BÀI GIẢNG XOẮN KHUẨN LEPTOSPIRA

XOẮN KHUẨN LEPTOSPIRA PXN Vi khuẩn Khoa Vi sinh Miễn dịch Viện Pasteur Tp HCM MỤC TIÊU 1.Giới thiệu xoắn khuẩn Leptospira Các kỹ thuật xét nghiệm chẩn đoán Leptospira Các biện pháp phòng bệnh Lịch sử 1886 　 Adolf Weil, phát bệnh Leptospirosis gọi bệnh Weil 1914 Ryo-kichi Inada Yasushi Ido, tìm thấy xoắn khuẩn leptospires 1917 Hideyo Noguchi xác định giống (Genus) Leptospira Dr Ryokichi Inada Dr Hideyo Noguchi Phân loại Con đường lan truyền Con đường lan truyền Dịch tễ CERoPath(2013): 500 000 ca/năm Vùng Đông Nam Á: khu vực dịch tễ đặc biệt cao TÍNH CHẤT VI SINH HỌC Hình thể cấu trúc • • • • Mảnh, xoắn, di động, có móc neo hai đầu Kích thước 0.25 x 6-25µm Màng có cấu trúc giống vi khuẩn Gram âm chứa LPS Sự đa dạng cấu trúc LPS tạo đa dạng kháng nguyên (serovar) Tính chất nuôi cấy: • • Là vi khuẩn ưa khí Phát triển tốt môi trường EMJH ( Ellinghasue-McCullough-Jonson-Harris) giàu dinh dưỡng • • • o o Nhiệt độ thích hợp: 28 C – 30 C pH: 6.8 – 7.2 Thời gian nuôi cấy: – 14 ngày Kính hiểm vi đen Kính hiểm vi đen (Dark-field microscope) sử dụng để quan sát Leptospira Leptospires bật sợi bạc đen Objective Position of specimen Reflected light Condenser Light entering the condenser Sức đề kháng • • • Tồn nước, môi trường có pH toan không phát triển  Leptospira chịu lạnh Chất mật gan làm Leptospira ngừng hoạt động, tan từ 10 – 15 phút Ở dịch dày 30 phút • Leptospira bị chết 56 C /10 phút, bị diệt dd Javelle phenol MAT Positive: More than 50% of Leptospira are agglutinated Titer=1:5120 Lưu ý • • Kiểm tra mẫu chứng âm: 100 % kháng nguyên tự Kiểm tra kháng nguyên đúng: cần tiến hành thường xuyên (tránh nhiễm chéo ghi tên chưa đúng): specific reference antisera/ monoclonal antibodies • Thao tác pha loãng huyết thanh: xác Microscopic agglutination test (MAT) Tiêu chuẩn vàng Ưu điểm: Độ đặc hiệu cao so sánh với thử nghiệm khác Xác định hiệu giá kháng thể serovar Nhược điểm: • • • • Cần nuôi cấy leptospira kháng nguyên phù hợp khu vực dịch tể Cần nhân viên đào tạo chuyên môn Mất thời gian Vì Serovar đặc hiệu nên không xác định bệnh leptospirosis trường hợp không tìm thấy hiệu giá hiệu giá thấp Enzyme linked Immunosorbent assay (ELISA) ELISA Ưu điểm: – – – Dễ thực Đã thương mại hóa Không cần nuôi cấy kháng nguyên Leptospira Nhược điểm: – – – – Ít đặc hiệu MAT, cho phản ứng chéo, cần xác định lại MAT Không xác định serovar Chỉ có antigen sử dụng (loài gây bệnh hay không gây bệnh) Cần trang thiết bị ( Máy đọc, máy rửa…) Micro Capsule Agglutination Test, MCAT Microcapsule, activated with glutaraldehyde Sonicated antigen Patient’s serum Healthy control’s serum Y No agglutination Y Y agglutination Y Y Positive Negative Representative result Click to edit Master text styles Second level Dilution of Patient sera Third level serum Fourth level Fifth level MAT ＋＋ MAT ＋ ＋＋ ＋ ＋ MAT: negative, MCAT: positive ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ MAT: positive, MCAT: negative Cut off titer NGUYÊN TẮC ĐIỀU TRỊ • Penicillin G: 10 - 15 ngày Người lớn : - 10 triệu đơn vị/ngày Trẻ em:100.000 đơn vị/kg • • • Có thể thay doxycyclin, ampicillin erythromycin Trường hợp nặng dùng cephalosporin quinolone Điều trị triệu chứng: Hồi phục nước, điện giải, trợ tim, truyền máu (nếu xuất huyết có sốc), hồi sức hô hấp lọc ngoại thận thể nặng CÁC VĂN BẢN PHÁP LUẬT • Thông tư liên Y tế, Lao động – thương binh xã hội, t9/TT-LB (25/12/1991) xếp bệnh Leptospira nghề nghiệp bảo hiểm • • Bệnh xoắn khuẩn vàng da thuộc nhóm B Luật Phòng, chống bệnh truyền nhiễm Thông tư Danh mục vi sinh vật gây bệnh truyền nhiễm theo nhóm nguy cấp độ an toàn sinh học phù hợp kỹ thuật xét nghiệm Bộ Y tế ngày 14 tháng năm 2012 (số 07/2012/TTBYT quy định xoắn khuẩn Leptospira thuộc nhóm nguy cấp độ PHÒNG BỆNH Rất khó khăn khó loại trừ động vật bị nhiễm • Một số biện pháp phòng bệnh sau: - Quản lý vật nuôi tránh thải nước tiểu, phân trực tiếp cống, ao hồ gây ô nhiễm nước - Cần trang bị bảo hộ lao động người có nguy cao đeo găng, ủng, đeo kính - Không tắm ao hồ gần khu vực chăn nuôi gia súc - Chưa có vacxin phòng bệnh Leptospira cho người Việt Nam Tiêm vacxin phòng bệnh, giám sát bệnh vật nuôi - Diệt chuột BIỆN PHÁP CHỐNG DỊCH Tổ chức: • Lập Ban chống dịch: trưởng ban: lãnh đạo quyền.Phó ban: lãnh đạo y tế địa thành viên khác như: Y tế, Chăn nuôi, Thú y, Công an, Hội Chữ thập đỏ v.v Phân công nhiệm vụ để đạo, huy động cộng đồng thực tốt công tác • Đối với vụ dịch nhỏ: sử dụng giường bệnh khu cách ly điều trị bệnh nhân Nếu có dịch lớn thành lập bệnh xá dã chiến cộng đồng BIỆN PHÁP CHỐNG DỊCH Chuyên môn: • • • Theo dõi, điều trị sớm phòng chống biến chứng Liều dự phòng:Dùng doxycyclin với liều 200 mg/1 lần/1 tuần    Xử lý môi trường: sát trùng, tẩy uế đồ vật bị nhiễm máu, nước tiểu bệnh nhân khu vực bị nhiễm nước tiểu súc vật Kiến nghị - Thiết lập đội ngũ đáp ứng nhanh đào tạo: nhà lâm sàng, bác sĩ thú y, chuyên gia y tế cộng đồng, nhà vi sinh học, kỹ thuật viên - Tham gia mạng lưới (LeptoNet, CERopath ) việc triển khai nghiên cứu Leptospirosis ... ti nc, mụi trng cú pH toan thỡ khụng phỏt trin c Leptospirachu c lnh Cht mt gan lm Leptospirangng hot ng, tan t 10 15 phỳt dch d dy 30 phỳt Leptospirab cht 56 C /10 phỳt, b dit bi dd Javelle... Nuụi cy Leptospira t mỏu, nc tiu hoc mụ Immuochromatography Sinh hc phõn t PCR Real time-PCR Leptospira Microscopic: Agglutination Test Patient serum MAT Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y 1~2 h Y Y Y Y Leptospira. .. C ch gõy bnh Nhim: tip xỳc trc tip vi t, nc, nc tiu ca ng vt mang bnh: Leptospira xõm nhp qua da hoc kt mc Sau nhim, Leptospira xut hin mỏu, xõm nhim n cỏc mụ v c quan, khu trỳ thn v thi qua