Khảo sát tác dụng cải thiện trí nhớ của chế phẩm đan sâm tam thất trên chuột nhắt trắng suy giảm trí nhớ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ĐỖ THANH SANG KHẢO SÁT TÁC DỤNG CẢI THIỆN TRÍ NHỚ CỦA CHẾ PHẨM ĐAN SÂM – TAM THẤT TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG SUY GIẢM TRÍ NHỚ LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC TP.HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ĐỖ THANH SANG KHẢO SÁT TÁC DỤNG CẢI THIỆN TRÍ NHỚ CỦA CHẾ PHẨM ĐAN SÂM – TAM THẤT TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG SUY GIẢM TRÍ NHỚ NGÀNH: Y HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 8720113 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS TS NGUYỄN PHƯƠNG DUNG TP.HỒ CHÍ MINH, NĂM 2022 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan danh dự cơng trình nghiên cứu khoa học mình, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan Tác giả luận văn Đỗ Thanh Sang MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT i DANH MỤC BẢNG iii DANH MỤC HÌNH iv MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Suy giảm trí nhớ theo quan điểm Y học đại 1.1.1 Đại cương .4 1.1.2 Hệ thống nhớ trình ghi nhớ 1.1.3 Giải phẫu thần kinh thần kinh sinh học nhớ 1.1.4 Phân loại tổn thương ảnh hưởng tới trí nhớ .6 1.1.5 Dịch tễ học 1.1.6 Di truyền .7 1.1.7 Bệnh thần kinh liên quan suy giảm trí nhớ 1.1.8 Lâm sàng suy giảm trí nhớ 10 1.1.9 Cận lâm sàng 11 1.1.10 Điều trị 11 1.2 Enzym acetylcholinesterase (AChE) 12 1.3 Sa sút trí tuệ theo YHCT 13 1.3.1 Định nghĩa 14 1.3.2 Nguyên nhân .14 1.3.3 Cơ chế bệnh sinh .15 1.3.4 Bệnh cảnh lâm sàng thường gặp điều trị .16 1.4 Giới thiệu chế phẩm nghiên cứu 17 1.4.1 Chỉ định .17 1.4.2 Liều lượng cách dùng 18 1.4.3 Tương tác 18 1.4.4 Đặc tính dược lý 18 1.4.5 Phối ngũ theo YHCT 18 1.5 Phân tích phối ngũ theo YHHĐ 19 1.5.1 Đan sâm (Radix salviae miltiorrhizae) .19 1.5.2 Tam thất (Radix panasis notoginseng) .21 1.6 Cơ sở lý luận phối hợp Đan sâm – Tam thất 21 1.6.1 Cơ sở lý luận YHCT 22 1.6.2 Cơ sở lý luận YHHĐ 22 1.6.3 Các nghiên cứu liên quan đến Đan sâm – Tam thất 23 1.7 Một số phương pháp thường dùng nghiên cứu sàng lọc tác dụng ức chế enzym acetylcholinesterase in vitro 25 1.7.1 Phương pháp sử dụng thuốc thử Ellman 25 1.7.2 Phương pháp sử dụng thuốc thử muối Fast Blue B 26 1.8 Các mơ hình nghiên cứu suy giảm trí nhớ in vivo .27 1.8.1 Mơ hình suy giảm trí nhớ scopolamin .28 1.8.2 Các mơ hình thường sử dụng khảo sát khả chống SGTN ngắn hạn .29 1.8.3 Các mơ hình thường sử dụng khảo sát khả chống SGTN dài hạn 30 CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 2.1 Nguyên vật liệu nghiên cứu .35 2.1.1 Chế phẩm nghiên cứu 35 2.1.2 Liều thử nghiệm 35 2.1.3 Thuốc đối chứng 36 2.1.4 Thuốc gây mơ hình 36 2.1.5 Hóa chất 36 2.1.6 Thiết bị dụng cụ 36 2.1.7 Động vật thực nghiệm 37 2.1.8 Nơi thực .38 2.2 Phương pháp nghiên cứu 38 2.2.1 Tiêu chuẩn chọn chuột 38 2.2.2 Khảo sát độc tính cấp 38 2.2.3 Đánh giá tác dụng ức chế acetylcholinesterase viên nén Đan sâm – Tam thất 38 2.2.4 Phương pháp đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ ngắn hạn viên nén Đan sâm - Tam thất mơ hình khám phá vật thể 40 2.2.5 Phương pháp đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ ngắn hạn viên nén Đan sâm - Tam thất mơ hình chữ Y .42 2.2.6 Phương pháp đánh giá tác dụng cải thiện trí nhớ dài hạn viên nén Đan sâm - Tam thất mơ hình ma trận bơi .45 2.2.7 Khảo sát ảnh hưởng viên nén Đan sâm – Tam thất với thời gian máu chảy, máu đông chuột nhắt 47 2.2.8 Phương pháp thống kê, xử lý số liệu 48 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ 49 3.1 Thử nghiệm độc tính cấp đường uống viên nén Đan sâm – Tam thất 49 3.2 Đánh giá hoạt tính ức chế enzym acetylcholinesterase viên nén Đan sâm – Tam thất in vivo 49 3.3 Tác dụng viên nén Đan sâm - Tam thất trí nhớ ngắn hạn chuột nhắt trắng thơng qua mơ hình khám phá vật thể lạ 51 3.4 Tác dụng viên nén Đan sâm – Tam thất trí nhớ khơng gian ngắn hạn chuột nhắt trắng thơng qua mơ hình chữ Y 53 3.5 Tác dụng cải thiện trí nhớ viên nén Đan sâm – Tam thất thông qua thử nghiệm ma trận bơi 55 3.5.1 Trong tập có chân đế (từ ngày 18 đến ngày 22) 56 3.5.2 Bài tập khơng có chân đế ngày 23 61 3.6 Ảnh hưởng viên nén Đan sâm – Tam thất lên thời gian máu chảy, thời gian máu đông in vivo sau 24 ngày uống thuốc thử 64 3.6.1 Ảnh hưởng viên nén Đan sâm – Tam thất đến thời gian máu chảy vào ngày 24 64 3.6.2 Ảnh hưởng viên nén Đan sâm – Tam thất đến thời gian đông máu ngày 24 67 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 69 4.1 Độc tính cấp đường uống viên nén Đan sâm – Tam thất 69 4.2 Khả ức chế enzym acetylcholinesterase viên nén Đan sâm – Tam thất mơ hình in vitro 70 4.2.1 Về phương pháp đo quang Ellman .70 4.2.2 Khả ức chế enzym acetylcholinesterase viên nén Đan sâm – Tam thất 70 4.3 Ảnh hưởng viên nén Đan sâm – Tam thất trí nhớ hình ảnh ngắn hạn chuột nhắt suy giảm trí nhớ thơng qua mơ hình khám phá vật thể lạ .73 4.3.1 Ảnh hưởng scopolamin trí nhớ ngắn hạn chuột nhắt trắng, mơ hình khám phá vật thể lạ tác dụng hồi phục trí nhớ ngắn hạn donezepil .73 4.3.2 Khả hồi phục trí nhớ nhận diện ngắn hạn viên nén Đan sâm – Tam thất lên chuột nhắt gây suy giảm trí nhớ scopolamin mơ hình khám phá vật thể lạ 74 4.4 Ảnh hưởng viên nén Đan sâm – Tam thất đến trí nhớ khơng gian ngắn hạn thơng qua mơ hình chữ Y chuột nhắt trắng suy giảm trí nhớ scopolamin 76 4.4.1 Khả gây suy giảm trí nhớ khơng gian ngắn hạn scopolamin .76 4.4.2 Tác dụng hồi phục trí nhớ khơng gian ngắn hạn chuột nhắt trắng suy giảm trí nhớ scopolamin thơng qua mơ hình chữ Y donezepil .77 4.4.3 Tác dụng hồi phục trí nhớ không gian ngắn hạn chuột nhắt trắng suy giảm trí nhớ scopolamin thơng qua mơ hình chữ Y viên nén Đan sâm – Tam thất 78 4.5 Ảnh hưởng viên nén Đan sâm – Tam thất trí nhớ dài hạn chuột nhắt trắng mơ hình ma trận bơi 80 4.5.1 Khả gây suy giảm trí nhớ dài hạn scopolamin mơ hình trí nhớ dài hạn thơng qua ma trận bơi .80 4.5.2 Khả hồi phục trí nhớ dài hạn donezepil chuột nhắt bị suy giảm trí scopolamin mơ hình ma trận bơi .80 4.5.3 Tác dụng hồi phục trí nhớ dài hạn viên nén Đan sâm – Tam thất mơ hình chuột nhắt bị gây suy giảm trí nhớ scopolamin mơ hình ma trận bơi 81 4.6 Ảnh hưởng viên nén Đan sâm – Tam thất thời gian máu chảy, máu đông in vitro 84 4.7 Cơ chế tác dụng viên nén Đan sâm – Tam thất khả hồi phục trí nhớ 87 4.7.1 Khả ức chế enzym AChE viên nén Đan sâm – Tam thất 87 4.7.2 Khả cải thiện lưu lượng máu não viên nén Đan sâm – Tam thất .88 4.8 Tính khả ứng dụng luận văn 90 4.9 Hạn chế luận văn 91 KẾT LUẬN 92 KIẾN NGHỊ .94 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC PHỤ LỤC i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT CHỮ VIẾT TẮT TIẾNG ANH TIẾNG VIỆT AChE Enzyme Men acteylcholinesterase acetycholinesterase AD Alzheimer's disease Bệnh Alzheimer Aβ β-amyloid Chuỗi β -amyloid BACEl Beta – site APP cleaving Protein enzyme phân cắt enzym BuChE Enzyme Men butyrylcholinesterase butyrylcholinesterase CBF Cerebral blood flow Lưu lượng máu não DLB Dementia with Lewy Sa sút trí tuệ thể lewy bodies Egb Ginkgo biloba Bạch EMA European Medicines Cơ quan Quản lý thuốc Châu Agency Âu Endoplasmic-reticulum Protein liên kết với lưới nội associated binding protein chất Familial forms of Các dạng bệnh Alzheimer quen Alzheimer's disease thuộc The United States Food Cục quản lý thực phẩm dược and Drug Administration phẩm Hoa Kì ERAB FAD FDA ii HSE Herpes simplex virus Viêm não herpes simplex infection HupA Huperzine A iNOS Inducible nitric oxide Tổng hợp oxit nitric cảm ứng synthase MD Mixed dementia Sa sút trí tuệ hỗn hợp MMP OS Matrix metalloproteinase Tỷ lệ sống sót tổng thể ma overall survival trận National Institute of Viện Y tế Chất lượng Điều Clinical Exellence trị Quốc gia Anh Nonsteroidal anti Thuốc kháng viêm không inflammatory drugs steriod PD Parkinson's disease Bệnh Parkinson ROS Reactive Oxygen Species Gốc oxi hóa tự NICE NSAID SGTN Suy giảm trí nhớ YHCT Y học cổ truyền YHHĐ Y học đại iii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Phân tích dược lý theo YHCT 18 Bảng 1.2: Tác dụng YHCT vị thuốc viên nén Đan sâm – Tam thất 21 Bảng 1.3 Thành phần hóa học tác dụng dược lý theo YHHĐ vị viên nén Đan sâm – Tam thất 22 Bảng 1.4 Một số nghiên cứu có sử dụng scopolamin làm tác nhân suy giảm trí nhớ 32 Bảng 2.1 Thành phần hóa chất thí nghiệm 39 Bảng 3.1 Số chuột chết 48 sau uống thuốc thử nghiệm .49 Bảng 3.2 Phần trăm ức chế acetylcholinesterase theo nồng độ mẫu thử 50 Bảng 3.3 Tỷ số khám phá chuột nhắt suy giảm trí nhớ scopolamin mơ hình khám phá vật thể sau ngày 15 dùng thuốc 51 Bảng 3.4 Tỷ lệ chuyển tiếp chuột nhắt suy giảm trí nhớ scopolamin mơ hình chữ Y sau 17 ngày dùng thuốc 53 Bảng 3.5 Kết tập có chân đế từ ngày 19 đến ngày 20 (giây) 56 Bảng 3.6 Kết tập có chân đế từ ngày 21 (giây) 59 Bảng 3.7 Kết tập có chân đế từ ngày 22 (giây) 60 Bảng 3.8 Thời gian diện tích 1/4 chứa chân đế chuột nhắt trắng gây suy giảm trí nhớ scopolamin sau 23 ngày dùng thuốc 62 Bảng 3.9 Thời gian máu chảy trung bình lô chuột nhắt trắng 65 Bảng 3.10 Thời gian đơng máu trung bình lơ chuột nhắt trắng 67