sau lợn nái có biểu tiêu chảy – tuần Nái mang thai cho ăn chế phẩm ruột sau sinh truyền kháng thể cho lợn qua sữa đầu lợn có khả miễn dịch bệnh Tuy nhiên, phương pháp làm cho lợn nái trở 25 thành vật mang trùng liên tục thải virus bên môi trường gây nhiễm bệnh cho lợn khác - Phòng bệnh vaccine: tiêm vaccine phòng bệnh PED cho lợn nái lần tuần tuần trước nái đẻ đồng thời cho lợn bú sữa đầu để kháng thể từ lợn mẹ - Lợn nhập phải cách ly theo dõi từ 2-4 tuần đưa vào trại Ngăn lây truyền giới động vật mang trùng truyền bệnh Phân lợn bệnh, giày, dép, quần áo, thức ăn nhiễm bẩn nguyên nhân truyền bệnh Người vào trại tham quan phải giày, ủng trại cung cấp Loại thải lợn mẫn cảm, không liên tiếp nhập lợn vào trại, chia nhỏ đàn nái đẻ nuôi để làm tốt công việc nhập xuất 2.6.13 Điều trị Không có thuốc điều trị đặc hiệu, biện pháp tăng cường sức đề kháng, cung cấp nước, chất điện giải đầy đủ, giữ ấm chuồng nái đẻ, cai sữa lợn lớn bắt đầu tập ăn để giảm tử số Việc kiểm soát vệ sinh chữa trị triệu chứng lợn trưởng thành giới hạn thiệt hại - Tăng nhiệt độ chuồng lên 33 – 36 oC để giữ ấm cho lợn - Cấp nước cho lợn bệnh cách pha nước cho uống tự dung dịch điện giải (O.R.S, ELECTROLYTE) - Cấp nhiều men tiêu hóa chế phẩm vi sinh để sớm phục hồi tế bào ruột chức ruột (GAVALACTYL) - Trường hợp lợn nhỏ suy nhược nặng tiêm xoang bụng dung dịch GLUCOSE 5% Có thể dùng Interferon alpha (NAVET-INTERFERON) chất tăng cường tác dụng hệ miễn dịch không đặc hiệu để phòng trị bệnh Đồng thời tích cực cung cấp loại nước có chất điện giải VITAELECTROLYTES, cung cấp nước sinh lý mặn hay đường phúc mạc Có thể dùng kháng sinh để ngăn ngừa giảm bệnh thứ phát Lợn ngày tuổi: cho uống kháng sinh Amoxycillin - Colistin, tiêm kháng sinh Ampisur, Apramycin để phòng vi khuẩn kế phát như: Salmonella, 26 Clostridium, E.coli Pha Glucose 5% Electrolyte cho lợn uống để chống nước tiêu chảy Nếu đến lúc lợn cai sữa có trọng lượng nhỏ 4,5kg nên loại thải lợn thải vi rút môi trường gây bệnh cho lợn khác - Có thể thêm kháng sinh để đề phòng phụ nhiễm bệnh đường ruột khác (DIMEFLOX 120, VIÊM RUỘT 130…) 2.7 Máu rối loạn máu trường hợp bệnh lý 2.7.1 Chức máu Máu gương phản ánh tình trạng dinh dưỡng sức khoẻ thể, xét nghiệm máu xét nghiệm dùng để đánh giá tình trạng sức khoẻ giúp cho việc chẩn đoán bệnh Máu có chức sinh lý sau: Chức hô hấp: Máu vận chuyển oxy từ phổi đến mô bào vận chuyển khí carbonic lừ mô bào phổi để thải Chức dinh dưỡng: Máu vận chuyển chất dinh dưỡng hấp thu từ ống tiêu hóa đến tận mô bào, tổ chức để nuôi dưỡng, cung cấp lượng nguyên liệu cho trình sinh tổng hợp tế bào Chức tiết: Máu nhận s ản phẩm cuối trao đổi chất mô bào, tổ chức khí CO2, urê, acid uric vận chuyển đến phổi, thận, da để đào thải Chức điều hòa thân nhiệt: Máu đảm bảo nhiệt lượng thể, đồng thời nhờ hệ thống tuần hoàn máu, nhiệt lượng vận chuyển từ thể hay ngược lại có tác dụng điều hòa nhiệt Khi gặp lạnh mạch máu da co lại dồn máu vào giữ ấm cho thể Khi trời nóng mạch máu da dãn ra, máu từ dồn đem nhiệt thải bớt Chức điều hòa trì cân nội môi: Các số như: cân nước, độ pa, áp suất thẩm thấu, tỷ lệ chất điện giải ổn định chế hấp thu chế đệm máu để đị nh nội môi Chức điều hòa thể dịch: Máu mang hormone chất dinh dưỡng sinh từ quan đến quan khác góp phần vào điều hòa trao đổi chất, sinh trưởng phát triển, điều hòa trình sinh lý thống toàn thể Chức bảo vệ thể: Trong máu có loại kháng thể loại bạch cầu 27 có khả ngăn cản, tiêu diệt vi khuẩn mầm bệnh xâm nhập vào thể 2.7.2 Rối loạn máu trường hợp bệnh lý 2.7.2.1 Sự thay đổi khối lượng máu Trong trường hợp bệnh lý khối lượng máu tăng giảm ♦ Khối lượng máu tăng: Khối lượng máu tăng toàn trường hợp thiếu máu lao động nặng, máu từ quan dự trữ đổ vào vòng tuần hoàn Những trường hợp đơn giản, sau thời gian ngắn thể điều chỉnh trở lại bình thường Tăng khối lượng máu tăng hồng cầu thường gặp động vật mắc bệnh tim, phổi, động vật vùng núi cao… Cơ thể trạng thái bệnh lý thiếu oxy cho tổ chức, kích thích quan tạo máu sản xuật hồng cầu đưa vào vùng tuần hoàn Số lượng hồng cầu tăng gấp hai lần bình thường Trong thực nghiệm, làm hồng cầu tăng 100-150% thấy có biểu giãn mạch, tăng tính thấm thành mạch làm cho máu cô đặc khó lưu thông, cản trở hoạt động tim Tăng khối lượng máu tăng huyết tương thường xảy gia súc mắc bệnh thận, thiếu máu, máu, gầy đói lâu ngày,… bệnh biểu triệu chứng máu loãng, thành phần hữu hình ít, không tăng khối lượng chung máu ♦ Khối lượng máu giảm: Máu giảm toàn khối lượng trường hợp máu (xuất huyết) Nếu lượng máu chế tự điều chỉnh thể, nước hút vào lòng mạch để hồi phục tương đối (nghĩa giữ áp lực vừa đủ để phục hồi tuần hoàn) Trong trường hợp lượng máu lớn từ 60-70%, vật không phục hồi chết Giảm khối lượng máu chủ yếu giảm số lượng hồng cầu Trường hợp hay gặp trường hợp thiếu máu mãn tính (bần huyết) trạng thái bệnh lý vi khuẩn hay ký sinh trùng gây Giảm khối lượng máu giảm khối lượng huyết tương Trường hợp hay gặp trường hợp bệnh lý nước ỉa chảy, nôn mửa, bỏng nặng, ngộ độc (asen, thủy ngân),… Khi giãn mạch đột ngột kích thích gây co thắt nơi khác làm tổn thương thành mạch, tăng tính thấm thành mạch, nước thoát lòng mạch (Tạ Thị Vịnh, 1991) 2.7.2.2.Rối loạn hồng cầu bạch cầu 28 * Rối loạn số lượng hồng cầu Chứng tăng hồng cầu: tượng hồng cầu tăng lên đơn vị khối lượng máu thiếu oxy tổ chức (khi thiếu oxy, tủy xương bị kích thích mạnh gây tăng sinh hồng cầu, thường gặp nhiều bệnh tim mạch, phổi trường hợp ngộ độc) thần kinh bị kích thích vào trung não Chứng giảm hồng cầu: Thường thiếu máu dẫn đến giảm hồng cầu * Rối loạn tạo bạch cầu Rối loạn số lượng bạch cầu - Tăng bạch cầu: Tức số lượng bạch cầu tăng lên đơn vị thể tích máu Hiện tượng có giá trị lớn chẩn đoán Tăng bạch cầu trung tính thường gặp điều kiện sinh lý (sau bữa ăn, sau lao động, có thai, có thay đổi khí hậu,…), điều kiện bệnh lý (thiếu oxy, nhiễm khuẩn, sau chảy máu, khối u ác tính,…) Ngoài số lượng bạch cầu còn tăng tiêm vaccine, tiêm protein, tiêm hormon vỏ thượng thận,… Tăng bạch cầu toan tính gặp trường hợp dị ứng, nhiễm ký sinh trùng, tăng sinh tủy xương, sau nhiễm xạ,… Tăng bạch cầu kiềm tính: Chủ yếu gặp trường hợp bệnh bạch cầu ác tính - Giảm bạch cầu: Là tượng số lượng bạch cầu đơn vị thể tích giảm xuống mức bình thường Hiện tượng giảm bạch cầu có theerlaf giảm toàn hay giảm riêng phần, thường bị ngộ độc, bạch cầu kết dính hàng loạt Trong bệnh viêm phổi, ngộ độc, phóng xạ,… thấy bạch cầu giảm Bạch cầu trung tính giảm chủ yếu tủy xương bị ức chế độc tố vi khuẩn Khi thiếu hẳn bạch cầu đa nhân trung tính gây tượng loét hoại tử da, niêm mạc xâm nhập vi khuẩn mà thể hàng rào bảo vệ Giảm bạch cầu toan tính trường hợp stress, nhiễm trùng giảm chung với bạch cầu có hạt Giảm bạch cầu kiềm tính gặp bệnh cường tuyến giáp, sử dụng heparin kéo dài (Tạ Thị Vịnh, 1991)[11] NỘI DUNG, ĐỊA ĐIỂM, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Nội dung nghiên cứu Nhằm thực mục tiêu đề tài, tiến hành nghiên cứu nội dung: 29 3.1.1 Điều tra tình hình dịch tiêu chảy cấp đàn lợn Thanh Hóa - Theo độ tuổi - Theo mùa vụ - Theo phương thức chăn nuôi - Nghiên cứu mối liên hệ tình hình bệnh kết tiêm phòng bệnh truyền nhiễm thường gặp lợn (con nái) địa điểm nghiên cứu - Chẩn đoán, phân lập giải trình tự gen virus PED - Phân lập vi khuẩn bội nhiễm 3.1.2 Đặc điểm bệnh lý lợn mắc bệnh PED - Theo dõi biểu lâm sàng lợn mắc PED - Theo dõi biến động về: Thân nhiệt, tần số hô hấp, tần số tim mạch - Theo dõi biến động số tiêu sinh lý máu: + Số lượng hồng cầu + Hàm lượng Hemoglobin + Tỷ khối hồng cầu + Nồng độ Hemoglobin trung bình hồng cầu + Lượng Hemoglobin trung bình hồng cầu + Sức kháng hồng cầu + Số lượng bạch cầu + Công thức bạch cầu + Biến đổi tiểu cầu - Theo dõi biến động số tiêu sinh hoá máu: + Protein tổng số + Các tiểu phần protein + Hàm lượng đường huyết + Độ dự trữ kiềm máu + Hàm lượng Natri Kali huyết + Đánh giá chức gan: Ph¶n øng lªn b«ng – Gros, định lượng hoạt độ men sGOT sGPT huyết - Theo dõi số tiêu sắc tố mật + Bilirubin huyết 30 + Urobili nước tiểu + Sterkobilin phân - Theo dõi tổn thương bệnh lý đường tiêu hóa + Bệnh lý đại thể + Bệnh lý vi thể 3.1.3 Xây dựng thử nghiệm biện pháp phòng trị - Phòng bệnh + Vệ sinh thú y + Nâng cao sức đề kháng, khống chế bội nhiễm vi khuẩn + Sử dụng Autovacxin - Điều trị + Vai trò số kích thích phi đặc hiệu + Tác động số loại thuốc hỗ trợ điều trị + Làm kháng sinh đồ xác định thuốc điều trị vi khuẩn kế phát 3.2 Vật liệu phương pháp nghiên cứu 3.2.1 Thời gian nghiên cứu Thời gian tiến hành đề tài từ năm 2013 - 2017 3.2.2 Địa điểm nghiên cứu - Phòng thí nghiệm Trung tâm Khoa thú y - Đại học Nông nghiệp Hà Nội - Phòng thí nghiệm Bộ môn Nội chẩn - Dược lý - Độc chất, Khoa thú y - Đại học Nông nghiệp Hà Nội - Phòng thí nghiệm Bộ môn - Vi sinh vật truyền nhiễm, Khoa thú y - Đại học Nông nghiệp Hà Nội - Lợn tỉnh Thanh Hóa 3.2.3 Vật liệu nghiên cứu - Đàn lợn nuôi Thanh Hóa - Các dụng cụ, trang thiết bị hóa chất phục vụ cho việc thực đề tài 3.2.4 Phương pháp nghiên cứu Nhằm đảm bảo mục tiêu đặt ra, tiến hành nghiên cứu nội dung đề tài phương pháp lâm sàng phòng thí nghiệm thường quy: 3.2.4.1 Phương pháp điều tra tình hình dịch bệnh - Lập phiếu theo dõi tình hình mắc PED toàn đàn lợn diện theo dõi đơn vị Cập nhật số liệu theo dõi hàng ngày 31 - Lập sổ theo dõi biểu lâm sàng ca bệnh (30 con): Nhiệt độ, hô hấp, nhịp tim trạng thái phân 3.2.4.2 Chẩn đoán xác định lợn mắc bệnh PED - Căn vào kết chẩn đoán dương tính với virus PED phương pháp PCR, ELISA Phòng thí nghiệm Trung tâm Khoa thú y - Dựa vào phương pháp chẩn đoán lâm sàng thường quy 3.2.4.3 Các tiêu sinh lý triệu chứng lâm sàng xác định phương pháp khám lâm sàng thường quy: - Xác định tần số hô hấp thông qua việc quan sát hoạt động thành ngực, thành bụng dùng ống nghe đếm trực tiếp số lần hoạt động phổi - Xác định tần số tim mạch phương pháp sử dụng ống nghe nghe trực tiếp hoạt động tim - Xác định thân nhiệt lợn bệnh nhiệt kế điện tử hãng Omron model MC - 240 đo trực tiếp trực tràng vào sáng sớm 3.2.4.4 Xét nghiệm tiêu sinh lý, sinh hoá máu phương pháp thường quy máy tự động - Xét nghiệm hàm lượng đường huyết máy glucometter - Xét nghiệm lượng dự trữ kiềm phương pháp Nevodop cải tiến - Xét nghiệm tiêu sinh lý máu máy xét nghiệm 36 tiêu sinh lý, sinh hóa phòng thí nghiệm trung tâm * Lấy mẫu máu: - Lấy máu vào buổi sáng sớm lợn chưa cho ăn - Các mẫu cần bảo quản tốt nơi râm mát (2-4 0C), tránh ánh sáng, vận chuyển nhẹ nhàng cần thiết tiến hành làm thí nghiệm sớm tốt Riêng với ống nghiệm để chắt huyết cần giữ nguyên 12 - 24 để chắt nhiều huyết huyết không bị lẫn thành phần khác máu Khi thao tác xét nghiệm cần tập trung, có tác phong nhanh nhẹn, xác, có ghi chép lại đầy đủ kết thu 3.2.4.5 Phương pháp làm tiêu vi thể Mổ khám lấy miếng ruột vùng ruột bị viêm ngâm dung dịch formon 10% để làm tiêu tổ chức học vi thể 32 Cách làm tiêu bản: Ruột lợn mắc bệnh cố định dung dịch formon 10% (thể tích formon gấp 10-20 lần thể tích tổ chức ruột) - Tẩy làm trong: + Lấy bệnh phẩm khỏi dung dịch formon 10% đem rửa nước từ 12-24 (rửa vòi nước chảy nhẹ) để trôi hết formon + Khử nước: mẫu bệnh phẩm rửa nước xong thấm nhẹ giấy lọc cho vào hệ thống cồn Ethylic với thời gian sau: Cốc cồn 70 với thời gian 2-4 giờ, cốc 2,3,4 cồn 1000 với thời gian 4-6 Thời gian thay đổi tùy mẫu tổ chức to hay nhỏ + Làm trong: Lấy miếng tổ chức khỏi cồn, thấm nẹ giấy lọc cho vào hệ thống lọ Xylen, lọ Thời gian thay đổi tùy tlợn miếng tổ chức to hay nhỏ Sau qua lọ Xylen, miếng tổ chức đường phèn được, khử lại từ cồn tuyệt đối lại đưa vào dung dịch làm - Tẩm parafin gồm: Cốc 1: parafin + Xylen theo tỷ lệ 1:1 từ 2-12 37 0C, sau cho qua cốc parafin nhiệt độ 560C cốc 4-6 (Khi tẩm cần tlợn dõi nhiệt độ liên tục, nhiệt độ cao thấp miếng tổ chức bị hỏng) - Đổ Block: Chuẩn bị đầy đủ dụng cụ, khuôn giấy, parafin phải nóng chảy hoàn toàn nhiệt độ không cao ảnh hưởng đến chất lượng tiêu sau Đợi cho parafin đông đặc hoàn toàn, bóc bỏ khuôn giấy sửa lại Block cho vuông vắn - Cắt dán mảnh: Cắt miếng tổ chức máy cắt Microtom với độ dày 3mm Mảnh tổ chức cắt để tãi phẳng nhờ nước trứng lửa đèn cồn Để miếng tổ chức khô nhờ không khí sau thời gian cho vào tủ ấm 370C - Nhuộm tiêu bản: + Tẩy parafin: Cho tiêu qua lọ Xylen lọ 3-5 phút Khi cho tiêu qua Xylen phải thường xuyên nhấc lên nhấc xuống cho tan parafin xung quanh miếng tổ chức + Tẩy Xylen: Dùng cồn Ethylic, cốc dùng cồn 960 từ 3-5 phút; cốc 2,3 dùng cồn 1000 từ 3-5 phút + Nhuộm Hematoxylin: Ngâm tiêu dung dịch Hematoxylin khoảng 510 phút tùy theo chất lượng thuốc nhuộm độ dày tiêu Sau nhuộm 33 Hematoxylin phải kiểm tra, màu tiêu nhạt nhúng nhanh tiêu qua cồn Axit chlohydric Sau điều chỉnh màu rửa tiêu nước cất + Nhuộm Eosin: Cho tiêu vào Eosin khoảng 30 giây-2 phút tùy theo thực tế, màu Eosin nhạt cho vào dung dịch Eosin 1-2 giọt axit axetic Sau rửa nước cất 1-2 phút + Tẩy nước: Dùng cồn Ethylic tẩy nước tiêu Cốc dùng cồn 90 2-3 phút; cốc 2,3 dùng cồn 1000 3-5 phút + Làm trong: Cho tiêu qua cốc Xylen cốc 3-5 phút - Gắn lamen, dán nhãn đọc kết kính hiển vi 3.2.4.6 Phương pháp phân lập virus gây bệnh số vi khuẩn kế phát, xác định số đặc tính sinh học virus phân lập - Áp dụng phương pháp tiên tiến, đại như: ELISA, PCR, hóa mô miễn dịch 3.2.4.7 Biện pháp phòng trị a Phòng bệnh - Vệ sinh thú y - Nâng cao sức đề kháng, khống chế bội nhiễm vi khuẩn - Sử dụng Autovacxin: + Lấy ruột lợn ốm hòa với nước sinh lý cho lợn mẹ lợn uống + Lấy ruột lợn ốm nghiền thành bột cho lợn mẹ ăn hàng ngày b Điều trị Xây dựng phác đồ điều trị thực nghiệm nhóm đối tượng lợn cảm nhiễm mạnh bệnh Phân lô so sánh đánh giá hiệu phác đồ điều trị + Lô I : - Thuốc điều trị bội nhiễm vi khuẩn - Thuốc trợ sức, trợ lực nâng cao sức đề kháng + Lô II : - Thuốc điều trị bội nhiễm vi khuẩn - Thuốc trợ sức, trợ lực nâng cao sức đề kháng - Huyết liệu pháp (Máu tự thân máu loài) + Lô III : - Thuốc điều trị bội nhiễm vi khuẩn - Thuốc trợ sức, trợ lực nâng cao sức đề kháng - Huyết liệu pháp (Máu tự thân máu loài) 34 - Bổ sung nước điện giải + Lô IV : - Thuốc điều trị bội nhiễm vi khuẩn - Thuốc trợ sức, trợ lực nâng cao sức đề kháng - Bổ sung nước điện giải 3.2.5 Phương pháp xử lý số liệu Sử dụng phần mềm phân tích dịch tễ học Winepiscope chương trình MS Excel để tổng hợp, phân tích so sánh tiêu nghiên cứu Độ tin cậy 95% theo công thức sau:  σ  x ± z ×    n pˆ ± z × SE pˆ Trong đó: x giá trị trung bình mẫu, σ độ lệch chuẩn n số mẫu mức 1.96 áp dụng cho độ tin cậy 95% Khi đó, ta tính độ tin cậy có công thức sau: pˆ ± z × SE pˆ Trong SEPˆ = pˆ (1 − pˆ ) , sai số chuẩn pˆ tỷ lệ xác định n n độ lớn mẫu DỰ KIẾN KẾT QUẢ 4.1 Thực trạng lợn mắc bệnh PED tỉnh Thanh Hóa - Tình hình bệnh PED lợn tiêu: tỷ lệ nhiễm, tỷ lệ chết, lứa tuổi, mùa vụ mắc bệnh phương thức chăn nuôi - Mối liên hệ tình hình bệnh kết tiêm phòng bệnh truyền nhiễm thường gặp lợn (con nái) địa điểm nghiên cứu - Kết phân lập, chẩn đoán phát virus PED từ ổ lợn mắc bệnh địa 35 điểm nghiên cứu - Kết giải trình tự gen virus PED - Kết phân lập vi khuẩn bội nhiễm 4.2 Đặc điểm bệnh lý lợn mắc PED 4.2.1 Kết biểu lâm sàng Trạng thái phân, thể trạng lợn tiêu chảy, thân nhiệt, hô hấp, tim mạch 4.2.2 Kết theo dõi biến động tiêu lâm sàng Thân nhiệt, hô hấp, tim mạch 4.2.3 Kết theo dõi số tiêu sinh lý máu 4.2.4 Kết theo dõi số tiêu sinh hóa máu 4.2.5 Kết theo dõi số tiêu sắc tố mật 4.2.6 Kết theo dõi số tổn thương bệnh lý đường tiêu hóa - Bệnh tích đại thể - Bệnh tích vi thể 4.3 Kết thử nghiệm biện pháp phòng điều trị bệnh 4.3.1 Phòng bệnh Đánh giá kết phòng bệnh yếu tố tác động 4.3.2 Trị bệnh So sánh hiệu điều trị lô thí nghiệm 36 ... c im sinh lý ca ln bỳ sa Ln t lỳc s sinh n lỳc cai sa (tỏch m) cú nhiu c im sinh lý c trng v ũi hi phi cú s chm súc nuụi dng tt Nu chn nuụi, ngi chn nuụi khụng nm vng cỏc c im sinh lý ca ln s... + Bilirubin huyt 30 + Urobili nc tiu + Sterkobilin phõn - Theo dừi tn thng bnh lý ng tiờu húa + Bnh lý i th + Bnh lý vi th 3.1.3 Xõy dng th nghim bin phỏp phũng tr - Phũng bnh + V sinh thỳ y +... Dc lý - c cht, Khoa thỳ y - i hc Nụng nghip H Ni - Phũng thớ nghim B mụn - Vi sinh vt truyn nhim, Khoa thỳ y - i hc Nụng nghip H Ni - Ln ti tnh Thanh Húa 3.2.3 Vt liu nghiờn cu - n ln nuụi ti Thanh