Nghiên cứu định tính, định lượng triclosan và triclocarban trong kem đánh răng và nước rửa tay bằng HPLC

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ ĐỨC QUÝ MÃ SINH VIÊN: 1201505 NGHIÊN CỨU ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG TRICLOSAN VÀ TRICLOCARBAN TRONG KEM ĐÁNH RĂNG VÀ NƯỚC RỬA TAY BẰNG HPLC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2017 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ ĐỨC QUÝ MÃ SINH VIÊN: 1201505 NGHIÊN CỨU ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG TRICLOSAN VÀ TRICLOCARBAN TRONG KEM ĐÁNH RĂNG VÀ NƯỚC RỬA TAY BẰNG HPLC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: GS.TS Thái Nguyễn Hùng Thu TS Lê Thị Hường Hoa Nơi thực hiện: Khoa mỹ phẩm Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương HÀ NỘI – 2017 LỜI CẢM ƠN Lời xin cảm ơn GS.TS Thái Nguyễn Hùng Thu, TS Lê Thị Hường Hoa – hai người thầy hướng dẫn cho kỹ cần thiết trình thực khóa luận Khóa luận thực hiên Khoa Mỹ phẩm – Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương Tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới ThS Đỗ Thu Trang với giúp đỡ cán bộ, nhân viên khoa Mỹ phẩm Tôi xin cảm ơn giúp đỡ Bộ môn Hóa Phân tích – Độc chất Khoa Mỹ phẩm Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương tạo điều kiện cho hoàn thành khóa luận Tôi xin chân thành cảm ơn quan tâm Ban giám hiệu, Phòng đào tạo nhà trường thầy cô dạy dỗ suốt thời gian học tập trường Cuối xin gửi lời cảm ơn tới người thân, bạn bè động viên suốt trình học tập thời gian thực đề tài Hà Nội, tháng 05 năm 2017 Sinh viên Đỗ Đức Quý MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ TRICLOSAN 1.1.1 Đặc điểm chung 1.1.2 Ứng dụng triclosan 1.1.3 Độc tính triclosan 1.1.4 Sự đề kháng vi khuẩn với TCS kháng sinh 1.1.5 Một số nghiên cứu phân tích triclosan mỹ phẩm 1.2 TỔNG QUAN VỀ TRICLOCARBAN 1.2.1 Đặc điểm chung 1.2.2 Ứng dụng triclocarban 10 1.2.3 Độc tính triclocarban 12 1.2.4 Mối đe dọa gia tăng tình trạng kháng kháng sinh phơi nhiễm với triclocarban 14 1.2.5 Một số nghiên cứu phân tích triclocarban mỹ phẩm 15 1.3 SƠ LƯỢC VỀ PHƯƠNG PHÁP HPLC 17 1.3.1 Sắc ký lỏng hiệu cao 17 1.3.2 Cấu tạo máy HPLC 17 1.3.3 Ứng dụng HPLC 17 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT 20 2.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 20 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 21 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.5 XỬ LÝ THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 23 CHƯƠNG KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ BÀN LUẬN 24 3.1 KHẢO SÁT LỰA CHỌN CÁCH XỬ LÝ MẪU 24 3.1.1 Lựa chọn dung môi hòa tan mẫu 24 3.1.2 Cách chuẩn bị mẫu 24 3.2 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 25 3.2.1 Lựa chọn điều kiện sắc ký 25 3.2.2 Thẩm định phương pháp 27 3.2.2.1 Đánh giá độ thích hợp hệ thống 27 3.2.2.2 Độ đặc hiệu 28 3.2.2.3 Khảo sát khoảng tuyến tính 31 3.2.2.4 Đánh giá độ 33 3.2.2.5 Độ lặp lại 37 3.2.2.6 Độ xác trung gian 39 3.2.2.7 Giới hạn phát (LOD), giới hạn định lượng (LOQ) 41 3.3 Áp dụng kiểm tra mẫu kem đánh nước rửa tay thị trường 42 3.4 BÀN LUẬN 45 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT AOAC: Association of Official Analytical Chemists (Hiệp hội nhà hóa học phân tích thức) ACN: Acetonitril CSSX: Cơ sở sản xuất FDA: Food and Drug Administration (Cục Quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ) HL: Hàm lượng HPLC: Hight performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) ICH: International Conference on Harmonisation (Hội nghị hòa hợp quốc tế) LOD: Limit of Detection ( Giới hạn phát hiện) LOQ: Limit of Quantification (Giới hạn định lượng) MeOH: Methanol NSX: Nước sản xuất RSD: Độ lệch chuẩn tương đối TCC: Triclocarban TCS: Triclosan UV – VIS: tử ngoại – khả kiến DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Tính chất TCS Bảng 1.2 Một số tính chất triclocarban 10 Bảng 2.1 Các mẫu sử dụng để xác định phương pháp phân tích 20 Bảng 3.1 Độ thích hợp hệ thống sắc ký 28 Bảng 3.2 Thời gian lưu hệ số phân giải chất nghiên cứu mẫu thử khác 31 Bảng 3.3 Kết khảo sát khoảng tuyến tính triclosan 31 Bảng 3.4 Kết khảo sát khoảng tuyến tính triclocarban 33 Bảng 3.5 Kết khảo sát độ phương pháp triclosan kem đánh 34 Bảng 3.6 Kết khảo sát độ phương pháp triclocarban kem đánh 35 Bảng 3.7 Kết xác định lượng triclocarban có mẫu thử nước rửa tay Life buoy 36 Bảng 3.8 Kết khảo sát độ phương pháp triclocarban nước rửa tay 36 Bảng 3.9 Kết khảo sát độ phương pháp triclosan nước rửa tay 37 Bảng 3.10 Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp triclosan kem đánh 37 Bảng 3.11 Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp triclocarban kem đánh 38 Bảng 3.12 Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp triclosan nước rửa tay 38 Bảng 3.13 Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp triclocarban nước rửa tay 39 Bảng 3.14 Kết khảo sát độ xác trung gian phương pháp triclosan kem đánh 39 Bảng 3.15 Kết khảo sát độ xác trung gian phương pháp triclocarban kem đánh 40 Bảng 3.16 Kết khảo sát độ xác trung gian phương pháp triclosan nước rửa tay 40 Bảng 3.17 Kết khảo sát độ xác trung gian phương pháp triclocarban nước rửa tay 41 Bảng 3.18 LOD LOQ TCS TCS 41 Bảng 3.19 Kết phân tích số mẫu kem đánh nước rửa tay 44 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 3.1 Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn với hệ pha động methanol-nước 25 Hình 3.2 Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn với hệ pha động ACN-đệm phosphat ACNnước 26 Hình 3.3 Sắc ký đồ độ đặc hiệu với TCS, TCC kem đánh 29 Hình 3.4 Sắc ký đồ độ đặc hiệu với TCS, TCC mẫu nước rửa tay 30 Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn mối tương quan diên tích pic nồng độ triclosan.32 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn mối tương quan diên tích pic nồng độ triclocarban 33 Hình 3.7 Sắc ký đồ thu phân tích mẫu kem đánh 42 Hình 3.8 Sắc ký đồ thu phân tích số mẫu nước rửa tay 43 ĐẶT VẤN ĐỀ Kinh tế phát triển, chất lượng sống người dân nâng cao nên mỹ phẩm trở thành sản phẩm tiêu dùng quen thuộc Mỹ phẩm loại sản phẩm, hàng hóa có lợi nhuận cao nên khó tránh khỏi việc sản xuất, kinh doanh, buôn bán mỹ phẩm chất lượng, không an toàn lợi nhuận Do việc đảm bảo chất lượng sản phẩm mỹ phẩm cần quan tâm nhiều hơn, đặc biệt với quan quản lý Kem đánh răng, nước rửa tay hai sản phẩm thiết yếu tất hộ gia đình, sử dụng hàng ngày, việc kiểm soát độ an toàn hai chế phẩm quan trọng Triclosan (TCS) Triclocarban (TCC) hai hợp chất có đặc tính kháng khuẩn tốt, hoạt phổ rộng, số nhà sản xuất đưa hai chất vào kem đánh nước rửa tay với mục đích làm tăng tác dụng sát khuẩn chế phẩm, giúp loại bỏ đáng kể số vi khuẩn có hại thể người tiêu dùng sử dụng Dù chưa có chứng đầy đủ số nghiên cứu sử dụng hai hợp chất mà không kiểm soát nồng độ ảnh hưởng xấu tới người sử dụng gây dị ứng, gây ung thư ảnh tới cân hormon, ảnh hưởng tới chức sinh sản Để đảm bảo lợi ích cho người Việt sử dụng chế phẩm kem đánh nước rửa tay để cung cấp chứng để quan quản lý quản lý tốt nhóm hàng kem đánh nước rửa tay, thực đề tài: “Nghiên cứu định tính, định lượng triclosan triclocarban kem đánh nước rửa tay HPLC” nhằm mục tiêu sau: Xây dựng quy trình phân tích triclosan triclocarban kem đánh nước rửa tay Áp dụng phương pháp xây dựng để kiểm tra số mẫu kem đánh nước rửa tay thị trường nhằm sơ đánh giá có việc lạm dụng hai chất chế phẩm kem đánh nước rửa tay hay không -1- 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Kem đánh cao cấp Hàn Quốc 2080 Dongeui (Tinh chất thảo mộc chứa muối) Kem đánh cao cấp Xylitol Proclinic Oriental (Tinh chất Xylitol, Cam thảo) Nước rửa tay Dr Clean Hand Wash (Strewberry) lọ hộp chữ nhật 500 ml Nước rửa tay Dr Clean Hand Wash (Grape) Nước rửa tay Dr Clean Hand Wash (Apple) Nước rửa tay Dr Clean Hand Wash (Strewberry) lọ hình trụ 200 ml Nước rửa tay Aqua vera liquid hand wash (Rose) Nước rửa tay Aqua vera liquid hand wash (Deep Ocean) Nước rửa tay LifeBuoy 500 g (493ml) Hàn Quốc 20/05/2019 Hàn Quốc 88860/14/CB MP – QLD 15/12/2018 Việt Nam 11/14/CBMP – LA 25/07/2019 Việt Nam 11/14/CBMP – LA 11/14/CBMP – LA 11/14/CBMP – LA 24/07/2019 96337/14/CB MP – QLD 96337/14/CB MP – QLD 28/12/2018 Việt Nam Việt Nam Iran Iran Việt Nam 06/08/2019 11/06/2019 25/12/2018 24/04/2018 PHỤ LỤC Sắc ký đồ trình khảo sát hệ dung môi pha động độ đặc hiệu phương pháp PL2.1 Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn khảo sát độ đặc hiệu kem đánh PL2.2 Sắc ký đồ mẫu kem đánh PL2.3 Sắc ký đồ mẫu kem đánh thêm hỗn hợp chuẩn PL2.4 Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn khảo sát độ đặc hiệu nước rửa tay PL2.5 Sắc ký đồ mẫu nước rửa tay PL2.6 Sắc ký đồ mẫu nước rửa tay thêm hỗn hợp chuẩn PHỤ LỤC Sắc ký đồ LOD, LOQ phương pháp PL3.1 LOD triclocarban Report(Report Editor) Status:Temporary 4/14/2017 09:59:05 / ==== Shimadzu LCsolution Analysis Report ==== @F:\TRANG\De tai\Triclosan, Triclocarban\Thang 3.2017\27.3\LOD Triclocarban 1.1.lcd Acquired by : mypham Sample Name : Sample ID : Tray# :1 Vail # :2 Injection Volume : 20 uL Data File Name : LOD Triclocarban 1.1.lcd Method File Name : Triclosan, Triclocarban.lcm Batch File Name : Triclosan.lcb Report File Name : Default.lcr Data Acquired : 3/29/2017 2:24:20 PM Data Processed : 3/29/2017 2:54:23 PM @F:\TRANG\De tai\Triclosan, Triclocarban\Thang 3.2017\27.3\LOD Triclocarban 1.1.lcd mAU PDA Multi 0.25 0.00 10 15 20 25 PDA Multi 1/280nm 4nm PeakTable @F:\TRANG\De tai\Triclosan, Triclocarban\Thang 3.2017\27.3\LOD Triclocarban 1.1.lcd PDA Ch1 280nm 4nm F:\TRANG\De tai\Triclosan, Triclocarban\Thang 3.2017\27.3\LOD Triclocarban 1.1.lcd PHỤ LỤC Sắc ký đồ số mẫu thử kem đánh nước rửa tay PL4.1 Mẫu kem đánh không chứa TCS, TCC (K1) PL4.2 Mẫu kem đánh chứa TCS (K3) PL4.3 Mẫu nước rửa tay chứa TCS (N13) PL4.4 Mẫu nước rửa tay chứa TCC (N18) Report(Report Editor) 4/14/2017 10:58:29 / ==== Shimadzu LCsolution Analysis Report ==== Acquired by Sample Name Sample ID Tray# Vail # Injection Volume Data File Name Method File Name Batch File Name Report File Name Data Acquired Data Processed @F:\Khoa KN MP\VKN.MP.HAD.1.GF\2016\Thang 9\Trang\Triclosan\Thu 469.1.lcd : Trang : : :1 :1 : 20 uL : Thu 469.1.lcd : DL.lcm : DL.lcb : Default.lcr : 9/12/2016 4:13:11 PM : 4/14/2017 10:56:56 AM @F:\Khoa KN MP\VKN.MP.HAD.1.GF\2016\Thang 9\Trang\Triclosan\Thu 469.1.lcd mAU PDA Multi 50 25 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 PDA Multi 1/280nm 4nm PeakTable @F:\Khoa KN MP\VKN.MP.HAD.1.GF\2016\Thang 9\Trang\Triclosan\Thu 469.1.lcd PDA Ch1 280nm 4nm F:\Khoa KN MP\VKN.MP.HAD.1.GF\2016\Thang 9\Trang\Triclosan\Thu 469.1.lcd Report(Report Editor) 4/14/2017 11:00:25 / ==== Shimadzu LCsolution Analysis Report ==== Acquired by Sample Name Sample ID Tray# Vail # Injection Volume Data File Name Method File Name Batch File Name Report File Name Data Acquired Data Processed @F:\Khoa KN MP\VKN.MP.HAD.1.GF\2016\Thang 9\Trang\Triclosan\Thu 471.1.lcd : Trang : : :1 :5 : 20 uL : Thu 471.1.lcd : DL1.lcm : DL.lcb : Default.lcr : 9/12/2016 5:35:27 PM : 4/14/2017 10:58:11 AM @F:\Khoa KN MP\VKN.MP.HAD.1.GF\2016\Thang 9\Trang\Triclosan\Thu 471.1.lcd mAU PDA Multi 8.179 / Triclosan 40 30 20 10 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 PDA Multi 1/280nm 4nm PeakTable @F:\Khoa KN MP\VKN.MP.HAD.1.GF\2016\Thang 9\Trang\Triclosan\Thu 471.1.lcd PDA Ch1 280nm 4nm Peak# Name Ret Time Area Height Theoretical Plate# Tailing Factor Triclosan 8.179 493054 41498 11520.969 1.331 Total 493054 41498 F:\Khoa KN MP\VKN.MP.HAD.1.GF\2016\Thang 9\Trang\Triclosan\Thu 471.1.lcd Report(Report Editor) Status:Temporary 4/17/2017 11:05:13 / ==== Shimadzu LCsolution Analysis Report ==== Acquired by Sample Name Sample ID Tray# Vail # Injection Volume Data File Name Method File Name Batch File Name Report File Name Data Acquired Data Processed @F:\TRANG\De tai\Triclosan, Triclocarban\Thang 3.2017\14.3.2017\Thu 3.1.lcd : Trang : : :1 :4 : 20 uL : Thu 3.1.lcd : Triclosan, Triclocarban.lcm : Triclosan.lcb : Default.lcr : 3/14/2017 1:59:51 PM : 4/17/2017 11:04:58 AM @F:\TRANG\De tai\Triclosan, Triclocarban\Thang 3.2017\14.3.2017\Thu 3.1.lcd mAU 2.343 / PDA Multi 15.436 / 8.425 / 2.030 / 6.492 / 20.379 / 12.322 / Triclosan 10 0 10 15 20 25 PDA Multi 1/280nm 4nm PeakTable @F:\TRANG\De tai\Triclosan, Triclocarban\Thang 3.2017\14.3.2017\Thu 3.1.lcd PDA Ch1 280nm 4nm Peak# Name Ret Time Area Height Theoretical Plate# Tailing Factor 2.030 30757 1211 78.418 0.000 2.343 151438 12865 1353.862 0.000 6.492 18420 1711 8048.346 1.586 8.425 14806 1122 9364.563 1.606 Triclosan 12.322 93709 4828 9725.164 0.000 15.436 24514 1136 11095.582 1.261 20.379 173080 5617 10526.763 1.393 Total 506724 28491 F:\TRANG\De tai\Triclosan, Triclocarban\Thang 3.2017\14.3.2017\Thu 3.1.lcd Report(Report Editor) Status:Temporary 4/17/2017 11:06:46 / ==== Shimadzu LCsolution Analysis Report ==== @F:\TRANG\De tai\Triclosan, Triclocarban\Thang 3.2017\14.3.2017\Thu Aqua 1.1.lcd Acquired by : Trang Sample Name : Sample ID : Tray# :1 Vail # : 24 Injection Volume : 20 uL Data File Name : Thu Aqua 1.1.lcd Method File Name : Triclosan1.lcm Batch File Name : Triclosan.lcb Report File Name : Default.lcr Data Acquired : 3/14/2017 4:28:07 PM Data Processed : 3/14/2017 4:45:09 PM @F:\TRANG\De tai\Triclosan, Triclocarban\Thang 3.2017\14.3.2017\Thu Aqua 1.1.lcd mAU 2.408 / PDA Multi 40 10.538 / 10.853 / Triclocarban 30 7.550 / 2.915 / 10 2.107 / 2.270 / 20 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 PDA Multi 1/280nm 4nm PeakTable @F:\TRANG\De tai\Triclosan, Triclocarban\Thang 3.2017\14.3.2017\Thu Aqua 1.1.lcd PDA Ch1 280nm 4nm Peak# Name Ret Time Area Height Theoretical Plate# Tailing Factor 2.107 49645 2060 26.611 0.000 2.270 21882 2556 304.875 0.000 2.408 187856 46218 8795.462 2.615 2.915 11063 791 1385.922 0.000 7.550 12897 1089 9182.198 1.513 10.538 -30 -5 975995.806 0.000 Triclocarban 10.853 19938 1203 9603.838 1.373 Total 303252 53911 F:\TRANG\De tai\Triclosan, Triclocarban\Thang 3.2017\14.3.2017\Thu Aqua 1.1.lcd ... phẩm kem đánh nước rửa tay để cung cấp chứng để quan quản lý quản lý tốt nhóm hàng kem đánh nước rửa tay, thực đề tài: Nghiên cứu định tính, định lượng triclosan triclocarban kem đánh nước rửa tay. .. DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ ĐỨC QUÝ MÃ SINH VIÊN: 1201505 NGHIÊN CỨU ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG TRICLOSAN VÀ TRICLOCARBAN TRONG KEM ĐÁNH RĂNG VÀ NƯỚC RỬA TAY BẰNG HPLC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng... tay HPLC nhằm mục tiêu sau: Xây dựng quy trình phân tích triclosan triclocarban kem đánh nước rửa tay Áp dụng phương pháp xây dựng để kiểm tra số mẫu kem đánh nước rửa tay thị trường nhằm sơ đánh