Nhằm khảo sát tác dụng tác dụng kháng viêm và sự thay đổi trên dạ dày khi phối hợp hai chế phẩm này, Bài viết trình bày tiến hành thực hiện đề tài “Khảo sát tác dụng kháng viêm và sự thay đổi niêm mạc dạ dày chuột nhắt trắng khi kết hợp chế phẩm Độc hoạt tang ký sinh (Du-huo-dang-ji-sheng) và meloxicam trên thực nghiệm”.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học KHẢO SÁT TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM VÀ SỰ THAY ĐỔI NIÊM MẠC DẠ DÀY CHUỘT NHẮT TRẮNG KHI KẾT HỢP CHẾ PHẨM ĐỘC HOẠT TANG KÝ SINH (DU-HUO-DANG-JI-SHENG) VÀ MELOXICAM TRÊN THỰC NGHIỆM Dương Ngọc Bảo*, Nguyễn Thị Sơn*, Nguyễn Phương Dung* TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Xu hướng kết hợp Đông Tây y điều trị ngày tăng, đặc biệt bệnh lý xương khớp Trong kết hợp phổ biến thuốc Độc hoạt tang ký sinh (ĐHTKS) Meloxicam Nhằm khảo sát tác dụng tác dụng kháng viêm thay đổi dày phối hợp hai chế phẩm này, tiến hành thực đề tài “Khảo sát tác dụng kháng viêm thay đổi niêm mạc dày chuột nhắt trắng kết hợp chế phẩm Độc hoạt tang ký sinh (Du-huo-dang-ji-sheng) meloxicam thực nghiệm” Phương pháp nghiên cứu: Thực hai mô hình gây viêm: Gây phù chân chuột carrageenan gây u hạt thực nghiệm cách cấy viên cotton Cuối mơ hình cấy u hạt, đánh giá thay đổi niêm mạc dày chuột nhắt trắng Kết quả: Sự kết hợp chế phẩm Độc hoạt tang ký sinh meloxicam có tác dụng kháng viêm tốt Kết hợp Độc hoạt tang ký sinh (uống liều 1,818 g bột thuốc/kg chuột) với meloxicam (uống liều mg/kg chuột) không làm tăng hiệu kháng viêm so với dùng riêng thuốc làm tăng số loét dày Kết hợp Độc hoạt tang ký sinh (uống liều 1,818 g bột thuốc/kg chuột) với meloxicam (uống liều mg/kg chuột) có hiệu kháng viêm tương đương dùng riêng meloxicam mg/kg, Độc hoạt thang ký sinh 1,818 g bột thuốc/kg làm giảm số loét dày Kết hợp Độc hoạt tang ký sinh (uống liều 0,909 g bột thuốc/kg chuột) với meloxicam (uống liều 4mg/kg chuột) có hiệu kháng viêm tương đương dùng riêng thuốc phối hợp (meloxicam mg/kg, Độc hoạt tang ký sinh 1,818 g bột thuốc/kg) làm giảm số loét dày Kết luận: Sự kết hợp meloxicam mg/kg với Độc hoạt tang ký sinh có tác dụng kháng viêm tương đương meloxicam mg/kg làm tăng số loét dày; kết hợp meloxciam mg/kg với Độc hoạt tang ký sinh làm tăng tác dụng kháng viêm so với dùng riêng thuốc giảm số loét dày chuột nhắt Từ khóa: Kháng viêm, Độc hoạt tang ký sinh, meloxicam, dày ABSTRACT EXPERIMENTAL STUDY ON ANTI-INFLAMMATORY EFFECT AND VARIATION IN THE STOMACH OF MICE WHEN COMBINING DU-HUO-DANG-JI-SHENG TABLETS AND MELOXICAM Duong Ngoc Bao, Nguyen Thi Son, Nguyen Phuong Dung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 20 - No - 2016: 75 - 85 Objectives: Tendency combining Eastern and Western medicine in treatment is increasing, particularly in musculoskeletal pathologies In which the most popular combination is combined Du-huo-dang-ji-sheng with Meloxicam The study was performed to clarify anti-inflammatory effects and variation in the stomach of mice when combining Du-huo-dang-ji-sheng tablets and meloxicam” Methods: Edema was by carrageenan and granuloma was inducted by cotton, acetic acid-induced acute * Khoa Y học cổ truyền- Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: ThS.BS Dương Ngọc Bảo ĐT: 01267336917 Email: duongngocbao89@gmail.com 75 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 abdominal writhing pain on mice, hot-plate test In the end of granuloma transplanting, evaluate the gastric mucosal changes and the number of platelets in mice Results: The combination between Du-huo-dang-ji-sheng and meloxicam has good anti-inflammatory effect The combination between Du-huo-dang-ji-sheng (1.818 g dose of powder/kg mice) and meloxicam (8 mg/kg mice) did not increase the anti-inflammatory effect than used separately but increased the index of gastric ulcers; The combination between Du-huo-dang-ji-sheng (1.818 g dose of powder/kg mice) and meloxicam (4 mg/kg mice) have anti-inflammatory effect equivalent to meloxicam mg/kg, or Du-huo-dang-ji-sheng 1.818 g powder/kg, and reduced index of gastric ulcers; The combination between Du-huo-dang-ji-sheng (0.909 g dose of powder/kg mice) and meloxicam (4 mg/kg mice) have anti-inflammatory effect equivalent to use separately or in combination (meloxicam mg/kg, Du-huo-dang-ji-sheng 1.818 g powder/kg), and reduced index of gastric ulcers Conclusions: The combination between meloxicam (8 mg/kg mice) and Du-huo-dang-ji-sheng has antiinflammatory effect equivalent to meloxicam mg/kg and increases the index of gastric ulcers; the combination between meloxicam (4 mg/kg mice) and Du-huo-dang-ji-sheng increases the anti-inflammatory effect and decreases the index of gastric ulcers Keywords: anti-inflammatory, Du-huo-dang-ji-sheng, meloxicam, stomach thầy thuốc phối hợp thuốc Độc hoạt tang ĐẶT VẤN ĐỀ ký sinh với meloxicam lâm sàng Các NSAIDs mang lại hiệu Để góp phần trả lời câu hỏi “Kết hợp Độc kháng viêm tốt cho bệnh nhân Tuy nhiên, hoạt tang ký sinh với Meloxicam có làm tăng NSAIDs gây nhiều hệ lụy cho tim mạch, hiệu kháng viêm làm giảm tác dụng phụ thận, đặc biệt tác dụng bất lợi hệ kích ứng dày meloxicam khơng?”, tiêu hóa lt, xuất huyết tiêu hóa, tiêu chảy, phạm vi nghiên cứu này, khảo sát tác thiếu máu, buồn nôn, biếng ăn, đau bụng (5) Vì dụng kháng viêm chế phẩm Độc hoạt tang thế, tìm kiếm phương cách giảm đau hiệu ký sinh meloxicam mơ hình chuột quả, an toàn cho bệnh nhân cần điều trị nhắt trắng gây viêm thực nghiệm NSAIDs vấn đề quan tâm Xu hướng kết hợp Đông Tây y điều trị ngày tăng, đặc biệt bệnh lý xương khớp Kết hợp NSAIDs với thuốc cổ truyền điều trị bệnh lý xương khớp có mang lại hiệu mong đợi, cụ thể tăng tác dụng kháng viêm hạn chế tác dụng phụ NSAIDS hay khơng? Cho đến nay, chưa có nhiều chứng khoa học trả lời cho câu hỏi Theo số liệu thống kê Bệnh viện Y học cổ truyền TP Hồ Chí Minh (2014-2015), chế phẩm từ Độc hoạt tang ký sinh (ĐHTKS) meloxicam có tần suất sử dụng cao Hai loại thuốc thường kết hợp điều trị bệnh lý xương khớp Trong thành phần Độc hoạt tang ký sinh có Cam thảo, Bạch thược, Quế, Đương quy, vị thuốc có tác dụng chống loét dày (5) Có lẽ mà 76 Mục tiêu nghiên cứu Khảo sát tác dụng kháng viêm chế phẩm Độc hoạt tang ký sinh meloxicam thực nghiệm Mục tiêu cụ thể Khảo sát tác dụng kháng viêm chế phẩm Độc hoạt tang ký sinh kết hợp meloxicam mơ hình chuột nhắt trắng gây phù chân carrageenin mơ hình tạo u hạt cotton Khảo sát thay đổi niêm mạc dày chuột nhắt trắng sử dụng kết hợp Độc hoạt tang ký sinh với meloxicam NGUYÊNLIỆU-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Nguyên liệu Chế phẩm Độc hoạt tang ký sinh Mỗi viên bao phim chứa cao khô dược liệu sau: Độc Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học hoạt 330 mg, Phòng phong 330 mg, Tang ký sinh 330 mg, Đỗ trọng 330 mg, Ngưu tất 330 mg, Tần giao 330 mg, Sinh địa 330 mg, Bạch thược 330 mg, Cam thảo 330 mg - Lô (n=10): Uống Meloxicam, liều mg/kg thể trọng (Melo 8) Bột khô của: Tế tân 60 mg, Quế nhục 60 mg, Nhân sâm 60 mg, Đương quy 60 mg, Xuyên khung 30 mg - Lô (n=10): Uống chế phẩm ĐHTKS 1/10 Dmax, tương đương 1,818 g bột thuốc/kg chuột (ĐHTKS 1,818) Tá dược vừa đủ 01 viên bao phim Tiêu chuẩn: TCCS SĐK: V731 - H12 – 10 Động vật thí nghiệm: Chuột nhắt trắng phái (đực), nặng 18-22 g, chủng Swiss albino Viện Pasteur thành phố Hồ Chí Minh cung cấp Bông cotton, carrageenan (Sigma Ltd Co., USA) Dung dịch chống thấm Omano imbidente (Ugo Basile, Italia) Meloxicam (Meloxicam 7,5 mg Stada®) Phương pháp nghiên cứu Mơ hình gây viêm gây carrageenan Theo phương pháp Winter – 1962 (4,6) Đo thể tích chân chuột bình thường (V0) máy Plethysmometer Nhúng chân phải chuột vào dung dịch chống thấm đến khuỷu chân, nhấn giữ bàn đạp để cố định, ghi nhận thể tích máy, tiến hành đo lần lấy kết trung bình Chuột gây viêm cách tiêm da gan bàn chân phải 0,05 ml hỗn hợp dung dịch carrageenan 1% (hỗn hợp dung dịch carrageenan 1% pha dung dịch nước muối sinh lý 0,9% chuẩn bị trước thử nghiệm để carrageenan trương nở) Chuột sau gây viêm cho vào lồng có giá đỡ để tránh nhiễm trùng chân Sau tiêm giờ, đo thể tích chân chuột (V3h) máy Plethysmometer Các chuột có chân sưng phù 50% so với bình thường chọn cho thí nghiệm chia ngẫu nhiên vào lô, chuột chia lô Chuột lô cho uống nước thuốc thể tích 0,1 ml/10 g thể trọng: - Lơ (n=13): Uống Meloxicam, liều mg/kg thể trọng (Melo 4) - Lô (n=11): Uống chế phẩm ĐHTKS 1/20 Dmax, tương đương 0,909 g bột thuốc/kg chuột (ĐHTKS 0,909) - Lô (n=7): Uống chế phẩm ĐHTKS (liều 1/10 Dmax) dung dịch meloxicam mg/kg thể trọng (Melo + ĐHTSK 1,818) - Lô (n=13): Uống chế phẩm ĐHTKS (liều 1/10 Dmax) meloxicam liều mg/kg (Melo + ĐHTSK 1,818) - Lô (n=13): Uống chế phẩm ĐHTKS (liều 1/20 Dmax) meloxicam liều mg/kg (Melo + ĐHTSK 0,909) Cho chuột uống thuốc ngày thử nghiệm đo thể tích chân ngày, thời điểm đo lúc sáng Ký hiệu thể tích chân chuột theo ngày: V1, V2, V3, V4, V5, V6 Đánh giá kết quả: Tác dụng kháng viêm đánh giá tỷ lệ % mức độ giảm thể tích sưng phù lơ thử nghiệm so với lô chứng Mức độ phù chân chuột tính theo cơng thức: Trong đó: X: Độ phù tính theo % Vo: Thể tích chân chuột trước gây viêm Vt: Thể tích chân chuột thời điểm t sau gây viêm Tác dụng kháng viêm thuốc đánh giá khả ức chế phản ứng phù (%) biểu thị tỷ lệ % giảm mức độ tăng thể tích bàn chân chuột lô đối chứng lô thử - Lô (n=10): Uống nước cất (Chứng) 77 Nghiên cứu Y học so với mức độ tăng lô không uống thuốc, tính theo cơng thức: I% = (ΔVc % -ΔVt %)/ ΔVc % Trong đó: ΔVc %: Trung bình độ tăng thể tích chân chuột lơ khơng điều trị ΔVt %: Trung bình độ tăng thể tích chân chuột lơ uống thuốc Mơ hình gây u hạt thực nghiệm cấy viên bơng cotton Một mẫu cotton có trọng lượng 10 ± mg vê tròn sấy tiệt khuẩn nhiệt độ 120ºC tủ sấy Chuột gây mê ether, cạo lơng vùng lưng phía trên, dùng kéo phẫu thuật mắt bấm lỗ chếch sang bên, luồn kéo vào hướng đầu, mở rộng mũi kéo để tách kỹ da lưng khỏi cơ, cấy viên cotton da Khâu vô trùng để nối liền chỗ mổ lưng (2,4) Mổ chuột dụng cụ tiệt khuẩn cách ngâm cồn 90% Sát trùng vết mổ dung dịch cồn iod (Povidine) Chuột lô cho uống nước thuốc thể tích 0,1 ml/10g thể trọng: - Lơ (n=12): Uống nước cất (Chứng) - Lô (n=12): Uống meloxicam, liều mg/kg thể trọng (Melo 8) - Lô (n=12): Uống meloxicam, liều mg/kg thể trọng (Melo 4) - Lô (n=12): Uống chế phẩm ĐHTKS 1/10 Dmax, tương đương 1,818 g bột thuốc/kg chuột (ĐHTKS 1,818) Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 ĐHTSK 0,909) Cho chuột uống ngày, ngày lần vào định với thể tích 0,1 ml/10 g trọng lượng chuột Đến ngày thứ 8, giết chết chuột, bóc tách u hạt, cân tươi u hạt Sau cho u hạt vào tủ sấy 60 ºC 18 giờ, cân u hạt khô Thông số đánh giá Khối lượng u hạt tươi/ khô chuột (Sau trừ khối lượng trước cấy) Tỷ lệ % độ giảm khối lượng u hạt lô thử so với lô chứng biểu thị công thức sau: X % = [(Mch – Mth) / Mch] x 100 X %: Tỷ lệ % giảm khối lượng u hạt lô thử so với lô chứng Mch: Khối lượng u hạt trung bình lơ chứng Mth: Khối lượng u hạt trung bình lơ thử Đánh giá thay đổi niêm mạc dày chuột nhắt trắng Cuối mô hình u hạt (ngày thứ 8) giết chuột đá CO2, rửa dày chuột nhắt nước muối sinh lý, quan sát niêm mạc dày chuột kính hiển vi soi nổi, ống kính 10 Chỉ số loét ghi nhận theo thang điểm Takagi Okabe để đánh giá mức độ tổn thương dày (3): = Khơng có tổn thương = Phù nề niêm mạc xuất huyết = 1-5 tổn thương nhỏ (1-2 mm) = Nhiều năm tổn thương nhỏ tổn thương trung gian (3-4 mm) - Lô (n=10): Uống chế phẩm ĐHTKS 1/20 Dmax, tương đương 0,909 g bột thuốc/kg chuột (ĐHTKS 0,909) = Hai đến tổn thương trung gian nhiều tổn thương gộp (> mm) - Lô (n=11): Uống chế phẩm ĐHTKS (liều 1/10 Dmax) dung dịch meloxicam mg/kg thể trọng (Melo + ĐHTSK 1,818) Trong đó, số lt tính mức độ tổn thương dày 100% - Lô (n=11): Uống chế phẩm ĐHTKS (liều 1/10 Dmax) meloxicam liều mg/kg (Melo + ĐHTSK 1,818) Các liệu trình bày dạng Mean ± SEM (standard error of mean – sai số chuẩn số trung bình).Việc xử lý thống kê đề tài dùng phần mềm STATA 13.0 Sự khác biệt lô phân tích - Lơ (n=10): Uống chế phẩm ĐHTKS (liều 1/20 Dmax) meloxicam liều mg/kg (Melo + 78 = Loét thủng Xử lý kết Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 20 * Số * 2016 phương pháp Wilcoxon, Mann – Whitney – U test P < 0,05 cho có ý nghĩa thống kê Nghiên cứu Y học KẾT QUẢ Kết mơ hình gây viêm tác nhân carrageenin Kết thay đổi độ phù chân chuột theo thời gian lơ trình bày bảng bảng Bảng 1.Sự thay đổi độ phù chân (%) lô chuột uống ĐHTKS 1,818 g bột thuốc/kg kết hợp với meloxicam STT Lô Thời gian Chứng (n=10) Độ phù (%) Melo (n=10) ĐHTKS 1,818 (n=10) Melo + ĐHTKS 1,818 (n=7) Melo (n=13) Độ phù (%) P2-1 121,2± 23,84 113,7 ±29,15 Melo + ĐHTKS 1,818 (n=13) Ngày 86,99 ±29,17 47,51± 20,03** 45,38 61,64± 25,06* 29,14 Ngày 73,42± 25,97 31,01± 18,53* 57,76 47,8 ± 21,13* 34,9 Ngày 63,89± 15,53 20,46± 13,54** 67,98 36,21± 19,98** 43,32 Ngày Ngày 52,4 ± 9,86 36,83 ± 8,3 12,58 ± 9,5** ± 6,07** % GPSVC Độ phù (%) P3-1 % GPSVC 121,28 ± 49,8 Độ phù (%) P4-1 113,52 ± 21,6 69,07 ± 9,6* 51,83± 11,83* 35,25± 13,44* 26,65 ± 14,7* 105,8± 21,45 35,72 90,74± 21,24 15,56 40,42 78,29± 16,42 10 45,43± 25,16 * # 47,76 51,99 67,71± 17,51 7,78 58,29 59,76± 15,14 6,46 52,27± 13,57 42,6 ± 9,17 0,25 -0,15 34,87± 19,16 * ## 26,89± 15,03 ** ## 16,11± 10,04 ** ## 10,21± 10,34 ** ## 52,51 57,91 69,26 72,28 % GPSVC Độ phù (%) % GPSVC Ngày 107,46 ±26,67 71,57 ± 26,7** 33,4 81,17± 37,04* 24,46 Độ phù (%) P6-1 P6-5 102 ± 43,63 % GPSVC 59,71± 26,35 * # 44,44 75,99 23,01 ± 15,9** 56,09 11,73 ± 7,36 * 77,61 83,7 11,08 ± 8,44** 69,91 4,72 ± 2,91* 87,18 Ghi chú: % GPSVC: Tỷ lệ % giảm phù sau viêm cấp (*) P