Bài viết trình bày các gien được sử dụng trong hệ thống học phân tử; các kỹ thuật phân tử đã được áp dụng; phân tích đặc điểm phân tử để xác định loài mới; phân loại một số loài và phân loài động vật; quan hệ phả hệ và tiến hóa của một số nhóm loài động vật; giám định một số động vật thuộc công ước CITES.
31(3): 1-9 Tạp chí Sinh học 9-2009 MộT Số THàNH TựU BƯớC ĐầU áP DụNG Kỹ THUậT PHÂN Tử Để PHÂN LOạI MộT Số NHóM ĐộNG VậT QUAN TRọNG VIệT NAM NGUYễN NGọC CHÂU, PHAN Kế LONG, TRịNH QUANG PHáP, ĐặNG TấT THế Viện Sinh thái Tài nguuyên sinh vật Mặc dù hình thái học đ , tiếp tục đóng vai trò quan trọng phân loại học nguyên tắc cấp độ phân loại học nhiều trờng hợp, phân tích hình thái giữ vai trò đắc lực việc cung cấp nhanh chóng đặc điểm chẩn loại rõ ràng xác đến loài Tuy nhiên, số trờng hợp đặc điểm hình thái học khó đa kết luận xác mặt phân loại Hơn nữa, đặc điểm hình thái học hầu nh không đáp ứng đợc yêu cầu chẩn loại mức độ dới loài (phân loài) mà đòi hỏi kỹ thuật phân loại kỹ thuật phân tử, bao gồm: điện di prôtêin, kỹ thuật huyết miễn dịch kỹ thuật phân tích DNA Các thị phân tử đ trở thành công cụ đắc lực có lợi cho định loại đến loài nh cho phép chẩn loại đến mức phân loài, quần thể chí phân biệt mức độ cá thể Sự phát triển nhanh chóng mặt phơng pháp luận đ cho phép triển khai kỹ thuật phân tử cho việc chẩn loại định loại tất nhóm động vật Các phân tử prôtêin DNA công cụ đặc biệt có lợi cho định loại đến loài so với phân loại hình thái, chúng bị chi phối yếu tố môi trờng thân ngời nghiên cứu Kết thu đợc dễ dàng so sánh giải đoán so với đặc điểm hình thái phức tạp Hiện đ hình thành xu hớng phân loại học đặc điểm di truyền đợc sử dụng phối hợp với đặc điểm hình thái Trong số trờng hợp, kỹ thuật phân tử riêng biệt có giá trị khẳng định tuyệt đối thích hợp cho công việc định loại thờng qui Do u phân tích đặc điểm phân tử định loại mà áp dụng kỹ thuật phân tử đ tăng lên cách nhanh chóng Từ năm 2000 đến nay, số nhóm nghiên cứu Viện sinh thái Tài nguyên sinh vật đ áp dụng kỹ thuật phân tử để phân loại số nhóm động vật Việt Nam Đến đ có 40 công bố nớc quốc tế liên quan đến việc áp dụng kỹ thuật phân tử để phân loại động vật Việt Nam Bài báo tổng quan cập nhật thành tựu kết áp dụng kỹ thuật phân tử để nghiên cứu phân loại số nhóm động vật Việt Nam, đồng thời thảo luận xu hớng phát triển lÜnh vùc nµy ë ta thêi gian tíi I PHƯƠNG PHáP NGHIÊN CứU Các gien đợc sử dụng hệ thống học phân tử Các tế bào động vật đa bào Eukaryotic chứa hệ gien khác nhau, nằm nhân ty thể (mitochondria) Trong hệ thống phân loại phân tử, sở số liệu phân tử đợc xác định từ nguồn Nhằm xác định quan hệ tiến hóa thực thể (đơn vị phân loại), mà thực chất đoạn gien phân tử đợc lựa chọn cho nghiên cứu trình tự Gien RNA ribosom nhân Các gien ribosom nhân, gien m hóa rRNA chiếm đến 2/3 toàn khối lợng ribosom đủ lớn phục vụ cho phân tích Các gien đợc xếp đợc tổ chức thành nhóm đơn vị gien nhỏ (18S) đơn vị gien lớn (26-28S) đợc tách biệt gien 5.8S nhỏ Ngoài đoạn m rRNA chứa chuỗi đệm (đoạn chèn) bao gồm đệm m (ETS) đệm m ITS1 ITS2 Các đơn vị đợc tách biệt đoạn liên kết (IGS) đợc xem nh đệm không phiên m (NTS) (hình 1A) Các gien 18S 28S tiến hóa chậm đợc sử dụng so sánh độ dài phân ly đơn vị phân loại Trong đoạn đệm đệm có tỷ lệ tiến hóa cao đợc sử dụng để tái cấu trúc nhánh tiến hóa so sánh phả hệ loài gần đơn vị dới loài Vùng ITS- rRNA đợc sử dụng phổ biến thích hợp để phân tích đặc điểm phân tử nhóm sinh vật nhỏ nh tuyến trùng vi sinh vật khác A Ribosomal DNA B Mitochondrial DNA Hình Sơ đồ vùng gien sử dụng cho nghiên cứu phân loại quan hệ phát sinh Dùng phân loại cấp bậc cao (họ); Phân loại loài dới loài; Phân loại loài; Phân loại loài dới loài; Phân loại dới loài Mitochondrial DNA Mitochondrial DNA (mtDNA) đợc sử dụng để kiểm tra cấu trúc quan hệ tiến hóa quần thể nhóm sinh vật khác Hệ gien mitochondria phần lớn sinh vật bao gồm 12 gien m hóa prôtêin, 22 gien vËn chun RNA (tRNA); vµ gien rRNA m hãa SSU LSU rRNAs Ngoài ra, có vùng không chứa m gọi vùng giàu AT (AT-rich region) vùng có hàm lợng cao gốc adenine thymine Trong hệ gien mitochondria chứa điểm khởi đầu cho nhân đoạn (mở chuỗi xoắn) phiên m Các chuỗi mtDNA tích tụ gốc thay nhiều so với chuỗi ITS có gốc A + T giàu (chiếm khoảng 75-80%) Mặc dù cã tû lƯ cao c¸c gèc thay thÕ, mtDNA rÊt có ích cho nghiên cứu phát sinh mức độ phân loại taxon bậc thấp (phân loài, quần thể), nhng không thích hợp việc hiệu đính thay sử dụng vùng sai mặt phát sinh cấp độ phân loại cao Vì vậy, mtDNA đợc sử dụng phổ biến để phân tích đặc điểm phân tử nhóm động vật có xơng sống Các kỹ thuật phân tử đợc áp dụng a Phản ứng chuỗi trùng hợp (PCR) Kỹ thuật PCR cho phép khuếch đại nhận biết đoạn phân tử DNA Đây kỹ thuật phân tích nhanh, đơn giản với giá rẻ để nhân đoạn (khuếch đại) phân tử DNA nhờ enzim xúc tác Phơng pháp cần DNA khuôn chứa đoạn DNA cần khuếch làm vật liệu ban đầu, đoạn mồi oligonucleotide (primer) gắn đầu đoạn DNA cần khuếch đại, enzim DNA polymerase deoxynucleotide triphosphate (dATP, dCTP, dGTP, dTTP) đợc trộn dung dịch đệm (buffer) chứa ion magnesium (MgCl2) Các DNA mục tiêu đợc khuếch đại PCR phục vụ cho phân tích khác nh RFLP, dot blot sequencing Ngoài ra, số trờng hợp đoạn DNA sau khuếch đại đợc sử dụng nh marker chẩn loại cho nhóm hoạc loài sinh vật b Kỹ thuật phân tích đa hình chiều dài đoạn cắt giới hạn PCR (PCR-RFLP) Sự biến đổi trình tự sản phẩm PCR đợc xác định enzim giới hạn khác cắt thành đoạn, đoạn DNA đợc tách biệt diện di Nếu có sai khác trình tự đoạn DNA vùng nhận biết enzim cắt giới hạn kết enzim cắt tạo sản phẩm đa hình đoạn cắt giới hạn (RFLP) Tùy nhóm đối tợng mà sử dụng mẫu PCR-RFLP vùng phiên m ITS gien RNA ribosome (rRNA), ITS-rDNA mtDNA làm dấu hiệu tin cậy để phân biệt loài Kỹ thuật đ đợc áp dụng để phân tích đặc điểm phân tử số loài tuyến trùng ký sinh gây bệnh côn trùng Việt Nam [23-30] c Kỹ thuật giải trình tự DNA (Sequencing DNA) Quá trình xác định trật tự nucleotide dọc theo dải DNA gọi giải trình tự Hiện có phơng pháp khác để tiến hành công việc Đó phơng pháp phân r hóa học (Maxam-Cilbert) phơng pháp khác đợc sử dụng phổ biến gọi phơng pháp kết thúc chuỗi (Sanger) Phơng pháp giải trình tự kết thúc chuỗi gần giống với kỹ thuật PCR bao gồm trình tổng hợp dải DNA bổ sung cho dải đơn làm khuôn có sẵn Phản ứng trình tự bao gồm DNA khuôn, enzim DNA polymerase với đệm phản ứng, mồi hỗn hợp deoxynucleotide (dNTP) dideoxynucleotide (ddNTP) Vì vậy, kết tạo chuỗi nucleotide với chiều dài khác Các chuỗi sau đợc tách rời điện di Nhờ cảm biến ghi màu huỳnh quang dải kết đợc xử lý chơng trình computer hiển thị trật tự gốc nucleotide dới dạng file sắc phổ Kỹ thuật đợc áp dụng phổ biến để phân tích đặc điểm phân tử tất nhóm, loài động vật Việt Nam II KếT QUả NGHIÊN CứU Mặc dù kỹ thuật phân tử đợc áp dụng cho phân loại học đông vật ë ViƯt Nam, nh−ng víi nh÷ng −u thÕ cđa chóng mà thời gian ngắn đ có 50 loài thuộc nhiều nhóm động vật khác đợc phân tích đặc điểm phân tử (bảng 1) Những nghiên cứu phân loại học phân tử kết nghiên cøu lÜnh vùc nµy tËp trung theo h−íng sau: xác định loài cho khoa học, chuẩn xác hóa số loài phân loài, đánh giá đa dạng di truyền quan hệ tiến hóa loài phân loài động vật phân tích, giám định vật mẫu phục vụ quản lý động vật theo công ớc CITES Việt Nam Phân tích đặc điểm phân tử để xác định loài Đây thành tựu bật việc áp dụng kỹ thuật DNA cho phân loại mét sè nhãm tuyÕn trïng quan träng ë ViÖt Nam Trên sở phân tích toàn vùng phiên m ITS-rDNA Nguyen cs [18] vµ Trinh cs [33] đ xác định loài tuyến trùng thuộc giống Radopholus R duriophilus R arabocoffeae ký sinh gây hại sầu riêng cà phê tỉnh Đắk Lắc Kết phân tích đ bổ sung loài tuyến trùng quan trọng vào danh sách tuyến trùng ký sinh gây hại giống Radopholus, loài đ biết R similis Gần Trinh et al [34] đ phát giống phân họ tun trïng ký sinh thùc vËt míi lµ Apratylenchinae n subfam., Apratylenchus n gen vµ loµi míi cđa gièng Apratylenchus vietnamensis Apratylenchus binhi từ vùng cà phê Đăk Lắc Quảng Trị Việc mô tả giống loài đợc coi phát quan trọng trờng hợp hy hữu khoa học tuyến trùng thực vật Trên sở phân tích đặc điểm phân tử vùng ITS-rDNA, Phan et al., 2001a,b; 2003, 2005; 2006 [24-29] vµ Pham et al., 2000 [19] đ xác định 10 loài tuyến trùng ký sinh gây bệnh côn trùng cho khoa häc Trong sè nµy cã loµi míi gièng Steinernema lµ: S tami, S sangi, S locim S thanhi, S robustispiculum, S sasonense, S backanense, S cumgarense vµ S eapokense; loµi míi thc gièng Heterorhabditis lµ H baujardi Ngoµi loài khác đặc điểm phân tử loài cho khoa học đợc nghiên cứu đặc điểm hình thái hình thái lợng để công bố thức Phân tích, đánh giá sai khác đặc điểm phân tử loài sán phổi Việt Nam, Phạm Ngọc Doanh cs [20-23] đ xác định loài sán phỉi ký sinh ë ®éng vËt ViƯt Nam, ®ã cã mét loµi míi cho khoa häc lµ Paragonimus vietnamensis sp.n đợc mô tả từ động vật tỉnh Yên Bái Bảng Danh sách loài động vật đợc phân tích giám định phân tử DNA STT 4 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 Tên loài Radopholus duriophilus Nguyen et al., 2003 Radopholus arabocoffeae Trinh et al., 2004 Apratylenchus vietnamensis Trinh et al., 2008 Apratylenchus binhi Trinh et al., 2008 Heterorhabditis indica Poinar et al., 1992 Heterorhabditis baujardi Phan et al., 2003 Steinernema tami Pham et al., 2000 S sangi Phan et al., 2001 S loci Phan et al., 2001 S thanhi Phan et al., 2001 S robustispiculum Phan et al., 2005 S sasonense Phan et al., 2006 S backanense Phan et al., 2006 S cumgarense Phan et al., 2006 S eapokense Phan et al., 2006 Steinernema sp1 Steinernema sp2 Steinernema sp3 Steinernema sp4 F gigantica Cobbold 1856 Paragonimus heterotremus Chen et Hsia,1964 Paragonimus proliferus Hsia et Chen, 1964 Paragonimus vietnamensis Pham et al., 2008 Paragonimus westermani (Kerbert, 1878) Pheretina aspergillum (Perrier) Pheretina robusta (Perrier) Rhinopithecus avunculus Dollman, 1912 Pygathrix nemaeus nemaeus (Linnaeus, 1771) P nemaeus cinerea Nadler, 1997 30 31 32 33 P nigripes (Milne-Edward, 1871) Trachypithecus germaini (Schlegel, 1876) T barbei holotephreus (Anderson, 1879) T hatinhensis (Dao, 1970) Nhãm sinh vËt TuyÕn trïng thùc vËt TuyÕn trïng thùc vËt TuyÕn trïng thùc vËt TuyÕn trïng thùc vËt TuyÕn trïng epn TuyÕn trïng epn TuyÕn trïng epn TuyÕn trïng epn TuyÕn trïng epn TuyÕn trïng epn TuyÕn trïng epn TuyÕn trïng epn TuyÕn trïng epn TuyÕn trïng epn TuyÕn trïng epn TuyÕn trïng epn TuyÕn trïng epn TuyÕn trïng epn TuyÕn trïng epn S¸n l¸ gan lín S¸n l¸ phỉi S¸n l¸ phỉi S¸n l¸ phỉi Sán phổi Giun đất Giun đất Voọc mũi hếch Phân loài voọc vá chân đỏ Phân loài voọc vá chân xám Voọc vá chân đen Voọc bạc Phân loài voọc xám Voọc gáy trắng Nguồn công bố 15, 17 16, 33 34 34 15, 27 15, 27 15, 19 15, 25 15, 26 15, 26 15, 27 15, 28 15, 28 15, 28 15, 28 15 15 15 15 3, 4, 11, 12 22 20 21 32 32 6 5 34 35 T delacouri (Osgood, 1932) T francoisi francoisi (Pousargues, 1898) 36 T francoisi poliocephalus (Trouessart, 1911) 37 38 39 40 41 42 T barbei subsp Paguma larvata (Smith, 1827) Lepus sinensis Gray, 1832 Tylototriton sp Naja atra Cantor,1842 Naja siamensis Lureti, 1768 43 Naja kaouthia Lession, 1831 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 Manis sp Sus sp Sus sp (dom.) Bos gaurus Smith, 1827 Bos sp (dom.) Bubalus bubalis Linnaeus, 1758 Capricornis sumatraensis Bechstein, 1799 Ceratotherium simum simum (Burchell, 1987) Ceratotherium simum (Burchell, 1987) Aerodramus fuciphagus (Thunberg, 1812) Xác định đặc điểm phân tử để tu chỉnh phân loại số loài phân loài động vật Trên sở phân tích đặc điểm phân tử DNA cđa s¸n l¸ gan lín (gièng Fasciola), ký sinh ë ngời gia súc, Đặng Tất Thế cs [3, 4] đ xác định dạng sán gan ViƯt Nam chØ cã mét loµi nhÊt lµ F gigantica mà loài F hepatica nh kết phân loại hình thái trớc Kết tạo sở để giải thích bệnh học, dịch tƠ cho bƯnh s¸n l¸ gan lín ë ng−êi, còng nh phát triển chế phẩm chẩn đoán bệnh sở miễn dịch học Trần Thị Thanh Bình Đặng Tất Thế [31] đ dùng thị DNA để phân biệt hai loài giun đất Pheretina aspergillum Pheretina robusta Đây loài gây tranh c i mặt hình thái Đặc điểm phân tử DNA cho thấy sai khác di truyền lớn quần thể loài, loài Pheretina aspergillum Voọc mông trắng Phân loài voọc má trắng Phân loài voọc đầu vàng Phân loài voọc xám Cầy vòi mốc Thỏ xám Cá cóc Rắn hổ mang Rắn hổ mang Thái Lan Rắn hổ mang kính Tê tê Lợn rừng Lợn nuôi Bò tót Bò nuôi Trâu rừng Sơn dơng Tê giác trắng Nam Phi Tê giác đen Nam Phi Chim yÕn 5 5 10 Ch−a c«ng bè 8, 13, 14 8, 13, 14 8, 13, 14 Ch−a c«ng bè Ch−a c«ng bè Ch−a c«ng bè Ch−a c«ng bè Ch−a c«ng bè Ch−a c«ng bè Ch−a c«ng bố Cha công bố Cha công bố Chỉ thị phân tử DNA đ cho phép khẳng định quần thể rắn hổ mang thuộc giống Naja nớc ta gåm cã loµi lµ Naja atra, Naja siamensis Naja kaouthia [13, 14], có loài nh kết định loại hình thái Kết phân tích phân tử đ tạo sở quan trọng cho việc chọn giống nuôi rắn đặc biệt cho việc tạo huyết kháng nọc rắn đặc hiệu Phân tích đặc điểm di truyền đàn chim yến Bình Định Khánh Hòa, Đặng Tất Thế cs [2] đ xác định nguồn gốc chúng từ quần thể chim yến nuôi nớc quanh khu vực di c đến Kết nghiên cứu hữu ích cho việc phát triển nghề nuôi chim yến đợc hình thành nớc ta năm gần đây, có việc xuất nhiều đàn chim yến làm tổ ®Êt liỊn ë c¸c tØnh phÝa Nam Quan hƯ phả hệ tiến hóa số nhóm loài động vật Trên sở phân tích trình tự vïng ITSrDNA cđa 34 chđng Steinernema cđa ViƯt Nam vµ sử dụng trình tự 48 chủng Steinernema khác giới, Nguyễn Ngọc Châu, Phan Kế Long [16] đ tạo dựng phát sinh Steinernema Ngoài việc xác lập đợc 13 nhánh phân loại ứng với 13 loài mới, phát sinh cho phép phân biệt nhóm loài có quan hệ gần mặt di truyền: i) nhãm “feltiae-krausseioregonense”; ii) nhãm “glaseri-arenariumlongicaudatum-karii”; iii) nhãm “carpocapsaetami-scapterisci”; iv) nhãm bicornutumceratophorum-riobrave v) nhóm intermedium-affine Các nhóm tơng ứng với nhóm hình thái sở chiều dài ấu trùng cảm nhiễm Trong loài phát từ Việt Nam có mặt nhóm đầu nhóm có đại diện phân bố vùng khí hậu nhiệt đới cận nhiệt đới Cũng tơng tự, phân tích trình tự vùng ITS-rDNA 16 chủng Heterorhabditis phân lËp tõ ViƯt Nam, Ngun Ngäc Ch©u, Phan KÕ Long [16] tạo dựng phát sinh Heterorhabditis dạng topology Cấu trúc phả hệ dạng maximum likelihood cho thấy loài H baujardi nhóm với loài H indica H hawaiiensis tạo thành nhánh loài nhiệt đới cận nhiệt đới với tính tơng đồng di truyền tơng đối cao Nhóm sán phổi (Paragonimus spp.) Việt Nam không đợc nghiên cứu toàn diện đặc điểm hình thái phân tử mà sở phân tích đặc điểm phân tử Phạm cs [18-21] đ vị trí phân loại, quan hệ họ hàng nguồn gốc phát sinh loài sán phổi miền bắc Việt Nam so với loài phân bố khu vực châu giới Lần tiến hóa phân tử DNA hệ gien ty thể 11 loài phân loài thc gièng vộc ë ViƯt Nam lµ Rhinopithecus, Pygathrix Trachypithecus thuộc phân họ voọc (Colobinae) đ đợc Đặng Tất Thế cs [5-7] nghiên cứu cách có hệ thống đầy đủ Kết đ phân tích dấu hiệu phân tử tất đại diện phân bố Việt Nam so sánh với loài phân loại voọc khác Trung Quốc đ góp phần làm rõ nhiều vấn đề vị trí phân loại quan hệ phát sinh nhóm thú linh trởng quí này, nhng nhiều bất đồng phân loại học hình thái tồn thời gian dài Một số động vật hoang d quý khác nh cầy vòi mốc (Paguma larvata) thỏ xám (Lepus sinensis) đ đợc phân tích đặc điểm phân tử Kết phân tích đ xác định đa dạng di truyền loài Việt Nam Giám định số động vật thuộc công ớc CITES Ngoài nhóm, loài động vật đợc nghiên cứu đặc điểm phân tử phục vụ cho mục đích khoa học, hàng loạt động vật quý thuộc danh sách cấm hạn chế săn bắn buôn bán theo công ớc CITES đ đợc giám định nh tê tê (Manis sp.), lợn rừng (Sus sp.), bò tót (Bos gaurus), trâu rừng (Bubalus bubalis), sơn dơng (Capricornis sumatraensis), tê giác trắng tê giác đen nam phi (Ceratotherium simum subspp.) Đặc biệt, việc xử lý sừng tê giác châu Phi nhập phức tạp, chúng thuộc phân loài thuộc mức xử lý khác nhau, việc sử dụng thị DNA đ cho phép phân biệt đợc phân loài Triển vọng áp dụng kỹ thuật phân tử để phân loại động vật Việt Nam Mặc dù kỹ thuật phân tử đợc áp dụng cho phân loại động vật Việt Nam, nhng đ cho thấy công cụ hiệu định loại nh nghiên cứu quan hệ chủng loại phát sinh nhóm sinh vật, sinh vật đặc hữu Việt Nam Nh đ giới thiệu trên, kỹ thuật tiên tiến tiếp tục đợc phát triển nhanh chóng đóng vai trò việc xác lập hệ thống định loại nhóm sinh vật Việc áp dụng kỹ thuật phân tử cho phân loại ® rÊt phỉ biÕn trªn thÕ giíi nh−ng ë ViƯt Nam số khó khăn điều kiện trang thiết bị, vật liệu hóa chất sử dụng cho kỹ thuật phân tử cha sẵn có thị trờng Việt Nam Ngoài ra, hầu hết cán nghiên cứu, phân loại động vật - có kỹ phân loại hình thái tốt nhng lại cha đợc đào tạo kỹ phân loại phân tử Các nghiên cứu áp dụng kỹ thuật đòi hỏi thiết bị kinh phí đầu t cao hạn chế việc áp dụng kỹ thuật cho phân loại Hiện nay, nhiều công bố quốc tế phân loại học, công bố loài mới, số nhóm động vật, mô tả hình thái, đặc điểm phân tử đợc coi nh yêu cầu bắt buộc để minh chứng xác thực phân loại Vì vậy, tiếp cận với công bố quốc tế phân loại học không tiếp cận áp dụng kỹ thuật phân tử để phân loại Do đó, tơng lai gần, chắn kỹ thuật phân tử trở thành phơng tiện đắc lực bắt buộc để nghiên cứu phân loại học cho hầu hết nhóm động vật Việt Nam Kỹ thuật phân tử không phục vụ cho nghiên cứu phân loại học mà công cụ giám định động vật phục vụ quản lý buôn bán động vật quý theo công ớc CITES Hiện nay, việc buôn bán bất hợp pháp mẫu vật động vật hoang d quí thách thức lớn cho công tác giám định, thờng khó định danh tiêu chúng phận đ bị chế biến, không khả để định loại xác phơng pháp hình thái truyền thống Chỉ thị phân tử DNA công cụ cho kết định danh xác với phần nhỏ từ mẫu vật cần giám định, kể đ bị biến dạng hoàn toàn Trong năm qua, Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật - Cơ quan thẩm quyền CITES Việt Nam đ giám định nhiều mẫu vật động vật hoang d quý thuộc diện cấm săn bắn, buôn bán, giúp quan chức có sở khoa học để xử lý vụ việc liên quan đến pháp luật Việc giám định phân tử giúp quan chức ngăn chặn đợc buôn bán bất hợp pháp động vật hoang d , mà góp phần tạo điều kiện cho doanh nghiệp phát triển kinh doanh hợp pháp động vật hoang d đợc Nhà nớc cho phép TàI LIệU THAM KHảO Đặng Tất Thế, Lê Xuân Cảnh, Nguyễn Hồng Vân, 2007: Báo cáo Hội thảo quốc gia lần thứ Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội: 368-373 Đặng Tất Thế, Đỗ Anh Dũng, Lê Xuân Cảnh, 2003: Tạp chí Công nghệ sinh học, 1: 189-195 Đặng Tất Thế, Lê Quang Hùng, Cao Văn Viên, 2003: Tạp chí Nghiên cứu Y học, 23: 120-126 Đặng Tất Thế cs., 2001: Thông tin Y học lâm sàng, 4: 77-83 Đặng Tất Thế, Lê Xuân Cảnh, 2005: Tạp chí Sinh học, 27(4A): 63-70 Đặng Tất Thế, Lê Xuân Cảnh, Nông Văn Hải, 2004: Tạp chí Công nghệ sinh học, 2: 25- 32 Đặng Tất Thế, Lê Xuân Cảnh, Nông Văn Hải, 2004: Tạp chí Công nghệ sinh học, 2: 169-178 Đặng Tất Thế, Ngô Thị Kim, Lê Quang Thịnh, 2004: Những vấn đề Nghiên cứu khoa häc sù sèng Nxb Khoa häc vµ Kü thuËt, Hµ Néi: 153-155 Dang Tat The, Yukifumi Nawa, 2005: Federation of Asian Paratologist, 1: 57-61 10 Đỗ Anh Dũng, Đặng Tất Thế, Đặng Huy Huỳnh, 2004: Những vấn đề Nghiên cứu khoa học sống Nxb Khoa häc vµ Kü thuËt, Hµ Néi: 343- 347 11 Le T H et al., 2002: Abst of book of the 10th Inter Congr on infection diseases, Singapore: 163 12 Lª Thanh Hòa cs., 2003: Tạp chí Sinh học, 25(1): 39- 44 13 Lê Thanh Hoà cs., 2001: Tạp chí Phòng chống sốt rét bệnh ký sinh trùng, 3: 73-79 14 Ngô Thị Kim, Đặng Tất Thế, 2004: Những vấn đề Nghiên cứu khoa häc sù sèng Nxb Khoa häc vµ Kü thuËt, Hµ Nội: 447- 450 15 Ngô Thị Kim, Đặng Thị Thanh Hà, Đặng Tất Thế, 2003: Những vấn đề Nghiên cứu khoa học sống Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội: 934-936 16 Nguyễn Ngọc Châu, Phan KÕ Long, 2005, T¹p chÝ Sinh häc, 27: 5-11 17 Nguyễn Ngọc Châu cs., 2005: Báo cáo Hội thảo quốc gia lần thức Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội: 33-42 18 Nguyen N C et al., 2003: Nematology, 5: 549-558 19 Pham V L et al., 2000: Russian J Nematology, 8: 33-43 20 Pham N D et al., 2007: Parasitology Research, 101: 1495-1501 21 Pham N D et al., 2007: Parasitology Research, 100: 1075-1082 22 Pham N D et al., 2008: Parasitology Research, 102: 677-683 23 Pham N D et al., 2009: Parasitology Research 104: 1149-55 24 Phan K L et al., 2000: Russian J Nematology, 8: 33-43 25 Phan K L., Nguyen N C., Moens M., 2001a: Nematology, 3: 503-514 26 Phan K L, Nguyen N C & Moens M., 2001b: Russian J Nematology, 9: 1-7 27 Phan K L., Subbotin S A., Nguyen N C., Moens M., 2003: Nematology, 5: 367-382 28 Phan K L., Spiridonov S E., Subbotin S A., Moens M., 2006: Russian J Nematology, 14: 11-29 29 Phan L K et al., 2005: Systematic Parasitology, 60: 23-32 30 Phan KÕ Long, Ngun Ngäc Ch©u, Maurice Moens, 2007: Báo cáo Hội thảo quốc gia lần thứ Sinh thái Tài nguyên sinh vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội: 168-173 31 Phan Kế Long, Nguyễn Ngọc Châu, Maurice Moens, 2008: Tạp chí Sinh học, 30(3): 12-17 32 Trần Thị Thanh Bình, Đặng Tất Thế, 2006: Tạp chí Khoa học, đại học S phạm Hà Néi, 4: 130-135 33 Trinh Q P et al., 2004: Nematology, 6: 681-694 34 Trinh Q P et al., 2009: Nematology, 11: 1-17 PRELIMINARY ACHIEVEMENT OF MOLECULAR TAXONOMY OF SOME IMPORTANT ANIMAL GROUPS IN VIETNAM NGUYEN NGOC CHAU, PHAN KE LONG, TRINH QUANG PHAP, §ANG TAT THE SUMMARY The molecular taxonomy in Vietnam has been started since year 2000 In the beginning stage a numerous molecular techniques such as PCR, PCR-RFLP, and sequencing has been applied for taxonomy of some important animals and plant in Vietnam To date the molecular characters of 51 indigenous animal species and subspecies has been characterized Based on these molecular data some about twenty new species to science were revealed Among them, four new species of plant parasitic nematodes (Radopholus spp and Apratylenchus spp.), eleven new species of enthomopathogenic nematodes (Steinernema spp and Heterorhabditis spp.) and one species of pulmonary trematodes (Paragonimus vietnamensis) The phylogenetic tree constructed from generic data has allowed to clarify some unclear and confusion situation on taxonomic of some species as well as subspecies of primates (Rhinopithecus avunculus, Pygathrix nemaeus subspp., P nigripes, Trachypithecus germaini, T barbei holotephreus, T hatinhensis, T delacouri, T francoisi subspp and T barbei subsp), swallow (Aerodramus fuciphagus), earth worm (Pheretina spp.), forest hare (Lepus sinensis), grey civet (Paguma spp.) and Indian cobra (Naja spp.) The phylogenetic trees produced based on maximum parasimony and maximum likelihood analyses were allowed to clarify and revise with the interpretation of the taxonomic position and origin some indigenous plant parasitic and enthomopathogenic nematodes in Vietnam In addition, the molecular techniques has also been assembled molecular proofs for preventing illegal trade of animals and plants belonging to CITES convention The paper also been affirmed the advantage of molecular techniques that are not only as useful tools for taxonomy but they are also very real measure for phylogenic inference Subsequently, the necessary of molecular approach in taxonomy and phylogeny as well as biological conservation of animals and plants in Vietnam was discussed in the paper Ngµy nhËn bµi: 12-11-2008 ... biệt đợc phân loài Triển vọng áp dụng kỹ thuật phân tử để phân loại động vật Việt Nam Mặc dù kỹ thuật phân tử đợc áp dụng cho phân loại động vật Việt Nam, nhng đ cho thấy công cụ hiệu định loại nh... buộc để minh chứng xác thực phân loại Vì vậy, tiếp cận với công bố quốc tế phân loại học không tiếp cận áp dụng kỹ thuật phân tử để phân loại Do đó, tơng lai gần, chắn kỹ thuật phân tử trở thành. .. định loại nhóm sinh vật Việc áp dụng kỹ thuật phân tử cho phân loại đ phổ biến giới nhng Việt Nam số khó khăn điều kiện trang thiết bị, vật liệu hóa chất sử dụng cho kỹ thuật phân tử cha sẵn