Phản ứng chuỗi polymerase (tiếng Anh: Polymerase Chain Reaction, viết tắt: PCR), cũng có sách gọi là phản ứng khuếch đại gen. PCR là một kỹ thuật phổ biến trong sinh học phân tử nhằm khuếch đại (tạo ra nhiều bản sao) một đoạn DNA mà không cần sử dụng các sinh vật sống như E. coli hay nấm men.
K THUT PCR Khó diễn tả nghĩa vai trò kỹ thuật PCR lĩnh vực công nghệ sinh học ngày Đây phơng pháp dễ dàng nhanh chóng để tách dòng nhân lên số lợng vô hạn đoạn trì trình tự ADN Sự phát minh kỹ thuật xứng đáng đợc coi bớc ngoặt hay kỹ thuật mang tính cách mạng thúc đẩy phát triển Công nghệ Sinh học đại J Watson Sự phát minh kỹ thuật PCR Kỹ thuật PCR hay đợc gọi phản ứng chuỗi trùng hợp polymeraza đợc Kary Mullis phát minh vào năm 1983 Hai năm sau (1985), phát minh đợc thức công bố tạp chí khoa học quốc tế Bằng công trình này, Kary Mullis đợc tặng giải thởng Nobel Hoá học năm 1993 Khỏi nim K thut PCR l mt ph ph ng phỏp cho phộp nhõn nhanh in vitro s lng ln mt on AND Ph Ph ng phỏp ny cú nhy rt cao v ngy ó tr thnh mt cụng c nghiờn cu u tay phn ln cỏc phũng thớ nghim cú liờn quan n gen v ADN thuc cỏc lnh vc khoa hc sinh hc, nụng nghip, mụi tr trng, y t, dc phm, phỏp y S tỏi bn DNA c th sng Nguyờn tc ca k thut PCR K thut PCR da trờn s xỳc tỏc ca enzym AND polymeraza nhõn bn mt on ADN nh hai on mi oligonucleotớt (primer) tng hp vi hai u hai mch n ca on ADN K thut ny c phỏt minh nh s phỏt hin Taq polymerase, l mt DNA polymerase t vi khun Thermus aquaticus sng sui nc núng Cỏc yờu cu cn thit cho PCR mi tng hp oligonucleotide (mi mi cú khong 20 20 50 nucleotide) (u33' OH t do) (u ADN khu khuụn ụn DNA polymerase chu nhit (Taqqpolymerase) (Ta loi nucleotide dNTP's dNTP's:: A, T, G, C Mg++, dung dch m, pH, etc etc u điểm bật kỹ thuật PCR -Có thể sử dụng trực tiếp ADN vừa chiết xuất, không cần tinh chế chế -Chuỗi ADN làm khuôn không cần tách chiết, v tính đặc hiệu ph ph n ứng oligo nucleotid làm mồi định định Phơng pháp tính nhiệt độ gắn mồi Tm ca primer: Chiu di ca primer Hm lng G/C i vi cỏc primers cú 15 - 26 nucleotides, tớnh Tm theo cụng thc Wallace (1989): Tm = [2(A+T) + 4(G+C)] C Trờn 2626-35 nucleotides Tm =22+1,46(2(G+C) +(A+T)) Real-time PCR Applications Quantification Mutation Detection Product Characterization C B A NTC 37 Detection of Anti-inflammatory effects of peptides The epithelium lining the airways is the first tissue to encounter pathogens and their products; it is therefore, critical to the innate immune system and is the front line of the host defence against invading microorganisms Some peptides which are classified in an antimicrobial group , can have an effect on immune system ,for example Intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1) is expressed at a low level in a subpopulation of haematopoietic cells, vascular endothelium, fibroblasts and epithelial cells However, its expression is dramatically increased at sites of inflammation, providing an important means of regulating cellcell interaction and thereby inflammatory responses Increase in Expression of 1(ICAM-1) will be lowered due to the effect of antimicrobial peptide & this can be detected by Real time PCR using SYBR Green.(12) REAL TIME PCR & ITS FUNCTIONS IN DIAGNOSIS 12/3/201 83 Real time PCR in forensic medicine The main task in The Forensic Medicine is to investigate deaths from unnatural causes Forensic science has embraced the use of DNA molecular biology tools for diagnostic purposes more than any other scientific field The process of routine forensic human identification involves sensitive PCR and can be performed successfully on most evidence materials found at a crime scene This real-time technology monitors the accumulation of PCR product with each cycle and allows assessment of each sample individually during the exponential growth phase.quantification assay has proven to be highly and DNA testssensitive,specific,rapid, performed by a U.S laboratorycost-effective have proved that bone flexible assay for of forensic casework fragments exhumed in theanalysis Ural Mountains in 2007 belong to two children of Russia's last czar samples 12/3/2013 REAL TIME PCR & ITS FUNCTIONS IN DIAGNOSIS 84 Some kites to detection of pathogens by Real Time PCR Adenoviruses different type Bordetella pertussis Herpsvirus (Bovine & Human all type ) Leukemia virus Klebsiella pneumoniae Influenza A virus Helicobacter pylori Hepatitis virus ( A,B,C,Delta ) HIV ( type1&2 ) Leishmania Neisseria meningitidis Respiratory Syncytial virus Shigella Streptococcus & 12/3/2013 REAL TIME PCR & ITS FUNCTIONS IN DIAGNOSIS 85 Conclusion PCR has proved to be a useful tool in research and diagnosis However, its use has also brought new challenges to research The sensitivity found in PCR technology and the availability of quantitative results will bring new problems to the interpretation of these results A great deal of work is needed to generate a basis of knowledge for correct interpretation of these tests In medicine, PCR-based diagnostics are just becoming widely used and because of the increased cost-effectiveness of the newer assays, knowledge for their interpretation will soon become available 12/3/2013 REAL TIME PCR & ITS FUNCTIONS IN DIAGNOSIS 86 Reference 1) Real time PCR By M Tevfik Dorak (Ed.) ISBN 0203967313 Master e-book 2) Clinical Applications of PCRSEECOND EDIITIION Edited by :Y M Dennis Lo, Rossa W K Chiu & K C Allen Chan 3) JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, May 2005, p 24352440 4) Am J Trop Med Hyg., 75(2), 2006, pp 212218 Copyright â 2006 by The American Society of Tropical Medicine and Hygiene 5) Using Real Time RT-PCR in quantitatively measurment of HIV-1 6) [Cooley's Anemia, Mediterranean Anemia Includes: Thalassemia Major (Beta-Thalassemia Major), Thalassemia Intermedia,Thalassemia Minor (BetaThalassemia Minor, Heterozygous Beta-Thalassemia)] 7) Quantitative Real-Time PCR Assay for Rapid Identification of Deletion Carriers in Hemophilia 8) Detection of unknown deleted genes in alpha-Thalassemia by real time pcr (Pasteur Institute of Iran) 9) Detection of cystic đbrosis alleles from single cells using molecular beacons and a novel method of asymmetric real-time PCR 10) Development of a Real-Time PCR Assay for Detection of Plasmodium Falciparum 11) Real-Time PCR for Detection and Identification of Plasmodium spp http://www.oligos.com/MolecularBeaconProbes.htm 12/3/2013 REAL TIME PCR & ITS FUNCTIONS IN DIAGNOSIS 87 This powerpoint was kindly donated to www.worldofteaching.com http://www.worldofteaching.com Is home to well over a thousand powerpoints submitted by teachers This a free site Please visit and I hope it will help in your teaching ... thuật xứng đáng đợc coi bớc ngoặt hay kỹ thuật mang tính cách mạng thúc đẩy phát triển Công nghệ Sinh học đại J Watson Sự phát minh kỹ thuật PCR Kỹ thuật PCR hay đợc gọi phản ứng chuỗi trùng hợp... pháp công nghệ ADN Mt s phng phỏp PCR ci tin ReverseReverse-transcriptase PCR Nested PCR Inverted PCR Colony PCR Multiplex PCR Quantitative realreal-time PCR ... tả nghĩa vai trò kỹ thuật PCR lĩnh vực công nghệ sinh học ngày Đây phơng pháp dễ dàng nhanh chóng để tách dòng nhân lên số lợng vô hạn đoạn trì trình tự ADN Sự phát minh kỹ thuật xứng đáng đợc