Nghiên cứu định lượng acid ursolic và tác dụng tăng cường trí nhớ của cao hương nhu tía (ocimum sanctuml ) trên chuột thực nghiệm

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HÀ THỊ THẢO MSV : 1101469 NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ACID URSOLIC VÀ TÁC DỤNG TĂNG CƯỜNG TRÍ NHỚ CỦA CAO HƯƠNG NHU TÍA (OCIMUM SANCTUM L.) TRÊN CHUỘT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2016 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HÀ THỊ THẢO MSV: 1101469 NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG ACID URSOLIC VÀ TÁC DỤNG TĂNG CƯỜNG TRÍ NHỚ CỦA CAO HƯƠNG NHU TÍA (OCIMUM SANCTUM L.) TRÊN CHUỘT THỰC NGHIỆM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Lê Thị Xoan PGS.TS Vũ Văn Điền Nơi thực Khoa Dược lý-Sinh hóa -Viện Dược liệu Khoa Hóa thực vật -Viện Dược liệu HÀ NỘI - 2016 LỜI CẢM ƠN Trong thời gian nghiên cứu thực khóa luận tốt nghiệp mình, em nhận giúp đỡ nhiệt tình từ tập thể cá nhân Lời em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Lê Thị Xoan - Khoa Dược lý, sinh hóa - Viện Dược liệu người thầy, người chị nhiệt tình bảo, hướng dẫn tạo điều kiện cho em trực tiếp tham gia thực thử nghiệm dược lý Em xin gửi lời cảm ơn tới PGS.TS Vũ Văn Điền tạo điều kiện cho em tham gia làm khóa luận Viện Dược liệu hết lòng giúp đỡ, đóng góp ý kiến quý báu để em hoàn thành khóa luận Em chân thành cảm ơn giúp đỡ, bảo nhiệt tình TS Nguyễn Văn Tài, Thạc sĩ Nguyễn Thu Trang - Khoa Hóa thực vật I anh chị Khoa Dược lý, sinh hóa - Viện Dược liệu trình em thực khóa luận Viện Dược liệu Em chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, toàn thể thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội trang bị cho em kiến thức quý báu, tạo điều kiện học tập tốt cho em suốt năm học qua Cuối cùng, em xin gửi lời biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè, động viên giúp đỡ em học tập sống Mặc dù thân cố gắng lần đầu nghiên cứu khoa học thời gian thực đề tài có hạn nên khóa luận em không tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận ý kiến đóng góp thầy cô bạn Hà Nội, Ngày 05 tháng 05 năm 2016 Hà Thị Thảo MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT i DANH MỤC CÁC BẢNG ii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ iii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1.Tổng quan hương nhu tía (Ocimum sanctum L.) 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Phân bố, sinh thái 1.1.4.Thành phần hóa học 1.1.5 Tác dụng dược lý 1.1.6 Tính vị, công 12 1.1.7 Công dụng 12 1.2 Tổng quan chứng sa sút trí tuệ bệnh Alzheimer 12 1.2.1 Các khái niệm 13 1.2.2 Phân loại 14 1.2.3 Cơ chế bệnh sinh bệnh Alzheimer 15 1.2.4 Các thuốc sử dụng điều trị 16 1.2.5 Hạn chế thuốc điều trị Alzheimer 17 1.2.6 Một số mô hình nghiên cứu thuốc tác động lên nhận thức trí nhớ theo hướng điều trị Alzheimer thể SSTT 18 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.1 Nguyên liệu 21 2.1.2 Động vật thí nghiệm 21 2.1.3 Hóa chất, trang thiết bị 22 2.2 Phương pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Định lượng acid ursolic cao chiết EtOH hương nhu tía phương pháp HPLC 23 2.2.2 Đánh giá tác dụng dược lý 27 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 35 3.1 Định lượng acid ursolic cao chiết EtOH hương nhu tía 35 3.1.1 Sắc ký đồ mẫu chuẩn mẫu thử 35 3.1.2 Kết định lượng acid ursolic 36 3.2 Đánh giá tác dụng tăng cường trí nhớ cao chiết EtOH 700 hương nhu tía chuột suy giảm trí nhớ loại bỏ thùy khứu giác (OBX) 39 3.2.1 Tác dụng tăng cường trí nhớ thử nghiệm mê lộ chữ Y cải tiến 39 3.2.2 Đánh giá thay đổi kích thước não thất bên (Lateral ventrical, LV) 39 CHƯƠNG BÀN LUẬN 45 4.1 Định lượng acid ursolic cao chiết hương nhu tía phương pháp HPLC 45 4.2 Tác dụng tăng cường trí nhớ cao chiết EtOH chuột bị suy giảm trí nhớ cách loại bỏ thùy khứu giác (OBX) 46 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT AChE Enzym Acetylcholinesterase Aβ 42 Amyloid β-protein 42 Chuột OBX Chuột phẫu thuật loại bỏ thùy khứu giác HPLC High Performance Liquid Chromatography ICD-10 International Classification of Desease 10th (phân loại bệnh quốc tế lần thứ 10) DSM-IV Diagnostic and Statistical manual of Mental Disoedus (chuẩn đoán thống kê bệnh tâm thần lần IV) OBX Olfactory Bulbectomy of mice (thùy khứu giác chuột) Chuột OBX Chuột phẫu thuật loại bỏ thùy khứu giác IC50 Nồng độ ức chế 50% HN400 Lô chuột OBX xử lý với mẫu thử liều 400mg/kg HN200 Lô chuột OBX xử lý với mẫu thử liều 200mg/kg p.o Đường uống i.p Đường tiêm phúc mạc MeOH Methanol EtOH Ethanol ii DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng STT Bảng 1.1 Kết nghiên cứu hàm lượng acid ursolic Trang loài thuộc chi Ocimum L ) phía Bắc Brazil Bảng 2.1 Hóa chất sử dụng đề tài 22 Bảng 2.2 Các lô chuột tiến hành thử tác dụng dược lý 28 Bảng 2.3 Quy trình nhuộm Nissl Staining 33 Bảng 3.1 Kết phụ thuộc diện tích pic nồng độ 36 acid ursolic Bảng 3.2 Kết định lượng acid ursolic cao hương nhu 38 tía Bảng 3.3 Thời gian chuột khám phá nhánh giai đoạn 39 kiểm tra Bảng 3.4 Tỷ lệ phần trăm diện tích não thất bên lô chuột vị trí Bregma -1,70 42 iii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Tên hình STT Trang Hình 1.1 Hương nhu tía (Ocimum sanctum L.) – nguồn Khoa tài nguyên Hình 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm nghiên cứu tác dụng dược lý cao chiết EtOH hương nhu tía 27 Hình 2.2 Quy trình phẫu thuật loại bỏ thùy khứu giác (OBX) chuột 29 Hình 2.3 Sơ đồ thử nghiệm mê lộ chữ Y cải tiến chuột OBX 31 Hình 3.1 Săc ký đồ mẫu chuẩn acid ursolic 630µg/ml 35 Hình 3.2 Sắc ký đồ mẫu thử so sánh với mẫu chuẩn acid ursolic 35 Hình 3.3 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính tín hiệu đáp ứng (diện tích pic) nồng độ mẫu chuẩn acid ursolic 37 Hình 3.4 Biểu đồ so sánh tỷ lệ thời gian lô chuột khám phá 40 nhánh Y3 Hình 3.5 Xác định diện tích não thất bên lô chuột vị trí 42 Bregma -1,70 Hình 3.6 Biểu đồ cột so sánh tỷ lệ phần trăm diện tích não thất bên lô chuột vị trí Bregma -1,70 43 ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, Sa sút trí tuệ nói chung bệnh Alzheimer nói riêng mối quan tâm hàng đầu nhà lão khoa giới Việt Nam bối cảnh tuổi thọ trung bình ngày cao, số người mắc bệnh ngày nhiều [6] Các thuốc hóa dược nghiên cứu nhiên chế bệnh sinh phức tạp khiến cho việc nghiên cứu thuốc gặp nhiều khó khăn toàn diện [12] Vì thế, xu hướng nghiên cứu, phát triển thuốc điều trị có khả tăng cường trí nhớ từ dược liệu hướng có triển vọng với thuốc hóa dược điều trị sa sút trí tuệ nói chung bệnh Alzheimer nói riêng Hương nhu tía (HNT) gọi é tía, có tên khoa học Ocimum sanctum L (Ocimum tenuiflorum L.) loại dược liệu trồng sử dụng rộng rãi nước ta Theo kinh nghiệm dân gian hương nhu tía dùng để hạ sốt, chữa cảm, cảm nắng, say nắng, nhức đầu, đau bụng, ngoài, phù thũng [8] Bên cạnh hương nhu tía biết đến với hoạt tính chống oxy hóa, kháng viêm, kháng khuẩn đặc biệt có tác dụng tâm thần kinh [11], [19],[15],[47] Trên giới có nhiều nghiên cứu tác dụng chống stress, oxy hóa hương nhu tía, số công bố tác dụng cải thiện trí nhớ, nhận thức hương nhu tía Đó sở khoa học cho thấy tiềm loài dược liệu theo hướng tác dụng tăng cường trí nhớ ứng dụng hỗ trợ điều trị sa sút trí tuệ nói chung Alzheimer nói riêng Việt Nam Về thành phần hóa học thành phần tinh dầu hương nhu tía biết đến dược liệu giàu acid ursolic - chất có nhiều tác dụng điều trị đáng ý tác dụng tâm thần kinh [26],[27] Tuy nhiên nước ta chưa có nhiều nghiên cứu hàm lượng acid ursolic hương nhu tía tác dụng hương nhu tía trí nhớ Vì lý tiến hành thực đề tài “ Nghiên cứu định lượng acid ursolic tác dụng tăng cường trí nhớ cao hương nhu tía (Ocimum sanctum L) chuột thực nghiệm” với mục tiêu sau: Định lượng acid ursolic cao chiết hương nhu tía Đánh giá tác dụng tăng cường trí nhớ cao chiết hương nhu tía chuột thực nghiệm Để thực mục tiêu đề tài tiến hành nội dung sau: Định lượng acid ursolic cao chiết EtOH 70% hương nhu tía phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Xây dựng mô hình động vật bị suy giảm trí nhớ cách loại bỏ thùy khứu giác (OBX) Trên mô hình đánh giá tác dụng tăng cường trí nhớ cao hương nhu tía qua thử nghiệm hành vi (mê lộ chữ Y cải tiến) thay đổi kích thước não thất bên 43 Tiến hành so sánh tỷ lệ phần trăm diện tích não thất tổng diện tích lát cắt não vị trí bregma -1,70 nhóm chuột phương pháp so sánh one way - ANOVA (phần mềm SPSS 22.0) Kết biểu diễn dạng biểu đồ cột Mỗi cột biểu diễn giá trị Mean ± SE với *p < 0,05 **p < 0,01 so sánh với lô chứng sinh lý ; #p < 0,05 ##p < 0,01 so sánh với lô chứng bệnh lý Hình 10 Phẫu thuật OBX ** # Hình 10 Biểu đồ cột so sánh tỷ lệ phần trăm diện tích não thất bên lô chuột vị trí Bregma -1,70 Nhận xét: - Lô chuột bệnh lý có tỷ lệ diện tích não thất bên 5,06% ± 0,78% cao lô chuột sinh lý 0,82% ± 0,46% (**p = 0.003 < 0,01) Hay não thất bên lô chuột bệnh lý mở rộng so với lô chuột chứng sinh lý 44 - Tỷ lệ phần trăm diện tích não thất bên lô HN400 (Chuột OBX xử lý với cao hương nhu tía liều 400mg/kg (p.o) 1,80% ± 0,53% thấp tỷ lệ phần trăm diện tích não thất bên lô chuột chứng bệnh lý 5,06% ± 0,78% (#p = 0,011 < 0,05) Hay cao chiết hương nhu tía liều 400 mg/kg (p.o) ngăn chặn mở rộng kích thước não thất bên chuột bị loại bỏ vùng khứu giác - Tỷ lệ diện tích não thất bên lô chứng dương (Chuột OBX xử lý với Donepezil) so sánh với nhóm chứng bệnh lý khác biệt ý nghĩa thống kê Donepezil liều 1,5mg/kg (i.p) tác dụng ngăn cản mở rộng kích thước não thất bên - Khi so sánh phần trăm diện tích não thất bên lô HN200 (Chuột OBX xử lý với cao chiết hương nhu tía liều 200 mg/kg (p.o) lô chuột chứng bệnh lý khác biệt ý nghĩa thống kê Nhận thấy cao chiết hương nhu tía liều 200 mg/kg (p.o) chưa thể tác dụng ngăn cản mở rộng kích thước não thất bên 45 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 4.1 Định lượng acid ursolic cao chiết hương nhu tía phương pháp HPLC Kết định lượng cho thấy lần định lượng HPLC khác dung dịch thử chuẩn bị từ cao chiết hương nhu tía, hàm lượng acid ursolic mẫu thử quy trình xử lý mẫu điều kiện sắc ký có độ lặp lại tốt (RSD < 2%) Như kết luận hệ thông sắc ký HPLC ổn định, có độ xác cao cho kết đáng tin cậy tiến hành phân tích hàm lượng acid ursolic cao chiết hương nhu tía Hàm lượng acid ursolic mẫu thử cao chiết EtOH hương nhu tía sử dụng để tiến hành đánh giá tác dụng dược lý tăng cường trí nhớ chuột thực nghiệm 1,49% Acid ursolic biết đến chất có nhiều tác dụng điều trị có đáng ý tác dụng bảo vệ thần kinh, tăng cường trí nhớ [21],[26],[47] + Acid ursolic có tác dụng cải thiện suy giảm trí nhớ suy giảm enzym chống oxy hóa não mô hình gây thoái hóa thần kinh D – galactose [26] + Nghiên cứu Kim Wilkinson cộng chứng minh acid ursolic chất ức chế trình gắn β - amyloid vào thụ thể CD36 từ ngăn chặn tế bào thần kinh đệm sản xuất cytokin độc tố gây thoái hóa thần kinh [21] + Kết nghiên cứu Young cộng chứng minh rằng: Acid ursoic có tác dụng cải thiện suy giảm trí nhớ chuột gây lipopolysaccharid (LPS) gây viêm não, thông qua ức chế sản xuất yếu tố gây viêm [48] 46 Những nghiên cứu tác dụng acid ursolic công bố với kết định lượng acid ursolic thu đề tài này, bước đầu thấy rằng: thành phần acid ursolic cao chiết hương nhu tía hoạt chất đóng góp vào tác dụng tăng cường trí nhớ cao chiết hương nhu tía Từ đó, dùng acid ursolic chất điểm định lượng, góp phần tiêu chuẩn hóa cao chiết hương nhu tía, ứng dụng phát triển sản phẩm hỗ trợ điều trị bệnh lý liên quan tới suy giảm trí nhớ từ hương nhu tía 4.2 Tác dụng tăng cường trí nhớ cao chiết EtOH chuột bị suy giảm trí nhớ cách loại bỏ thùy khứu giác (OBX) Mô hình gây suy giảm trí nhớ cách loại bỏ thùy khứu giác (OBX) Hiện giới có khả nhiều mô hình sử dụng để nghiên cứu thuốc cải thiện trí nhớ Trong mô hình phải kể tới mô hình chuột loại bỏ thùy khứu giác (OBX): - OBX mô hình thực nghiệm đại phòng thí nghiệm thần kinh giới sử dụng rộng rãi để đánh giá tác dụng thuốc hay liệu pháp điều trị chứng rối loạn nhận thức trí nhớ bao gồm Alzheimer [23],[24] Có nhiều chứng cho thấy tương đồng chuột OBX biểu Alzheimer nói riêng suy giảm nhận thức nói chung trình bày phần tổng quan - Mặc dù OBX mô hình động vật thực nghiệm sử dụng rộng rãi giới Việt Nam mô hình chưa nghiên cứu triển khai nhiều để đánh giá tác dụng thuốc, dược liệu có tiềm điều trị suy giảm trí nhớ - Quy trình thực nghiệm phẫu thuật kiểm soát mức độ thành công khống chế tỷ lệ chuột tử vong trình phẫu thuật (trong nghiên 47 cứu tỷ lệ sống sau phẫu thuật đạt tới 90%) Số lượng mẫu cần để đạt thống kê thấp góp phần nâng cao đạo đức nghiên cứu Do có nhiều điểm phù hợp dễ quan sát định lượng nên định sử dụng mô hình để nghiên cứu tác dụng tăng cường trí nhớ cao chiết hương nhu tía Tuy nhiên mô hình có số nhược điểm chung: não chuột có chút khác biệt so với não người giải phẫu chức năng, việc theo dõi đánh giá gặp khó khăn, phép đo đồng thời theo thời gian bị hạn chế không thực Kỹ thuật không áp dụng cho động vật tỉnh táo, phải sử dụng thuốc gây mê gây tai biến chết chuột liều thuốc mê Tác dụng tăng cường trí nhớ thử nghiệm mê lộ chữ Y cải tiến Thử nghiệm mê lộ chữ Y thử nghiệm hành vi để đo lường khả sẵn sàng khám phá môi thường động vật gặm nhấm Thử nghiệm mê lộ chữ Y cải tiến triển khai nhằm mục đích đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ ngắn hạn hình thành thông qua trình học tập làm việc có liên quan đến vị trí không gian cao chiết hương nhu tía chuột bị suy giảm trí nhớ loại bỏ thùy khứu giác Nhiều phận não tham gia vào trình có vùng hải mã [7] Đây vùng có dấu hiệu tổn thương mô hình OBX triển khai bên để gây suy giảm trí nhớ chuột Trong mô hình chuột có trí nhớ tốt có khả nhận diện nhánh Y3 có xu hướng khám phá nhánh nhiều Từ kết thử nghiệm mê lộ chữ Y cải tiến, nhận thấy: + Lô chứng bệnh lý ưu tiên khám phá nhánh giai đoạn kiểm tra Kết thấy đề tài thành công áp dụng mô hình phá 48 hủy thùy khứu giác để gây suy giảm trí nhớ chuột – phương pháp chuột bị suy giảm trí nhớ + Tỷ lệ phần trăm thời gian khám phá nhánh Y3 lô chứng dương (Chuột OBX xử lý với Donepezil) cao lô chứng bệnh lý Donepezil thuốc ức chế AchE có tác dụng cải thiện trí nhớ bệnh nhân Alzheimer từ nhẹ đến trung bình trích dẫn phần tổng quan Kết lần khẳng định tác dụng cải thiện trí nhớ thuốc chứng dương Donepezil + Kết thử nghiệm cho thấy lô HN400 (Chuột OBX xử lý với cao chiết hương nhu tía liều 400 mg/kg, (p.o) ) có ưu tiên khám phá nhánh Y3 hai nhánh quen thuộc Y1, Y2 Hay cao chiết hương nhu tía mức liều 400 mg/kg (p.o) có tác dụng tăng cường trí nhớ ngắn hạn phụ thuộc không gian làm việc chuột bị loại bỏ vùng khứu giác OBX + Lô HN200 (Chuột OBX xử lý với cao chiết hương nhu tía liều 200 mg/kg, (p.o) ưu tiên khám phá nhánh Y3 Hay mức liều 200 mg/kg thể trọng cao chiết hương nhu tía chưa thể tác dụng tăng cường trí nhớ chuột loại bỏ vùng OBX Kết thử nghiệm hành vi mê lộ chữ Y cải tiến cho thấy cao chiết EtOH hương nhu tía có tác dụng tăng cường trí nhớ ngắn hạn hình thành qua trình làm việc, có liên quan đến vị trí không gian tác dụng phụ thuộc vào liều Đánh giá thay đổi mô học kích thước não thất bên (Lateral ventrical, LV) - Nghiên cứu cho thấy kích thước não thất bên tăng dần theo độ tuổi, bệnh Alzheimer có biểu hình ảnh teo não giãn rộng não thất chụp CT scanner, MRI Sự giãn rộng não thất não thất não thất bên Sự tăng rõ rệt kích thước não thất sau năm xem dấu hiệu đặc trưng bệnh Alzheimer [5],[33] 49 - Trong nghiên cứu tiền lâm sàng để đánh giá tác dụng thuốc lên trí nhớ mô hình chuột phá bỏ thùy khứu giác OBX tìm thấy mở rộng kích thước não thất loài gặm nhấm [23],[24] - Thử nghiệm đánh giá thay đổi mô học kích thước não thất bên thực nhằm mục đích đánh giá tác dụng tăng cường trí nhớ cao chiết EtOH hương nhu tía thông qua việc ngăn chặn mở rộng kích thước não thất bên mô hình gây suy giảm trí nhớ cách loại bỏ thùy khứu giác Một số ghi nhận thu từ kết thử nghiệm đánh giá thay đổi kích thước não thất bên: + Não thất bên lô chuột chứng bệnh lý mở rộng so với lô chuột chứng sinh lý Kết với nghiên cứu trước mối quan hệ mở rộng não thất bên Alzheimer, lần cho thấy đề tài thành công áp dụng mô hình loại bỏ thùy khứu giác để đánh giá tác dụng thuốc tăng cường trí nhớ cao chiết hương nhu tía chuột thực nghiệm Bằng phương pháp loại bỏ thùy khứu giác chuột bị suy giảm trí nhớ + Tỷ lệ phần trăm diện tích não thất bên lô HN400 (Chuột OBX xử lý với hương nhu tía liều 400 mg/kg (p.o)) thấp tỷ lệ phần trăm diện tích não thất bên lô chuột chứng bệnh lý Điều khẳng định cao chiết hương nhu tía liều 400 mg/kg (p.o) ngăn chặn mở rộng kích thước não thất bên chuột bị loại bỏ vùng OBX hay có tác dụng tăng cường trí nhớ chuột thực nghiệm Lô HN200 chưa thể rõ tác dụng ngăn cản mở rộng kích thước não thất bên để từ có tác dụng tăng cường trí nhớ Kết lần thể tác dụng tăng cường trí nhớ hương nhu tía phụ thuộc vào liều 50 + Donepezil thuốc thuộc nhóm ức chế AchE quan quản lý thực phẩm thuốc Mỹ (FDA) phê duyệt từ năm 1996 để điều trị Alzheimer từ mức độ nhẹ đến trung bình Cơ chế tác dụng Donepezil ức chế phân hủy Acetylcholin, chất dẫn truyền thần kinh quan trọng chức nhận thức từ có tác dụng cải thiện trí nhớ [5] Kết Donepezil tác dụng ngăn cản mở rộng não thất bên chế tác dụng tăng cường trí nhớ hương nhu tía có theo hướng khác với Donepezil - Tăng cường kích thước não thất có mối liên hệ với trầm cảm [30], chứng suy nhược thần kinh khác tâm thần phân liệt [16], rối loạn lưỡng cực [29] Điều gợi ý cho việc tiến hành thêm nghiên cứu tác dụng hương nhu tía việc điều trị chứng suy nhược thần kinh khác Kết ban đầu đề tài tác dụng tăng cường trí nhớ cao chiết hương nhu tía giúp định hướng cho việc nghiên cứu tiếp tác dụng hương nhu tía bảo vệ tế bào thần kinh - hướng tiếp cận nghiên cứu thuốc hay liệu pháp góp phần điều trị hỗ trợ điều trị bệnh lý liên quan tới thần kinh 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận: - Trong cao chiết EtOH hương nhu tía, hàm lượng acid ursolic định lượng theo phương pháp HPLC 1,49% - Tác dụng tăng cường trí nhớ cao chiết EtOH chứng minh mô hình chuột bị suy giảm trí nhớ cách loại bỏ thùy khứu giác (OBX) thông qua thử nghiệm hành vi mê lộ chữ Y cải tiến thử nghiệm đánh giá thay đổi kích thước não thất bên Tác dụng phụ thuộc vào liều + Mức liều 400mg/kg (p.o) thể tác dụng tăng cường trí nhớ thông qua tác dụng làm tăng tỷ lệ thời gian khám phá nhánh Y3 ngăn chặn mở rộng não thất bên chuột bị suy giảm trí nhớ cắt bỏ thùy khứu giác (OBX) Mức liều 200mg/kg (p.o) chưa thể rõ tác dụng Kiến nghị: Từ kết nghiên cứu đề tài kiến nghị số nội dung sau: - Tiêu chuẩn hóa cao chiết xây dựng quy trình chiết xuất hương nhu tía chuẩn hóa ứng dụng phát triển sản phẩm từ dược liệu tiềm theo hướng hỗ trợ điều trị điều trị trị bệnh - Tiến hành thêm đề tài để nghiên cứu chế tác dụng hương nhu tía góp phần khẳng định đầy đủ tác dụng hương nhu tía trí nhớ nói riêng thần kinh nói chung - Kiểm tra độc tính cấp cấp, độc tính bán trường diễn đường uống cao chiết hương nhu tía động vật thí nghiệm TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Bộ Y tế (2007), Dược liệu học, Tập 2, NXB Y học Bộ Y tế (2007), Hóa Phân Tích, Tập 2, NXB Y học, tr.168-189 Lê Đức Hinh, Nguyễn Anh Đạt, Charles Warlow (2012), The lancet-Tiếp cận xử lý thần kinh học, NXB Y học Nguyễn Ngọc Hiếu (2013), "Nghiên cứu thành phần hóa học hương nhu tía (Ocimum sanctum L.)", Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ đại học, Đại học Dược Hà Nội Trường đại học Dược Hà Nội - đại học Groningen Hà Lan (2014), Dược lâm sàng nguyên lý sử dụng thuốc điều trị, Dự án NPT-VNM-240, Tập 2, tr.387-409 Trường đại học Y Hà Nội (2012), Bệnh học nội khoa, NXB Y học, tr.446461 Trường đại học Y khoa Phạm Ngọc Thạch (2011), Sinh lý học Y khoa, vol 2, NXB Y học, tr.360-366 Viện Dược Liệu (2006), thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, vol I, NXB Khoa học Kỹ thuật, tr.1027-1028 Trần Phi Hoàng Yến cộng (2011), "Khảo sát khả cải thiện suy giảm trí nhớ cao chiết hương nhu tía (Ocimum sanctum) chuột nhắt", Tạp trí Y học TP.HCM 15( 1), tr.124-129 Tài liệu Tiếng Anh 10 Baxter Karen et al (2010), "Stockley’s Drug Interactionas" 9th edition (chapter 11) 11 Bhargavaand KP, N Singh (1981), "Anti-stress activity of Ocimum sanctum Linn", The Indian journal of medical research 73, pp 443 12 Eropean Medicines Agency (2010), "Guideline on medicinal products for treatment of Alzheimer’ disease and other dementia" 13 Goretti M, Silva V et al (2008), "Variation of ursolic acid content in eight Ocimum species from northeastern Brazil", Molecules 13(10), pp 24822487 14 Gupta Shweta et al (2006), "Antidiabetic, antihypercholesterolaemic and antioxidant effect of Ocimum sanctum (Linn) seed oil", Indian journal of experimental biology 44(4), pp 300 15 Hanumanthachar Joshiand Milind Parle (2006), "Evaluation of nootropic potential of Ocimum sanctum Linn in mice", Indian journal of experimental biology 44(2), pp 133 16 Ian C Wright et al (2000), "Meta-analysis of regional brain volumes in schizophrenia", American Journal of Psychiatry 17 Jack de la Torre et al (2004), "Drug therapy in Alzheimer’s disease", The New England journal of medicine 351(18), pp 1911-1913 18 Karen Baxter et al (2010), 9th edition, chapter 11: Anticholinesterases (2010), "Stockley’s Drug Interaction" 9th edition, chapter 11(chapter 11: Anticholinesterases) 19 Kelm MA et al (2000), "Antioxidant and cyclooxygenase inhibitory phenolic compounds from Ocimum sanctum Linn", Phytomedicine 7(1), pp 7-13 20 Khannaand N, Jagriti Bhatia (2003), "Antinociceptive action of Ocimum sanctum (Tulsi) in mice: possible mechanisms involved", Journal of ethnopharmacology 88(2), pp 293-296 21 Kim Wilkinson et al (2011), "A high content drug screen identifies ursolic acid as an inhibitor of amyloid β protein interactions with its receptor CD36", Journal of Biological Chemistry, editor, pp 3491434922 22 Kulshreshthaand DK, Rastogi RP (1973), "Identification of ebelin lactone from Bacoside A and the nature of its genuine sapogenin", Phytochemistry 12(8), pp 2074-2076 23 Le Thi Xoan et al (2013), "Bacopa monnieri ameliorates memory deficits in olfactory bulbectomized mice: possible involvement of glutamatergic and cholinergic systems", Neurochemical research 38(10), pp 22012215 24 Le Thi Xoan et al (2015), "Protective effects of Bacopa monnieri on ischemia-induced cognitive deficits in mice: The possible contribution of bacopaside I and underlying mechanism", Journal of ethnopharmacology 164, pp 37-45 25 Limpeanchob Nanteetip et al (2008), "Neuroprotective effect of Bacopa monnieri on beta-amyloid-induced cell death in primary cortical culture", Journal of ethnopharmacology 120(1), pp 112-117 26 Lu Jun et al (2007), "Ursolic acid ameliorates cognition deficits and attenuates oxidative damage in the brain of senescent mice induced by D-galactose", Biochemical pharmacology 74(7), pp 1078-1090 27 Machado DG et al (2012), "Antidepressant-like effect of ursolic acid isolated from Rosmarinus officinalis L in mice: evidence for the involvement of the dopaminergic system", Pharmacology Biochemistry and Behavior 103(2), pp 204-211 28 Maria Teresa Salles Trevisan et al (2006), "Characterization of the volatile pattern and antioxidant capacity of essential oils from different species of the genus Ocimum", Journal of agricultural and food chemistry 54(12), pp 4378-4382 29 Matthew J Kempton et al (2008), "Meta-analysis, database, and metaregression of 98 structural imaging studies in bipolar disorder", Archives of general psychiatry 65(9), pp 1017-1032 30 Matthew J Kempton et al (2011), "Structural neuroimaging studies in major depressive disorder: meta-analysis and comparison with bipolar disorder", Archives of general psychiatry 68(7), pp 675-690 31 Pattanayak Priyabrata et al (2010), "Ocimum sanctum Linn A reservoir plant for therapeutic applications: An overview", Pharmacognosy reviews 4(7), pp 95 32 Sakina MR et al (1990), "Preliminary psychopharmacological evaluation of Ocimum sanctum leaf extract", Journal of ethnopharmacology 28(2), pp 143-150 33 Sean M Nestor et al (2008), "Ventricular enlargement as a possible measure of Alzheimer's disease progression validated using the Alzheimer's disease neuroimaging initiative database", Brain 131(9), pp 2443-2454 34 Sembulingam K, Prema SembulingamandA Namasivayam (2005), "Effect of Ocimum sanctum Linn on the changes in central cholinergic system induced by acute noise stress", Journal of ethnopharmacology 96(3), pp 477-482 35 Shigeki Moriguchi et al (2006), "Decreased calcium/calmodulin‐ dependent protein kinase II and protein kinase C activities mediate impairment of hippocampal long‐term potentiation in the olfactory bulbectomized mice", Journal of neurochemistry 97(1), pp 22-29 36 Singh S (1998), "Comparative evaluation of antiinflammatory potential of fixed oil of different species of Ocimum and its possible mechanism of action", Indian journal of experimental biology 36(10), pp 10281031 37 Skaltsa H, Tzakouand O, Singh M (1999), "Note Polyphenols of Ocimum sanctum from Suriname", Pharmaceutical biology 37(1), pp 92-94 38 Suneetha Sampath et al (2015), "Holy basil (Ocimum sanctum Linn.) leaf extract enhances specific cognitive parameters in healthy adult volunteers: A placebo controlled study", Indian J Physiol Pharmacol 59(1), pp 69-77 39 Surender Singh, DK MajumdarandHMS Rehan (1996), "Evaluation of anti-inflammatory potential of fixed oil of Ocimum sanctum (Holybasil) and its possible mechanism of action", Journal of Ethnopharmacology 54(1), pp 19-26 40 Surender Singh, Manjusha Malhotraand, DK Majumdar (2005), "Antibacterial activity of Ocimum sanctum L fixed oil", Indian journal of experimental biology 43(9), pp 835 41 Swathi B et al (2011), "Immunomodulatory and cortisol sparing effect of tulsi (Ocimum sanctum L) in heat stress broilers" 42 Tapan K Maity et al (2000), "Effect of Ocimum sanctum roots extract on swimming performance in mice", Phytotherapy Research 14(2), pp 120-121 43 Vasudevan DM et al (2001), "Activity of Ocimum sanctum (the traditional Indian medicinal plant) against the enteric pathogens", Indian journal of medical sciences 55(8), pp 434 44 Vats V, SP YadavandJK Grover (2004), "Ethanolic extract of Ocimum sanctum leaves partially attenuates streptozotocin-induced alterations in glycogen content and carbohydrate metabolism in rats", Journal of ethnopharmacology 90(1), pp 155-160 45 Vijayasree Vayalanellore Giridharan et al (2011), "Ocimum sanctum Linn leaf extracts inhibit acetylcholinesterase and improve cognition in rats with experimentally induced dementia", Journal of medicinal food 14(9), pp 912-919 46 Yanpallewar SU et al (2004), "Evaluation of antioxidant and neuroprotective effect of Ocimum sanctum on transient cerebral ischemia and long-term cerebral hypoperfusion", Pharmacology Biochemistry and Behavior 79(1), pp 155-164 47 Yo-Kyung Chung et al (2001), "Inhibitory Effect of Ursolic Acid Purified from Origanum majorana L on the Acetylcholinesterase", Molecules & Cells 11(2) 48 Yong-Jian Wang et al (2011), "Ursolic acid attenuates lipopolysaccharide-induced cognitive deficits in mouse brain through suppressing p38/NF-KB mediated inflammatory pathways", Neurobiology of learning and memory 96(2), pp 156-165 [...]... Moris và tác dụng này có liên quan đến hệ cholinergic, làm tăng hàm lượng Acetylcholin và giảm hoạt tính Acetylcholinesterase trong vùng hải mã não chuột [9] Những nghiên cứu trên về tác dụng của hương nhu tía trên tâm - thần kinh là cơ sở cho việc nghiên cứu tác dụng dược lý các mẫu thử với những dung môi chiết khác nhau và những bộ phận khác nhau của hương nhu tía đối với tác dụng tăng cường trí nhớ. .. của vùng hải mã và hệ cholinergic ở loài gặm nhấm theo đó gây ra sự suy giảm trí nhớ, nhận thức [23],[24],[35] 20 + Đây cũng là mô hình được lựa chọn trong nghiên cứu này của chúng tôi để gây suy giảm trí nhớ và trên mô hình đó tiến hành các thử nghiệm hành vi và mô học đánh giá tác dụng tăng cường trí nhớ của cao chiết hương nhu tía 21 CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên. .. cồn từ hương nhu tía có tác dụng chống trầm cảm trên chuột nhắt (giảm thời gian bất động trên thử nghiệm treo đuôi chuột và thử nghiệm chuột bơi cưỡng bức) [38] - Cao chiết Methanol của O sanctum L ở liều 400 mg/kg (i.p) làm tăng thời gian bơi của chuột trong thử nghiệm chuột bơi cưỡng bức cho thấy tác dụng kích thích hệ thống thần kinh trung ương và chống căng thẳng [42] - Trong một nghiên cứu của B.Swathi... 70% của hương nhu tía với liều 100 mg/kg có tác dụng bảo vệ các mô não trước tác động có hại gây stress bởi tiếng ồn [34] Một số nghiên cứu về tác dụng cải thiện trí nhớ, nhận thức của hương nhu tía: Trên thế giới: - Sử dụng mô hình gây thiếu máu não trên chuột nhắt, Yanpallerwar và cộng sự đã chứng minh rằng dịch chiết cồn từ lá hương nhu tía làm giảm peroxid hóa lipid và SOD (superoxid dismutase) và. .. Việt Nam: Tác giả Trần Phi Hoàng Yến và cộng sự đã sử dụng mô hình gây suy giảm trí nhớ bằng Trimethylmin (TMT) để đánh giá tác dụng bảo vệ khả năng học tập và ghi nhớ của cao chiết toàn phần lá hương nhu tía trên chuột nhắt trắng Kết quả nghiên cứu cho thấy, cao chiết EtOH toàn phần lá hương nhu tía ở liều uống 50 mg/kg và 100 mg/kg thể hiện khả năng bảo vệ sự suy giảm khả năng học tập và ghi nhớ qua... bản trong hương nhu tía bằng phản ứng hóa học cho thấy cành, lá hương nhu tía có chứa: saponin triterpenoid, flavonoid, coumarin, acid hữu cơ, tinh dầu, phytosterol Kết quả nghiên cứu cũng xác định sự có mặt acid ursolic trong hương nhu tía bằng SKLM cũng như bước đầu xây dựng quy trình chiết tách acid ursolic từ hương nhu tía Tuy nhiên đề tài này chưa thực hiện quá trình định lượng acid ursolic [4]... groups) cùng những biến đổi về mô học gây ra thiếu máu não – một trong những nguyên nhân gây suy giảm trí nhớ [46] 11 - Dịch chiết nước của Ocimum sanctum L Có tác dụng tăng cường trí nhớ trên mô hình chuột gây suy giảm trí nhớ bằng scopolamin, diazepam và do lão hóa [31] - Nghiên cứu của Girdhan và cộng sự cũng cho thấy dịch chiết nước (300 và 500 mg/kg) và dịch chiết EtOH (300 và 500 mg/kg) của lá hương. .. có mặt của acid ursolic trong mẫu thử - Sử dụng thông số diện tích pic của mẫu thử và mẫu chuẩn để xây dựng đường chuẩn và dựa vào đường chuẩn xây dựng trong cùng ngày xác định hàm lượng acid ursolic trong mẫu thử, từ đó tính toán nồng độ acid ursolic trong cao chiết hương nhu tía 27 2.2.2 Đánh giá tác dụng dược lý Nước cất (Sinh lý, bệnh l ) Chế độ điều trị Cao hương nhu tía (HN200, HN40 0) Donepezil... orientin; acid galic; acid cafeic; acid galic methylester [37] Acid ursolic và acid oleanolic là thành phần chính và quan trọng có hàm lượng cao trong hương nhu tía thuộc nhóm saponin triterpenoid [31] Theo USP 36: + Lá HNT ≥ 0,5% triterpen (Ursolic + Oleanolic) + Sản phẩm từ HNT: ≥2% triterpenoid 6 H COOH H HO Acid ursolic Acid oleanoic + Năm 2008, Silva và cộng sự đã tiến hành nghiên cứu hàm lượng acid ursolic. .. (300 và 500 mg/kg) của lá hương nhu tía có tác dụng chống suy giảm trí nhớ , ức chế Acetylcholinesterase và làm tăng cường miễn dịch trên chuột cống gây mất trí nhớ bằng sốc điện, atropin và cyclosporin liều cao [45] - Kết quả thử nghiệm lâm sàng cho thấy viên nang 300mg cao chiết EtOH lá hương nhu tía có tác động tích cực lên các thông số nhận thức nhất định như trí nhớ ngắn hạn, mức độ tập trung khi