bài giảng xét nghiệm miễn dịch trong huyết học truyền máu

Một ít tình huống phức tạpĐịnh nhóm máu không được Định nhóm khác nhau ở nhiều lần xét nghiệm trên 1 cá thể Trùng nhóm máu giữa người bệnh và bọc máu nhưng cross-match vẫn +... Một ít tì

Jan Janský (1873-1921)

Định nhóm máuTrên phiến kính

Trong tube : PP trực tiếp & gián tiếp

Cho máu đông lại

Chiết ra riêng phần serum

Rửa khối HC và treo trong môi trường nước muối đẳng

trương

PP trực tiếp : HC của BN

PP gián tiếp : serum của BN

Phản ứng chéo

(cross-match)

Phản ứng chéo (cross-match)

Nguyên tắc : trộn máu người cho với máu BNKhông đơn giản : trùng nhóm máu vẫn bị phản ứng

Phản ứng chéo

Tách riêng

- HC

- và huyết thanh

Một ít tình huống phức tạp

Định nhóm máu không được

Định nhóm khác nhau ở nhiều lần xét nghiệm (trên 1 cá thể)

Trùng nhóm máu giữa người bệnh và bọc máu nhưng cross-match vẫn (+)

Một ít tình huống phức tạp

Nguyên tắc xử lý

Phải chuyển mẫu máu về Trung tâm Truyền máu ( 1 ống 5 mL máu đông và 1 ống 5 mL

có kháng đông) trước khi quyết định

Truyền HC lắng O nếu cần cấp cứu sốc mất

máu

Một ít tình huống phức tạp

Định nhóm máu không được : mâu thuẫn giữa PP định

nhóm trực tiếp và gián tiếp

* Sơ sinh non tháng : kháng nguyên nhóm máu yếu, kháng thể

tự nhiên chưa có

* Máu tự ngưng kết  nguy hiểm khi định nhóm AB

* Nhỏ anti-serum xong mà để lâu quá không coi k/q

* BN đã được truyền máu khác nhóm mới đây

Một ít tình huống phức tạp

Định nhóm máu khác nhau ở cùng 1 cá nhân : lúc thì A lúc thì AB

* Nhóm máu AB nhưng coi vội, tưởng là A

(kháng nguyên A mạnh và anti-A có hiệu giá mạnh hơn B nhiều)

* Máu BN tự ngưng kết  nhóm AB

Một ít tình huống phức tạp

Trùng nhóm máu nhưng cross-match (+)

 Nhóm máu phụ, eg : BN nhóm A2, A2B

Làm sao biết là BN bị tiêu huyết do có hiện diện một kháng thể bất thường trên màng HC ?

Làm sao biết là BN có kháng thể bất thường đang lưu hành trong serum BN ?

NGHIỆM PHÁP COOMBS

Coombs test

Cho máu đông lại

 Chiết ra riêng phần serum

 Rửa khối HC và treo trong môi trường nước muối đẳng trương

Nghiệm pháp Coombs

( Coombs’ test)

Kháng thể immunoglobuline miễn dịch IgG

Nghiệm pháp Coombs

( Coombs’ test)

Kháng thể globuline miễn dịch IgG

Nghiệm pháp Coombs

( Coombs’ test)

Kháng thể immunoglobuline miễn dịch IgG

Không có hiện tượng ngưng kếtMuốn có ngưng kết : cho 1 cầu nối

Anti-globuline (sản xuất nhân tạo)

 có hiện tượng ngưng kết

 Coombs trực tiếp (+)

(direct AHG test, DAT ; AHG=anti-human globulin)

globuline

 Có kháng thể bất thường trên HC

bệnh tự miễn (autoimmune disease)

bệnh ác tính lympho (CLL, lymphoma, Kahler )

 Coombs trực tiếp (-)

 Không có kháng thể bất thường trên HC

Coombs gián tiếp ?

Chiết ra riêng phần serum

Nghi ngờ và cần tìm kháng thể

bất thường trong serum

Dùng HC mẫu nhóm O+ , ủ với serum BN

Ủ serum BN

với HC mẫu nhóm máu O Rh(+)

O+

O+

Sau khi ủ

- Có hiện tượng ngưng kết xảy ra ?

- Không có !

Anti-globuline

 có hiện tượng ngưng kết

 Coombs gián tiếp (indirect AHG) (+)

 Coombs gián tiếp (indirect AHG) (+)

Điều cần nhớ

có chuyện về sau ! …

Check lại …

* Xem hiểu bài chưa ?

* Kể chuyện đời xưa ! … Once upon a time …

Check lại …

* Xem hiểu bài chưa ?

* nếu Coombs TT & GT ĐỀU (+++) ? (như K/q

ở slide sau đây) …

* Cả Coombs TT và GT đều (+) mạnh, biện luận ra sao ?

Phương pháp Gel Card

Kết luận ? - Máu nhóm B, Rhesus (-)

Kết luận ? - Máu A, Rhesus (+), Coombs TT (-)

Nhắc lại : DAT = Direct Anti-Globulin Test = Coombs trực tiếp

Bổ thể

Trong các bệnh Tán huyết Miễn dịch

Jules Bordet (1870-1961), Nobel Y Học 1919

innate immune system)( hệ miễn dịch thích nghi,

adaptive immune system) và vai trò trong tiêu hủy

vi sinh vật và tiêu hồng cầu

Các đường khởi đầu của Hệ Bổ Thể và đường cuối

(Final pathway)

Đường cơ bản (cổ điển) có 3 thành tố :

1- Kháng nguyên (vi khuẩn, virus, hồng cầu, …) 2- Kháng thể

3- Bổ thể : C1 …

Ab

C1

Đường thay phiên chỉ cần 2 thành tố :

1- Kháng nguyên (vi khuẩn, virus, hồng cầu, …)

0- Kháng thể

2- Bổ thể : C3 … (không có C1, C4, C2 )

Đường lectin (hệ miễn dịch bẩm tố )

Lectin : protein gắn kết một đường glucid

(carbohydrate) như mannose hiện diện trên bề mặt

* MBL : Mannose-Binding Lectin

Final Pathway

Hình thành MAC

(Membrane Attack Complex)

Cell Lysis

Tiêu huyết qua trung gian Bổ Thể

(Complement-Mediated Hemolysis)

Làm cách nào có được AHG đa giá ?

(polyvalent, polyspecific)

Kháng nguyên

HC người

Kháng thể chống kháng nguyên HC người

Globulin

Globulin

Anti Human-Globulin

đa giá

Lưu ý thuốc thử Coombs

Polyspecific : anti IgG + anti-Complement

Monospecific :

- anti IgG

- anti-Complement

Câu hỏi tự học :

Trong các bệnh tiêu huyết miễn dịch, bệnh tự miễn, lupus hệ thống định lượng CH50, C3, C4 tăng hay giảm ? Tại sao ?

Cảm ơn

Xin mời đặt câu hỏi(trừ câu hỏi vừa rồi ! )