báo cáo thực hành an toàn thực phẩm bài 1 xác định dư lượng no3 trên rau

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM

DANH SÁCH SINH VIÊN NHÓM 2

123456

BÀI 1: XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG NO3- TRÊN RAUI Khái quát chung

 Nitrit có thể là tác nhân gây ung thư, làm thay đổi tính miễn dịch của cơ thể vàđộc cho phôi thai.

 Có thể bị dị ứng. Phá hủy vitamin.

c Triệu chứng cấp tính: Đau bụng, buồn nôn, tiêu chảy.II Định lượng NO-

3 bằng phương pháp so màu với axit disunfophenic

1 Nguyên tắc

NO3- + Disunfophenic Trinitrophenol (màu vàng) Cường độ phản ứng phụ thuộc vào các chất tham gia phản ứng  [NO3-] càng cao thì trinitrophenol nhiều hơn  màu vàng đậm hơn. Xác định cường độ màu bằng quang phổ ở 420 – 460nm.

 Xác định được nồng độ NO3- trong dung dịch.2 Cách tiến hành

a Xây dựng 1 đồ thị đường chuẩn

Đồ thị đường chuẩn phụ thuộc vào dung dịch KNO3 0.01 mg/ml Từ dung dịchgốc ta pha ra nhiều dung dịch có nồng độ biết trước và có nồng độ tăng dần.

- Xác định phương trình đường chuẩn dung dịch KNO3 0.01mg/ml.

pH= 7.5 - 8

VKNO3(ml) 0 5 10 15 20 25

[N03-] (mg/ml)

0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01

Cô cạn dung dịch đến khi còn 1 giọt Để nguội, sau đó thêm 1ml axitdisunfophenic láng đều bề mặt cặn và thêm 20ml H2O rồi từ từ thêm NAOH 10%đến khi dung dịch có màu vàng không đổi Lên thể tích dung dịch 50ml => Xác địnhcường độ màu bằng quang phổ kế.

b Tiến hành phân tích mẫu: Mẫu rau cải ( 5,21g)

Mẫu được rửa sạch vẩy ráo nước, thái nhỏ trộn đều, cân 5,21( g ) rau cải ngồngcho vào bình tam giác 250ml, thêm 75ml nước cất Sau đó đun sôi 3 phút, để nguội,rồi lọc lấy toàn bộ dịch Lên thể tích dịch 100ml Hút 10ml vào 1 cốc thủy tinh côcạn đến khi còn 1 giọt Thêm 1 ml axit disunfophenic láng đều bề mặt cặn Thêm20ml nước cất rồi từ từ thêm NAOH 10% cho đến khi dung dịch có màu vàngkhông đổi lên thể tích dung dịch 50ml Xác định cường độ màu Thu được giá trịOD của mẫu cần phân tích.

Kết quả OD mẫu[NO3-]

0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01OD 0 0,3774 0,6950 1,4406 1,8181 2,2823Đồ thị thể hiện mối quan hệ giữa giá trị OD với [NO3-] (mg/ml).

f(x) = 235.42 x − 0.07R² = 0.99

Đồ thị thề hiện mối quan hệ giữa giá trị OD và [NO3-]

ODodLinear (od)

[NO3-] (mg/ml)

C Tính toán kết quả

OD mẫu rau cải là 0,3263.

Từ phương trình y = 235.42x – 0.0749 với R2=0.9882 > 0.95 kết quả có ý nghĩa.Thay y = 0.3263 vào ta được x = 0.0017

Áp dụng công thức:A (mg/kg) = a V 1000V 1 P

Trong đó: A là dư lượng NO3- có trong rau (mg/kg)

a là nồng độ NO3- tính được từ phương trình đường chuẩn (mg/ml) V là tổng thể tích chiết ra từ mẫu (100ml)

V1 là thể tích mẫu đem phân tích (10ml) P là khối lượng mẫu đem phân tích (g)Với P = 5,21g

Vậy lượng NO3- trên mẫu rau cải đó là:

A = 0.0017 ×100 ×100010 ×5.21 = 3.263 (mg/kg)

Vậy ta thấy mẫu rau muống đem phân tích có dư lượng NO3- trên rau là 3,263 (mg/kg) Mà theo Tổ chức Y tế thế giới (WHO) và cộng đồng kinh tế châu Âu (EC) giới hạn hàm lượng nitrat trong rau không quá 300 mg/kg rau tươi Như vậy,hàm lượng nitrat tồn dư trong rau muống là ở mức cho phép , an toàn với người sử dụng.

Bài 2: Xác định dư lượng các hóa chất sử dụng trong quá trìnhsản xuất , chế biến nông sản thực phẩm

I Xác định sự có mặt của thuốc bảo vệ thực vật lân hữu cơ (Wofatox)

1 Nguyên lý

Wofatox còn được gọi là Parathion Metyl có tên hóa học là O.O Nitrophenyl Phosphorothionat cũng như các thuốc bảo vệ thực vật hữu cơ khác đềukhông bền vững ở môi trường kiềm NaOH và sẽ thủy phân thành Natriparanitrophenolat và Natri Dimetyl-O-Thiophosphat.

Dimetyl-O-P-Chất Natri paranitrophenolat là một chất có màu vàng rơm, nhận dạng dễ dàng.2 Cách tiến hành

1 Chiết xuất thuốc BVTV ra khỏi sản phẩm

Căn cứ trên tính chất vật lý của TBVTV là ít tan trong nước nhưng tan nhiều trongcác dung môi hữu cơ, alcol có phân tử lượng đường thấp như cồn metylic, cồnetylic,… vì vậy việc chiết xuất là dung dịch cồn etylic 90-1000 kết hợp với việc masát, cọ rửa bằng chổi lông,bút lông và tác dụng xối rửa của bình tia dung môi.

Lấy mẫu: dưa chuột và đỗ

Cách lấy: đặt mẫu trong phễu trong bình tam giác, dùng bình tia chứa cồn phunướt nửa đầu trên của mẫu dùng chổi lông cọ lần lượt từng phần từ trái qua phải, từtrên xuống dưới, xoay mẫu 1800 và tiến hành tương tự

2 Làm đậm đặc thuốc trong dung môi

Nếu nồng độ thuốc trong dung môi nhỏ, ta phải làm đậm đặc bằng cách cô cáchthủy ở nơi thoáng gió, trong tủ hốt.

3 Tiến hành

Lấy 3ml dung dịch mẫu kiểm tra vào ống nghiệm Thêm 3ml NaOH 1N lắc đềudung dich có màu vàng rơm đậm hay nhạt tùy thuộc vào nồng độ Wofatox có trongdung dịch

a Mẫu nguyên cứu: Bún

1 Tiến hành

- Cân 15g bún, ngâm trong 25ml nước đã đun sôi.- Sau 15 phút gạn lấy nước đun sôi lại.

- Lọc lấy 5ml nước trong cho vào ống nghiệm.

- Nhỏ vào ống nghiệm 2-3 giọt phenolphthalein 1% rồi lắc đều.3.Kết quả

Khi nhỏ phenolphthalein 1% rồi lắc đều thì không thấy xuất hiện màu hồng Do đóta kết luận sản phẩm bún không có hàn the

b.Mẫu nghiên cứu: Bánh phở

1 Cách tiến hành:

- Cân 15g bánh phở ngâm trong 20ml mước cất đã đun sôi để nguội.

- Sau 15phút lọc lấy toàn bộ dịch ngâm vào trong ống nghiệm và đun sôi lại- Cho 3 giọt phenolphthalein vào ống nghiệm

- Lắc đều và quan sát2 Kết quả:

Khi nhỏ 3giọt phenolphthalein vào ống nghiệm thấy dung không có màu hồng xuấthiện chứng tỏ sản phẩm bánh phở không có hàn the.

Bài 3: Xác định một số chỉ tiêu vi sinh vật trên nông sảnthực phẩm

Ι Quan sát hình thái tế bào một số loài vi khuẩn gây bệnh

 Một số mẫu vi khuẩn  Salmonella

 E.coli

 Bacillus cereus

 Staphylococcus aureusCách tiến hành

Rửa bằng nước cất↓

Dung dịch Lugol ( giữ 1 – 2 phút ) ↓

Rửa bằng cồn ↓

Dung dịch hồng Safranin ( giữ 1 – 2 phút ) ↓

Rửa bằng nước cất↓

Quan sát vật kính 100x ( nhỏ giọt dầu lên tiêu bản ) c.Kết quả quan sát

- Salmonella : Gram(+) ,hình que,không có tiêm mao,số lượng nhiều,dài.

- E.coli: Gram (+) ,hình que, không có tiêm mao, số lượng nhiều, dài

- Staphylococcus aureus : Gram (+), hình que riêng lẻ, không có tiêm mao, sốlượng nhiều, dài.

- E.coli : Gram (+), hình que, không có tiêm mao, số lượng nhiều, dài.

- Bacillus cereus : Gram (-) ,hình que, không có tiêm mao,số lượng nhiều, dài.d.Hình vẽ:

II Định lượng chỉ tiêu vi sinh vật trên nông sản thực phẩm bằng phương pháp đếm khuẩn lạc trên môi trường.

1 Mục tiêu

Xác định một số chỉ tiêu vi sinh vật trên củ cải

- Xác định tổng số vi sinh vật hiếu khí: trên môi trường thạch chọn lọc PCA.- Xác định tổng số nấm men nấm mốc: môi trường thạch YGC.

- Tổng số coliform: là nhóm vi khuẩn G (-), không sinh bào tử, hiếu khí hoặc kị khí, có khả năng lên men đường lactose và sinh khí khi nuôi cấy ở 370 C.

Coliform gồm 4 giống: Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Citrobacter

- Khi nuôi cấy trên môi trường thạch VRBL sau 48h ở 37oC khuẩn lạc Coliformscó màu đỏ đến đỏ đậm, đường kính > 0.5mm, xung quanh khuẩn lạc có vùng đổi màu của môi trường ( đỏ tím đến vàng nhạt ).

Bước 3: Cấy mẫu vào đĩa petri sau khi pha loãng đến nồng độ 10-2, 10-3 Hút 1ml mẫu vào đĩa petri mỗi nồng độ 3 đĩa

- Bước 4 : Chuẩn bị môi trường chọn lọc

500ml môi trường PCA, YGC, VRBL+ VRBL:

Cân chính xác:- 500ml nước cất

- 3,5g pepton

- 1,5g cao nấm men- 5g lactose

- 2,5g NaCl

- 0,015g đỏ trung tính- 0,001g tím tinh thể- 10g agar

+ PCR

- 500ml nước- 2,5g Trypton

- 1,25g cao nấm men

+ YGC:

- 500ml nước

- 2,5g cao nấm men- 10g Glucose- 10g Agar

- 0.05g Chloramphenol

Đun sôi hỗn hợp đã cân của từng môi trường, khấy đều Để môi trường nguội xuống 500C rồi rót vào đĩa đã cấy vi sinh vật chiều dày của môi trường khoảng 3mm Để đĩa và môi trường hòa đều nhau thì đặt đĩa trên mặt phẳng quay 4 vòng theo chiều kim đồng hồ và 4 vòng ngược chiều kim đồng hồ Đợi cho đĩa môi trường đông lại nuôi cấy trong tủ ấm Xác định số lượng khuẩn lạc sau 48h.

4 Kết quả

Đựa vào số lượng khuẩn lạc đếm được, mật độ vi sinh vật được tính như sau: A (CFU/ml) = n 1 vf 1+ … +nivfiN R

Trong đó :

N: là tổng số khuẩn lạc đếm được trên tất cả các đĩa.ni : là số đĩa tại mỗi độ pha loãng.

v : là thể tích mẫu đem đi cấy.

fi : là độ pha loãng có số khuẩn lạc được chọn tại các đĩa đếm.

R : là hệ số khẳng định đối với colifrom (R=0.9 đối với coloform, R= 1 đối với nấm mốc, nấm men, vi khuẩn hiếu khí).