Nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý của dịch tiêu chảy cấp trên lợn (porcine epidemic diarrhea – PED) tại tỉnh thanh hóa và giải pháp phòng trị TT

HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM HỒNG VĂN SƠN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CỦA DỊCH TIÊU CHẢY CẤP TRÊN LỢN (PORCINE EPIDEMIC DIARRHEA - PED) TẠI TỈNH THANH HĨA VÀ GIẢI PHÁP PHỊNG TRỊ Ngành: Bệnh lý học chữa bệnh vật nuôi Mã số: 9.64.01.02 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP - 2021 Cơng trình hồn thành tại: HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM Ngƣời hƣớng dẫn: PGS.TS PHẠM NGỌC THẠCH GS.TS NGUYỄN THỊ LAN Phản biện 1: PGS.TS Cù Hữu Phú Hội Thú y Phản biện 2: PGS.TS Huỳnh Thị Mỹ Lệ Học viện Nông nghiệp Việt Nam Phản biện 3: TS Phan Thị Hồng Phúc Trƣờng Đại học Nông lâm, Đại học Thái Nguyên Luận án đƣợc bảo vệ trƣớc Hội đồng đánh giá luận án cấp Học viện họp tại: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Vào hồi giờ, ngày tháng năm 2021 Có thể tìm hiểu luận án thư viện: - Thư viện Quốc gia Việt Nam - Trung tâm Thông tin - Thư viện Lương Định Của, Học viện Nơng nghiệp Việt Nam PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Thanh Hố tỉnh có ngành chăn phát triển mạnh so với nước, chăn ni lợn chiếm vai trị quan trọng sản xuất nơng nghiệp tỉnh nhanh chóng chuyển đổi thành sản xuất hàng hoá Tuy nhiên, thông tin hiểu biết dịch tiêu chảy cấp (Porcine Epidemic Diarrhea- PED) nhà quản lý người chăn ni cịn hạn chế, chưa có cơng bố thức tình hình mắc PEDV tỉnh Nhằm cung cấp thơng tin đầy đủ, xác đặc điểm dịch tễ, bệnh lý giải pháp phòng trị để nhà khoa học, nhà quản lý người chăn ni lợn có thêm sở khoa học cho việc chủ đ ng công tác phòng ng a s x m nhập virus PED lợn nước nói chung tỉnh Thanh Hố nói riêng Chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu m t số đặc điểm bệnh lý dịch tiêu chảy cấp lợn (Porcine Epidemic Diarrhea – PED) tỉnh Thanh Hóa giải pháp phịng trị” 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1.2.1 Mục tiêu chung Là cơng trình nghiên cứu có hệ thống dịch tiêu chảy cấp (PED) đàn lợn lai máu ni Thanh Hố Kết khảo sát th c trạng bệnh tất lứa tuổi lợn, mùa vụ mắc bệnh, quy mô đàn đánh giá mô tả đặc điểm bệnh lý lợn mắc bệnh PED 1.2.2 Mục tiêu cụ thể Áp dụng phương pháp điều tra dịch tễ học thường quy: vấn tr c tiếp, phát phiếu điều tra, hồi cứu tài liệu lưu trữ, dịch tễ học mô tả kết hợp với phương pháp chẩn đoán l m sàng, chẩn đoán Test kit PED Ag phản ứng RT-PCR để đánh giá tình hình mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) Xác định biến đổi bệnh lý lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) biểu l m sàng, bệnh tích (đại thể vi thể), tiêu huyết học chủ yếu bệnh PED để làm sở cho chẩn đoán Xác định m t số biện pháp phòng trị bệnh PED đạt hiệu 1.3 PHẠM VI NGHIÊN CỨU 1.3.1 Đối tƣợng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu luận án lợn lai ba máu nuôi trang trại gia trại thu c tỉnh Thanh Hoá bị mắc PED 1.3.2 Phạm vi nghiên cứu Địa điểm theo dõi lấy mẫu trang trại gia trại nuôi lợn huyện bao gồm: Hoằng Hố, Nơng Cống, Như Thanh, Tĩnh Gia, Thạch Thành Yên Định tỉnh Thanh Hoá Mẫu xử lý phân tích phịng thí nghiệm B môn N i - Chẩn – Dược – Đ c chất, khoa Thú y Phịng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học Thú y – Học viện Nông nghiệp Việt Nam Trung tâm nghiên cứu phát triển cơng nghệ vắc-xin, Cơng ty RTD Phịng thí nghiệm Chăn nuôi-Thú y, trường Đại học Hồng Đức Thời gian nghiên cứu: Thời gian nghiên cứu t tháng 9/2014 đến tháng 01/2020 Số liệu đề tài thu thập t tháng 9/2014 đến tháng 01/2020 1.4 NHỮNG ĐÓNG GÓP MỚI CỦA ĐỀ TÀI Là cơng trình nghiên cứu có hệ thống dịch tiêu chảy cấp (PED) đàn lợn lai máu nuôi Thanh Hoá Kết khảo sát th c trạng bệnh tất lứa tuổi lợn, mùa vụ mắc bệnh, quy mô đàn đánh giá mô tả đặc điểm bệnh lý lợn mắc bệnh PED 1.5 Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI 1.5.1 Ý nghĩa khoa học đề tài - Kết luận án tình hình mắc bệnh, đặc điểm bệnh lý lợn lai máu mắc PED m t số biện pháp phịng trị bệnh PED Các thơng tin có ý nghĩa quan trọng cơng tác chẩn đốn l m sàng cơng tác phịng trị bệnh - Luận án tài liệu tham khảo tốt phục vụ cho nghiên cứu khoa học PED nguồn tư liệu tham khảo phục vụ đào tạo ngành Chăn nuôi, Thú y 1.5.2 Ý nghĩa thực tiễn đề tài - ết nghiên cứu giúp Nhà quản lý chuyên môn Chăn nuôi, Thú y người chăn nuôi nắm rõ tình hình mắc bệnh PED Thanh Hoá, đồng thời hiểu biết rõ đặc điểm bệnh lý lợn mắc PED, để t giúp chẩn đốn đúng, phát sớm để có kế hoạch phòng chống giảm thiểu thiệt hại nâng cao hiệu chăn ni; - Chủ đ ng cơng tác phịng ng a s x m nhập PED lợn biện pháp xử lý dịch bệnh xảy PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 SƠ LƢỢC VỀ ĐỊA BÀN NGHIÊN CỨU Thanh Hố tỉnh có dân số đơng, diện tích r ng, địa hình phong phú, có khí hậu đa dạng phân hố mạnh theo không gian thời gian Lượng mưa lớn, nhiệt đ cao, cường đ chiếu sáng mạnh… điều kiện thuận lợi cho phát triển sản xuất Nông - Lâm - Ngư nghiệp nói chung phát triển chăn ni lợn nói riêng Chăn ni lợn Thanh Hố chiếm vai trị quan trọng sản xuất nơng nghiệp tỉnh nhanh chóng chuyển đổi thành sản xuất hàng hố UBND tỉnh Thanh Hố có sách nhằm hỗ trợ, thúc đẩy ngành chăn nuôi lợn phát triển m t cách thiết th c như: Quyết định số 1745/2011/QĐ-UBND việc hỗ trợ giống gốc vật nuôi; Quyết định số 271/2011/QĐ-UBND việc hỗ trợ phát triển chăn nuôi gia súc, gia cầm; Quyết định số 4833/2014/QĐ-UBND việc phê duyệt Quy hoạch tổng thể phát triển Nơng nghiệp tỉnh Thanh Hố đến năm 2020 định hướng đến năm 2030 Trong đó, giai đoạn 2015 - 2020 đầu tư phát triển trang trại chăn nuôi lợn ngoại quy mơ lớn, chăn ni khép kín huyện miền núi trung du với tổng quy mơ 40.000 - 50.000 lợn ngoại Đến năm 2025 có tổng đàn lợn 1.300.000 có 780.000 lợn ngoại 2.2 NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Tiêu chảy gọi ỉa chảy, tiếng Anh Diarrhea Diarrhoea, Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) định nghĩa bệnh nhân có số lần ph n lỏng nhiều ba lần ngày bệnh nhân tiêu nhiều ph n lúc khỏe mạnh Tiêu chảy m t biểu lâm sàng trình bệnh lý đặc thù đường tiêu hóa Biểu lâm sàng tùy thu c theo đặc điểm, tính chất, diễn biến, đ tuổi mắc bệnh Có dạng tiêu chảy khác tiêu chảy “thẩm thấu”, “tiết”, “viêm” 2.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ DỊCH TIÊU CHẢY CẤP TRÊN LỢN (PORCINE EPIDEMIC DIARRHEA - PED) Dịch tiêu chảy cấp phát Anh quốc vào năm 1971 (Wood EN, 1977) Năm 1976, m t số nước ch u Âu khác ghi nhận ca bệnh đặt tên “Epidemic viral diarrhea” (E D) Năm 1978 đổi tên thành PED (Porcine Epidemic Diarrhea) thức cơng nhận Bệnh ghi nhận nhiều nước Anh, Bỉ, Nhật Bản, Trung Quốc nhiều nước châu Âu Hiện bệnh phân bố khắp nơi giới (Andreas & cs., 2002) 2.4 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM CỦA VIRUS PED Virus gây bệnh PED (PED ) xếp vào chi Coronavirus, họ Coronaviridae, với TGEV, Coronavirus g y bệnh cho mèo (Feline coronavirus), Coronavirus g y bệnh cho chó (Canine coronavirus) Coronavirus 229E người (Human coronavirus) (Gonzales & cs., 2003) Hạt PEDV mang điểm đặc trưng họ Coronaviridae Theo phân loại huyết học, người ta xác định vius PED có serotype Các chủng PEDV phân lập t châu Âu, Hàn Quốc Trung Quốc tương đồng mặt huyết với với chủng CV777 phân lập t th c địa Bỉ năm 1978 (Kweon & cs., 1993) 2.5 HIỂU BIẾT VỀ DỊCH TIÊU CHẢY CẤP Ở LỢN (PED) 2.5.1 Dịch tễ học Dịch xảy lợn lứa tuổi đặc biệt lợn ngày tuổi Trong ổ dịch tỷ lệ ốm tới 100%, tỷ lệ chết 50 – 100% (Sun & cs., 2012; Nguyễn Tất Toàn & Đỗ Tiến Duy, 2013; Geiger & Connor, 2013; Ge & cs., 2013; Alvarez & cs., 2015; Ojkic & cs., 2015; Sung & cs., 2015; Yamane & cs., 2016) 2.5.2 Triệu chứng lâm sàng Các mức đ nghiêm trọng gây PEDV khác nhau, phần lớn phụ thu c vào tình trạng miễn dịch tình hình dịch bệnh trang trại lợn Khi lợn mắc PED, biểu chủ yếu lợn tiêu chảy mạnh, phân nhiều nước Lợn có tượng bỏ ăn, mệt mỏi, sốt cao Lợn theo mẹ: gầy, lười bú, ỉa chảy, phân lỏng, tanh, màu vàng, lẫn sữa không tiêu; nôn mửa, lợn sụt cân nhanh nước Lợn thích nằm lên bụng mẹ, điều trị loại kháng sinh đặc trị tiêu chảy khơng có kết 2.5.3 Bệnh tích Lợn theo mẹ chết PED, xác gầy, khơ tiêu chảy nặng, phần mơng dính nhiều phân vàng Ru t căng phồng, đầy dịch, màu vàng, chứa cục sữa chưa tiêu Thành ru t mỏng Hạch lâm ba màng treo ru t xuất huyết nhẹ Lát cắt ngang ru t non lợn bị nhiễm virus PED cho thấy lông nhung ru t non bị, đứt gãy, teo ngắn lại Pensaert & cs (1992) cho biết virus nhân lên tế bào ru t non gây thoái hoá tổn thương tế bào lông nhung (villous), làm cho tỷ lệ chiều cao lông nhung rãnh ru t (crypt) giảm xuống cịn 3:1, tỷ lệ lợn khoẻ mạnh 7:1, Gregory & cs (2013) cho biết tỷ lệ lợn 19 ngày tuổi mắc PED giảm xuống 1:1 Theo Hak- Mo & cs (2000), virus PED nhân lên tế bào biểu mô ru t, làm cho tế bào lông nhung bị đứt nát dính vào PHẦN NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu luận án bệnh PED đàn lợn lai ba máu nuôi trang trại gia trại huyện bao gồm: Hoằng Hố, Nơng Cống, Như Thanh, Tĩnh Gia, Thạch Thành Yên Định thu c tỉnh Thanh Hoá bị mắc PED 3.2 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU Địa điểm theo dõi lấy mẫu: Tại trang trại gia trại ni lợn lai ba máu tỉnh Thanh Hố Mẫu xử lý phân tích phịng thí nghiệm B môn N i - Chẩn Dược, khoa Thú y Phịng thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ sinh học Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam Trung tâm nghiên cứu phát triển công nghệ vắcxin, Công ty RTD Phịng thí nghiệm Chăn ni-Thú y, Trường Đại học Hồng Đức 3.3 THỜI GIAN NGHIÊN CỨU Thời gian nghiên cứu t tháng 9/2014 đến tháng 01/2020 3.4 TRANG THIẾT BỊ, DỤNG CỤ VÀ VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU * Vật liệu Mẫu bệnh phẩm (ph n, ru t) t lợn có triệu chứng PED dương tính với Test kit PED Ag để xét nghiệm RT-PCR xác định bệnh Mẫu máu lợn mắc PED lợn khoẻ mạnh tuần tuổi thứ để xác định tiêu huyết học Xác chết lợn mắc PED tuần tuổi thứ để mổ khám bệnh tích đại thể làm tiêu bệnh tích vi thể Ru t lợn tuần tuổi mắc PED để làm chế phẩm “Gut feedback” Lợn nái khoẻ mạnh mang thai tuần thứ 13 để thử nghiệm phương pháp phòng bệnh “Gut feedback” Máu lợn nái sau dùng thử nghiệm phương pháp phịng bệnh “Gut feedback” có biểu tiêu chảy ngày thứ 14 21 để xác định kháng thể huyết Thuốc thú y: Colistin sulfat, Atropin sulfat, Lactat ringer, Glucose 5% * Hóa chất - Formol trung tính 10%; nước cất, cồn, xylen, parafin, thuốc nhu m; heamatoxylin, eosin ; Kit tách chiết QIAamp Viral RNA Minikit (Qiagen), Primers; Hóa chất: Mơi trường dùng để bảo quản mẫu bệnh phẩm: Formol 10% Hóa chất dùng để nhu m tiêu bản: nước cất, cồn nồng đ , xylen, paraffin; - Máy móc thí nghiệm cần thiết: máy RT-PCR, ELISA, máy phân tích huyết học, máy đúc Block, khuôn đúc, máy cắt mảnh Microtom, máy ly tâm, kính hiển vi, tủ lạnh âm, tủ ấm, lam kính, la men, dao, panh, kẹp, ống nghiệm 3.5 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 3.5.1 Tình hình dịch tiêu chảy cấp lợn (PED) Thanh Hoá Xác định tình hình chăn ni lợn Thanh Hố đoạn t năm 2016 đến 2019; tỷ lệ mắc bệnh, tỷ lệ chết tỷ lệ tử vong lợn mắc PED theo vị trí địa lý; theo đối tượng lợn; theo mùa theo quy mô đàn 3.5.2 Một số đặc điểm bệnh lý lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) Thanh Hoá - Xác định triệu chứng lâm sàng lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED); - Xác định tiêu l m sàng lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED): Thân nhiệt, tần số hô hấp, tần số tim; - Xác định bệnh tích đại thể lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED); - Xác định biến đổi bệnh lý vi thể tá tràng, không tràng, hồi tràng kết tràng lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED); - Xác định m t số tiêu huyết học lợn mắc PED: số hồng cầu; số bạch cầu số sinh hóa máu 3.5.3 Thử nghiệm biện pháp phòngtrị dịch tiêu chảy cấp lợn (PED) - Phòng dịch tiêu chảy cấp lợn (PED) phương pháp “Gut feedback” Thai Swine eternary Association (2015) để phòng bệnh - Điều trị thử nghiệm lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) 3.6 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.6.1 Phƣơng pháp xác định số đặc điểm bệnh lý lợn mắc dịch tiêu chảy cấp (PED) - Chẩn đoán l m sàng phi lâm sàng (Kít PED-Ag test RT – PCR); - Khám bệnh tích đại thể theo TCVN 8402: 2010 làm tiêu vi thể theo Robert (1969) Burn (1974), cắt dán mảnh Microtom; - Các tiêu huyết học xác định máy Cell Dyn-3700 hãng Abbott), khúc xạ kế Zena 3.6.2 Thử nghiệm phòng dịch tiêu chảy cấp lợn(PED) Sử dụng phương pháp “Gut feedback” Thai Swine eternary Association (2015) để phòng bệnh xác định lượng kháng thể huyết lợn thử nghiệm phương pháp test ELISA theo ISO/IEC 17025:2005 3.6.3 Thử nghiệm phác đồ trị bệnh PED - Xác định tính mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn E coli phân lập t phân lợn mắc dịch tiêu chảy cấp; - Xây d ng phác đồ điều trị: Sử dụng thuốc (Atropin sulfat) điều trị triệu chứng (tiêu chảy, nôn); Sử dụng kháng sinh (Colistin sulfat) điều trị b i nhiễm vi khuẩn (E coli); Bổ sung nước chất điện giải (Dung dịch Glucose 5%, Lactat Ringe), sử dụng huyết liệu pháp (máu lồi) để kích thích chức phịng vệ thể (tăng bạch cầu đa nh n trung tính, tăng th c bào) nâng cao sức đề kháng tăng trình trao đổi chất 3.6.4 Phƣơng pháp xử lý số liệu - Dung lượng mẫu xác định theo Thrusfield (1997): 1,962 x Pexp (1- Pexp) n= d2 - Số liệu thô xử lý tính tốn Excel, số liệu tổng hợp xử lý chương trình thống kê T.Test Chitest Phép thử chi bình phương (χ2) sử dụng để so sánh tỷ lệ dương tính giá trị P < 0,05 coi có ý nghĩa PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 TÌNH HÌNH DỊCH TIÊU CHẢY CẤP Ở LỢN (PED) TẠI THANH HỐ 4.1.1 Tình hình chăn ni lợn Thanh Hố giai đoạn từ năm 2016 đến 2019 Để khái quát tình hình chăn ni lợn địa bàn tỉnh Thanh Hố năm gần đ y, chúng tơi tổng hợp số liệu Cục thống kê tỉnh Thanh Hoá năm 2016, 2017, 2018 2019 Kết trình bày bảng 4.1 Bảng 4.1 Tình hình chăn ni lợn Thanh Hố giai đoạn 2016 - 2019 Năm Tổng đàn Nông hộ 2016 2017 2018 2019 945.300 785.120 813.789 795.071 652.919 500.750 520.255 490.479 Tỷ lệ % 69,07 63,78 63,93 61,69 Gia trại 124.401 132.685 113.524 111.866 Tỷ lệ % 13,16 16,90 13,95 14,07 Trang trại 167.980 151.764 180.010 192.725 Tỷ lệ % 17,77 19,33 22,12 24,24 4.1.2 Tình hình mắc PED đàn lợn huyện tỉnh Thanh Hoá Kết theo dõi tình hình dịch PED đàn lợn m t số gia trại trang trại chăn nuôi huyện Thanh Hoá thể qua bảng 4.2 Bảng 4.2 Tình hình mắc PED đàn lợn số huyện tỉnh Thanh Hoá Địa điểm (huyện) Hoằng Hố Như Thanh Nơng Cống Thạch Thành Tĩnh Gia Yên Định Tổng Số lợn điều tra (con) 2.771 1.757 2.982 3.459 2.642 2.832 16.443 Trung bình Số lợn mắc (con) 398 293 414 521 426 342 2.394 Số lợn chết (con) 198 149 207 294 241 189 1.278 Tỷ lệ mắc bệnh (%) 14,36c 16,68dg 13,88b 15,06ce 16,12d 12,08a Tỷ lệ chết (%) 7,15abc 8,48abd 6,94ab 8,50d 9,12e 6,67a Tỷ lệ tử vong (%) 49,75a 50,85ab 50,00ab 56,43e 56,57e 55,26abc 14,56 7,77 53,38 Ghi chú: Các chữ biểu sai khác có ý nghĩa giá trị so sánh cột (P